Способ нормализации активности 2 антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией

Способ нормализации активности 2 антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией

Реферат

Изобретение относится к биологии и ветеринарии, а именно к гематологии.

Ближайшим аналогом предлагаемого способа нормализации уровня α₂ антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией можно считать RU 2392927 «Способ нормализации уровня α₂ антиплазмина при анемии у новорожденных телят и поросят». В прототипе, как и в заявленном способе, применяется ферроглюкин, но в виде двоекратного введения, разнесенного на 2 инъекции через 10 суток, что удлиняет сроки коррекции и без индивидуализации количества железа, вводимого в организм теленка. Применяемые в сочетании с ферроглюкином еще 2 стимулирующих препарата делают прототип «громоздким» и сложным в исполнении в условиях промышленного животноводства. При этом заявленный способ отличается простотой и легкостью при его применении на практике с достижением коррекции α₂ антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией через 6 суток против 10 суток в прототипе. Кроме того, у гликопина, применяемого в заявленном способе (N-ацетилглюкозаминил-N-ацетил-мурамил-аланил-Д-изоглутамин), (Андронова Т.М., Пинегин Б.В., Козлов И.Г., Устинова Г.И. Применение иммуномодулятора гликопина для профилактики и лечения заболеваний животных. Методические рекомендации. Москва, 2009. - 12 с.) ранее ни при изолированном его применении, ни при сочетании с какими-либо средствами не обнаруживалась способность влиять на активность α₂ антиплазмина при железодефицитной анемии.

Целью изобретения является достижение нормализации уровня α₂ антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для нормализации уровня α₂ антиплазмина новорожденным телятам с железодефицитной анемией назначаются ферроглюкин-75 (1 мл), содержащий 75 мг железа в 1 мл раствора, из расчета 15 мг железа на 1 кг живой массы теленка внутримышечно, однократно в сочетании с выпаиванием разведенного в небольшом количестве (100,0 мл-150,0 мл) воды, или молока, или молозива гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина.

Способ позволяет нормализовать уровень α₂ антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией на следующие сутки после завершения лечения, стабильно переводя его на уровень, свойственный для здоровых телят, что позволяет у новорожденных телят существенно снижать риск тромботических осложнений, оздоравливать стадо, увеличивать привесы, исключить падеж без потерь в будущем качества и объема получаемой мясной и молочный продукции.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для диагностики у новорожденных телят с железодефицитной анемией нарушения уровня α₂ антиплазмина (α₂-АП), являющегося наиболее важным ингибитором фибринолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимо лишенного активности комплекса "плазмин-α₂-АП", проводится его оценка по следующей методике (Москва, 1999, издательство «Ньюдиамед-АО». - С.132-133).

α₂-Антиплазмин (α₂-АП) является наиболее важным ингибитором фибринолиза, в присутствии которого происходит быстрое формирование необратимо лишенного активности комплекса "плазмин-α₂-АП". Метод основан на определении способности α₂-АП исследуемого образца плазмы инактивировать добавляемый в плазму очищенный плазмин. Содержание остаточного плазмина определяется по степени гидролиза хромогенного субстрата, специфичного по отношению к этому ферменту.

α₂-АП_{образец}+плазмин _{избыток}=[α₂-АП - плазмин]+плазмин _{остаток}

Используются реактивы: 1. Плазмин крупного рогатого скота, лиофилизированный. Разводится в буфере до концентрации 0,1 СТА Е/мл. 2. Хромогенный субстрат D-Norvalylcyclohexylalanil-lysil-p-nitroanilide. Разводится в дистиллированной воде до концентрации 3 ммоль/л. 3. Раствор буфера: КН₂РО₄ (100 ммоль/л), NaCl 9 г/л, глицерин (250 г/л), pH 7,5.

Для выполнения исследования необходима также стандартная или контрольная нормальная плазма с известным содержанием α₂-АП или пулированная (взятая не менее чем от 10 здоровых телят), активность α₂-АП в которой принимается за 100%.

Применяется следующее оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой. Температура реакции +37°C. Используемая длина волны 405 нм. Ширина оптического пути кюветы -1 см.

Материалом для исследования служит цитратная бедная тромбоцитами плазма.

Предварительно все смешиваемые реагенты подогреваются до +37°C. Ход определения приводится в таблице.

Таблица.
Схема определения уровня α2 антиплазмина у обследуемого животного
Последовательность операций	Исследуемый образец	Контроль (плазмин)
1. Внести в кювету или пробирку:
исследуемую плазму	20 мкл (0,02 мл)	-
физиологический (0,15 М) раствор хлорида натрия		20 мкл (0,02 мл)
раствор плазмина	1,0 мл	1,0 мл
2. Перемешать и инкубировать при +37°C в течение 1 мин
3. Добавить хромогенный субстрат и включить секундомер	0,1 мл	0,1 мл
В течение 30 сек учитывают показатели поглощения и одновременно включают секундомер. Спустя 60 и 120 сек повторно определяют показатели поглощения.

Вычисляют скорость изменения поглощения за 1 мин (Δ А/мин), которая пропорциональна активности α₂-АП. Для этого рассчитывают разницу поглощения при 405 нм между 0 и 60 секундами инкубации, а также между 60 и 120 секундами. Определяют среднюю величину из двух показателей Δ А/мин.

Каждая серия анализов требует не менее одного значения для раствора плазмина (Δ А/мин _{плазмин}) и одного референтного значения, определяемого с использованием контрольной нормальной плазмы (Δ А/мин _{контроль}) с известным значением α₂-АП. Эти значения используют для вычисления внутрилабораторного коэффициента пересчета (Кп):

Содержание α₂-АП в исследуемом образце плазмы в виде % от нормы в дальнейшем вычисляется по формуле:

α₂-АП_{образец} (% от нормы)=Кп×(Δ А/мин _{плазмин} - Δ А/мин _{образец})

В норме уровень α₂-АП в плазме крови составляет 80-120%.

Снижение активности α₂-АП может быть определено при активации фибринолиза, его повышение сопряжено с риском тромбоза.

При выявлении у новорожденных телят с железодефицитной анемией повышения α₂-АП необходимо назначение лечения согласно заявленному способу.

Пример 1. У новорожденного теленка с железодефицитной анемией №07, 2-е сутки жизни с массой тела 29 кг была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного теленка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 84,7 г/л, эритроцитов 4,01×10¹²/л, сидероцитов 1,3% при уровне железа в сыворотке 13,6 мкмоль/л.

При обследовании у теленка была выявлена повышенная активность α₂-АП (142%). Животному был назначен раствор ферроглюкина-75 в количестве 5,8 мл внутримышечно, однократно и выпаивание разведенного в 150,0 мл воды гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка нормализовалась красная кровь. Так, количество гемоглобина у него возросло до 118,0 г/л, эритроцитов - до 5,20×10¹²/л, сидероцитов до 7,1% при увеличении железа в сыворотке до 19,3 мкмоль/л. У теленка была достигнута полная нормализация активности α₂-АП (118%).

Наблюдение за теленком в последующем зарегистрировало сохранение активности α₂-АП как минимум в течение 1 месяца после окончания лечения (не выше 115%).

Пример 2. У новорожденного теленка с железодефицитной анемией №12, 4-е сутки жизни, масса тела 33 кг, была взята кровь и исследована по изложенной выше схеме.

У данного теленка отмечалось нарушение эритропоэза с признаками снижения уровня содержания железа в его организме, сопровождаясь изменением показателей крови. Так, количество гемоглобина у него составляло 84,5 г/л, эритроцитов 3,96×10¹²/л, сидероцитов 1,0% при уровне железа в сыворотке 12,0 мкмоль/л.

При обследовании у теленка была выявлена повышенная активность α₂-АП (146%). Животному был назначен раствор ферроглюкина-75 в количестве 6,6 мл внутримышечно, однократно и выпаивание разведенного в 100,0 мл молока гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина.

На следующие сутки после окончания лечения у теленка нормализовалась красная кровь: количество гемоглобина у него возросло до 121,0 г/л, эритроцитов - до 5,6×10¹²/л, сидероцитов до 8,2% при увеличении железа в сыворотке до 25,7 мкмоль/л.

У теленка была достигнута полная нормализация активности α₂-АП (89%).

Наблюдение за теленком в последующем не зарегистрировало отрицательной динамики α₂-АП как минимум в течение 3 месяцев (α₂-АП был не выше 100%).

Заявленный способ апробирован на 145 новорожденных телятах с железодефицитной анемией, показав в 100% случаев эффективность коррекции железодефицитной анемии и уровня α₂-АП.

Использование предлагаемого способа оптимизации активности α₂-АП в ветеринарии поможет избежать сосудистых нарушений у новорожденных телят с железодефицитной анемией, оздоровит стадо, сведет к минимуму падеж, увеличит привесы, повысит качество и объем получаемой мясной и молочной продукции и позволит получать в последующем от этих телят здоровое потомство.

Способ нормализации активности α₂ антиплазмина у новорожденных телят с железодефицитной анемией, отличающийся тем, что применение раствора ферроглюкина-75 из расчета 15 мг железа на 1 кг массы тела теленка внутримышечно однократно сочетается с выпаиванием гликопина по 6,0 мг/сутки утром в течение 6 суток, начиная одновременно с инъекцией ферроглюкина.