Способ хранения донорской эритроцитарной массы

Способ хранения донорской эритроцитарной массы

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно, к фармакологии и трансфузиологии, и может быть использовано для консервирования эритроцитарной массы и хранения донорских эритроцитов до 30 суток при t=+4°С.

Консервирование донорской крови и эритроцитарной массы проводится с использованием гемоконсервантов и дополнительных веществ, способствующих укреплению клеточной мембраны эритроцитов, в качестве которых используются вещества, уплотняющие мембрану и частично обезвоживающие ее (сахароза, маннит, сорбит), а также коллоидные препараты (растворы желатина, поливинилпирролидона), которые, обволакивая эритроцитную мембрану, повышают ее стабильность при консервировании (Шевченко Ю.Л., Шабалин В.Н., Заривчатский М.Ф., Селиванов Е.А. «Руководство по общей и клинической трансфузиологии.» - Спб: ООО «Фолиант», 2003, с.127-128.).

Недостатком существующего способа является значительное снижение эффективности: отсутствие влияния на процессы перекисного окисления липидов и образование свободных радикалов при хранении донорских эритроцитов, что неизбежно приводит к ускоренному старению клеток.

Также известен способ консервирования донорской крови путем дополнительного введения 3-окси-6-метил-2-этилпиридина сукцината (мексидола, далее ОПС) в состав стандартного гемокон-серванта глюгицир в концентрации 0,25 мг/мл глюгицира. При этом консервант содержит в 1 литре воды натрия гидроцитрат двузаме-щенный 20 г, глюкозы безводной 30 г, а также дополнительно ОПС 0,25 г. Соотношение крови и консерванта 4:1 (Патент РФ №2410103).

Недостатком данного способа, несмотря на успешную коррекцию процессов перекисного окисления липидов в донорской крови и повышение ее качества по сравнению с кровью, консервированной только с использованием глюгицира, является снижение защитной активности заявленной комбинации глюгицира ОПС к 14-ым, 21-ым и 30-ым суткам хранения донорской крови.

Целью изобретения является более эффективная защита клеточных мембран эритроцитов, в большей степени ограничение процессов гемолиза и предупреждение образование микросгустков на поздних сроках хранения эритроцитарной массы (14-21-30 сутки).

Поставленная цель решается дополнительным введением 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малата (этоксидола, далее ОПМ) в состав гемоконсерванта глюгицир в концентрации 0,25 мг/мл глюгицира. Консервант содержит в 1 литре воды натрия гидроцитрат двузамещенный 20 г, глюкозы безводной 30 г, ОПМ 25 г. Соотношение крови и консерванта 4:1.

Технический результат заключается в повышении качества эритроцитарной массы при ее хранении до 14-21-30 суток. Консервант позволяет сохранить морфофункциональную полноценность эритроцитов в течение 30 суток.

Изобретение иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1.

Исследование влияния ОПМ проводилось в образцах эритро-цитной массы, заготовленной на гемоконсерванте глюгицир, который содержал 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл ОПМ.

Контролем служила эритроцитарная масса, заготовленная на глюгицире без добавок.

Серией сравнения явились образцы донорской эритроцитарной массы, заготовленной на гемоконсерванте глюгицир, который содержал 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл ОПС.

Исследования ряда показателей, отражающих качество эритроцитов, проводили в образцах эритроцитарной массы сразу после заготовки, затем, в процессе хранения при t=+4°С через 7 суток, 14 суток, 21 сутки и 30 суток.

Влияние ОПМ на морфо-функциональную полноценность донорских эритроцитов исследовали путем определения содержания свободного гемоглобина бензидиновым методом, доли осмотически неустойчивых эритроцитов (по содержанию свободного гемоглобина после помещения эритроцитов в 0,6% раствор натрия хлорида), количества микросгустков (подсчет под микроскопом), определяли процент гемолиза, среднего объема эритроцита (MCV) и ширины распределения эритроцитов (анизоцитоз) на гематологическом анализаторе МЕК-6410К (Япония).

Хранение донорской эритроцитной массы сопровождается увеличением проницаемости клеточной мембраны, ростом осмотической неустойчивости эритроцитов и увеличением содержания свободного гемоглобина, нарастанием количества микросгустков.

На сроках хранения свыше 7 суток в образцах эритроцитарной массы с добавлением ОПМ наблюдалось достоверно более значительное снижение количества микросгустков во всех изученных дозах (0,25 мг/мл, 0,5 и 1,0 мг/мл глюгицира), чем при добавлении к глюгициру ОПС. Так, при использовании препарата в концентрации 0,25 мг/мл показатель снижался относительно данных контроля на 14-е сутки 48%, на 21-е сутки - 47% и на 30-е сутки хранения - на 50% и был меньше серии сравнения, соответственно, на 41%, 31% и 34%.

При использовании для добавления к глюгициру ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл количество микросгустков в образцах эритроцитарной массы снижалось по сравнению с контролем к 14-м суткам на 41%, к 21-м - на 47% и к 30-м - на 52%, в том числе, по сравнению с показателями серии сравнения (с применением ОПС в соответствующей концентрации), на 33%, 30% и 46%, соответственно.

ОПМ в концентрации 1,0 мг/мл позволило ограничить рост количества микросгустков на 14-е, 21-е и 30-е сутки хранения на 41%, 34% и 47%, соответственно, по сравнению с контрольными данными. Кроме того, показатель был ниже серии сравнения на 34%, 14% и 41%.

Таблица 1.
Влияние ОПС и ОПМ на количество микросгустков (в 106 л) при хранении эритроцитной массы (n=20).
Метод коррекции	Сроки хранения эритроцитной массы.
исход	7 сут.	14 сут.	21 сут.	30 сут.
(контроль)		4,500±0,224	47,30±1,14	145,45±1,60	198,8±6,35
3-ОПС	1,01±0,04∗	41,9±0,73∗	111,4±1,48∗	151,7±1,73∗
0,25 мг/мл
3-ОТП	2,587±0,112∗#	24,73±0,712∗#	77,39±1,95∗#	100,13±1,46∗#
0,25 мг/мл
3-ОПС	0,000±0,001	0,91±0,04∗	41,7±0,42∗	110,6±1,26∗	176,7±2,25∗
0,5 мг/мл
3-ОПМ		2,787±0,107∗#	27,933±0,530∗#	77,200±1,797∗#	94,75±1,98∗#
0,5 мг/мл
3-ОПС	0,90±0,05∗	42,2±0,62∗	111,5±1,72∗	177,7±2,07∗
1,0 мг/л
3-ОПМ	2,693±0,111∗#	27,800±0,500∗#	96,41±2,13∗#	105,59±0,89∗#
1,0 мг/мл
Примечание: ∗ - достоверность различий р<0,05 по сравнению с данными контроля соответствующего срока наблюдения; # - по сравнению с данными при введении ОПС соответствующей концентрации и срока наблюдения.

Минимальное содержание микросгустков определялось в образцах с добавлением ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл. Динамические изменения гематологических показателей эритроцитов, свидетельствуют о целесообразности применения ОПМ при консервировании эритроцитарной массы (табл.1).

Пример 2.

Уровень свободного гемоглобина на 7-е сутки хранения донорской эритроцитарной массы на фоне добавления к консерванту ОПМ в концентрации 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл был ниже контрольных данных на 24%, 33% и 22%, соответственно, и достоверно не отличался от показателей группы сравнения с добавлением ОПС (табл.2).

К 14 суткам хранения эритроцитарной массы в образцах с добавлением к консерванту ОПМ уровень свободного гемоглобина был меньше контрольных данных на 20%, 42% и 27%. При этом в группе сравнения, где к консерванту глюгицир добавлялся ОПС в соответствующих дозах, достоверного снижения содержания свободного гемоглобина не наблюдалось (табл.2).

На 21 сутки хранения эритроцитарной массы с добавлением к консерванту глюгицир ОПМ уровень свободного гемоглобина был ниже показателей контроля на 58%, 69% и 61%, в то время как в серии сравнения с добавлением ОПС показатель снижался относительно контроля только при использовании концентрации 0,25 мг/мл на 34% (табл.2).

К 30-м суткам хранения донорской эритроцитарной массы наибольшее снижение уровня свободного гемоглобина наблюдалось при использовании концентрации ОПМ 0,5 мг/мл.

Таблица 2.
Влияние ОПМ на уровень свободного гемоглобина (г/л) при хранении эритроцитарной массы (М±m).
Метод коррекции	Сроки хранения эритроцитной массы, сут.
исход	7 сут.	14 сут.	21 сут.	30 сут.
(контроль)		0,051±0,001	0,079±0,007	0,206±0,008	0,583±0,018
3-ОПС	0,039+0,001∗	0,069±0,001	0,135±0,015∗	0,219±0,010∗
0,25 мг/мл
3-ОПМ	0,03910,001∗	0,063+0,003∗	0,086+0,002∗#	0,301±0,007∗#
0,25 мг/мл
3-ОПС	0,029+0,001	0,039+0,001∗	0,069±0,001	0,239±0,010	0,284+0,010∗
0,5 мг/мл
3-ОПМ	0,034±0,002∗	О,046±0,002∗#	0,064±0,003∗#	0,274±0,031∗
0,5 мг/мл
3-ОПС	0,039+0,001∗	0,069±0,001	0,239±0,010	0,284±0,010∗
1,0 мг/л
3-ОПМ	0,040±0,001∗	Э,058±0,001∗#	0,080+0,003∗#	0,380±0,015∗#
1,0 мг/мл
Примечание: ∗ - достоверность различий р<0,05 по сравнению с данными контроля соответствующего срока наблюдения; # - по сравнению с данными при введении ОПС соответствующей концентрации и срока наблюдения.

Пример 3.

Процент гемолиза в образцах донорской эритроцитарной массы снижался при добавлении ОПМ к консерванту глюгицир к 7 суткам хранения по сравнению с контролем на 52%, 69% и 70%, соответственно, при использовании концентрации ОПМ 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл. При этом показатель во всех исследованных концентрациях снижался достоверно в большей степени, чем при добавлении к глюгициру ОПС.

На 14 сутки хранения процент гемолиза также был ниже контроля на 64%, 69% и 63% при использовании концентрации ОПМ 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл, соответственно, и был достоверно меньше данных серии сравнения, где добавлялся ОПС, на 59%, 65% и 61%.

На 21 сутки хранения эритроцитарной массы процент гемолиза был ниже контрольных данных на 49% и 22% в образцах с использованием концентрации ОПМ 0,5 и 1,0 мг/мл. При этом более выраженное снижение процента гемолиза по сравнению с добавлением в консервант ОПС наблюдалось при использовании концентрации ОПМ 0,5 мг/мл (на 56%).

На 30-е сутки хранения эритроцитарной массы процент гемолиза был ниже контрольных данных на 46%, 58% и 48% в образцах с добавлением к консерванту ОПМ в концентрации 0,25 мг/мл, 0,5 мг/мл и 1,0 мг/мл. Причем, при использовании концентрации 0,5 мг/мл показатель был ниже данных группы сравнения на 19%.

Таким образом, процент гемолиза снижался в большей степени при различных сроках хранения эритроцитарной массы в образцах, где к консерванту глюгицир добавлялся ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл.

Таблица 3.
Влияние ОПС и ОПМ на % гемолиза при хранении эритроцитарной массы (М±m).
Метод коррекции	Сроки хранения эритроцитной массы, сут.
Исход	7 сут.	14 сут.	21 сут.	30 сут.
(контроль)		0,113±0,003	0,175±0,015	0,458±0,017	1,456±0,044
3-ОПС	0,085±0,002∗	0,153+0,003	0,29910,034∗	0,54510,024∗
0,25 мг/мл
3-ОПМ	0,054±0,006∗#	0,063±0,003∗#	0,398±0,071	0,793±0,021∗#
0,25 мг/мл
3-ОПС	0,058±0,002	0,089±0,004∗	0,157±0,004	0,53010,021	0,75010,038 ∗
0,5 мг/мл
3-ОПМ	0,035±0,002∗#	0,055±0,006∗#	0,235±0,013∗#	0,61±0,06∗#
0,5 мг/мл
3-ОПС	0,08710,002∗	0,166±0,008	0,51410,025	0,71110,025∗
1,0 мг/л
3-ОПМ	0,034±0,002∗#	0,065±0,004∗#	0,357±0,064#	0,756±0,033∗
1,0 мг/мл
Примечание: ∗ - достоверность различий р<0,05 по сравнению с данными контроля соответствующего срока наблюдения; # - по сравнению с данными при введении ОПС соответствующей концентрации и срока наблюдения.

Пример 4.

Доля осмотически неустойчивых эритроцитов снижалась по сравнению с контролем на всех сроках наблюдения при добавлении к консерванту глюгицир ОПМ в изученных концентрациях (табл.4). При этом при добавлении ОПМ в концентрации 0,5 мг/мл показатель не отличался от данных серии сравнения, а в концентрации 1,0 мг/мл был ниже, чем при добавлении ОПС на 32%, 7% и 17% на сроках хранения 14, 21 и 30 суток.

Таблица 4.
Влияние ОПМ на долю осмотически неустойчивых эритроцитов (%) при хранении эритроцитной массы (n=20).
Метод коррекции	Сроки хранения эритроцитной массы.
исход	7 сут.	14 сут.	21 сут.	30 сут.
(контроль)		7,45±0,11	12,24+0,12	16,97+0,09	22,905+0,36
3-ОПС	3,54±0,08∗	5,09+0,07*	11,33±0,16∗	13,84±0,15∗
0,25 мг/мл
3-ОПМ	3,93±0,07∗	7,35±0,13∗#	12,28+0,18∗#	14,11+0,10∗
0,25 мг/мл
3-ОПС	0,03 7±0,003	3,50±0,07∗	4,98±0,08∗	11,32±0,14∗	13,57±0,11∗
0,5 мг/мл
3-ОПМ	3,47+0,11∗	4,93+0,11∗	11,43+0,20∗	13,67+0,16∗
0,5 мг/мл
3-ОПС	3,94±0,06∗	7,45±0,08∗	12,24+0,13∗	16,99+0,11∗
1,0 мг/л
3-ОПМ	3,60+0,11∗	5,07±0,07∗#	11,43±0,20∗#	14,03+0,21∗#
1,0 мг/мл
Примечание: ∗ - достоверность различий р<0,05 по сравнению с данными контроля соответствующего срока наблюдения; # - по сравнению с данными при введении ОПС соответствующей концентрации и срока наблюдения.

Пример 5.

На всех сроках хранения эритроцитарной массы при добавлении к консерванту глюгицир ОПМ в изученных концентрациях наблюдается уменьшение процессов анизоцитоза (табл.5) и ограничение роста объема эритроцитов (табл.6). При этом предотвращается увеличение ширины распределения размеров эритроцитов и их объема свыше нормы при хранении образцов донорской эритроцитарной массы до 30 суток, в то время как в контроле в 80% случаев на поздних сроках хранения наблюдается увеличение размеров эритроцитов.

Таблица 5.
Влияние ОПС и ОПМ на анизоцитоз (ширина распределения эритроцитов) (%CV) при хранении эритроцитарной массы (М±m).
Метод коррекции	Сроки хранения эритроцитной массы, сут.
исход	7 сут.	14 сут.	%	21 сут.	%	30 сут.	%
(контроль)		14,23±0,17	15,66±0,06	0	16,22±0,05	10	17,02+0,1 0	80
3-ОПМ 0,25 мг/мл	12,68+0,12∗	13,65±0,27∗	0	13,72+0,29∗	0	14,52±0,31∗	0
3-ОПМ 0,5 мг/мл	10,90 ±0,16	12,28+0,24∗	13,65+0,27∗	0	13,72+0,29∗	0	14,52±0,31∗	0
3-ОПМ 1,0 мг/мл	13,06±0,34∗	14,27+0,19∗	0	14,25±0,61∗	0	14,73±0,61∗	0
Примечание: ∗ - достоверность различий р<0,05 по сравнению с данными контроля соответствующего срока наблюдения; % - процент эритроцитов, размеры которых превышают норму контроль - 21 сутки, контроль - 30 сутки. При добавлении ОПМ - 21 сутки. При добавлении ОПМ - 30 сутки.

Таблица 6.
Влияние ОПС и ОПМ на средний объем эритроцитов (fl) при хранении эритроцитарной массы (М±m).
Метод коррекции	Сроки хранения эритроцитной массы, сут.
Исход	7 сут.	14 сут.	%	21 сут.	%	30 сут.	%
- (контроль)		91,28±0,45	91,68±0,46	0	97,45+0,66	15	99,86+0,39	55
3-ОПМ	90,55±0,33	94,57±0,40	0	92,76±0,38∗	0	97,24+0,52∗	0
0,25 мг/мл
3-ОПМ	87,38±0,62	91,53±0,70	91,29±0,27	0	96,00±0,41	0	97,19±0,38∗	0
0,5 мг/мл
3-ОПМ	91,66+0,67	94,57±0,38	0	95,71±0,33∗	0	96,88±0,66∗	0
1,0 мг/мл
Примечание: ∗ - достоверность различий р<0,05 по сравнению с данными контроля соответствующего срока наблюдения; % -процент эритроцитов, содержание гемоглобина в которых не соответствует норме (норма - 80-l00fl).

Дополнительное применение 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малата в составе гемоконсерванта «глюгицир» позволяет пролонгировать сроки хранения донорских эритроцитов и снизить уровень деструктивных процессов в хранящейся до востребования эритроцитной массе.

1. Способ консервирования донорской эритроцитарной массы, включающий получение донорской крови, смешивание с гемоконсервантом в соотношении 4:1, разделение донорской крови на плазму и эритроцитную массу, с последующим хранением эритроцитной массы в течение 30 суток при t=+4°С, отличающийся тем, что дополнительно в состав гемоконсерванта глюгицир вводят 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малат.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малат вводят в концентрации 0,5 или 1,0 мг/мл глюгицира.