Композиция для профилактики и лечения рака, содержащая яичный белок с халькантитом

Композиция для профилактики и лечения рака, содержащая яичный белок с халькантитом

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Настоящее изобретение относится к композиции, включающей яичный белок с халькантитом, для профилактики или лечения рака, в частности к композиции для профилактики или лечения рака, которая включает только яичный белок с халькантитом, приготовленные смешиванием халькантита с яичным белком для детоксикации халькантита, или включает смесь яичного белка с халькантитом и бамбуковой соли, а также к способу приготовления такой композиции.

Предшествующий уровень техники

Рак относится к классу заболеваний, которые начинаются с неконтролируемой пролиферации клеток, затем происходит инвазирование и разрушение соседних нормальных тканей и органов, что далее может вызвать возникновение новых локализаций для раковых клеток и, наконец, привести к смерти человека. За последнее десятилетие, для того чтобы победить рак, были сделаны значительные разработки по модулированию клеточного цикла и апоптоза, а также по нахождению новых мишеней типа онкогенов или генов-супрессоров, подавляющих опухолевый рост. Несмотря на достижения в этой области, уровень заболеваемости раком продолжает возрастать.

В настоящее время лечение рака основано на хирургических операциях, радиотерапии и химиотерапии с назначением множества разновидностей противораковых препаратов, обладающих сильной цитотоксичностью. Однако большая часть этих терапевтических мероприятий ограничивается использованием только для пациентов с ранними стадиями рака и для ограниченного числа раковых заболеваний, поэтому уровень смертности от рака постоянно возрастает.

Кроме того, поскольку большинство противораковых препаратов являются высокотоксичными химическими соединениями, постоянно предпринимаются попытки разработки противораковых препаратов с низкой токсичностью, в частности противораковых препаратов, производимых из натуральных компонентов.

Халькантит, который является разновидностью сульфатных минералов, состоит в основном из голубого пентагидрата CuSO₄·5H₂O. Халькантит является натуральным минералом с очень небольшой долей примесей других минералов в виде голубых кристаллов. Халькантит относится к кристаллам с триклинной системой и стекловатой структурой, которые имеют полупрозрачный голубой блестящий цвет. Известно, что халькантит, включая его искусственную разновидность медный купорос, используется в рвотных средствах, инсектицидах, красителях, фиксажах, электролитах и т.п. Имеется опасение отравления при применении из-за токсичности халькантита, являющегося лекарственным сырьем минерального происхождения. По этой причине имеется ограничение по клиническому применению халькантита, а факт использования халькантита в качестве противоракового препарата не известен из уровня техники.

Бамбуковая соль была изобретена Ил-хум Кимом (годы жизни 1909-1992, псевдоним - Ин-сан). Бамбуковая соль готовится путем синтезирования бамбука и соли с использованием процесса прокаливания. Здесь бамбук может действовать как средство восстановления клеток с генерацией новых клеток, а соль может действовать как стерилизатор и антисептик. В частности, соль с бамбуком прокаливается несколько раз в печи при высокой температуре, за счет чего происходит удаление из соли токсичных веществ с увеличением фармацевтического эффекта при ее применении.

Бамбуковая соль имеет несколько преимуществ, таких как наличие фармакологического эффекта при лечения воспалительных заболеваний за счет укрепления желудка, который считается одним из основных органов тела человека, эффекта очищения крови, эффекта детоксикации и очистки от шлаков и выделений, накопленных в организме, а также эффекта преобразования соматического типа из кислотного в слабощелочной. Дополнительно, известно, что бамбуковая соль в три-четыре раза эффективнее обычной соли в отношении противовоспалительных действия против бактерий и по стерилизационной способности, поэтому такая высокая стерилизационная способность ведет к ослаблению лихорадочного состояния организма.

Изобретателем было обнаружено, что композиция яичного белка с халькантитом, где токсичность халькантита нейтрализуется яичным белком, вызывает апоптоз раковых клеток и подавляет их рост, за счет чего может применяться в качестве натурального противоракового препарата. Более того, изобретатель обнаружил, что в качестве противораковой композиции может использоваться яичный белок с халькантитом самостоятельно или смесь яичного белка с халькантитом и бамбуковой соли, что послужило основой настоящего изобретения.

Раскрытие изобретения

Техническая проблема

Варианты настоящего изобретения направлены на создание композиции для профилактики или лечения рака, которая включает яичный белок с халькантитом в качестве активного начала.

Варианты настоящего изобретения также направлены на создание функционального оздоровительного пищевого продукта для профилактики рака или улучшения состояния при раке, который включает яичный белок с халькантитом в качестве активного начала.

Варианты настоящего изобретения также направлены на создание способа приготовления композиции белка с халькантитом, который включает операции: (a) нагрев и дегидратация халькантита, являющегося лекарственным сырьем минерального происхождения, до тех пор пока весь халькантит не приобретет серый цвет; (b) охлаждение дегидратированного халькантита и его порошкование; и (c) смешивание халькантита, полученного в операции (b), с яичным белком.

Техническое решение

В одном аспекте по настоящему изобретению предлагается композиция для профилактики или лечения рака, включающая яичный белок с халькантитом в качестве активного начала.

В настоящем изобретении термин «яичный белок с халькантитом» означает смесь яичного белка и халькантита, который может быть приготовлен путем обжига халькантита (натуральный минерал, главным образом, состоящий из CuSO₄·5H₂O) для его дегидратации, порошкования дегидратированного халькантита и последующего смешивания порошка халькантита с яичным белком для проведения реакции между ними. В яичном белке с халькантитом, приготовленным таким образом, токсичность халькантита нейтрализуется яичным белком, за счет чего токсичность снижается или снимается, а фармацевтические свойства улучшаются.

Композиция по настоящему изобретению может дополнительно включать бамбуковую соль.

Бамбуковая соль, используемая в настоящем изобретении, может быть продуктом, имеющимся на рынке, или приготовляться специально. Здесь бамбуковая соль может быть приготовлена ортодоксальным девятикратным методом, который описан в ряде книжных изданий, таких как «Универсальное и удивительное лекарстов» (1980) и «Удивительное лекарстов» (1986) автора Ил-хум Ким (псевдоним - Ин-сан), который известен как изобретатель бамбуковой соли, однако бамбуковая соль в настоящем изобретении не ограничивается таким способом ее получения. Например, способ производства бамбуковой соли может включать следующие операции: помещение морской соли, производимой на западном побережье Республики Корея, в ствол бамбука и закрытие открытых концов ствола пробками из желтой охры; плотная укладка стволов бамбука, заполненных внутри морской солью, в чугунный короб; обжиг стволов бамбука с использованием в качестве дров, за счет чего происходит сгорание стволов бамбука; размалывание остающегося после обжига столбика соли, а затем повторное помещение размолотой соли в новый ствол бамбука; повторение вышеописанного процесса восемь раз и во время девятого процесса расплавление соли за счет увеличения степени нагрева с помощью добавления сосновой смолы.

Яичный белок и халькантит, содержащиеся в композиции по настоящему изобретению, могут быть порошком. Также, когда композиция включает в себя как яичный белок с халькантитом, так и бамбуковую соль, порошок яичного белка с халькантитом и бамбуковая соль могут смешиваться при различных массовых соотношениях от 1:99 до 99:1, предпочтительно при массовом соотношении от 1:5 до 1:50 и более предпочтительно при массовом соотношении 1:5; 1:10, 1:15, 1:25 и 1:30.

Когда композиция по настоящему изобретению используется как препарат для орального приема, массовое количество молотой бамбуковой соли может быть равным или большим, чем массовое количество порошка яичного белка с халькантитом. В случае применения композиции детьми, ослабленными пациентами, старыми или больными людьми, доля бамбуковой соли может быть увеличена. Однако, если пациент имеет крепкий организм, может быть существенно увеличена доля порошка яичного белка с халькантитом и такая композиция может быть назначена в качестве лекарственного средства при массовом отношении яичного белка с халькантитом к бамбуковой соли вплоть до соотношения от 1:10 до 1:5.

Далее, когда композиция по настоящему изобретению используется как препарат для наружного применения, который наносится на кожу, используется для обработки протиранием или распылением или используется для клизмы, доля порошка яичного белка с халькантитом может быть увеличена, а также яичный белок с халькантитом может назначаться в качестве самостоятельного препарата.

Композиция яичного белка с халькантитом по настоящему изобретению может обладать способностью супрессии раковых клеток за счет повышения активности каспазы-3.

В ряде вариантов осуществления настоящего изобретения, в случае воздействия на клетки рака печени (HepG2), клетки рака толстой кишки (SW480), клетки рака молочной железы (MCF-7), клетки рака легких (NCI-H460) с помощью яичного белка с халькантитом может наблюдаться, что супрессия пролиферации клеток является зависимой от концентрации. Более того, в случае воздействия на клетки рака печени и клетки рака легких с помощью яичного белка с халькантитом, может наблюдаться ядерная фрагментация и конденсация хроматина, вызываемые апоптозом. Дополнительно, способность супрессии рака с помощью композиции яичного белка с халькантитом наблюдается на уровне белка и в результате может быть подтверждено, что активация белка каспазой-3 вызывает апоптоз, т.е. подтверждается, что композиция, включающая яичный белок с халькантитом, подавляет рост раковых клеток.

Композиция яичного белка с халькантитом по настоящему изобретению может использоваться для профилактики или лечения рака. В настоящем описании термин «профилактика» означает каждый случай, который предотвращает возникновение и развитие заболеваний за счет назначения композиции, а термин «лечение» означает каждый случай, который нормализует состояние при заболевании или изменяет состояние при заболевании в благоприятную сторону за счет назначения композиции.

Композиция по настоящему изобретению может применяться для большинства разновидностей рака, например, таких как печени, рак молочной железы, рак легких, рак толстой кишки, рак желудка, рак поджелудочной железы, рак матки, рак предстательной железы, рак костей, глиома, лейкоз и т.д. Предпочтительно, когда композиция по настоящему изобретению назначается при раке печени, толстой кишки, молочной железы и легких, что не является ограничением.

Композиция, включающая яичный белок с халькантитом по настоящему изобретению в качестве активного начала, может использоваться в качестве фармацевтической композиции за счет включения в ее состав фармацевтически приемлемых носителей. В этом случае композиция может быть приготовлена вместе с такими носителями. Также композиция по настоящему изобретению может использоваться как отдельный агент, так и в качестве агента комплексной композиции с другими эффективными ингредиентами, повышающими эффект такого комплексного препарата.

В настоящем изобретении термин «фармацевтически приемлемый носитель» относится к носителям или разбавителям, которые не ингибируют биологическую активность и характеристики назначаемого химического препарата и не стимулируют живые организмы. Фармацевтически приемлемый носитель в композиции, приготовленной в виде жидкого раствора, может включать носители, приемлемые для живого организма, например, солевой раствор, стерилизованная вода, замедлитель, забуференный физиологический раствор, инъекционный раствор альбумина, раствор декстрозы, раствор солодового декстрина, глицерин, этанол, а также смесь, включающая хотя бы один из этих носителей. В случае необходимости в носитель могут быть добавлены целевые добавки типа антиоксидантов, буферных агентов и бактериостатических агентов. Также возможно готовить препарат для применения в виде инъекций (например, водный раствор, суспензия, эмульсия и т.п.), пилюль, капсул, гранул или таблеток за счет дополнительного добавления разбавителей, диспергентов, поверхностно-активных агентов, связующих агентов и лубрикантов.

Композиции по настоящему изобретению может применяться в любых лекарственных формах, включающих ее в качестве активного начала, и приготовляться в формах для перорального или парентерального введения. Препарат по настоящему изобретению может иметь любую лекарственную форму, подходящую для введения перорально, ректально, назально, для наружного применения, подкожно, вагинально, парентерально, в форме для ингаляции или инсуфляции. Здесь парентеральное введение может включать внутримышечное, подкожное или внутривенное введение.

Лекарственная форма для перорального приема, включающая композицию по настоящему изобретению, может быть приготовлена в форме, например, таблеток, пастилок, таблеток для рассасывания, водного раствора или липофильной суспензии, порошков или гранул, эмульсии, твердых или мягких капсул, сиропа, эликсира и т.п. Для приготовления композиции в форме таблеток или капсул композиция может включать связующие вещества (например, лактоза, сахароза, сорбитол, манитол, крахмал, амилопектин, целлюлоза или желатин), наполнители (например, дикальцийфосфат), разрыхлители (например, кукурузный крахмал или крахмал батата) и лубриканты (например, стеарат магния, стеарат кальция, натрия стеарил фумарат или парафинированный полиэтиленгликоль). В случае использования капсульных лекарственных форм жидкие носители типа жирного масла также могут быть добавлены в дополнение к вышеперечисленным веществам.

Лекарственная форма для парентерального введения, включающая композицию по настоящему изобретению, может быть приготовлена в форме для инъекций, типа подкожной, внутривенной или внутримышечной инъекции, в форме суппозитория или в форме спрея типа аэрозоли, который может вдыхаться через дыхательные пути. Для приготовления лекарственной формы для инъекций композиция по настоящему изобретению может смешиваться со стабилизатором или буферным агентом в воде для приготовления за счет этого раствора или суспензии, при этом приготовленный раствор или суспензия могут быть подготовлены в форме однократных доз в ампулах или флаконах. Такая форма, как суппозиторий, может быть приготовлена в форме композиции для ректального введения типа клизмы или свечей, включая обычную основу для свечей, например, масло какао или другие глицериды. В случае использования формы в виде спрея типа аэрозоли могут добавляться пропелленты с целевыми добавками, такие как водно-дисперсные вещества в конденсированном состоянии или диспергированный увлажненный порошок.

В другом аспекте по настоящему изобретению предлагается способ профилактики или лечения рака путем применения композиции, включающей яичный белок с халькантитом.

В настоящем изобретении лечение заболеваний может включать применение фармацевтической композиции, включающей яичный белок с халькантитом. В настоящем изобретении термин «применение» означает введение фармацевтической композиции по настоящему изобретению пациенту с помощью подходящих способов.

Композиция по настоящему изобретению может быть применена с помощью различных способов введения, например, с помощью только перорального способа введения или только парарентального способа введения, если в этом случае композиция может достичь орган-мишень. В частности, композиция может применяться с помощью обычных способов введения, например, с помощью перороального, ректального, наружного, внутривенного, внутритазового, внутримышечного, внутриартериального, подкожного, интраназального, ингаляционного, интраокулярного или интрадермального способа введения. Желательно, когда композиция применяется пероральным введением или накожно.

Способ лечения по настоящему изобретению включает применение композиции по настоящему изобретению в фармацевтически приемлемых дозах. Для специалиста, обладающего обычными знаниями в этой области, очевидно, что общая дневная доза может быть назначена врачом в рамках надлежащей медицинской оценки. Терапевтически эффективная доза для определенного пациента может быть определена в зависимости от различных факторов или псевдофакторов, хорошо известных в области медицины, например, вид и длительность действия, которые должны быть достигнуты, возможность использования конкретной лекарственной формы и специфических композиций от частного случая, возраста пациента, массы тела, общего состояния здоровья, пола, диетических ограничений, способа введения и коэффициента распределения композиции, продолжительности лечения, лекарственных средств, принимаемых совместно или последовательно с композицией и т.д. Поэтому эффективная дневная доза фармацевтической композиции, подходящая для объекта, может быть определена, принимая во внимание вышеуказанное. Предпочтительно, когда эффективная дневная доза фармацевтической композиции назначается в количестве от 0,1 г до 30 г, базируясь на массе порошка яичного белка с халькантитом. Однако такая доза не является ограничением, когда композиция назначается для наружного применения, например, для клизмы, наружного нанесения и т.п.

Далее, способ лечения по настоящему изобретению может использоваться для любых животных, которые могут болеть раком. Здесь под животными могут пониматься не только люди и приматы, но также домашние животные, такие как коровы, свиньи, овцы, лошади, собаки или кошки.

В частности, при пероральном приеме композиции по настоящему изобретению возможно глотать композицию вместе с водой, с водой, в которой смешаны и настояны имбирь и корень солодки, с водой, содержащей экстракт коры корня вяза, или со слюной. В качестве способа приема может использоваться прием капсул, содержащих композицию, с помощью вышеописанных способов, равно как и с помощью непосредственного приема композиции. В этом случае прием капсул, содержащих композицию, заглатыванием вместе со слюной более предпочтителен, чем прием капсул с водой или напитком. Композиция может быть назначена так, что ее можно смешать с пищей или напитком в небольшом количестве. Например, микстура с композицией может быть добавлена в рисовую лапшу или обжаренный чеснок, или порошок яичного белка с халькантитом может быть добавлен в сою с бамбуковой солью.

В частных вариантах осуществления настоящего изобретения яичный белок с халькантитом по настоящему изобретению назначается пациентам, страдающим от рака, вместе с бамбуковой солью, при этом также может наблюдаться противораковый эффект. В результате наблюдается, что применение яичного белка с халькантитом является эффективным для лечения рака молочной железы, лейкемии, рака желудка, рака толстой кишки, рака легких, рака костей, дисплазии шейки матки, рака щитовидной железы и т.д.

В другом аспекте по настоящему изобретению предлагается функциональный оздоровительный пищевой продукт для профилактики рака или улучшения состояния при раке, включающий яичный белок с халькантитом в качестве активного начала.

Функциональный оздоровительный пищевой продукт по настоящему изобретению может включать бамбуковую соль в дополнение к яичному белку с халькантитом.

Композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена с добавлением пищевых добавок, которые являются ситологически приемлемыми, и может использоваться в качестве функционального оздоровительного пищевого продукта для профилактики рака или улучшения состояния при раке. Такой функциональный оздоровительный пищевой продукт по настоящему изобретению может быть осуществлен в таких формах, как таблетки, капсулы, пилюли и жидкость.

Пища, в которую может быть добавлена композиция по настоящему изобретению, может включать, например, различные виды бакалейных товаров, напитков, желейные продукты, чай, витаминные комплексы, биологически активные пищевые добавки.

Термин «функциональный оздоровительный пищевой продукт» означает в настоящем описании пищевой продукту, который произведен или готовится с использованием сырья, обладающего полезными функциями для организма человека. Здесь термин «функциональный» означает, что потребление такой пищи направлено на управление с помощью питательных веществ структурой и функциями организма человека или достижения полезного эффекта с целью сохранения здоровья, например, физиологической активности.

Композиция по настоящему изобретению может быть добавлена в пищу или напитки для целей предотвращения рака или улучшения состояния при раке. Здесь количество композиции, добавляемой в пищу или напиток, может находиться в пределах от 0,01% мас. до 10% мас. по отношению к общей массе пищи. Например, общий объем напитка составляет 100 мл, композиция может быть добавлена в напиток в количестве от 0,01 г до 5 г, более предпочтительно от 0,5 г до 1 г.

В другом аспекте по настоящему изобретению предлагается способ приготовления композиции белка с халькантитом, включающий операции: (a) нагрев и дегидратация халькантита, являющегося лекарственным сырьем минерального происхождения, до тех пор, пока весь халькантит не приобретет серый цвет; (b) охлаждение дегидратированного халькантита и его порошкование; и (c) смешивание халькантита, полученного в операции (b), с яичным белком.

Здесь, ниже, способ приготовления белка с халькантитом по настоящему изобретению будет описан для каждой операции.

В операции (а) халькантит (в частности, натуральный минерал, содержащий CuSO₄·5H₂O) нагревают и затем подвергают дегидратации. Нагрев халькантита может выполняться с использованием обычных способов, которые известны из уровня техники. Предпочтительно, когда халькантит помещают в котел, а затем обжигают с помощью газового пламени, пламени древесины или древесного угля. В процессе нагревания халькантит можно переворачивать для равномерного нагрева при внимательном наблюдении изменения цвета каждые 3-5 часов. Хотя надлежащее время нагрева может варьироваться для разного обжигаемого количества, все же обычным является время обжига 10-24 час. Халькантит нагревают до тех пор, пока все его кристаллы не приобретут серый цвет, т.е. перейдут в состояние дегидратированного халькантита.

В операции (b) халькантит, нагретый и дегидратированный в операции (a), охлаждают, а затем порошкуют. Дегидратированный халькантит должен быть охлажден полностью. Здесь содержание влаги в дегидратированном халькантите может составлять 0-5%. После того как дегидратированный халькантит охлажден полностью, его измельчают в порошок. После этого порошок халькантита может быть уложен в пластиковый пакет или герметичный контейнер, чтобы предотвратить абсорбцию им влаги, а затем его хранят в сухом месте.

В операции (c) порошок халькантита, полученный в операции (b), смешивают с яичным белком, чтобы вызвать реакцию между халькантитом и яичным белком, которая снижает или снимает токсичность халькантита и улучшает фармацевтические свойства.

Здесь яйцо должно быть разделено на яичный желток и яичный белок, а затем в настоящем изобретении используется только яичный белок. Яйцо может быть домашним, предпочтительно яйцом курицы корейский огол. Порошок дегидратированного халькантита, приготовленный в операции (b), смешивают с яичным белком. При этом соотношение при смешивании может быть 600 г порошка халькантита на 140-400 г яичного белка, который обычно получают из 7-20 яиц. При наблюдении за процессом смешивания количество яичного белка может регулироваться, при этом халькантит и яичный белок могут быть смешаны равномерно с использованием подходящего устройства, например, деревянной лопатки, которая редко оказывает влияние на реакцию. Дополнительно, смешивание может выполняться в сосуде, который является неактивным в химической реакции, например, в глиняном сосуде, керамическом изделии или кварцевом сосуде. Во время смешивания следует уделять особое внимание этому процессу, т.к. при нем выделяется значительная теплота реакции.

Далее, если количество яичного белка слишком мало при смешивании, то достаточно трудно нейтрализовать токсичность порошка дегидратированного халькантита. И, наоборот, если количества яичного белка явно слишком много, теплота реакции слишком мала или практически не генерируется, что делает трудным достижение необходимого эффекта при смешивании. Таким образом, количество яичного белка должно быть тщательно отрегулировано. После того как халькантит и яичный белок смешаны надлежащим образом, эта смесь охлаждается до полного прекращения выделения теплоты реакции.

Более того, способ приготовления композиции по настоящему изобретению, после выполнения операции (c), может включать операцию (d) охлаждения смеси, полученной в операции (c), и порошкование охлажденной смеси, полученной в операции (c).

В операции (d) смесь, полученная в операции (c), охлаждают до полного выхода теплоты из смеси, после чего смесь халькантита и яичного белка измельчают в порошок, чтобы получить порошок яичного белка с халькантитом. Здесь за счет порошкования яичного белка с халькантитом он может эффективно использоваться в фармацевтических или ситологических препаратах или диетических продуктах, а также увеличивается площадь реакции, за счет чего максимально увеличивается терапевтическая активность.

В яичном белке с халькантитом, приготовленным с помощью вышеописанного способа, токсичность халькантита снята, а его фармацевтические свойства улучшены, поэтому он может использоваться в фармацевтической или диетической композиции для лечения или профилактики рака.

Преимущества

Композиция, включающая яичный белок с халькантитом по настоящему изобретению, приготовлена в такой форме, в которой токсичность халькантита снята, а фармацевтическая активность приготовленной композиции повышена до максимума, за счет чего композиция обладает ярко выраженной противораковой активностью. Поэтому такая композиция может использоваться для целей профилактики и лечения рака.

Краткое описание фигур чертежей

Фиг.1 иллюстрирует методику проведения теста обратной мутации микроорганизмов.

Фиг.2-4 и 5 иллюстрируют результаты МТТ-теста для каждой из клеток после обработки клеток рака печени (HepG2), клеток рака легких (NCI-H460), клеток рака толстой кишки (SW480) и клеток рака молочной железы (MCF-7) с помощью обожженного халькантита (IS3), яичного белка с халькантитом (IS4) и исходного халькантита (IS5) соответственно.

Фиг.6 и 7 иллюстрируют результаты окрашивания клеток DAPI после обработки NCI-H460 и HepG2 с помощью обожженного халькантита (IS3) и яичного белка с халькантитом (IS4), имеющих концентрацию 50 мкг/мл соответственно.

Фиг.8 иллюстрирует результаты вестерн-блоттинга для наблюдения степени экспрессии белка клеток после обработки клеток NCI-H460 с помощью яичного белка с халькантитом (IS4) с различной концентрацией.

Фиг.9, 10 и 11 иллюстрируют графики изменения веса тела, количества потребляемой пищи и количества потребляемой жидкости в зависимости от времени у мышей контрольной группы и опытных групп, которые были заражены клетками NCI-H460, соответственно.

Фиг.12 иллюстрирует график изменения объема опухоли в зависимости от времени у мышей контрольной группы и опытных групп, которые были заражены клетками NCI-H460.

Фиг.13 иллюстрирует сроки выживаемости у мышей контрольной группы и опытных групп, которые были заражены клетками NCI-H460.

Фиг.14 иллюстрирует часть гистопатологического исследования, а именно результаты оптической микроскопии печени мышей контрольной группы и опытных групп, которые были заражены клетками NCI-H460.

Примеры

Далее, композиция, включающая яичный белок с халькантитом для профилактики и лечения рака по настоящему изобретению, будет описана более подробно со ссылками на сопровождающие чертежи. Однако нижеприведенные примеры предназначены только для целей иллюстрации настоящего изобретения, не ограничивая настоящее изобретение.

Пример 1. Подготовка исследуемого материала (исходный халькантит, обожженный халькантит и яичный белок с халькантитом).

Обожженный халькантит получали обжигом и дегидратацией исходного халькантита, а яичный белок с халькантитом получали обработкой обожженного халькантита с яичным белком. В тесте использовали как исходный халькантит, так и обожженный халькантит и яичный белок с халькантитом.

Сначала готовили обожженный халькантит за счет нагрева и обжига исходного халькантита. В частности, когда исходный халькантит нагревали в течение 24 час, исходный халькантит стал серым за счет его дегидратации. Такой дегидратированный халькантит далее упоминается как «обожженный халькантит». После полного охлаждения обожженного халькантита его измельчали в порошок.

Яичный белок с халькантитом готовили за счет смешивания с последующей реакцией порошка обожженного халькантита с яичным белком. В частности, 600 г порошка обожженного халькантита смешивали с 260 г яичного белка, отделенного от 13 свежих яиц домашних куриц, и проведения реакции с использованием влаги, содержащейся в яичных белках, с выделением большого количества теплоты (теплота реакции). В результате халькантит приобрел зеленый цвет и его порошок агломерировался, такая композиция далее упоминается как «яичный белок с халькантитом».

Для целей дальнейшего использования обожженный халькантит (IS3), яичный белок с халькантитом (IS4) и исходный халькантит (IS5) были развешены по 100 мг с помощью весов, а затем были разведены каждый в бидистилляте воды для приготовления смеси в количестве 1 мл. После полного растворения материалов супернатант отфильтровали с помощью шприцевого фильтра (0,8 мкм) центрифугированием смеси при частоте вращения 6000 об/мин.

Таблица 1
	Материал	Полный объем	Особенности	Размер фильтра	Примечание
Раствор вдистиллированнойводе	IS3	Обожженный халькантит	100 мг/мл	Растворимость 97% (около 30 мкг выпало в осадок)	фильтр 0,8 мкм	Супернатант отделен на центрифуге при 6000об/мин в течение 10 мин
IS4	Яичный белок с халькантитом	100 мг/мл	Крайне малый садок в виде белого порошка	фильтр 0,8 мкм
IS5	Исходный халькантит	100 мг/мл	Растворен	фильтр 0,8 мкм

Пример 2. Тест обратной мутации микроорганизмов для исследования генетической токсичности.

Для оценки степени генетической токсичности обожженного халькантита и яичного белка с халькантитом был выполнен тест обратной мутации микроорганизмов, с помощью которого можно обнаружить клеточный мутаген.

Сущностью этого теста является использование измененных штаммов, неспособных к биосинтезу гистидина, которые не растут в среде, не содержащей гистидин. Этот тест выполняется для обнаружения репарации гистидина, что является свойством исходного штамма и происходит под влиянием мутагенов в тесте обратной мутации. В этом тесте, если количество колоний штаммов, по крайней мере, в два раза превосходит их количество в необработанной группе (негативная контрольная группа) или возрастает в зависимости от концентрации исследуемого материал, то результат теста расценивается как положительный, и исследуемый материал считается мутагеном.

Для выполнения теста обратной мутации микроорганизмов в качестве предкультуры использовали стандартные штаммы Salmonella typhimurium TA98, ТА100, ТА1535 и ТА1537. Сначала провели пробу на толерантность, после чего два штамма, а именно ТА100 и ТА102, были отобраны в качестве штаммов для теста, как продемонстрировавшие толерантность по отношению к халькантиту. Штамм Salmonella typhimurium ТА100 является штаммом для теста на обратную мутацию в гене гуанина и цитозина, а штамм ТА102 является штаммом для теста на обратную мутацию аденина и тимина.

Когда антибактериальный тест выполнялся на клетках с использованием яичного белка с халькантитом (5000 мкг/чашка) и обожженного халькантита (2500 мкг/чашка), наблюдалось, что рост штаммов супрессировался. Поэтому тест на генетическую токсичность (обратной мутации) выполнялся при нижеприведенных концентрациях, когда рост штаммов не супрессировался (см. фиг.1).

Яичный белок с халькантитом, имеющий концентрацию 1250, 625, 313, 156 и 78 мкг/чашка, использовался в качестве опытной группы с максимальной концентрацией 2500 мкг/чашка. Также в качестве опытной группы использовался обожженный халькантит, имеющий концентрацию 625, 313, 156 и 78 мкг/чашка с максимальной концентрацией 1250 мкг/чашка.

В качестве позитивной контрольной группы использовались азид натрия с концентрацией 1 мкг/чашка (для штамма Salmonella typhimurium ТА100) и митомицин С (для штамма Salmonella typhimurium ТА102). В качестве негативной контрольной группы использовалась дистиллированная вода.

Соответствующие материалы для исследования, химические соединения позитивных контрольных групп, дистиллированная вода обрабатывались на чашках, после чего подсчитывалось количество колоний штамма с обратной мутацией. Результаты представлены ниже.

Таблица 2
Яичный белок с халькантитом, Штамм: ТА 100
	Позитивная контрольная группа	Негативная контрольная группа	Опытная контрольная группа
Концентрация (мкг/чашка)	1	0	2500	1250	625	313	156	78
Количество	1136	194	241	195	157	142	159	186
1421	211	205	221	184	173	162	162
Среднее количество	1279	202	223	208	171	158	161	174

Таблица 3
Отожженный халькантит, Штамм: ТА 100
	Позитивная контрольная группа	Негативная контрольная группа	Опытная контрольная группа
Концентрация (мкг/чашка)	1	0	1250	625	313	156	78
Количество	1662	237	192	186	193	192	173
1456	201	235	179	182	193	169
Среднее количество	1559	219	214	183	188	193	171

Таблица 4
Яичный белок с халькантитом, Штамм: ТА102
	Позитивная контрольная группа	Негативная контрольная группа	Опытная контрольная группа
Концентрация (мкг/чашка)	1	0	2500	1250	625	313	156	78
Количество	>1000	5	3	4	2	1	0	2
	>1000	3	5	3	2	0	3	1

Таблица 5
Отожженный халькантит, Штамм: ТА102
	Позитивная контрольная группа	Негативная контрольная группа	Опытная контрольная группа
Концентрация (мкг/чашка)	1	0	1250	625	313	156	78
Количество	>1000	2	2	4	1	3	0
	>1000	3	1	0	3	4	2

В случае штамма Salmonella typhimurium ТА100 количество колоний штамма в группах, обработанных яичным белком с халькантитом и обожженным халькантитом, было значительно меньше, чем в позитивной контрольной группе, и даже подобным количеству колоний в негативной контрольной группе при максимальной концентрации, не вызывающей супрессию роста микроорганизмов. Более того, количество колоний не возрастало в зависимости от концентрации. Поэтому было определено, что яичный белок с халькантитом и обожженный халькантит не являются мутагенами.