Снижение сопутствующих инфекций у свиней с помощью антигена pcv2

Снижение сопутствующих инфекций у свиней с помощью антигена pcv2

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Перечень последовательностей

В настоящую заявку входит перечень последовательностей в бумажной и электронной версии, сущность и содержание которого включено в настоящее описание в качестве ссылки. Перечень последовательностей идентичен перечню, включенному в WO 06/072065.

Предпосылки создания изобретения

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к ветеринарии, в частности к инфекционным болезням. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу снижения сопутствующих инфекций у свиней, которые вызываются патогенами, отличными от PCV2.

Описание известного уровня техники

В 1996 г. было описано новое заболевание, обозначенное как «синдром после отъемного мультисистемного истощения» (PMWS), применительно к случаям, которые были обнаружены в Канаде 5-ю годами раньше (Clark Т. Pathology of the Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome of Pigs, 1996, cc.22-25). В качестве основного возбудителя этого синдрома болезни был идентифицирован цирковирус свиней типа 2 (PCV2). При этом PMWS обнаружен практически во всех регионах мира, в которых разводят свиней (Brunborg I.M., Moldal Т., Jonassen C.M., J Virol Methods 15, 122(2), 20 декабря 2004 г., cc.171-178). Наиболее часто поражаются свиньи возрастом 5-15 недель (Allan G, McNeilly F., PMWS/PCVD: Diagnosis, Disease and Control: What do we know?, 16 июля-19 июля 2006 г., Allan GM и др., Vet Microbiol, 98(2), 4 февраля 2004 г., cc.165-168; Chae C., Vet J, 168(1), июль 2004 г., cc.41-49). Клинические признаки включают значительное увеличение коэффициента смертности, истощение, генерализованное увеличение лимфатических узлов, респираторные симптомы и иногда бледность, желтуху и диарею (Chae C., Vet J, 169(3), май 2005 г., cc.326-336; Segales J. и др., Vet Microbiol, 98(2), 4 февраля 2004 г., cc.151-158). Эти клинические признаки не все проявляются одновременно в пораженном PMWS стаде свиней, но, вероятно, что проявление клинических признаков косвенно связано со специфическими для фермы копатогенами, мишенью которых являются различные системы органов (Krakowka S. и др., Vet Pathol, 38(1), январь 2001 г., cc.31-42). Эпидемиологические исследования продемонстрировали, что наиболее часто синдром заболевания встречается в сочетании с присутствием возбудителя репродуктивно-респираторного синдрома свиней (PRRSV), вируса свиного гриппа (SIV), парвовируса свиней (PPV), Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae (APP), Streptococcus suis и Mycoplasma hyopneumoniae (Chae C., Vet J, 168(1), июль 2004 г., cc.41-49).

Было постулировано, что для проявления PMWS основное значение имеет активация иммунной системы (Krakowka S. и др., Vet Pathol, 38(1), январь 2001 г., cc.31-42). В то время как экспериментальная инокуляция только PCV2 приводила к возникновению лишь асимптоматических инфекций и очень незначительного гистологического проявления воспаления, двойное заражение PCV2 и PPV или PRRSV приводило к более серьезным клиническим признакам, макроскопическим и гистологическим повреждениям, более широкому распространению и более высокому уровню вирусной нагрузки PCV2 в пораженных тканях. Эти результаты позволяют предположить, что основную роль играет PCV2, поскольку заражение только PRRSV или PPV не приводит к сопоставимым клиническим признакам или повреждениям (Allan и др., J Comp Pathol, 121(1), июль 1999 г., cc.1-11; Allan G.M. и др., Arch Virol. 145(11), 2000, cc.2421-2429; Harms P.A. и др., Vet Pathol, 38(5), сентябрь 2001 г., cc.528-539; Krakowka S. и др., Vet Pathol, 37(3), май 2000 г., cc.254-263; Ostanello F. и др., Vet Microbiol, 108(3-4), 1 июля 2005 г., cc.179-186; Rovira А. и др., J Virol, 76(7), апреля 2002 г., cc.3232-3239). Кроме того, аналогичного усиления серьезности заболевания можно достигать также в отсутствии коинфицирующих агентов при иммуностимуляции свиней гемоцианином лимфы улитки в неполном адъюванте Фрейнда (KLH/ICFA) (Krakowka S. и др., Vet Pathol, 38(1), январь 2001 г., cc.31-42).

Воздействие PCV2 на иммунную систему свиней пока недостаточно изучено. Известно, что основными клетками-мишенями, в которых происходит репликация PCV2, являются линия клеток моноцитов/макрофагов, а также другие антигенпрезентирующие клетки, такие как фолликулярные дендритные клетки (Darwich L. и др., Arch Virol, 149(5), май 2004 г., cc.857-874). В нескольких исследованиях было выдвинуто предположение о том, что PCV2 заражает делящиеся клетки, макрофаги и В-лимфоциты, индуцируя апоптоз В-клеток, что приводит к повреждению лимфоидных тканей, обусловливающему значительное истощение лимфоцитов (Darwich L. и др., Arch Virol, 149(5), май 2004 г., cc.857-874). У пораженных PMWS свиней, прежде всего, проявляются инфильтрация гистиоцитов и истощение лимфоцитов, как фолликулярных центров, так и парафолликулярных зон, т.е. симптомы, ассоциированные с присутствием PCV2 (Segales J. и др., Vet Microbiol, 98(2), 4 февраля 2004 г., cc.151-8; Darwich L. и др., Arch Virol, 149(5), май 2004, cc.857-874). Эти факты позволяют предположить, что заражение PCV2 может приводить к иммуносупрессии (Darwich L. и др., Arch Virol, 149(5), май 2004, cc.857-874; Krakowka S. и др., Viral Immunol 15(4), 2002, cc.567-582).

Подходы к лечению вызываемых PCV2 инфекций, основанные на применении ДНК-вакцины, описаны в US 6703023. В WO 03/049703 описано получение живой химерной вакцины, содержащей каркас PCV-1, в которой ген каркаса PCV-1 заменен на иммуногенный ген патогенных штаммов PCV2. В WO 99/18214 описано несколько штаммов PCV2 и процедуры получения убитой вакцины против PVC2. Эффективная субъединичная вакцина на основе ОРС-2 (открытой рамки считывания 2) описана в WO 06/072065. Любая из указанных вакцин предназначена для применения с целью вакцинации/лечения свиней от PMWS.

В настоящее время отсутствуют данные о потенциальной роли вызываемых PCV2 инфекций на встречаемость сопутствующих инфекций, которые вызываются различными соответствующими свиными патогенами. В частности, отсутствуют данные о потенциальном взаимодействии PCV2 и специфических патогенов, таких как Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis, Mycoplasma hyorhinis, Pasteurella multocida, PRRSV, Salmonella spp., SIV или Strepococcus suis. Кроме того, несмотря на то, что уже в течение некоторого времени известны различные вакцины против PCV2, их воздействие на сопутствующие отличные от PCV2 инфекции свиней пока не установлено.

Краткое описание чертежа

На чертеже показан профиль появления вируса PCV2 в крови (виремия). Получали образцы крови из предварительно отобранных обработанных плацебо животных (фиг.1А; n=110) и вакцинированных животных (фиг.1Б; n=110) в определенные моменты времени. На основе результатов количественной ПЦР животных группировали в классы животных с субклиническими вирусными нагрузками (10⁴-10⁶ геномных эквивалентов (гЭ)/мл) и с клинически значимыми вирусными нагрузками (>10⁶ гЭ/мл). Белыми столбиками обозначена доля животных с субклиническими вирусными нагрузками, а черные столбики иллюстрируют долю животных с клинически значимыми вирусными нагрузками в день отбора образцов.

Подробное описание изобретения

При создании настоящего изобретения неожиданно было установлено, что вакцина против PCV2 может не только снижать процент PCV2-инфекций у свиней или в стаде свиней, но также снижать процент сопутствующих инфекций, вызываемых патогенами, отличными от цирковируса, в частности отличными от PCV2.

Таким образом, одним из объектов настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, вызываемых одним или несколькими патогенами, которые отличны от PCV2, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2.

Понятие «сопутствующие инфекции» в контексте настоящего описания означает (но, не ограничиваясь только ими) любую инфекцию свиней, вызываемую такими патогенами как вирусы, бактерии, грибы или черви, отличными от цирковируса, в частности, отличными от PCV2. Понятие «сопутствующий патоген» в контексте настоящего описания означает (но, не ограничиваясь только ими) патоген свиней, отличный от цирковируса, в частности, отличный от PCV2. Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, вызываемых одним или несколькими патогенами, такими как вирусы, бактерии, грибы или черви, отличными от цирковируса, в частности, отличными от PCV2, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2. Предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими бактериальными, вирусными или грибными патогенами или их комбинациями. Более предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими бактериальными или вирусными патогенами или их комбинацией.

Согласно другому объекту настоящего изобретения понятие «сопутствующие инфекции» означает также, что свинью, которая заражена одним или несколькими сопутствующими патогенами, отличными от цирковируса, в частности отличными PCV2, коинфицируют PCV2. Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, коинфицированных PCV2, в котором сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими патогенами, отличными от цирковируса, в частности отличными от PCV2, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2. Предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими такими патогенами как вирусы, бактерии, грибы или черви, отличными от цирковируса, в частности, отличными от PCV2.

Понятие «коинфицированный PCV2» в контексте настоящего изобретения означает (но, не ограничиваясь только ими) любую форму коинфекции PCV2, это означает, что заражение PCV2 имеет место до, одновременно или после заражения патогенами, отличными от цирковируса, в частности, отличными от PCV2. Под понятие подпадают также субклинические, имеющие клиническое проявление, молниеносные и хронические формы вызываемых PCV2 инфекций. В этом контексте формы проявления не ограничены PMWS, а включают также другие клинические проявления вызываемых PCV2 инфекций, такие как комплекс респираторных болезней свиней (PRDC), синдром свиного дерматита и нефропатии (PDNS), снижение репродуктивной функции, гранулематозные энтериты и, возможно, врожденный тремор (CT-AII) и перинатальный миокардит (Chae, Veterinary J., 169, 2005, cc.326-336).

Однако понятие «сопутствующая инфекция» не обязательно подразумевает, что свинья или стадо свиней конинфицированы PCV2. Понятие «сопутствующая инфекция» относится также (но, не ограничиваясь только ими) к случаям, когда свиньи или стадо свиней подвергаются воздействию PCV2 или имеют риск заражения PCV2. Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, которые подвергаются воздействию PCV2 или подвергаются риску заражения PCV2 или являются чувствительными к заражению PCV2, где сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими патогенами, отличными от цирковируса, в частности, отличными от PCV2, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2. Предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими такими патогенами как вирусы, бактерии, грибы или черви, отличными от цирковируса, в частности, отличными от PCV2.

Понятие «снижение процента сопутствующих инфекций» означает, что количество свиней, зараженных патогеном, отличным от цирковируса, снижено более чем на 10%, предпочтительно более чем на 20%, более предпочтительно более чем на 30%, еще более предпочтительно более чем на 40%, еще более предпочтительно более чем на 50%, еще более предпочтительно более чем на 60%, еще более предпочтительно более чем на 80%, еще более предпочтительно более чем на 100% по сравнению с невакцинированной контрольной группой. В этом контексте понятие «невакцинированная контрольная группа» означает группу свиней, которым не вводили в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2. Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, вызываемых патогеном, отличным от цирковируса, в частности отличным от PCV2, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2, в котором количество свиней, зараженных патогеном, отличным от цирковируса, снижают более чем на 10%, предпочтительно более чем на 20%, более предпочтительно более чем на 30%, еще более предпочтительно более чем на 40%, еще более предпочтительно более чем на 50%, еще более предпочтительно более чем на 60%, еще более предпочтительно более чем на 80%, еще более предпочтительно более чем на 100% по сравнению с невакцинированной контрольной группой. Предпочтительно сопутствующая инфекция вызывается вирусным, бактериальным или грибным патогеном, отличным от цирковируса, в частности, отличным от PCV2. Более предпочтительно свиньи или стадо свиней коинфицированы PCV2, как указано выше, подвергнуты воздействию PCV2 или имеют риск заражения PCV2 или чувствительны к заражению PCV2.

Сопутствующие инфекции, вызываемые вирусным, бактериальным или грибным патогеном, отличным от цирковируса, в частности, отличным от PCV2, могут проявляться у зараженных животных в виде энтерита, симптомов, связанных с воздействием на респираторную систему, репродуктивную систему, центральную нервную систему или локомоторную активность. Можно снижать проявление любого из указанных клинических симптомов, вызываемых соответствующими патогенами. Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, которые вызываются одним или несколькими отличными от PCV2 патогенами, заражение которыми может проявляться в виде энтерита, воздействия на респираторную систему, репродуктивную систему, центральную нервную систему или локомоторную активность, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, которая содержит антиген PCV2. Предпочтительно свиньи коинфицированы PCV2, как указано выше, подвергнуты воздействию PCV2 или имеют риск заражения PCV2 или чувствительны к заражению PCV2. Более предпочтительно количество свиней, инфицированных отличным от цирковируса патогеном, заражение которым проявляется в виде энтерита, воздействия на респираторную систему, репродуктивную систему, центральную нервную систему или локомоторную активность, снижают касательно патогена, заражение которым проявляется в виде энтерита, воздействия на респираторную систему, репродуктивную систему или центральную нервную систему или локомоторную активность, более чем на 10%, предпочтительно более чем на 20%, более предпочтительно более чем на 30%, еще более предпочтительно более чем на 40%, еще более предпочтительно более чем на 50%, еще более предпочтительно более чем на 60%, еще более предпочтительно более чем на 80%, еще более предпочтительно более чем на 100% по сравнению с невакцинированной контрольной группой.

Примерами патогенов, которые вызывают энтерит (энтерических патогенов), являются Lawsonia intracellularis, E.coli, Streptococcus suis, Clostridium spp, Salmonella spp., Brachyspira spp., ротавирусы или коронавирусы. Примерами патогенов, которые оказывают воздействие на респираторную систему, являются PRRSV, Mycoplasma hyopneumoniae, M. hyorhinis. Примерами патогенов, которые оказывают воздействие на репродуктивную систему, являются Leptospira spp., PRRSV, Chlamydia spp. Примерами патогенов, которые оказывают воздействие на локомоторную активность, являются S. suis, M. hyorhinis, Erysipelotrix rusiopathiae. Примерами патогенов, которые оказывают воздействие на центральную нервную систему, являются вирус псевдобешенства, S. suis, Haemophilus sp.

В целом, понятие «патоген, отличный от PCV2» относится (но, не ограничиваясь только ими) к одному или нескольким патогенам, выбранных из группы, включающей: Actinobacillus suis; Arcanobacterium pyogenes; Actinobacillus pleuropneumonia (APP); вирус африканской чумы свиней; Aspergillus spp.; Astroviruses; Ascaris suum; Blastocystis spp.; Bordetella bronchiseptica; Brachyspira spp., B. hyodysenteriae, B. pilosicoli; Brucella suis, биовары 1, 2 и 3 Brucella suis; Candida spp.; вирус классической чумы свиней; Clostridium spp., в частности C. difficile, C. perfringens типов A, B и C, C. novyi, C. septicum, C. difficile, C. tetani; Chlamydia spp., Cryptosporidium spp.; вирус энцефаломиокардита; Eperythrozoonosis suis; Erysipelothrix ruhsiopathiae; Escherichia coli; Fusarium spp.; Haemophilus parasuis; гемагглютинирующий вирус энцефаломиелита; вирус гепатита Е; вирус японского энцефалита; Hyostrongylus rubidus; Lawsonia intracellularis; Leptospira spp., L. australis, L. canicola, L. grippotyphosa, L. pomona, L. icterohaemorrhagicae, L. interrogans, L. tarassovi, L. hardjo, L, sejroe, L. bratislava; Mannheimia haemolytica; вирус вирус «Менангл»; Mycobacterium spp., M. avium, M. intracellulare, M. tuberculosis; Mycoplasma spp., M. hyopneumoniae, M. hyorhinis; вирус Нипах; Oesophagostum spp., Oesophagostum dentatum, Oesophagostum quadrospinulatum; Pasteurella spp., P. multocida; Penicillium spp.; аденовирус свиней; цитомегаловирус свиней; энтеритные калицивирусы свиней; энтеритные пикорнавирусы свиней; парвовирус свиней; респираторный коронавирус свиней; вирус PRRS; вирус псевдобешенства; реовирус; ротавирус; рубулавирус; Salmonella spp., S. typhimurium, S. choleraesuis, S. dublin; Sarcoptes spp.; Staphylococcus hyicus; Streptococcus spp., S. suis, S. porcinus, S. dysgalactiae, S. dysgalactiae subsp. equisimilis; Strongyloides ransomi, вирус герпеса свиней; вирус свиного гриппа; вирус оспы свиней; вирус трансмиссивного гастроэнтерита; Trichuris spp. Taenia spp., Trichinella spiralis; вирус везикулезного стоматита; вирус везикулезной экзантемы свиней; вирус Западного Нила; или Yersina spp., Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica.

Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, которые вызываются одним или несколькими патогенами, отличными от PCV2, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2, в котором патогены, которые вызывают сопутствующие инфекции, выбирают из группы, включающей: Actinobacillus suis; Arcanobacterium pyogenes; Actinobacillus pleuropneumonia (APP); вирус африканской чумы свиней; Aspergillus spp.; Astroviruses; Ascaris suum; Blastocystis spp.; Bordetella bronchiseptica, Brachyspira spp., B. hyodysenteriae, B. pilosicoli; Brucella suis, биовары 1, 2 и 3 Brucella suis; Candida spp.; вирус классической чумы свиней; Clostridium spp., в частности C. difficile, C. perfringens типов A, B и C, C. novyi, C. septicum. C. difficile, C. tetani; Chlamydia spp., Cryptosporidium spp.; вирус энцефаломиокардита; Eperythrozoonosis suis, Erysipelothrix ruhsiopathiae; Escherichia coli; Fusarium spp.; Haemophilus parasuis; гемагглютинирующий вирус энцефаломиелита; вирус гепатита Е; вирус японского энцефалита; Hyostrongylus rubidus; Lawsonia intracellularis; Leptospira spp., L. australis, L. canicola, L. grippotyphosa, L. pomona, L. icterohaemorrhagicae, L. interrogans, L. tarassovi, L. hardjo, L. sejroe, L. bratislava; Mannheimia haemolytica; вирус «Менангл»; Mycobacterium spp., M avium, M. intracellulare, M. tuberculosis; Mycoplasma spp., M. hyopneumoniae, M. hyorhinis; вирус Нипах; Oesophagostum spp., Oesophagostum dentatum, Oesophagostum quadrospinulatum; Pasteurella spp., P. multocida; Penicillium spp.; аденовирус свиней; цитомегаловирус свиней; энтеритные калицивирусы свиней; энтеритные пикорнавирусы свиней; парвовирус свиней; респираторный коронавирус свиней; вирус PRRS; вирус псевдобешенства; реовирус; ротавирус; рубулавирус; Salmonella spp., S. typhimurium, S. choleraesuis, S. dublin; Sarcoptes spp.; Staphylococcus hyicus; Streptococcus spp., S. suis, S. porcinus, S. dysgalactiae, S. dysgalactiae subsp. equisimilis; Strongyloides ransomi; вирус герпеса свиней; вирус свиного гриппа; вирус оспы свиней; вирус трансмиссивного гастроэнтерита; Trichuris spp. Taenia spp., Trichinella spiralis; вирус везикулезного стоматита; вирус везикулезной экзантемы свиней; вирус Западного Нила; или Yersina spp., Y. pseudotuberculosis, Y. enterocolitica.

Предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими патогенами, выбранными из группы, включающей: Actinobacillus pleuropneumoniae; Haemophilus parasuis, Mycoplasma hyrhinis; Pasteurella multocida; PRRS; Salmonella spp. и Strepococcus suis. Более предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими патогенами, выбранными из группы, включающей: Actinobacillus pleuropneumoniae; Haemophilus parasuis; Mycoplasma hyrhinis; Pasteurella multocida; PRRS; Salmonella spp. и Strepococcus suis. Наиболее предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются одним или несколькими патогенами, выбранными из группы, включающей Actinobacillus pleuropneumomae; Mycoplasma hyrhinis и PRRS. Наиболее предпочтительно сопутствующие инфекции вызываются Mycoplasma hyrhinis и/или PRRS.

Предпочтительно свиньи коинфицированы PCV2, как указано выше, подвергнуты воздействию PCV2 или имеют риск заражения PCV2, или чувствительны к заражению PCV2. Более предпочтительно количество свиней, инфицированных одним или несколькими указанными выше патогенами, отличными от цирковируса, снижают касательно указанного патогена более чем на 10%, предпочтительно более чем на 20%, более предпочтительно более чем на 30%, еще более предпочтительно более чем на 40%, еще более предпочтительно более чем на 50%, еще более предпочтительно более чем на 60%, еще более предпочтительно более чем на 80%, еще более предпочтительно более чем на 100% по сравнению с невакцинированной контрольной группой. В случае нескольких инфекций указанное выше снижение уровней относится к каждому конкретному патогену. Например, снижение более чем на 10% сопутствующих инфекций у зараженной несколькими патогенами свиньи означает, что уровень заражения касательно конкретного патогена снижается более чем на 10%. Это не обязательно означает, что уровень заражения всеми патогенами снижается более чем на 10% по сравнению с невакцинированной контрольной группой, или в случае стада, что менее 10% свиней в указанном стаде инфицированы всеми указанными патогенами.

Понятие «антиген PCV2» в контексте настоящего описания относится к аминокислотной последовательности, которая вызывает иммунологический ответ против PCV2 у хозяина. Антиген в контексте настоящего описания включает полноразмерную последовательность любых белков PCV2, их аналогов или их иммуногенных фрагментов.

Понятие «иммуногенный фрагмент» обозначает фрагмент белка, который содержит один или несколько эпитопов, и в результате этого вызывает иммунный ответ у хозяина. Такие фрагменты можно идентифицировать с помощью любого из многочисленных методов картирования эпитопов, хорошо известных в данной области (см., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, том 66, под ред. Glenn E. Morris, изд-во Humana Press, Totowa, New Jersey, 1996). Например, линейные эпитопы можно выявлять, например, осуществляя конкурентный синтез большого количества пептидов на твердых подложках, где пептиды соответствуют фрагментам молекулы белка, и, подвергая пептиды взаимодействию с антителами, при этом пептиды остаются прикрепленными к подложкам. Такие методы известны в данной области и описаны, например в US 4708871; у Geysen и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81, 1984, cc.3998-4002; Geysen и др., Molec. Immunol. 23, 1986, cc.709-715. Аналогично этому, конформационные эпитопы легко можно идентифицировать путем определения пространственной конформации аминокислот, например, с помощью рентгеновской кристаллографии и 2-мерного ядерного магнитного резонанса (см., например, Epitope Mapping Protocols, выше).

Указанное понятие включает также синтетические антигены, например, полиэпитопы, фланкирующие эпитопы и другие полученные методами рекомбинации или синтеза антигены (см., например, Bergmann и др., Eur. J. Immunol. 23, 1993, cc.2777-2781; Bergmann и др., J. Immunol. 157, 1996, cc.3242-3249; Suhrbier A., Immunol, и Cell Biol. 75, 1997, cc.402-408; Gardner и др., 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, 28 июня-3 июля 1998 г.).

Понятие «иммунный ответ» относится (но, не ограничиваясь только указанным) к формированию в хозяине клеточно- и/или антитело-опосредованного иммунного ответа на представляющий интерес антиген, композицию или вакцину. Как правило, «иммунный ответ» включает (но, не ограничиваясь только ими) одну или несколько из следующих реакций: производство или активацию антител, В-клеток, Т-клеток-хелперов, Т-клеток-супрессоров и/или цитотоксических Т-клеток, специфически направленных на антиген или антигены, включенный(е) в представляющую интерес композицию или вакцину. Предпочтительно организм-хозяин должен вырабатывать либо терапевтический, либо защитный иммунологический (вторичный иммунный) ответ так, чтобы повышалась устойчивость к новой инфекции и/или снижалась клиническая серьезность заболевания. Такое защитное действие можно выявлять либо по снижению уровня или серьезности симптомов, либо по отсутствию одного или нескольких симптомов, ассоциированных с заражением хозяина PCV2, замедлению появления вируса в крови (виремия), снижению персистентности вируса, снижению общей вирусной нагрузки и/или снижению вирусной экскреции.

Понятия «иммуногенная композиция» или «вакцина» (оба понятия являются синонимами) в контексте настоящего описания относятся к любой фармацевтической композиции, которая содержит антиген PCV2, при этом, композицию можно применять для предупреждения или лечения ассоциированного с заражением PCV2 заболевания или состояния у животного. Предпочтительная иммуногенная композиция может индуцировать, стимулировать или повышать иммунный ответ на PCV2. Под это понятие подпадают как субъединичные иммуногенные композиции, описанные ниже, так и композиции, которые содержат убитые (полностью обезвреженные) или ослабленные и/или инактивированные PCV2.

Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, которые вызываются одним или несколькими отличными от PCV2 патогенами, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2, в котором иммуногенная композиция представляет собой субъединичную иммуногенную композицию, композицию, содержащую полностью обезвреженные или ослабленные и/или инактивированные PCV2. Предпочтительно свиньи коинфицированы PCV2, как указано выше, подвергнуты воздействию PCV2 или имеют риск заражения PCV2 или чувствительны к заражению PCV2. Более предпочтительно количество свиней, инфицированных указанными патогенами, отличными от цирковируса, снижают в отношении одного или нескольких указанных патогенов более чем на 10%, предпочтительно более чем на 20%, более предпочтительно более чем на 30%, еще более предпочтительно более чем на 40%, еще более предпочтительно более чем на 50%, еще более предпочтительно более чем на 60%, еще более предпочтительно более чем на 80%, еще более предпочтительно более чем на 100% по сравнению с невакцинированной контрольной группой.

В контексте настоящего описания понятие «субъединичная иммуногенная композиция» относится к композиции, которая содержит по меньшей мере один иммуногенный полипептид или антиген, но не все антигены, выведенные или являющиеся гомологами антигена PCV2. Такая композиция практически свободна от интактного PCV2. Таким образом, «субъединичную иммуногенную композицию» получают по меньшей мере из частично очищенных или фракционированных (предпочтительно практически очищенных) иммуногенных полипептидов PCV2, или их рекомбиантных аналогов. Субъединичная иммуногенная композиция может содержать субъединицу антигена или антигенов, представляющих интерес, которые практически свободны от других антигенов или полипептидов из PCV2 или являются фракционированными. Предпочтительная иммуногенная субъединичная композиция содержит белок ОРС-2 PCV2, описанный ниже. Наиболее предпочтительными являются иммуногенные субъединичные композиции, которые содержат любой из антигенов PCV2, представленных в WO 06/072065, которая полностью включена в настоящее описание в качестве ссылки.

Таким образом, следующим объектом изобретения является иммуногенная композиция, как она определена в контексте настоящего описания, которая наиболее предпочтительно содержит полипептид или его фрагмент, экспрессируемый ОРС-2 PCV2. ДНК ОРС-2 PCV2 и белок, которые применяют согласно изобретению для приготовления композиций и с помощью способов, предлагаемых в изобретении, представляет собой высококонсервативный домен в изолятах PCV2 и поэтому согласно изобретению любая ОРС-2 PCV2 должна быть эффективной в качестве источника ДНК ОРС-2 PCV и/или полипептида. Предпочтительным белком ОРС-2 PCV2 является белок, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:11 в WO 06/072065. Другим предпочтительным полипептидом ОРС-2 PCV является полипептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO:5 в WO 06/072065. Однако специалистам в данной области должно быть очевидно, что последовательность может варьироваться в пределах 6-10% в соответствии с понятием гомологии последовательностей и все еще сохранять антигенные характеристики, которые делают ее приемлемой для включения в иммуногенные композиции. Антигенные характеристики иммунологической композиции можно оценивать, например, путем экспериментов по контрольному заражению, описанных в примере 4 WO 06/072065. Кроме того, антигенные характеристики модифицированного антигена все еще сохраняются, когда модифицированный антиген обеспечивает по меньшей мере 70%, предпочтительно 80%, более предпочтительно 90% защитного иммунитета по сравнению с белком ОРС-2 PCV2, который кодируется полинуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в WO 06/072065.

Таким образом, следующим объектом настоящего изобретения является способ снижения процента сопутствующих инфекций у свиней или в стаде свиней, которые вызываются отличными от PCV2 патогенами, заключающийся в том, что вводят свинье(ям) в эффективном количестве антиген PCV2 или иммуногенную композицию, содержащую антиген PCV2, в котором антиген PCV2 представляет собой антигенный белок ОРС-2 PCV2, который обеспечивает по меньшей мере 70%, предпочтительно 80%, более предпочтительно 90% защитного иммунитета по сравнению с белком ОРС-2 PCV2, который кодируется полинуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4 в WO 06/072065. Предпочтительно белок ОРС-2 PCV2 имеет последовательность, представленную в SEQ ID NO:11 или SEQ ID NO:5 в WO 06/072065. Предпочтительно свиньи коинфицированы PCV2, как указано выше, подвергнуты воздействию PCV2 или имеют риск заражения PCV2 или чувствительны к заражению PCV2. Более предпочтительно количество свиней, инфицированных указанными патогенами, отличными от цирковируса, снижается более чем на 40%, предпочтительно более чем на 50%, более предпочтительно более чем на 60%, еще более предпочтительно более чем на 80%, еще более предпочтительно более чем на 100% по сравнению с невакцинированной контрольной группой.

В некоторых вариантах иммуногенные участки белка ОРС-2 PCV2 применяют а качестве антигенного компонента в иммуногенной композиции, содержащей антиген PCV2. Понятие «иммуногенный участок» в контексте настоящего описания относится к укороченным и/или имеющим замены формам или фрагментам белка и/или полинуклеотида ОРС-2 PCV2 соответственно. Предпочтительно такие укороченные и/или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 6 смежных аминокислот из полноразмерного полипептида ОРС-2. Более предпочтительно укороченные или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 10, более предпочтительно по меньшей мере 15 и еще более предпочтительно по меньшей мере 19 смежных аминокислот из полноразмерного полипептида ОРС-2 PCV. Две предпочтительные в этом плане последовательности представлены в виде SEQ ID NO:9 и SEQ ID NO:10 в WO 06/072065. Следует понимать также, что указанные последовательности могут представлять собой часть более крупных фрагментов или укороченные формы.

Как указано выше, предпочтительным является также любой полипептид ОРС-2 PCV2, который кодируется нуклеотидными последовательностями SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4. Кроме того, как должно быть очевидно специалистам в данной области, эта последовательность может варьироваться в пределах 6-20% в соответствии с понятием гомологии последовательностей и все еще сохранять антигенные характеристики, которые делают ее приемлемой для включения в иммуногенные композиции. В некоторых вариантах укороченные или имеющие замены формы или фрагменты полипептида ОРС-2 PVC2 применяют в качестве антигенного компонента в композиции. Предпочтительно такие укороченные или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов из полноразмерной нуклеотидной последовательности ОРС-2 PVC2, например, SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4. Более предпочтительно укороченные или имеющие замены формы или фрагменты должны содержать по меньшей мере 30, более предпочтительно по меньшей мере 45 и еще более предпочтительно по меньшей мере 57 смежных нуклеотидов из полноразмерной нуклеотидной последовательности ОРС-2 PVC2, например, представленной в SEQ ID NO:3 или SEQ ID NO:4.

Понятие «идентичность последовательностей», как известно в данной области, относится к родству между двумя или большим количеством полипептидных последовательностей или двумя или большим количеством полинуклеотидных последовательностей, а именно между референс-последовательностью и рассматриваемой последовательностью, подлежащей сравнению с референс-последовательностью. Идентичность последовательностей определяют путем сравнения данной последовательности с референс-последовательностью после оптимального выравнивания последовательностей для получения наиболее высокой степени сходства последовательностей, что определяют по совместимости отрезков указанных последовательностей. После выравнивания идентичность последовательностей оценивают по находящимся в одинаковых положениях основаниям (по типу «положение с положением»), например, последовательности являются «идентичными» в определенном положении, если в этом положении нуклеотиды или аминокислотные остатки идентичны. Общее количество таких идентичных положений затем делят на общее количество нуклеотидов или остатков в референс-последовательности, получая % идентичности последовательностей. Идентичность последовательностей легко можно рассчитывать с помощью известных методов, включая (но, не ограничиваясь только ими) описанные в: Computational Molecular Biology, под ред. Lesk A.N., изд-во Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, под ред. Smith D.W., изд-во, Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, часть I, под ред. Griffin A.M. и Griffin H.G., изд-во Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinge G., изд-во Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, под ред. Gribskov M. и Devereux J., изд-во M. Stockton Press, New York, 1991; и Carillo H. и Lipman, D., SIAM J. Applied Math., 48, 1988, с.1073, содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки. Предпочтительные методы определения идентичности последовательностей созданы так, чтобы получать наибольшее соответствие между изучаемыми последовательностями. Методы определения идентичности последовательностей приведены в систему в доступных общественности компьютерных программах, которые позволяют определять идентичность последовательностей для рассматриваемых последовательностей. Примерами таких программ являются (но, не ограничиваясь только ими) пакет программ GCG (Devereux J. и др., Nucleic Acids Research, 12(1), 1984, с.387), BLASTP, BLASTN и FASTA (Altschul S.F. и др., J. Molec. Biol., 215, 1990, cc.403-410). Программа BLASTX является доступной для научной общественности от фирмы NCBI и других источников (BLAST Manual, Altschul S. и др., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul S.F. и др., J. Molec. Biol., 215, 1990, cc.403-410), содержание которых включено в настоящее описание в качестве ссылки). Эти программы позволяют осуществлять оптимальное выравнивание последовательностей с помощью принимаемых по умолчанию значений таких, как вес бреши, для того, что получать наиболее высокий уровень идентичности последовательностей для рассматриваемой последовательности и референс-последовательности. В качестве иллюстрации: когда упоминается полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого по меньшей мере на 85%, предпочтительно на 90%, еще более предпочтительно на 95% «идентична последовательности» нуклеотидной референс-последовательности, то подразумевается, что нуклеотидная последовательность данного полинуклеотида идентична референс-последовательности за исключением того, что данная полинуклеотидная последовательность может включать вплоть до 15, предпочтительно вплоть до 10, еще боле предпочтительно вплоть до 5 точечных мутаций на каждые 100 нуклеотидов нуклеотидной референс-последовательности. Другими словами, для того, чтобы полинуклеотид имел нуклеотидную последовательность, идентичную по меньшей мере на 85%, предпочтительно на 90%, еще более предпочтительно на 95% нуклеотидной референс-последовательности, вплоть до 15%, предпочтительно 10%, еще более предпочтительно 5% нуклеотидов в референс-последовательности можно изымать путем делеции или заменять на другой нуклеотид, или вплоть до 15% нуклеотидов, предпочтительно 10%, еще более предпочтительно 5% от общего количества нуклеотидов в референс-последовательности можно встраивать в референс-последовательность. Эти мутации референс-последовательности могут иметь место на 5'- или 3'-конце нуклеотидной референс-последовательности или в любом положении между этими концами, либо находясь индивидуально среди нуклеотидов в референс-последовательности, либо в виде одной или нескольких смежных групп в референс-последовательности. Аналогично этому, когда упоминают полипепти