Иммуностимулирующее средство

Иммуностимулирующее средство

Реферат

Изобретение относится к области иммунологии и может найти применение в биотехнологии и в иммунотерапии в качестве средства для стимулирования функциональной активности иммунокомпетентных клеток.

Известна биологическая активность ультрадисперсных алмазов (Пат. РФ №2203068. Биологически активные ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза. A61K 33/44. Опубл. 2003.04.27), однако их иммуномодулирующие свойства, тем более в сочетании с другими биологически активными веществами, не выявлены.

Известна композиция, обладающая иммуностимулирующими свойствами, содержащая ультрадисперсный алмазный порошок (Пат. РФ №2348416, МПК A61K 33/44. Композиция, обладающая иммуностимулирующими свойствами. Опубл. 10.03.2009. Принято за прототип).

В качестве компонента, усиливающего иммуностимулирующие свойства, известная композиция содержит фуллерен, модифицированный порфирином. Имунностимулирующая активность известной композиции недостаточна. Кроме того, количественный диапазон между иммуностимулирующим и иммунотоксическим действием модифицированного фуллерена, весьма мал, что вносит риск нежелательного побочного действия.

Технической задачей изобретения является получение иммуностимулирующего средства на основе продуктов нанотехнологий, а именно наноалмазов, обладающего высокой иммунобиологической активностью и малой токсичностью.

Поставленная задача решается путем использования в активной композиции, кроме обычных наноалмазных порошков, наноалмазов, модифицированных золотом, в эффективном количестве.

Оба компонента представляют собой нанодисперсные порошки, способные к длительному хранению, а их смесь допускает различные формы терапевтического использования.

Согласно изобретению выявленное иммуностимулирующее средство содержит указанные компоненты в массовом процентном соотношении 55:45.

Заявленная композиция обладает значительно увеличенной иммуностимулирующей активностью относительно композиции-прототипа.

Благодаря современным методам очистки детонационных наноалмазов они сравнительно дешевы (Пат. РФ №2083490. Способ выделения ультрадисперсных алмазов из водной суспензии. 1997; Пат. РФ №2109683. Способ выделения синтетических ультрадисперсных алмазов. 1998).

Анализ специальной литературы не выявил работ других авторов по факту стимулирования функциональной активности иммунокомпетентных клеток применением алмазов, модифицированных золотом, в частности, в сочетании с нанодисперсными алмазами.

Модифицирование поверхности наноалмаза проведено наночастицами золота в виде гидрозоля, полученного по методике, описанной Ященок А.М. с соавт., которая включает реакцию восстановления золота(III) цитратом натрия [4]. В опытах авторами использованы образцы металлизированного наноалмаза, содержащие на своей поверхности 1,5% золота. Диаметр частиц порошка 11-23 нм.

Результаты проведенных исследований вышеуказанных смесей в различных соотношениях, в частности 55:45, показали высокие иммуностимулирующие свойства заявляемой композиции и наличие у нее иммунобиологической активности, что иллюстрируется конкретным примером.

Пример. К порошку наноалмазов, полученных детонационным синтезом, с размером частиц от 2 до 7 нм, добавляли порошок наноалмазов, модифицированных золотом, в массовом процентном соотношении 55:45. Композиция исследовалась на иммунобиологическую активность.

Проведено тестирование действия композиции на иммунокомпетентные клетки в реакции бластной трансформации лимфоцитов человека, стимулированных фитогемагглютинином (ФГА) после действия препаратов в диапазоне концентраций (2-20)×10^-3 мг/мл. Оценка влияния препаратов на пролиферативную активность лимфоцитов в спонтанном и индуцированном ФГА тесте проведена в соответствии с методическими рекомендациями Фармкомитета Минздрава. РФ [Ведомости фармакологического комитета, 1999, №1].

Иммуностимулирующая активность композиции по приведенному примеру представлена на фиг.1.

Из графика хорошо видно, что заявляемая композиция в изученных концентрациях оказывает стимулирующее действие на спонтанную активность лимфоцитов в диапазоне 35-70% относительно прототипа и до 240% относительно контроля. Кроме того, видно, что заявляемая композиция не оказывает угнетающего действия на индуцированную ФГА пролиферативную активность лимфоцитов.

Проведены также исследования влияния композиции на функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов периферической крови доноров в широком спектре концентраций (0,2-20)×10^-3 мг/мл. Применялась известная из литературы методика моделирования фагоцитоза с использованием штамма Staphylococcus aur. H-209 (Новиков Д.К., Новикова В.Н. Оценка иммунного статуса. Москва-Витебск, 1996, 281 с.). Подсчитывался процент активных нейтрофилов (ПАН), поглотительная способность нейтрофилов (ПСН) и процент завершенного фагоцитоза (ПЗФ) при контрольном тестировании без воздействия препаратов. Результаты представлены в таблице, из которой видно, что после воздействия композиции повышается процент активных нейтрофилов и их фагоцитарная активность в сравнении с прототипом, что может иметь важное значение для иммунотерапии.

Таблица
Влияние композиции на функциональную активность нейтрофильных лейкоцитов
Доза, 10-3 мг/мл	% ПАН	% ПСН	% ПЗФ
контроль	33	4,5	55
	Прототип	Композиция	Прототип	Композиция	Прототип	Композиция
0,2	47	48	3	5	70	73
2	51	54	4	6	71	70
20	35	40	2	4	54	67

В литературных источниках отсутствуют сведения о применении заявляемых композиций в иммунологической практике, в частности из уровня техники их иммуностимулирующие свойства на настоящий момент неизвестны, что свидетельствует о новизне технического решения, а неочевидность иммуностимулирующей активности композиции позволяет говорить о соответствии его критерию «изобретательский уровень».

Технический результат - повышение иммунобиологической активности при малой токсичности средства.

Использованная литература

1. Пат. РФ №2203068. Биологически активные ультрадисперсные алмазы детонационного синтеза. A61K 33/44. Опубл. 2003.04.27.

2. Пат РФ №2348416, МПК A61K 33/44. Композиция, обладающая иммуностимулирующими свойствами. Опубл. 10.03.2009.

3. Пат. РФ №2083490. Способ выделения ультрадисперсных алмазов из водной суспензии. 1997; Пат. РФ №2109683. Способ выделения синтетических ультрадисперсных алмазов. 1998.

4. Ященок A.M., Иноземцев О.А., Горин Д.А., Хлебцов Б.Н. Влияние размера наночастиц коллоидного золота на физические параметры оболочек нанокомпозитных микрокапсул // Коллоидный журнал, 2009, т.71. №3, с.420-427.

5. Ведомости фармакологического комитета, 1999, №1.

Иммуностимулирующее средство, содержащее порошок наноалмазов, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит наноалмазы, модифицированные золотом, при следующем содержании компонентов, мас.%:

порошок наноалмазов	55
порошок наноалмазов, модифицированных золотом	45