Пептид, фармацевтическая композиция (варианты) и лекарственное средство на его основе, способ лечения и/или предупреждения диабета или заболеваний, сопутствующих ожирению, способ уменьшения аппетита, уменьшения потребления пищи, уменьшения потребления калорий, уменьшения массы тела и увеличения расхода энергии

Пептид, фармацевтическая композиция (варианты) и лекарственное средство на его основе, способ лечения и/или предупреждения диабета или заболеваний, сопутствующих ожирению, способ уменьшения аппетита, уменьшения потребления пищи, уменьшения потребления калорий, уменьшения массы тела и увеличения расхода энергии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Данная заявка относится к применению активных веществ, более конкретно, пептида, для контроля аппетита, питания, приема пищи, расхода энергии и потребления калорий, лечения избыточной массы тела, ожирения и для предупреждения и лечения сопутствующих ожирению заболеваний.

Уровень техники

Согласно данным Всемирной Организации Здравоохранения (ВОЗ), ожирение представляет собой всемирную эпидемию, в которой более одного миллиарда взрослых людей имеют повышенную массу тела, из которых по меньшей мере 300 миллионов имеют клиническую стадию ожирения. Кроме того, по оценке ВОЗ, 250000 смертей в год в Европе и больше 2,5 миллионов смертей в мире связаны с массой тела (World Health Organisation, Global Strategy on Diet, Physical Activity and Health, (Всемирная Организация Здравоохранения, Мировая стратегия по питанию, физическая активность и здоровье, 2004).

Причина ожирения является сложной и многофакторной. Растущее число фактов позволяет предположить, что ожирение не является простой проблемой самоконтроля, но представляет собой комплексное нарушение, включающее регуляцию аппетита и энергетический обмен. Кроме того, ожирение связано с множеством состояний, ассоциированных с повышенной заболеваемостью и смертностью у населения. Хотя этиология ожирения окончательно не установлена, считают, что в нее вносят вклад генетические, метаболические, биохимические, культурные и психосоциальные факторы. В целом ожирение описано как состояние, при котором избыток жира в организме создает риск для здоровья субъекта.

Имеется веское доказательство того, что ожирение связано с повышенной заболеваемостью и смертностью. Риск развития заболевания, например риск развития сердечно-сосудистого заболевания и риск развития диабета типа 2, повышается независимо с ростом индекса массы тела (BMI).

В действительности риск количественно оценивают как пятипроцентное повышение риска развития сердечных заболеваний у женщин и семипроцентное повышение риска развития сердечных заболевания у мужчин для каждого пункта BMI, превышающего 24,9 (см. статьи Kenchaiah et al., N. Engl. J. Med. 347:305, 2002; Massie, N. Engl. J. Med. 347:358, 2002). Кроме того, имеется существенное доказательство того, что снижение массы тела у субъектов с ожирением или избыточной массой тела уменьшает важные факторы риска развития заболевания. Снижение массы тела на 10% от исходной массы тела у взрослых как с избыточной массой тела, так и с ожирением связана со уменьшением факторов риска, таких как гипертензия, гиперлипидемия и гипергликемия.

Хотя диета и физическая нагрузка представляют простой способ уменьшить набор массы тела и способствуют потере массы тела, субъекты с избыточной массой тела и ожирением часто не могут в достаточной степени контролировать данные факторы, чтобы эффективно терять массу тела. Доступна фармакотерапия; Управление по контролю за продуктами и лекарствами одобрило ряд лекарственных препаратов для снижения массы тела, которые могут быть использованы как часть комплексной программы снижения массы тела. Однако, многие из данных лекарственных препаратов имеют серьезные вредные побочные эффекты. Примером широко используемого супрессора аппетита является сибутрамин (см. обзор McNeely, Wet al., Drugs, 1998, 56(6), 1093-1124). Первичные и вторичные метаболиты сибутрамина фармакологически активны, и считают, что они усиливают насыщение и термогенез путем ингибирования повторного всасывания серотонина и норадреналина. Когда не действуют менее инвазивные способы, и субъект находится в группе высокого риска заболеваемости и смертности, связанных с ожирением, хирургическое вмешательство, направленное на снижение массы тела, представляет собой альтернативу для тщательно отобранных субъект с клинически тяжелым ожирением. Однако данные способы лечения входят в группу высокого риска и подходят для использования только для ограниченного числа субъектов (см. статью Wolfe and Morton, JAMA, 2005, 294, 1960-1963). Это не только субъекты с ожирением, которые хотят снизить массу тела. Люди с массой тела, лежащей в рекомендованном интервале, например, в верхней части рекомендованного интервала, могут иметь желание снизить свою массу тела, чтобы подвести ее ближе к идеальной массе тела.

Оксинтомодулин (далее охт) представляет собой пептидный член из 37 аминокислот суперсемейства глюкагона (см. статью Sherwood et al, Endocrine Reviews, 2000, 21(6): 619-670) включающий полную последовательность глюкагона из 29 аминокислот с карбокси-концевым удлинением из восьми аминокислот, обусловленным тканеспецифическим процессингом предшественника пре-про-глюкагона в головном мозге и кишке (см. статью Holst, Ann Rev Physiol, 1997, 59:257-271). Введение oxm крысам посредством интрацеребровентрикулярной инъекции и инъекции в паравентрикулярные и дуговидные ядра гипоталамуса подавляет повторное питание после голодания (см. статьи Dakin et al, Endocrinology, 2001, 142:4244-4250; Dakin et al, Endocrinology, 2004, 145:2687-2695). Постоянное центральное введение приводило в результате к пониженному уровню набора массы тела, согласующемуся с уменьшением приема пищи (см. статью Dakin et al, Am J Physiol Endocrinol Metab, 2002, 283:E1173-E1177). Периферические введения два раза в день также приводили в результате к пониженному набору массы тела и ожирения (см. статью Dakin et al, Endocrinology, 2004, 145:2687-2695).

WO 03/022304 раскрывает применение oxm в нативной форме и его аналогов в качестве лекарственного средства, предназначенного для применения для контроля аппетита, питания, поглощения пищи, потребления энергии и поглощения калорий, особенно в области ожирения. Исследования на человека показали, что внутривенно вливаемый oxm является эффективным супрессором аппетита (см. статью Cohen et al, J. Clin. Endocrinol Metab, 2003, 88(10): 4696-4701). В исследовании эффектов oxm на потерю массы тела у человека обнаружено, что подкожные инъекции 1,8 мг (приблизительно 400 нмоль) oxm людям-добровольным участникам эксперимента три раза в день (на 30 мин. до приема пищи) в течение 28 дней приводила в результате в существенному снижению массы тела (см. статью Wynne et al, Diabetes, 2005, 54: 2390-2395).

Пептиды широко используют в медицинской практике, хотя при использовании в лечении нативных пептидов или их аналогов, как правило, обнаруживают, что они имеют высокую скорость выведения и/или чувствительны в разложению. В частности, высокий уровень выведения или быстрое разложение лечебного фактора неудобно в случаях, когда требуется поддерживать высокий уровень в крови в течение длительного периода времени, поскольку затем будут необходимы повторные введения, снижающие уровень удобства для субъекта и повышающие стоимость лечения.

Остается потребность в факторах, которые можно использовать для того, чтобы вызвать снижение массы тела у субъекта с избыточной массой тела или ожирением и/или для лечения субъектов с другими состояниями, включающими избыточную массу тела, например, с диабетом или нарушениями питания. Особенно необходимы факторы, структурно близкие охт, которые проявляют повышенную активность и/или пролонгированный или более терапевтически эффективный профиль действия и/или более низкую скорость выведения, чем у нативного oxm.

Раскрытие изобретения

Соединения, соответствующие изобретению, представляют собой новые пептидные аналоги охт (далее "аналоги oxm"), в которых одна или более аминокислот или частей последовательности охт заменены одной или более определенных заменяющих аминокислот или последовательностей.

Соответственно, изобретение предусматривает пептид, включающий последовательность аминокислот:

Хаа1 Хаа2 Хаа3 Gly4 Thr5 Phe6 Thr7 Ser8 Asp9 Tyr10 Ser11 Lys12 Tyr13 Leu14 Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 Trp25 Leu26 Хаа27 Хаа28 Хаа29 Хаа30 Хаа31 Хаа32 Lys33 Asn34 Asn35 Ile36 Ala37;

где:

Хаа1 представляет собой His1 или D-His1,

Хаа2 представляет собой Ser2 или Ala2,

Хаа3 представляет собой Gln3 или Asp3;

Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 представляет собой:

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

Glu15 Gln 16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

или Asp15 Ser16 Arg17 Arg18 Ala19 Gln20 Asp21 Phe22 Val23 Gln24;

Хаа27 Хаа28 Хаа29 Хаа30 Хаа31 Хаа32 представляет собой:

Met27 Asn28 Thr29 Lys30 Arg31 Asn32,

Lys27 Asn28 Ala29 Gly30 Pro31 Ser32,

или Lys27 Asn28 Gly29 Gly30 Pro31 Ser32

либо пептид, как приведено выше, в котором остаток Asn34 заменен Asp34;

или пептид, как приведено выше, в котором Хаа3 представляет собой Glu3;

при условии, что если

Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 представляет собой Asp15 Ser16 Arg17 Arg18 Ala19 Gln20 Asp21 Phe22 Val23 Gln24, то Xaa27 Хаа28 Хаа29 Хаа30 Хаа31 Хаа32 не является Met27 Asn28 Thr29 Lys30 Arg31 Asn32. (SEQ ID NO:356).

В одном варианте осуществления, изобретение предусматривает пептид, включающий последовательность аминокислот:

Хаа1 Хаа2 Хаа3 Gly4 Thr5 Phe6 Thr7 Ser8 Asp9 Tyr10 Ser11 Lys12 Tyr13 Leu14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Trp25 Leu26 Xaa27 Хаа28 Хаа29 Хаа30 Хаа31 Хаа32 Lys33 Asn34 Asn35 Ile36 Ala37;

где:

Хаа1 представляет собой His1 или D-His1,

Хаа2 представляет собой Ser2 или Ala2,

Хаа3 представляет собой Gln3 или Asp3;

Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 представляет собой:

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Glu16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Glu16 Glu17 lle18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Leu18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Leu23 Gln24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Glu24,

Glu15 Gln16 Glu17 Ile18 Val19 Lys20 Tyr21 Phe22 Ile23 Gln24,

или Asp15 Ser16 Arg17 Arg18 Ala19 Gln20 Asp21 Phe22 Val23 Gln24;

Xaa27 Xaa28 Xaa29 Хаа30 Хаа31 Хаа32 представляет собой:

Met27 Asn28 Thr29 Lys30 Arg31 Asn32,

Lys27 Asn28 Ala29 Gly30 Pro31 Ser32,

или Lys27 Asn28 Gly29 Gly30 Pro31 Ser32

при условии, что если

Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 представляет собой

Asp15 Ser16 Arg17 Arg18 Ala19 Gln20 Asp21 Phe22 Val23 Gln24,

то Хаа27 Хаа28 Хаа29 Хаа30 Хаа31 Хаа32 не является

Met27 Asn28 Thr29 Lys30 Arg31 Asn32.

Пептиды, соответствующие изобретению, являются сильными и длительно действующими супрессорами аппетита.

Краткое описание чертежей

На фигуре 1 показаны 355 специфических пептидных последовательностей, входящих в объем изобретения.

На фигурах 2-41 показаны результаты, полученные в примерах 1-19.

На Фигуре 2 показано влияние нативного оксинтомодулина (человеческого) на суммарное поглощение пищи при внутрибрюшинной инъекции 1400 нмоль/кг группам мышей, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 3 показано влияние нативного оксинтомодулина (человеческого) на суммарное поглощение пищи при подкожной инъекции 1400 нмоль/кг группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 6 часов.

На Фигуре 4 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:178 [SEQ. ID NO:178] при введении его в дозе 10 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 5 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:82 [SEQ. ID NO:82] при введении его в дозе 10 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 6 показано влияние на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:58 [SEQ. ID NO:58] при введении его в дозе 10 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 7 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:52 [SEQ. ID NO:52] при введении его в дозе 10 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 8 показано влияение на поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:164 [SEQ. ID NO:164] при введении его в дозе 4 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 9 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:167 [SEQ. ID NO:167] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 32 часов.

На Фигуре 10 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:100 [SEQ. ID NO:100] при введении его в дозе 20 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 11 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:148 [SEQ. ID NO:148] при введении его в дозе 10 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 12 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:60 [SEQ. ID NO:60] при введении его в дозе 100 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 13 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:94 [SEQ. ID NO:94] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 14 показано влияение на поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:155 [SEQ. ID NO:155] при введении его в дозе 4 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 32 часов.

На Фигуре 15 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:142 [SEQ. ID NO:142] при введении его в дозе 3 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 16 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:172 [SEQ. ID NO:172] при введении его в дозе 3 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 17 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:184 [SEQ. ID NO:184] при введении его в дозе 3 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 18 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:4 [SEQ. ID NO:4] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 19 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:108 [SEQ. ID NO:108] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 20 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:195 [SEQ. ID NO:195] при введении его в дозе 800 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 21 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:136 [SEQ. ID NO:136] при введении его в дозе 100 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 22 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:142 [SEQ. ID NO:142] при введении его в дозе 3 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 23 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:22 [SEQ. ID NO:22] при введении его в дозе 3 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 24 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:153 [SEQ. ID NO:153] при введении его в дозе 200 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 25 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:199 [SEQ. ID NO:199] при введении его в дозе 500 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 26 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:210 [SEQ. ID NO:210] при введении его в дозе 20 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам мышей, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 27 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:211 [SEQ. ID NO:211] при введении его в дозе 200 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам мышей, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 28 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:213 [SEQ. ID NO:213] при введении его в дозе 400 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам мышей, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 29 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:214 [SEQ. ID NO:214] при введении его в дозе 400 нмоль/кг путем внутрибрюшинной инъекции группам мышей, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 30 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:201 [SEQ. ID NO:201] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 31 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:202 [SEQ. ID NO:202] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 32 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:203 [SEQ. ID NO:203] при введении его в дозе 100 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 33 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:204 [SEQ. ID NO:204] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 32 часов.

На Фигуре 34 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:205 [SEQ. ID NO:205] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 32 часов.

На Фигуре 35 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:206 [SEQ. ID NO:206] при введении его в дозе 80 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 36 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:207 [SEQ. ID NO:207] при введении его в дозе 80 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 37 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:209 [SEQ. ID NO:209] при введении его в дозе 80 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 48 часов.

На Фигуре 38 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:215 [SEQ. ID NO:215] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 39 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:216 [SEQ. ID NO:216] при введении его в дозе 10 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

На Фигуре 40 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:355 [SEQ. ID NO:355] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам крыс, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 4 часов.

На Фигуре 41 показано влияение на суммарное поглощение пищи аналога оксинтомодулина: Пептид NO:130 [SEQ. ID NO:130] при введении его в дозе 5 нмоль/кг путем подкожной инъекции группам мышей, подвергнутых голоданию, по сравнению с контрольной группой животных, которой вводили физиологический раствор, в течение 24 часов.

Осуществление изобретения

Определения

Для того чтобы облегчить обзор различных вариантов осуществления данного описания, ниже приведены следующие пояснения к специальным терминам:

Животный организм: живые многоклеточные позвоночные организмы, группа, которая включает, например, млекопитающих и птиц. Термин млекопитающее включает как человека, так и млекопитающих, отличных от человека. Аналогично термин "субъект (пациент)" включает человека и субъектов, отличных от человека, в том числе ветеринарных субъектов.

Аппетит: естественное желание или сильное желание принять пищу. В одном варианте осуществления аппетит измеряют путем опроса с целью оценки желания принять пищу. Повышенный аппетит, как правило, приводит к усиленному пищевому поведению.

Супрессоры аппетита: Соединения, которые снижают желание принятия пищи. Коммерчески доступные супрессоры аппетита включают, но без ограничения перечисленным, амфепрамон (диэтилпропион), фентермин, мациндол и фенилпропаноламин фенфлурамин, дексфенфлурамин, сибутрамин, римонабант и флуоксетин.

Индекс массы тела (BMI): Математическая формула для измерения массы тела, также иногда называемая Индексом Кветелета. BMI рассчитывают путем деления массы тела (в кг) на рост² (в м²). Рекомендуемые классификации для BMI для человека, принятые Экспертной группой по Идентификации, оценке и лечению избыточной массы тела и ожирению у взрослых, и одобренные ведущими организациями специалистов в области здравоохранения представлены следующими: Пониженная масса тела <18,5 кг/м²; нормальная масса тела 18,5-24,9 кг/м²; избыточная масса тела 25-29,9 кг/м²; ожирение (Класс 1) 30-34,9 кг/м²; ожирение (Класс 2) 35-39,9 кг/м²; сильное ожирение (Класс 3) ≥40 кг/м² (см. Практическое руководство по Идентификации, оценке и лечению избыточной массы тела и ожирению у взрослых, The North American Association for the Study of Obesity (Североамериканская ассоциация по изучению ожирения) (NAASO) и National Heart, Lung, and Blood Institute (Национальный институт сердца, легкого и крови) (NHLBI) 2000). В одном варианте осуществления BMI больше чем 25 кг/м² можно использовать для выявления субъекта, нуждающегося в лечения по поводу избыточной массы тела или ожирения. Идеальная масс тела будет варьировать среди видов и субъектов в зависимости от роста, строения тела, структуры костей и пола.

Консервативные замены: Замена остатка аминокислоты в полипептиде другим подобным остатком. Как правило, но без ограничения консервативные замены представляют собой замены одной на другую алифатических аминокислот Ala, Val, Leu и Не; взаимозамену Ser и Thr, содержащих гидроксильные остатки, взаимозамену кислотных остатков Asp и Glu, взаимозамену амидсодержащих остатков Asn и Gln, взаимозамену основных остатков Lys и Arg, взаимозамену ароматических остатков Phe и Tyr и взаимозамену аминокислот маленького размера Ala, Ser, Thr, Met и Gly. Дополнительные консервативные замены включают замену одной аминокислоты на другую близкой пространственной или стерической конфигурации, например, взаимозамену Asn на Asp или Gln на Glu.

Таблица 1
Неограничивающие примеры консервативных замен аминокислот
Исходный остаток	Консервативные замены
Ala	Gly, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Met
Arg	Lys
Asn	Asp, Gln, His
Asp	Glu, Asn
Cys	Ser
Gln	Asn, His, Lys, Glu
Glu	Asp, Gln
Gly	Ala, Ser, Thr, Met
His	Asn, Gln
Ile	Ala, Leu, Val, Met
Leu	Ala, Ile, Val, Met,

Исходный остаток	Консервативные замены
Lys	Arg
Met	Leu, Ile, Ala, Ser, Thr, Gly
Phe	Leu, Tyr, Trp
Ser	Thr, Cys, Ala, Met, Gly
Thr	Ser, Ala, Ser, Met, Gly
Trp	Tyr, Phe
Tyr	Trp; Phe
Val	Ala, Ile, Leu

Неконсервативные замены: Замена в полипептиде остатка аминокислоты другим остатком, который не является биологически близким. Например, замена остатка аминокислоты другим остатком, который имеет в существенной степени другой заряд, в существенной степени другую гидрофобность или в существенной степени другую пространственную или стерическую конфигурацию.

Выражение "альтернативная аминокислота" охватывает альтернативные аминокислоты, которые представляют собой результат как консервативных, так и неконсервативных замен. Кроме двадцати обычно присутствующих аминокислот, которые, как правило, обнаруживают в природных полипептидах, в соответствии с изобретением в качестве "альтернативных аминокислот" могут быть использованы редкие аминокислоты, например, канаванин, орнитин и 5-гидрокситриптофан, и искусственные аминокислоты, т.е. аминокислоты, обычно не обнаруживаемые in vivo, например трет-бутил глицин. Можно использовать любую хиральную форму аминокислоты.

Диабет: Неспособность клеток транспортировать эндогенную глюкозу через свои мембраны вследствие либо эндогенного недостатка инсулина и/либо нарушения чувствительности к инсулину. Диабет представляет собой хронический синдром нарушенного обмена углеводов, белков и жиров, обусловленный недостаточной секрецией инсулина или устойчивостью к инсулину ткани-мишени. Он протекает в двух основных формах: инсулинзависимый сахарный диабет (IDDM, тип I) и инсулинорезистентный сахарный диабет (NIDDM, тип II), который отличается по этиологии, патологии, генетике, возрасту начала заболевания и лечению.

Обе из двух основных форм диабета характеризуются неспособностью доставки инсулина в количестве и в точное время, которые необходимы для контроля гомеостаза глюкозы. Причиной диабета типа I или инсулинзависимого сахарного диабета (IDDM) является разрушение β-клеток поджелудочной железы, которое обусловлено недостаточными уровнями эндогенного инсулина. Диабет типа II или инсулинорезистентный диабет обусловлен дефектом как в чувствительности организма к инсулину, так и в относительной недостаточности продукции инсулина.

Потребление пищи: Количество пищи, потребляемой отдельным субъектом. Потребление пищи можно измерить по объему или по массе. Например, Потребление пищи может представлять собой общее количество пищи, потребленной отдельным субъектом. Иначе потребление пищи отдельным субъектом может представлять собой количество белков, жиров, углеводов, холестерина, витаминов, минералов или другого пищевого компонента. Термин "потребление белков" относится к количеству белка, потребляемого субъектом. Аналогично термины "потребление жиров", "потребление углеводов", "потребление холестерина", "потребление витаминов" и "потребление минералов" относится к количеству жиров, углеводов, холестерина, витаминов или минералов, поглощаемых субъектом, соответственно.

Нормальная суточная диета: Среднее потребление пищи для представителя данного вида. Нормальную суточную диету можно выражать в терминах потребления калорий, потребления белка, потребления углеводов и/или потребления жиров. Нормальная суточная диета для человека, как правило, включает следующее: от приблизительно 2000, приблизительно 2400 или приблизительно 2800 до существенного большего количества калорий. Кроме того, нормальная суточная диета для человека, как правило, включает от приблизительно 12 г до приблизительно 45 г белка, от приблизительно 120 г до приблизительно 610 г углевода и от приблизительно 11 г до приблизительно 90 г жира. Низкокалорийная диета составляла бы не больше чем приблизительно 85% и предпочтительно не больше чем приблизительно 70% от нормального потребления калорий у человека.

У животных организмов требования к калорийности и питательным веществам варьируют в зависимости от вода и размера животного. Например, у кошек общее потребление калорий/фунт, а также процентное распределение белков, углеводов и жиров варьирует в зависимости от возраста кошки и репродуктивного статуса. Общей нормой для кошек, однако, является 40 кал/фунт/день (18,2 кал/кг/день). От приблизительно 30% до приблизительно 40% должны составлять белки, от приблизительно 7% до приблизительно 10% должны составлять углеводы и от приблизительно 50% до приблизительно 62,5% должны быть получены от потребления жиров. Компетентный специалист в области техники легко может определить нормальную суточную диету представителя любого вида.

Ожирение: состояние, при котором избыток жира в организме может привести к риску для здоровья субъекта (см. статью Barlow and Dietz, Pediatrics 102:E29, 1998; National Institutes of Health, National Heart, Lung, and Blood Institute (Национальные институты здравоохранения, Национальный институт сердца, легкого и крови) (NHLBI)), Obes. Res. 6 (доп.2): 51S-2098, 1998). Избыток жира в организме является результатом дисбаланса поглощения энергии и потребления энергии. Например, для оценки ожирения можно использовать Индекс массы тела. В одном часто используемом соглашении BMI от 25,0 кг/м² до 29,9 кг/м² считают избыточной массой тела, тогда как BMI от 30 кг/м² или выше является ожирением.

В другом соглашении для оценки ожирения используют окружность талии. Избыточный жир в абдоминальной области является важной независимой оценкой риска, связанного с ожирением или наличием избыточной массы тела. Измерение окружности талии особенно эффективно у субъектов, которых разделяют на группы с нормальной или избыточной массой. Обычно бывает необходимым измерить окружность талии у субъектов с BMIs ≥35 кг/м², поскольку это несколько повышает предсказательную силу классификации риска заболевания при BMI. Мужчины с окружностью талии больше чем 40 дюймов (102 см) и женщины с окружностью талии больше чем 35 дюймов (90 см) находятся в группе повышенного риска развития диабета, дислипидемии, гипертензии и сердечно-сосудистого заболевания из-за избыточного жира в абдоминальной области. Следует считать, что субъекты с окружностью талии больше чем данные значения находятся в группе более высокого риска, чем определено по их BMI.

Веское доказательство показывает, что ожирение действует как на заболеваемость, так и на смертность субъектов. Например, субъект с избыточной массой тела или ожирением находится в группе повышенного риска развития сердечных заболеваний, инсулинрезистентного диабета (типа 2), гипертензии, инсульта, рака (например, среди прочих, рака эндометрия, молочной железы, простаты и толстой кишки), дислипидемии, болезни желчного пузыря, апноэ во сне, пониженной фертильности и остеоартрита (см. статью Lyznicki et al., Am. Fam. Phys. 63:2185, 2001)).

Избыточная масса тела: Субъект, масса тела которого превышает идеальную для него массу тела. Субъект с избыточной массой тела может иметь ожирение, но необязательно страдает ожирением. Например, субъект с избыточной массой тела является любым субъектом, который желает уменьшить массу своего тела. В одном соглашении субъект с избыточной массой тела является субъектом с BMI от 25,0 кг/м² до 29,9 кг/м².

Пегилирование: процесс реакции полиалкиленгликоля, предпочтительно активированного полиалкиленгликоля с формированием ковалентной связи. Можно использовать агент, способствующий реакции, например, аминокислоту, например, лизин. Хотя "пегилирование" часто осуществляют с использованием полиэтиленгликоля или его производных, таких как метоксиполиэтиленгликоль, термин в данном контексте не ограничивают использованием метоксиполиэтиленгликоля, но он также включает использование любого другого эффективного полиалкиленгликоля, например, полипропиленгликоля. Термин пегилированный будут определять соответственно.

Периферическое введение: Введение вне центральной нервной системы. Периферическое введение не включает прямое введение в головной мозг. Периферическое введение включает, но без ограничения перечисленным, внутрисосудистое, внутримышечное, подкожное, ингаляционное, пероральное, ректальное, чрескожное, защечное, подъязычное или интраназальное введение.

Полипептид: полимер, в котором мономеры представляют собой остатки аминокислот, которые связаны друг с другом посредством амидных связей. Когда аминокислоты представляют собой α-аминокислоты, можно использовать как L-оптический изомер, так и D-оптический изомер, причем L-изомеры предпочтительны. На протяжении данного описания принимают, что α-аминокислота является L-изомером, если специально не утверждают, что это D-изомер. Термины "полипептид" или "белок", как используют в данном контексте, охватывают любую последовательность аминокислот и включают модифицированные последовательности, такие как гликопротеины.

Термин "полипептид" охватывает природные белки, а также продуцируемые рекомбинантным или синтетическим путем. Термин "полипептидный фрагмент" относится кчасти полипептида, например, такому фрагменту, который представляет по меньшей мере одну последовательность, используемую в связывании рецептора. Термин "функциональные фрагменты полипептида" относится ко всем фрагментам полипептида, которые сохраняют активность полипептида. Биологически фун