Средство для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, применение и способ лечения

Средство для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, применение и способ лечения

Реферат

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармакологии, а именно к средствам, обладающим противогипоксической, нейропротекторной и антиамнестической активностью и способностью повышать физическую работоспособность, предназначенной, в частности, для лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, в том числе ишемического инсульта и других заболеваний и состояний, сопровождающихся снижением когнитивных функций.

Одной из актуальных проблем современной неврологии является разработка эффективных средств защиты центральной нервной системы за счет активизации различных метаболических процессов мозга. Актуальность разработки новых лекарственных средств, обладающих выраженной нейропротекторной активностью, определяется высокой смертностью от инсульта.

Известен гептапептид метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин, обладающий нейропротекторной активностью [1].

Известно лекарственное средство холина альфосцерат, которое обладает аналогичной активностью [6, 11].

Лекарственные средства гептапептида метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина влияют на процессы, связанные с формированием памяти и обучением. Усиливают избирательное внимание при обучении и анализе информации, улучшают консолидацию памятного следа; улучшает адаптацию организма к гипоксии, церебральной ишемии, общей анестезии и др. повреждающим воздействиям. В условиях нервно-психического утомления облегчает концентрацию внимания, улучшает операторскую деятельность, способствует сохранению и ускоряет восстановление умственной работоспособности.

Холина альфосцерат - холина гидроксида (R)-2,3-дигидроксипропилгидрофосфат (внутренняя соль) обладает нейропротективным действием: возбуждает холинорецепторы, преимущественно центральные (оказывает холиномиметическое действие). Стимулирует холинергическую нейротрансмиссию, улучшает пластичность нейрональных мембран и функцию рецепторов, активирует церебральный кровоток, стимулирует метаболизм ЦНС и ретикулярную формацию (Энциклопедия лекарственных средств. 11-й вып., М., РЛС - 2004, с.967).

Лекарственные средства холина альфосцерата применяются при черепно-мозговых травмах (острый период) с преимущественно стволовым уровнем поражения, хронической цереброваскулярной недостаточности (дисциркуляторной энцефалопатии), деменции (альцгеймеровского типа, сенильной, смешанных форм), ишемическом инсульте (восстановительный период), хорее Гентингтона, функциональных расстройствах ЦНС, нарушении памяти, спутанности сознания, дезориентации, снижении мотивации, инициативности и концентрации внимания, старческой меланхолии.

В настоящее время эти препараты широко применяют в различных областях медицины. Так, например, оба препарата используют в неврологии при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения и связанных с ней заболеваниях, в том числе при мозговом инсульте и его последствиях [3, 7, 8, 12]. Однако в клинике гептапептид метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат не всегда эффективны [3, 9, 12], в частности, в отношении повышения физической работоспособности.

Техническим результатом изобретения является расширение арсенала лекарственных средств и создание нового лекарственного средства, обладающего наряду с выраженной нейропротекторной активностью в сочетании с противогипоксической и антиамнестической активностью и способностью повышать физическую работоспособность, и способа профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения с минимальными побочными эффектами. Совместное использование позволяет сократить количество принимаемого средства при профилактике и лечении за счет высокой его активности, не характерной и превышающей действие отдельных веществ.

Указанный технический результат достигается за счет того, что фармацевтическая композиция, обладающая нейропротекторной, противогипоксической и антиамнестической активностью и повышающая физическую работоспособность, включает в качестве активных компонентов метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат при следующем соотношении компонентов, в мас.%:

метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил -
пролил-глицил-пролин	0,01-2,00
холина альфосцерат	98,00-99,99

Технический результат достигается также за счет применения указанной фармацевтической композиции для изготовления средства, обладающего нейропротекторной, противогипоксической и антиамнестической активностью и повышающее физическую работоспособность, для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения.

Технический результат достигается также в средстве, обладающем нейропротекторной, противогипоксической и антиамнестической активностью и повышающем физическую работоспособность, для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, содержащем указанную фармацевтическую композицию.

Кроме того, средство может быть выполнено в форме, приемлемой для перорального применения.

Кроме того, средство может быть выполнено в виде таблетки. Кроме того, средство может быть выполнено в виде капсул.

Кроме того, средство может быть выполнено в форме, приемлемой для парентерального применения.

Кроме того, средство может быть выполнено в виде раствора для инъекций.

Технический результат достигается также в способе профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, предусматривающем введение пациенту фармацевтически эффективного количества средства, содержащего указанную фармацевтическую композицию.

Кроме того, при острых состояниях пациенту вводят средство в виде инъекций внутримышечно в дозе от 500 до 1010 мг в сутки или внутривенно капельно - от 500 до 3030 мг в сутки в течение 7 дней или до появления положительной динамики.

Кроме того, при хронических состояниях пациенту перорально вводят средство в дозе от 200 до 410 мг по 3 раза в сутки в течение 3-5 месяцев.

Фармакологическая активность описываемой фармацевтической композиции была изучена экспериментально по известным методикам [4].

Свойства предлагаемой фармацевтической композиции подтверждены следующими примерами.

Пример 1

Противогипоксическое действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на модели острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией (в гермокамере) (табл.1)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-25 г по известной методике [4].

Острую нормобарическую гипоксию с гиперкапнией воспроизводили путем помещения мышей (поодиночке) в гермокамеру: животных сажали в стеклянные банки одинакового объема (250 см³), которые герметично закрывали. По мере потребления кислорода концентрация его в воздухе сосуда и в организме снижалась, а количество углекислого газа наоборот возрастало. В результате у животных развивалась острая гипоксическая гипоксия с гиперкапнией. Регистрировали с помощью секундомера продолжительность жизни мышей (до остановки дыхания) в гермокамере в минутах (с точностью до 0,1 минуты) и по ее увеличению судили об эффективности испытанных фармакологических веществ. Исследуемые вещества и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно (композицию, содержащую метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерат - за 3 часа, один метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин - за 3 часа, один холина альфосцерат - за 3 часа) до помещения животных в гермокамеру.

Полученные результаты представлены в табл.1. Установлено, что метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (самостоятельно) в дозах 0,025 и 0,2 мг/кг и один холина альфосцерат в дозе 200 мг/кг существенно не изменяли продолжительность жизни мышей в гермокамере. Однако композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) увеличивала продолжительность жизни животных на 27% (композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина 0,2 мг/кг и холина альфосцерата 200 мг/кг) и 29% (композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина 0,025 мг/кг и холина альфосцерата 200 мг/кг). При этом по выраженности действия композиция значимо (р<0,05) превосходила метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (в 1,2 раза) и холина альфосцерат (в 1,2-1,3 раза) по отдельности.

Пример 2

Нейропротекторное действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата (табл.2)

Исследования выполнены на белых нелинейных крысах-самцах массой 220-280 г, содержащихся в виварных условиях, у которых моделировали ишемический инсульт.

Исследовали нейропротекторное действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата у крыс с экспериментальной ишемией головного мозга. Ишемию головного мозга у крыс воспроизводили путем одномоментной перевязки (под эфирным наркозом) обеих общих сонных артерий. У ложнооперированных животных (контрольная группа №1) операция была ограничена этапом доступа к общим сонным артериям. В контрольной группе №2 крысы получали только изотонический раствор натрия хлорида. В подопытных группах животным вводили внутрибрюшинно различные вещества (метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерат по отдельности и композицию их содержащую) 1 раз в сутки в течение 7 суток; в первые сутки - через 1 и 3 часа после операции. Животных после операции наблюдали в течение 2 недель с учетом выживаемости крыс. Неврологический дефицит у животных определяли (слепым методом) по шкале McGraw et al. [10] (в баллах) каждый час в течение 24 часов, а затем 1 раз в сутки. Тяжесть состояния определяли по сумме соответствующих баллов. У ложнооперированных животных неврологический дефицит отсутствовал.

Результаты исследования нейропротекторного действия композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата и других веществ представлены в табл.2. Из нее видно, что у крыс контрольной группы №2 неврологический дефицит был наиболее выражен (8,9±0,1 балла) через 2 и 3 суток после двусторонней перевязки общих сонных артерий; при этом в контроле погибло 24% (18 крыс из 75) животных.

Было обнаружено, что метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (один) в дозе 0,5 мг/кг/сут и холина альфосцерат (один) в дозе 100 мг/кг/сут одинаково уменьшали летальность крыс с 24% (контроль) до 14% (р>0,05). Композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) увеличивала количество выживших крыс до 100% (т.е. крысы не погибали). При этом в отношении летальности композиция значимо (р<0,05) превосходила и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (на 14%), и холина альфосцерат (на 14%). Кроме того, достоверно уменьшался неврологический дефицит, причем по выраженности действия на неврологический дефицит композиция значимо (р<0,05) превосходила как метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (в 1,1 раза), так и холина альфосцерат (в 1,1-1,2 раза) (табл.2).

Пример 3

Антиамнестическое действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на модели амнезии, вызванной электросудорожным шоком (табл.3)

Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на процессы обучения и памяти исследовали на белых нелинейных мышах-самцах (массой 20-24 г), используя условную реакцию пассивного избегания (УРПИ) электрокожного раздражения [2]. В настоящее время тест УРПИ является базисной моделью для оценки влияния веществ на формирование и воспроизведение памятного следа в норме и в условиях его нарушения (амнезия), а также наиболее информативным из применяемых сегодня методов оценки эффективности веществ с ноотропной активностью [4]. Установка для мышей представляла собой экспериментальную камеру черного цвета размером 30×40×30 см с электродным полом и белой пластиковой платформой (7,5×7,5×0,5 см), которую располагали на полу в центре камеры. Мышей (поодиночке) помещали на пластиковую платформу. Обычно животные спускались (или спрыгивали) с платформы на электродный пол, где они получали «наказание» - удар электрическим током (в это время на пол камеры подавали постоянный электрический ток силой 0,5 мА). Электрический ток включали только тогда, когда мышь касалась пола всеми четырьмя конечностями. Обычной реакцией животных было возвращение на безопасную платформу. После 5 мин обучения у мышей вырабатывалась УРПИ - они оставались на платформе. Тестирование на сохранность УРПИ проводили через 24 часа после амнезирующего воздействия. При этом если животное покидало платформу в течение 1 минуты, у него отмечали ретроградную амнезию навыка пассивного избегания.

В качестве амнезирующего воздействия использовали электросудорожный шок (ЭСШ; параметры электрического тока: 50 Гц, 50 мА, 0,3 с), который наносили мышам с помощью электродов в виде клипс, фиксируемых на ушных раковинах (транспиннеально), сразу после обучения УРПИ [5]. У животных контрольной группы вызывали псевдоэлектросудорожный шок: накладывали пиннеальные электроды для нанесения ЭСШ без подачи электрического тока. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (один), холина альфосцерат (один), композицию их содержащую и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно в период генерализованных судорог, вызванных ЭСШ, т.е. непосредственно после ЭСШ. Тестирование мышей на сохранение УРПИ производили через 24 часа после ЭСШ.

Установлено, что ЭСШ вызывал у большинства мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 82% животных (р<0,001) через 24 часа наблюдалась амнезия УРПИ. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,2 мг/кг и холина альфосцерат в дозе 200 мг/кг существенно не изменяли амнестическое действие. Однако композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) ослабляла амнестический эффект в 2,3 раза (табл.3). При этом по выраженности действия композиция значимо (р<0,05) превосходила и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (в 2,1 раза) и холина альфосцерат (в 1,8 раза) по отдельности.

Пример 4

Антиамнестическое действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на модели амнезии, вызванной плаванием мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (табл.4)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной в примере 3).

Животных (поодиночке) помещали в заполненный водой пластиковый ящик размером 17×9×19 см с вращающимся ребристым колесом. Плавание мышей в холодной воде (температура 12-14°С) с одновременным вращением колеса до изнеможения (ПМХВ) применяли сразу после обучения УРПИ. Сохранность УРПИ проверяли через 24 часа после окончания ПМХВ. В качестве ложного ПМХВ использовали помещение животных в мокрые холодные опилки.

Установлено, что ПМХВ вызывало у большей части мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 62% животных (р<0,001) через 24 часа наблюдалась амнезия УРПИ. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,025 мг/кг и холина альфосцерат в дозе 200 мг/кг существенно не влияли на амнезию УРПИ. Однако композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) ослабляла амнестический эффект в 2,7 раза (табл.4). При этом по выраженности действия композиция значимо (р<0,05) превосходила и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (на 27%) и холина альфосцерат (на 27%).

Пример 5

Антиамнестическое действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на модели амнезии, вызванной скополамином (табл.5)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной в примере 5).

Для воспроизведения модели скополаминовой амнезии м-холиноблокатор вводили мышам внутрибрюшинно в дозе 1 мг/кг сразу после обучения УРПИ [4]. Животные контрольной группы получали в том же объеме изотонический раствор натрия хлорида внутрибрюшинно. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (один), холина альфосцерат (один) и композицию их содержащую вводили внутрибрюшинно за 3 часа до обучения мышей. Проверку сохранности УРПИ производили через 24 часа после внутрибрюшинной инъекции.

Установлено, что скополамин вызывал у большей части мышей ретроградную амнезию навыка пассивного избегания: у 72% животных (р<0,001) через 24 часа наблюдалась амнезия УРПИ. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина в дозе 0,025 мг/кг и холина альфосцерат в дозе 100 мг/кг существенно не влияли на амнезию УРПИ. Однако композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) ослабляла амнестический эффект в 2 раза (табл.5). При этом по выраженности действия композиция значимо (р<0,05) превосходила и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (на 32%), и холина альфосцерат (на 28%).

Пример 6

Антиамнестическое действие композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на модели амнезии, вызванной острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией (в гермокамере) (табл.6)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-24 г с применением выработки у животных УРПИ (описанной в примере 5).

Описанную в примере 3 модель острой нормобарической гипоксической гипоксии с гиперкапнией также использовали для вызывания у животных ретроградной амнезии навыка пассивного избегания. Для этого мышей сразу после обучения УРПИ помещали (поодиночке) в гермокамеру на 16-18 минут в зависимости от выраженности симптомов кислородной недостаточности и массы (чем больше масса, тем обычно меньше время их пребывания в гермокамере). В контрольной группе животных подвергали ложной гипоксии - сажали мышей в стеклянные банки одинакового объема, которые не закрывали. Проверку сохранения УРПИ проводили через 24 часа после окончания воздействия гипоксии с гиперкапнией. Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (один), холина альфосцерат (один), композицию их содержащую и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили внутрибрюшинно (композицию - за 3 часа, метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин - за 3 часа, холина альфосцерат - за 3 часа) до обучения мышей.

Было обнаружено, что через 24 часа после 16-18-минутного пребывания мышей в гермокамере у большей части из них наблюдалась ретроградная амнезия: у 64% животных (р<0,001). Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,025 мг/кг и холина альфосцерат в дозе 200 мг/кг существенно не влияли на амнезию УРПИ. Однако композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) оказывала отчетливое антиамнестическое действие, уменьшая выраженность амнезии в 2 раза (табл.6). При этом по выраженности действия композиция значимо (р<0,05) превосходила метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (на 27%) и холина альфосцерат (на 25%) по отдельности.

Пример 7

Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на физическую работоспособность мышей (табл.7)

Исследования выполнены на белых нелинейных мышах-самцах массой 20-22 г.

Физическую работоспособность мышей оценивали по тесту бега в шестидорожечном третбане [5]. На каждую беговую дорожку ленты транспортера помещали одно животное. Скорость движения ленты составляла 32 м/мин. Мыши бегали до полного утомления, критерием которого было отсутствие реакции на раздражение электрическим током при нахождении на «электрическом столе». Учитывали продолжительность бега животных в минутах (с точностью до 0,1 минуты). Метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (один), холина альфосцерат (один), композицию их содержащую и изотонический раствор натрия хлорида (контроль) вводили орально через зонд (композицию - за 3 часа, метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин - за 3 часа, холина альфосцерат - за 3 часа) до бега в третбане.

Было обнаружено, что метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин в дозе 0,01 мг/кг и холина альфосцерат дозе 0,5 мг/кг существенно не изменяли физическую работоспособность мышей по тесту бега в третбане. Однако композиция, содержащая метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат, значимо (р<0,05) повышала физическую работоспособность мышей на 26% (табл.7). При этом по выраженности действия композиция значимо (р<0,05) превосходила и метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (на 29%) и холина альфосцерат (на 23%).

Таблица 1
Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на продолжительность жизни мышей в гермокамере (М±m)
Вещество (доза, мг/кг)	Число мышей	Продолжительность жизни, минуты
Изотонический раствор натрия хлорида (контроль)	16	26,8±0,7
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025)	14	28,1±0,8
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2)	14	28,7±0,8
Холина альфосцерат (200)	14	27,3±0,9
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина 0,025 и холина альфосцерата (200)	16	34,7±2,4*□#
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (0,2) и холина альфосцерата (200)	16	34,1±2,0*□#
Примечание. * - р<0,05 - значимость различий по сравнению с контролем; □ - р<0,05 - значимость различий по сравнению с метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина; # - р<0,05 - значимость различий по сравнению с холина альфосцератом (критерий Стьюдента).

Таблица 3
Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на амнезию у мышей, вызванную электросудорожным шоком (ЭСШ)
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после амнезирующего воздействия (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + псевдоЭСШ (контроль 1)	30	27 (90)	5 (19)
Изотонический раствор натрия хлорида + ЭСШ (контроль 2)	30	28 (93)	23 (82)°°°
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,2) + ЭСШ	22	20 (91)	15 (75)°
Холина альфосцерат 200 + ЭСШ	30	28 (93)	18 (64)°
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (0,2) и холина альфосцерата (200) + ЭСШ	30	28 (93)	10 (36)*□#
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно: ° или * - р<0,05, °°° - р<0,001; □ - р<0,05 - значимость различий по сравнению с метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином; # - р<0,05 - значимость различий по сравнению с холина альфосцератом (точный метод Фишера).

Таблица 4
Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на амнестический эффект, вызванный плаванием мышей в холодной воде с одновременным вращением колеса до изнеможения (ПМХВ)
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после ПМХВ (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + ложное ПМХВ (контроль 1)	52	48 (92)	8(17)
Изотонический раствор натрия хлорида + ПМХВ (контроль 2)	55	52 (94)	32 (62)°°°
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + ПМХВ	30	28 (93)	14 (50)°
Холина альфосцерат (200) + ПМХВ	26	24 (92)	12 (50)°
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (0,025) и холина альфосцерата (200) + ПМХВ	28	26 (93)	6 (23)*□#
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно: ° или * - р<0,05, °°° - р<0,001; □ - р<0,05 - значимость различий по сравнению с метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином; # -р<0,05 - значимость различий по сравнению с холина альфосцератом (точный метод Фишера).

Таблица 5
Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилалан-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на амнезию у мышей, вызванную скополамином
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после амнезирующего воздействия (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + изотонический раствор натрия хлорида (контроль 1)	31	29 (94)	5 (17)
Изотонический раствор натрия хлорида + скополамин (контроль 2)	32	29 (91)	21 (72)°°°
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин 0,025 + скополамин	31	28 (90)	19 (68)°
Холина альфосцерат (100) + скополамин	30	28 (93)	18 (64)°
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (0,025) и холина альфосцерата (100) + скополамин	30	28 (93)	10 (36)*□#
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно: ° или * - р<0,05, °°° - р<0,001; □ - р<0,05 - значимость различий по сравнению с метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином; # - р<0,05 - значимость различий по сравнению с холина альфосцератом (точный метод Фишера).

Таблица 6
Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на амнезию у мышей, вызванную острой нормобарической гипоксической гипоксией с гиперкапнией
Условия опытов и вещество (доза, мг/кг)	Общее число мышей	Число мышей, обучившихся УРПИ (%)	Число мышей с амнезией УРПИ через 24 часа после амнезирующего воздействия (%)
Изотонический раствор натрия хлорида + ложная гипоксия (контроль 1)	30	28 (93)	5 (18)
Изотонический раствор натрия хлорида + гипоксия (контроль 2)	48	44 (92)	28 (64)°°°
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,025) + гипоксия	24	22 (92)	13 (59)°
Холина альфосцерат (200) + гипоксия	32	30 (94)	17 (57)°
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (0,025) и холина альфосцерата (200) + гипоксия	30	28 (93)	9 (32)*□#
Примечание. Различия статистически значимы по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно: ° или * - р<0,05, °°° - р<0,001; □ - р<0,05 - значимость различий по сравнению с метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином; # - р<0,05 - значимость различий по сравнению с холина альфосцератом (точный метод Фишера).

Таблица 7
Влияние композиции метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина и холина альфосцерата на физическую работоспособность мышей по тесту бега в третбане (М±m)
Вещество (доза, мг/кг)	Число мышей	Продолжительность бега, минуты
Изотонический раствор натрия хлорида (контроль)	14	6,8±0,1
метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин (0,01)	14	6,6±0,1
Холина альфосцерат (0,5)	14	7,0±0,1
Композиция метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина (0,01) и холина альфосцерата (0,5)	14	8,6±0,2*□#
Примечание. * - р<0,05 - значимость различий по сравнению с контролем; □ - р<0,05 - значимость различий по сравнению с метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролином; # - р<0,05 - значимость различий по сравнению с холина альфосцератом (критерий Стьюдента).

В результате проведенных исследований установлено, что предлагаемая фармацевтическая композиция обладает выраженной нейропротекторной, противогипоксической и антиамнестической активностью, способна также повышать физическую работоспособность, и она нашла применение при создании новых лекарственных средств для лечения различной патологии центральной нервной системы.

Примеры лекарственных средств

Пример 1

Капсулы получали общеизвестным способом (Чуешов В.И. и др. Промышленная технология лекарств, Т.2, МТК - Книга; Изд-во НФАУ, 2002 г., стр.400-413).

Для приготовления капсул смешивают ингредиенты из расчета состава одной капсулы: холина альфосцерата - 300 мг; метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина - 2 мг; очищенной воды - 140 мг; глицерина - 50 мг.

Состав оболочки капсул: желатин, эзитол, сорбитанс, натрия этилпарагидроксибензоат, натрия пропилпарагидроксибензоат, титана диоксид (Е171), железа (III) метагидроксид (Е172).

Пример 2

Таблетки получали общеизвестным способом (там же, стр.335-368).

Для приготовления таблеток смешивают ингредиенты из расчета состава одной таблетки: холинаальфосцерата - 300 мг; метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина - 3 мг; кремния диоксида коллоидного - 2,5 мг; талька - 5 мг; лактозы моногидрата - 83 мг; крахмала кукурузного - 97 мг.

Пример 3

Инъекционные растворы получали общеизвестным способом (там же, стр.510-543).

Для приготовления раствора для внутривенного и внутримышечного введения смешивают ингредиенты из расчета состава одной ампулы (4 мл): холина альфосцерата - 750 мг; метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролина - 0,75 мг; вода для инъекций - до 4 мл.

Раствор прозрачный, бесцветный, без запаха.

Лечение осуществляют следующим образом.

При острых состояниях пациенту вводят лекарственное средство в виде инъекций внутримышечно в дозе 750 мг в сутки или внутривенно капельно - от 750 мг до 2250 мг в сутки в течение 7 дней или до появления положительной динамики и возможности перейти на прием капсул.

При внутривенном капельном введении содержимое 1 ампулы (4 мл) разводят в 50 мл физиологического раствора; скорость инфузии - 60-80 капель/мин.

При хронических состояниях (например, при хронической цереброваскулярной недостаточности, изменениях в эмоциональной и поведенческой сфере и мультиинфарктной деменсостояниях) пациенту вводят лекарственное средство перорально в дозе 300 мг 3 раза в сутки в виде таблеток или капсул до приема пищи.

Продолжительность терапии составляет 3-5 месяцев.

Изобретение позволит расширить арсенал лекарственных средств и создать новые лекарственные средств, обладающие наряду с выраженной нейропротекторной активностью в сочетании с противогипоксической и антиамнестической активностью и способностью повышать физическую работоспособность, и осуществлять профилактику или лечение острых и хронических нарушений мозгового кровообращения при сокращении количества принимаемого средства за счет его высокой эффективности с минимальными побочными эффектами.

Литература

1. Патент РФ №2922514 (2005).

2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.Д. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения: пер. с англ. / Под ред. Батуева А.С. - М., Высш. шк., 1991. - 399 с.

3. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. - М.: Медицина, 2001.

4. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Фисенко В.П. - М., 2000. - 398 с.

5. Самойлов Н.Н., Стратиенко Е.Н., Цеева Ф.Н. и др. Методика оценки физической работоспособности мышей в условиях гипоксии с гиперкапнией // Вестник Межд. акад. наук экологии и безопасности жизнедеятельности. - 2002. - №5. - С.189-191.

6. Скоромец А.А., Ковальчук В.В. Медикаментозная реабилитация пациентов после инсульта // Журн. Неврол. и психиатр. им. С.С.Корсакова. - 2007. - Т.107, №2. - С.21-24.

7. Федеральное руководство по использованию лекарственных средств (формулярная система). Выпуск IX // Под редакцией А.Г.Чучалина, Ю.Б.Белоусова, В.В.Яснецова - М.: «Эхо», 2008. - 1000 с.

8. Di Perri R., Coppola G., Ambrosio L.A. et al. A multicentre trial to evaluate the efficacy and tolerability of alpha-glycerylphosphorylcholine versus cytosine diphosphocholine in patients with vascular dementia // J. Int. Med. Res. - 1991. - Vol.19, No 4. - P.330-341.

9. Mandat Т., Wilk A., Manowiec R. et al. Preliminary evaluation of risk and effectiveness of early choline alphoscerate treatment in craniocerebral injury // Neurol. Neurochir. Pol. - 2003. - Vol.37, No 6. - P.1231-1238.

10. McGraw C.P., Pashayan A.G., Wendel O.T. Cerebral infarction in the Mongolian gerbil exacerbated by phenoxybenzaminetreatment // Stroke. - 1976 - Vol.7, No 5. - P.485-488.

11. Onishchenko L.S., Gaikova O.N., Yanishevskii S.N. Changes at the focus of experimental ischemic stroke treated with neuroprotective agents // Neurosci. Behav. Physiol. - 2008. - Vol.38, No 1. - P.49-54.

12.Parnetti L., Amenta F., Gallai V. Choline alphoscerate in cognitive decline and in acute cerebrovascular disease: an analysis of published clinical data // Mech. Ageing Dev. - 2001. - Vol.122, No 16. - P.2041-2055.

1. Применение фармацевтической композиции, включающей в качестве активных компонентов метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-пролил-глицил-пролин и холина альфосцерат при следующем соотношении компонентов, мас.%:

метионил-глутамил-гистидил-фенилаланил-
пролил-глицил-пролин	0,01-2,00
холина альфосцерат	98,00-99,99

для изготовления средства для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения.

2. Средство для профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, содержащее в качестве активного компонента фармацевтическую композицию по п.1.

3. Средство по п.2, отличающееся тем, что оно выполнено в форме, приемлемой для перорального применения.

4. Средство по п.3, отличающееся тем, что оно выполнено в виде таблетки.

5. Средство по п.4, отличающееся тем, что таблетки выполнены в виде жевательных таблеток.

6. Средство по п.4, отличающееся тем, что таблетки выполнены в виде подъязычных таблеток.

7. Средство по п.3, отличающееся тем, что оно выполнено в виде сухого сиропа.

8. Средство по п.3, отличающееся тем, что оно выполнено в виде капсул.

9. Средство по п.2, отличающееся тем, что оно выполнено в форме, приемлемой для парентерального применения.

10. Средство по п.9, отличающееся тем, что оно выполнено в виде раствора для инъекций.

11. Способ профилактики или лечения острых и хронических нарушений мозгового кровообращения, характеризующийся тем, что включает введение пациенту фармацевтически эффективного количества средства по п.2.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что при острых состояниях пациенту вводят средство по п.2 в виде инъекций внутримышечно в дозе от 500 до 1010 мг в сутки или внутривенно капельно от 500 до 3030 мг в сутки в течение 7 дней или до появления положительной динамики.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что при хронических состояниях перорально вводят средство по п.2 в дозе от 200 до 410 мг по 3 раза в сутки в течение 3-5 месяцев.