Терапевтическое применение зеаксантина, обладающего специфической антиапоптозной активностью для каспазы-3, и композиции, его содержащие

Терапевтическое применение зеаксантина, обладающего специфической антиапоптозной активностью для каспазы-3, и композиции, его содержащие

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к применению соединений, которые, как обнаружено, активны при ингибировании каспазы-3 и поэтому применимы для регуляции апоптоза путем предотвращения запрограммированной гибели клеток при лечении заболеваний и дисфункций, характеризующихся дефектом в регуляции физических механизмов апоптоза и, следовательно, ранней гибелью клеток.

Уровень техники

Одной из таких дисфункций типично является алопеция. Жизненный цикл волосяного фолликула по существу представлен тремя последовательными фазами: анагеном (рост), катагеном (регрессия) и телогеном (фаза покоя). По окончании последней фазы цикл начинается снова. Биологическая основа такого явления находится в способности стволовых клеток фолликулла выходить, в альтернативных фазах, из их состояния бездействия. Во время роста фолликула и выработки волоса активность факторов роста регулирует пролиферацию, дифференцировку и доминанты выживаемости. Вместо этого фаза регрессии характеризуется активацией молекулярных путей, которые вызывают апоптоз клеток фолликулов.

Различные клеточные популяции в волосяном фолликуле обладают различной восприимчивостью к явлению апоптоза. В частности, эпителиальные клетки и меланоциты являются наиболее чувствительными к явлению апоптоза, в то время как представляется, что дермальные фибробласты, некоторые кератиноциты и некоторые меланоциты, выбранные для выживания, являются более устойчивыми. Жизненный цикл волоса и его развитие зависят от факторов роста, которые регулируют коммуникационные сигналы между эпителием и мезенхимными клетками фолликула. Такие молекулярные факторы принадлежат к следующим белковым семействам: BMP (костный морфогенный белок), TGF-бета, EGF, FGF, IGF, нейротрофин, TNF и Wnt.

Апоптоз, также называемый запрограммированной гибелью клеток, представляет собой сложный биологический процесс, который регулируется на генном уровне и который играет решающую роль в гомеостазе тканей, где он противодействует пролиферативному (митотическому) действию, проявляемому факторами роста. С морфологической точки зрения клетка при апоптозе претерпевает быстрое уменьшение объема, сопровождаемое уплотнением и утратой контакта с окружающими клетками. На уровне ядра наблюдают дизагрегацию, разрушение мембраны и конденсацию и фрагментацию хроматина в фрагменты в примерно 200 пар оснований.

Каспазы - каталитические ферменты являются белковым компонентом, существенным как для активации, так и для осуществления процесса апоптоза. У человека идентифицировано 10 каспаз (в действительности, они имеют номера от 1 до 10). Каспазы представляют собой каталитические ферменты, которые проявляют протеазную активность и функционируют как в качестве эффекторов при демонтаже клеток, типичном для апоптоза, так и в качестве инициаторов такого явления после активации сигналами проапоптоза.

Каспаза-3 (также известная как СРР32, Yama или апопаин) является одним из основных эффекторов апоптоза.

В условиях бездействия в большинстве клеток каспаза-3 существует в неактивной форме (профермент), которая, после проапоптозной стимуляции, активируется каспазой-8 или каспазой-9. Это зависит от типа апоптозного стимула, полученного клеткой. Поэтому апоптоз рассматривается как имеющий центральную роль в регуляции регрессии волосяного фолликула (Effects of finasteride on apoptosis and regulation of the human hair cycle, Keane et al., Journal of Cutaneous Medicine and Surgery, vol.6, no.1, January 2002).

Раскрытие изобретения

Неожиданно обнаружилось, что некоторые соединения, используемые как одни, так и в сочетании, могут оказывать ингибирующее действие на каспазу-3, имеют сильную апоптозную активность и могут противодействовать потере воолос.

Согласно изобретению, на самом деле первичное применение таких соединений, обладающих специфической активностью ингибирования каспазы-3, относится к расстройствам волосистой части кожи головы, характеризующимся избыточным клеточным функциональным циклом, таким как алопеция, вызванная химиотерапией, гнездная алопеция, андрогенная алопеция и телоген с выпадением волос (telogen effluvium).

Осуществление изобретения

В этом отношении данное изобретение относится к применению зеаксантина и/или рутина как таковых или также в сочетании со спермидином как активной основы в фармацевтической, пищевой или косметической композиции, подходящей для ингибирования активности фермента каспазы-3, и, следовательно, для регуляции апоптоза посредством предотвращения запрограммированной гибели клеток, для каждого показания, при котором применимо такое ингибирующее действие. Особое отношение имеется к лечению алопеции у людей через ингибирование каспазы.

Изобретение также относится к фармацевтической, пищевой или косметической композиции, подходящей для ингибирования активности фермента каспазы-3, и, следовательно, для регуляции апоптоза посредством предотвращения запрограммированной гибели клеток, отличающейся включением в качестве активной основы зеаксантина и/или рутина как таковых или также в сочетании со спермидином, составленной с любым эксципиентом, подходящим для местного или системного (предпочтительно, перорального) введения.

Экспериментальное исследование, описанное далее в данном описании, в действительности неожиданно показывает, что возможно получить ингибирование апоптозной активности каспазы-3 релевантным путем за счет использования соединений по настящему изобретению.

Поэтому показаниями для такой фармацевтической, пищевой или косметической композиции по изобретению являются, в основном, лечение расстройств волосистой части кожи головы, характеризующихся избыточным клеточным функциональным циклом, таких как алопеция, вызванная химиотерапией, гнездная алопеция, андрогенная алопеция и телоген с выпадением волос.

Изобретение относится к применению в качестве активных ингредиентов соединений зеаксантина или рутина по отдельности или в паре друг с другом, каждого в паре со спермидином или обоих в сочетании со спермидином.

В одном воплощении композиция по изобретению включает зеаксантин или рутин.

В другом воплощении композиция по изобретению включает зеаксантин и рутин. В соответствующем воплощении композиция по изобретению включает 2 мг зеаксантина и 2,5 мг рутина.

В предпочтительном воплощении композиция по изобретению включает зеаксантин, рутин и спермидин. В соответствующей форме предпочтительного осуществления композиция по изобретению включает зеаксантин, рутин и спермидин в массовом соотношении приблизительно 8:5:1, соответственно. В другой форме предпочтительного осуществления композиция по изобретению включает зеаксантин, рутин и спермидин в массовом соотношении приблизительно 4:5:1, соответственно.

В другом воплощении композиция по изобретению включает активную основу, которая состоит из рутина и спермидина. В соответствующем воплощении композиция по изобретению включает рутин и спермидин в массовом соотношении приблизительно 5:1.

В другом воплощении композиция по изобретению включает зеаксантин и спермидин. В соответствующем воплощении композиция по изобретению включает зеаксантин и спермидин в массовом соотношении приблизительно 4:1.

В одном воплощении композиция по изобретению включает эксципиенты для местного применения для волосистой части кожи головы. Подходящие концентрации выбирают из следующих: 0,0005-1%, мас/мас, зеаксантина, 0,0005-1%, мас./мас, рутина и 0,0001-1%, мас./мас, гидрохлорида спермидина.

В другом воплощении композиция по изобретению включает эксципиенты для системного введения, предпочтительно, перорального. В предпочтительном воплощении композиция для перорального введения, в том числе, таблетка, включает 2 мг зеаксантина, 2,50 мг рутина и 0,50 мг тригидрохлорида спермидина.

Приведенные далее примеры иллюстрируют изобретение без ограничения каким-либо путем его объема притязаний.

Пример 1

Пищевая добавка в таблетках для перорального применения с зеаксантином, рутином, спермидином, служащими донорами серы соединениями (сульфированные аминокислоты, метилсульфонилметан), витаминами и минералами

Каждая таблетка содержит указанное далее.

Метионин	300 мг
Тригидрохлорид спермидина	0,5 мг
Рутин	2,5 мг
Зеаксантин	2 мг
Пантотенат кальция	9 мг
d-Биотин	0,05 мг
Хелат цинк-аминокислота	37,5 мг
	(эквивалент 7,5 мг цинка)
Хелат медь-аминокислота	12 мг
	(эквивалент 1,2 мг меди)
Витамин C (аскорбиновая кислота)	90 мг
Витамин B6, гидрохлорид	2,421 мг
	(эквивалент 2 мг пиридоксина)
Витамин Е, ацетат (d1-альфа-токоферол)	15 мг
Фолиевая кислота	0,3 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	60-150 мг
Дигидрат двухосновного фосфата кальция	60-150 мг
Гидроксипропилметилцеллюлоза	50-100 мг
Аравийская камедь	2-20 мг
Стеарат магния	5-9 мг
Диоксид кремния	2,50-8 мг
Желтый оксид железа Е172	0,1-0,3 мг
Медь-хлорофилл	0,4-0,8 мг
Диоксид титана	1,5-3,5 мг
Стеариновая кислота	1 -2 мг
Этилцеллюлоза	2-3 мг
Гидролизованный желатин	15-17 мг

Пример 2

Пищевая добавка в твердых капсулах с зеаксантином, рутином и спермидином

Каждая капсула содержит указанное далее.

Тригидрохлорид спермидина	0,5 мг
Рутин	2,5 мг
Зеаксантин	2 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	100-150 мг
Дигидрат двухосновного фосфата кальция	100-150 мг
Стеарат магния	3-6 мг
Диоксид кремния	2,50-5 мг
Натуральный желатин (упаковка)	q.s.

Пример 3

Пищевая добавка в таблетках для перорального применения с зеаксантином, рутином, спермидином, изофлавонами сои, сухим экстрактом Emblica officinalis, ресвератролом, витаминами и минералами

Каждая таблетка содержит указанное далее.

Изофлавоны сои	40 мг
Пантотенат кальция	9 мг
d-Биотин	0,5-0,15 мг
Тригидрохлорид спермидина	0,5 мг
Рутин	2,5 мг - 12 мг
Сухой экстракт Emblica officinalis	100 мг
Ресвератрол	0,5 мг
Зеаксантин	2 мг
Хелат цинк-аминокислота	37,5 мг
	(эквивалент 7,5 мг цинка)
Хелат медь-аминокислота	12 мг
	(эквивалент 1,2 мг меди)
Фолиевая кислота	0,2-0,3 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	60-150 мг
Дигидрат двухосновного фосфата кальция	100-300 мг
Гидроксипропилметилцеллюлоза	40-100 мг
Тапиоковый декстрин	40-100 мг
Аравийская камедь	2-20 мг
Глицерилбегенат	5-10 мг
Диоксид кремния	2,5-10 мг
Желтый оксид железа Е172	0,1-0,3 мг
Красный оксид железа Е172	0,1-0,3 мг
Диоксид титана	1,5-3,5 мг
Стеариновая кислота	1-2 мг

Пример 4

Не выделяющий пузырьков газа гранулированный препарат для немедленного применения на основе соединений доноров серы (метилсульфонилметан) и зеаксантина

Каждая доза содержит указанное далее.

Метилсульфонилметан	200 мг
Зеаксантин	2 мг
Порошок мальтита	100-300 мг
Натрийкрахмалгликолят	100-300 мг
Аравийская камедь	100-500 мг
Порошок сорбита	5-9 мг
Ацесульфам калий	0,5-1,5 мг
Аспартам	0,25-1,25 мг
Стеарилфумарат натрия	10-30 мг
Отдушка	q.s.

Пример 5

Таблетки пищевой добавки для перорального применения с зеаксантином, рутином, спермидином, L-аргинином, Ajuga reptans, кверцетином, витаминами и минералами

Каждая таблетка содержит указанное далее.

Рутин	2,5 мг
Зеаксантин	2 мг
Тригидрохлорид спермидина	0,5 мг
d-Пантотенат кальция	9 мг
d-Биотин	0,15 мг
Кверцитин	0,9 мг

Масло бурачника (омега-6-полиненасыщенные

жирные кислоты)	40-100 мг
Рутин	3-12 мг
Гидрохлорид L-аргинина	242 мг
Сухой экстракт ajuga reptans	5 мг
Хелат цинк-аминокислота	37,5 мг
	(эквивалент 7,5 мг цинка)
Хелат медь-аминокислота	12 мг
	(эквивалент 1,2 мг меди)
Тапиоковый декстрин	40-100 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	130-200 мг

Дигидрат двухосновного

фосфата кальция	50-200 мг
Гидроксипропилметилцеллюлоза	40-100 мг
Моно- и диглицериды жирных кислот	5-10 мг
Диоксид кремния	5-10 мг
Стеариновая кислота	1-2 мг
Диоксид титана	1,5-3,5 мг
Красный оксид железа	0,1-0,3 мг
Рибофлавин (краситель)	0,1-0,3 мг

Пример 6

Пищевая добавка в таблетках для перорального применения с молочными кислотами и питательными веществами, применимая для восстановления баланса при осыпании с волосистой части головы

Каждая таблетка содержит указанное далее.

Рутин	2,5 мг
Зеаксантин	2 мг
Lactobacillus rhamnouse	109 кое/табл.
	(1 миллиард кое/г)
Нерастворимое пищевое волокно	20-40 мг
Инулин	20-40 мг
Метионин	200 мг
Витамин B5 (пантотенат кальция)	9 мг
Витамин B6, гидрохлорид	2,421 мг
	(эквивалент 2 мг пиридоксина)
Биотин	0,23 мг
Витамин A	1200 мг
Витамин B2 (рибофлавин)	1,60 мг
Сухой экстракт листьев Ajuga reptans	2,5 мг
Хелат цинк-аминокислота	37,5 мг
	(эквивалент 7,5 мг цинка)
Витамин C (аскорбиновая кислота)	90 мг
Витамин E, ацетат (d1-альфа-токоферол)	15 мг
Селеновые дрожжи	15 мг
	(эквивалент 30 мкг селена)
Трикальцийфосфат	28-32 мг
Микрокристаллическая целлюлоза	100-200 мг
Безводный гидрофосфат кальция	50-100 мг
Стеарат магния	6-10 мг
Диоксид кремния	4-10 мг

Пример 7

Гель для укладки волос с зеаксантином, рутином, спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Полиакрилат-14	0,7-2
Гидроксипропилгуар	0,5-5
Гидроксиметилглицинат натрия	0,1-1
Бензофенон-4	0,1-3
Тетранатриевая соль ЭДТК	0,1-0,8
Таурин	0,01-0,08
Пантотенат кальция	0,01-0,05
Экстракт Ajuga reptans с
содержанием фенилпропаноидов >50%	0,001-0,1
Зеаксантин	0,001-0,1
Рутин	0,005-0,05
Спермидин HCl	0,001-0,05
Биотин	0,0001-0,05
Вода	q.s. до 100

Пример 8

Укрепляющий волосы безвоздушный мусс с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Спирт	9,5-20
Экстракт листьев Boehmeria nipononivea	1-5,5
Таурин	1-5,5
Глицерин	1-3,5
Sodium olive amhoacetate	0,5-2
Пантотенат кальция	0,1-2
Токоферолы (α, β, γ)	0,1-2
Поликватерний-16	0,02-1
Динатриевая соль ЭДТК	0,02-0,08
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,02-0,05
Спермидин HCl	0,01-0,05
Зеаксантин	0,1-0,5
Рутин	0,1-0,5
Метабисульфит калия	0,01-0,05
Vitis vinifera	0,01-0,05
Биотин	0,002-0,05
Лимонная кислота	0,1-0,3
Вода	q.s. до 100

Пример 9

Укрепляющий волосы лосьон с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Спирт	10,5-20
Экстракт Juglans regia	1-4,5
ПЭГ-40-гидрированное касторовое масло	0,5-3
Пантотенат кальция	0,1-0,5
Отдушка	0,1-0,5
Динатриевая соль ЭДТК	0,05-0,1
Лимонная кислота	0,05-0,1
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,05-0,1
Спермидин HCl	0,01-0,05
Зеаксантин	0,1-0,3
Рутин	0,1-0,5
Биотин	0,003-0,05
Лецитин	0,002-0,005
Полисорбат 80	0,001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 10

Восстанавливающий структуру волос кондиционер с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Цетариловый спирт	1,5-5,5
Диметикон	3-4,5
Глицерилстеарат	4-5,5
(С12-13)-Алкиллактат	1,5-3
Хлорид цетримония	1-3,5
Стеарат ПЭГ-100	1-3,5
Диметиконол	1-2,5
Ксилит	1-2,5
Феноксиэтанол	0,5-1
Пропиленгликоль	0,5-1
Гидроксиэтилцеллюлоза	0,5-1
Пантенол	0,5-1
Отдушка	0,5-1
Триметилсилиламодиметикон	0,2-1
Метилпарабен	0,1-1
Динатриевая соль ЭДТК	0,1-1
Бутиленгликоль	0,1-1
Этилпарабен	0,01-0,05
Молочная кислота	0,01-0,5
Пропилпарабен	0,01-0,05
Пантотенат кальция	0,001-0,005
Зеаксантин	0,0005-0,01
Рутин	0,0005-0,01
Спермидин HCl	0,0001-0,005
Биотин	0,00001-0,0005
Вода	q.s. до 100

Пример 11

Маска-гель против потери волос с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Глицерин	1,5-4,5

«Сополимер акрилоиламмония-

-диметилтаурата/VP»	1-5,5
Циклопентасилоксан	1-5,5
Феноксиэтанол	0,1-0,8
Отдушка	0,1-0,5
Силикон кватерний-15	0,1-0,5
Токоферилацетат	0,1-0,5
Диметикон	0,1-0,3
Метилпарабен	0,1-0,5
Глицирризат аммония	0,1-0,5
Этилгексилметоксициннамат	0,05-0,1
Динатриевая соль ЭДТК	0,05-0,1
Этилпарабен	0,02-0,05
Глицериллаурат	0,02-0,05
Пантотенат кальция	0,02-0,05
Пропилпарабен	0,02-0,05
Зеаксантин	0,001-0,1
Рутин	0,01-0,1
Спермидин HCl	0,001-0,005
Биотин	0,0001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 12

Укрепляющий волосы шампунь с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас/мас.
Лауретсульфат магния	2-8,5
Лауроилсаркозинат натрия	2-5,5
Динатрийлауретсульфосуцинат	1-5,5
ПЭГ-200-гидрированный
глицерилпальмитат	1-5,5
Кокамид MIPA	1-5,5
Глицерин	0,5-1
Отдушка	0,5-1
Дистеарат гликоля	0,5-1
Лимонная кислота	0,5-1
Лаурет-7	0,5-1
Глицерилкокоат ПЭГ-7	0,5-1
Бетаин	0,5-1
Хлорид лаурилметилглюцет-10-
гидроксипропилдиаммония	0,5-1
Поликватерний-10	0,2-0,5
Гидроксиметилглицинат натрия	0,2-0,5
Калийундециленоилпротеин из
пшеницы	0,2-0,5
Тетранатриевая соль ЭДТК	0,2-0,5
Пантенол	0,2-0,5
Силикон кватерний-15	0,1-0,5
Аминокислоты шелка	0,1-0,5
Парет-9С11-С15	0,03-0,06
Sodium olive amphoacetate	0,03-0,06
Пантотенат кальция	0,01-0,05
ВНА	0,01-0,05
Зеаксантин	0,001-0,01
Рутин	0,001-0,01
Спермидин HCl	0,001-0,01
Биотин	0,0001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 13

Гель для укладки волос с зеаксантином, рутином, спермидином и изофлавонами сои

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Полиакрилат-14	0,7-2
Гидроксипропилгуар	0,5-5
Гидроксиметилглицинат натрия	0,1-1
Бензофенон-4	0,1-3
Тетранатриевая соль ЭДТК	0,1-0,8
Таурин	0,01-0,08
Пантотенат кальция	0,01-0,05
Экстракт культур клеток Ajuga
reptans с содержанием
фенилпропаноидов 50%	0,001-0,1
Зеаксантин	0,001-0,1
Рутин	0,005-0,02
Спермидин HCl	0,001-0,05
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Биотин	0,0001-0,001
Вода	q.s. до 100

Пример 14

Укрепляющий волосы безвоздушный мусс с зеаксантином, рутином, спермидином и изофлавонами сои

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Спирт	9,5-20
Экстракт листьев Boehmeria
nipononivea	1-5,5
Таурин	1-5,5
Глицерин	1-3,5
Sodium olive amhoacetate	0,5-2
Пантотенат кальция	0,1-2
Токоферолы (α, β, γ)	0,1-2
Поликватерний-16	0,02-1
Динатриевая соль ЭДТК	0,02-0,08
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,02-0,05
Спермидин HCl	0,1-1
Зеаксантин	0,1-1
Рутин	0,1-1
Метабисульфит калия	0,01-0,05
Vitis vinifera	0,01-0,05
Биотин	0,002-0,05
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Лимонная кислота	0,1-0,3
Вода	q.s. до 100

Пример 15

Укрепляющий волосы лосьон с зеаксантином, рутином спермидином и изофлавонами сои

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Спирт	10,5-20
Экстракт juglans regia	1-4,5
ПЭГ-40-гидрированное касторовое масло	0,5-3
Пантотенат кальция	0,1-0,5
Отдушка	0,1-0,5
Динатриевая соль ЭДТК	0,05-0,1
Лимонная кислота	0,05-0,1
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,05-0,1
Спермидин HCl	0,01 -0,05
Зеаксантин	0,1-1
Рутин	0,1-1
Биотин	0,003-0,05
Лецитин	0,002-0,005
Полисорбат 80	0,001-0,005
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Вода	q.s. до 100

Пример 16

Восстанавливающий структуру волос кондиционер с зеаксантином, рутином, спермидином и изофлавонами сои

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Цетариловый спирт	1,5-5,5
Диметикон	3-4,5
Глицерилстеарат	4-5,5
(С12-13)-Алкиллактат	1,5-3
Хлорид цетримония	1-3,5
СтеаратПЭГ-100	1-3,5
Диметиконол	1-2,5
Ксилит	1-2,5
Феноксиэтанол	0,5-1
Пропиленгликоль	0,5-1
Гидроксиэтилцеллюлоза	0,5-1
Пантенол	0,5-1
Отдушка	0,5-1
Триметилсилиламодиметикон	0,2-1
Фитантриол	0,1-1
Метилпарабен	0,1-1
Динатриевая соль ЭДТК	0,1-1
Бутиленгликоль	0,1-1
Этилпарабен	0,01-0,05
Молочная кислота	0,01-0,05
Пропилпарабен	0,01-0,05
Полиглицерил-3-дистеарат	0,01-0,05
Пантотенат кальция	0,001-0,005
Зеаксантин	0,0005-0,001
Рутин	0,0005-0,001
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Спермидин HCl	0,0001-0,005
Биотин	0,00001-0,0005
Вода	q.s. до 100

Пример 17

Маска-гель против потери волос с зеаксантином, рутином, спермидином и изофлавонами сои

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Глицерин	1,5-4,5
Сополимер акрилоиламмония-
диметилтаурата/VP	1-5,5
Циклопентасилоксан	1-5,5
Феноксиэтанол	0,1-0,8
Отдушка	0,1-0,5
Силикон кватерний-15	0,1-0,5
Токоферилацетат	0,1-0,5
Диметикон	0,1-0,3
Метилпарабен	0,1-0,5
Глицирризат аммония	0,1-0,5
Этилгексилметоксициннамат	0,05-0,1
Динатриевая соль ЭДТК	0,05-0,1
Этилпарабен	0,02-0,05
Глицериллаурат	0,02-0,05
Пантотенат кальция	0,02-0,05
Пропилпарабен	0,02-0,05
Зеаксантин	0,001-0,1
Рутин	0,01-0,1
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Спермидин HCl	0,0001-0,005
Биотин	0,0001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 18

Укрепляющий волосы шампунь с зеаксантином, рутином, спермидином и изофлавонами сои

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Лауретсульфат магния	2-8,5
Лауроилсаркозинат натрия	2-5,5
Динатрийлауретсульфосуцинат	1-5,5
ПЭГ-200-гидрированный
глицерилпальмитат	1-5,5
Кокамид MIPA	1-5,5
Глицерин	0,5-1
Отдушка	0,5-1
Дистеарат гликоля	0,5-1
Лимонная кислота	0,5-1
Лаурет-7	0,5-1
Глицерилкокоат ПЭГ-7	0,5-1
Бетаин	0,5-1
Хлорид лаурилметилглюцет-10-
гидроксипропилдиаммония	0,5-1
Поликватерний-10	0,2-0,5
Гидроксиметилглицинат натрия	0,2-0,5
Калийундециленоилпротеин
из пшеницы	0,2-0,5
Тетранатриевая соль ЭДТК	0,2-0,5
Пантенол	0,2-0,5
Силикон кватерний-15	0,1-0,5
Аминокислоты шелка	0,1-0,5
Пантотенат кальция	0,01-0,05
Лаурет-4	0,01-0,05
ВНА	0,01-0,05
Зеаксантин	0,001-0,01
Рутин	0,001-0,01
Спермидин HCl	0,001-0,01
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Биотин	0,0001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 19

Укрепляющий волосы шампунь с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас/мас.
Лауретсульфат магния	2-8,5
Лауроилсаркозинат натрия	2-5,5
Динатрийлауретсульфосуцинат	1-5,5
Эпигаллокатехин-3-галлат	1-5,5
ПЭГ-200-гидрированный
глицерилпальмитат	1-5,5
Кокамид MIPA	0,5-1
Глицерин	0,5-1
Отдушка	0,5-1
Дистеарат гликоля	0,5-1
Лимонная кислота	0,5-1
Лаурет-7	0,5-1
Глицерилкокоат ПЭГ-7	0,5-1
Бетаин	0,5-1
Хлорид лаурилметилглюцет-10-
гидроксипропилдиаммония	0,2-0,5
Поликватерний-10	0,2-0,5
Гидроксиметилглицинат натрия	0,2-0,5
Калийундециленоилпротеин из пшеницы	0,2-0,5
Тетранатриевая соль ЭДТК	0,2-0,5
Пантенол	0,1-0,5
Силикон кватерний-15	0,1-0,5
Аминокислоты шелка	0,01-0,05
Пантотенат кальция	0,01-0,05
Лаурет-4	0,01-0,05
ВНА	0,001-0,01
Зеаксантин	0,001-0,01
Рутин	0,001-0,01
Спермидин HCl	0,001-0,05
Биотин	0,0001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 20

Укрепляющий волосы лосьон с зеаксантином, рутином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас/мас.
Спирт	10,5-20
Экстракт Juglans regia	1-4,5
Эпигаллокатехин-3-галлат	0,5-3
ПЭГ-40-гидрированное касторовое масло	0,1-0,5
Пантотенат кальция	0,1-0,5
Отдушка	0,05-0,1
Динатриевая соль ЭДТК	0,05-0,1
Лимонная кислота	0,05-0,1
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,05-0,1
Спермидин HCl	0,1-0,3
Зеаксантин	0,1-0,5
Рутин	0,003-0,05
Биотин	0,002-0,05
Лецитин	0,001-0,05
Полисорбат 80	0,001-0,05
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Вода	q.s. до 100

Пример 21

Укрепляющий волосы шампунь с зеаксантином и спермидином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Лауретсульфат магния	2-8,5
Лауроилсаркозинат натрия	2-5,5
Динатрийлауретсульфосуцинат	1-5,5
ПЭГ-200-гидрированный
глицерилпальмитат	1-5,5
Кокамид MIPA	0,5-1
Глицерин	0,5-1
Отдушка	0,5-1
Дистеарат гликоля	0,5-1
Лимонная кислота	0,5-1
Лаурет-7	0,5-1
Глицерилкокоат ПЭГ-7	0,5-1
Бетаин	0,5-1
Хлорид лаурилметилглюцет-10-
гидроксипропилдиаммония	0,5-1
Поликватерний-10	0,2-0,5
Гидроксиметилглицинат натрия	0,2-0,5
Калийундециленоилпротеин из
пшеницы	0,2-0,5
Тетранатриевая соль ЭДТК	0,2-0,5
Пантенол	0,2-0,5
Силикон кватерний-15	0,1-0,5
Аминокислоты шелка	0,1-0,5
Пантотенат кальция	0,01-0,05
Лаурет-4	0,01-0,05
ВНА	0,01-0,05
Зеаксантин	0,001-0,01
Спермидин HCl	0,001 -0,01
Линалоол	0,001-0,01
Биотин	0,001-0,005
Вода	q.s. до 100

Пример 22

Укрепляющий волосы безвоздушный мусс с рутином и спермидином (без зеаксантина)

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Спирт	9,5-20
Экстракт листьев Boehmeria
nipononivea	1-5,5
Таурин	1-5,5
Глицерин	1-3,5
Sodium olive amhoacetate	0,5-2
Пантотенат кальция	0,1-2
Токоферолы (α, β, γ)	0,1-2
Поликватерний-16	0,02-1
Динатриевая соль ЭДТК	0,02-0,08
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,02-0,05
Спермидин HCl	0,01-0,5
Рутин	0,1-1
Метабисульфит калия	0,1-0,5
Vitis vinifera	0,01-0,05
Биотин	0,002-0,05
Лимонная кислота	0,1-0,3
Вода	q.s. до 100

Пример 23

Укрепляющий волосы лосьон с зеаксантином и рутином

Название ингредиентов INCI	%, мас./мас.
Спирт	10,5-20
Экстракт Juglans regia	1-4,5
ПЭГ-40-гидрированное касторовое масло	0,5-3
Пантотенат кальция	0,1-0,5
Отдушка	0,1-0,5
Динатриевая соль ЭДТК	0,05-0,1
Лимонная кислота	0,05-0,1
Экстракт листьев Ajuga reptans	0,05-0,1
Зеаксантин	0,01-0,5
Рутин	0,1-0,3
Биотин	0,001-0,05
Лецитин	0,002-0,005
Полисорбат 80	0,002-0,005
Изофлавоны сои	0,001-0,5
Вода	q.s. до 100

Краткое описание чертежей

Теперь описывается экспериментальное исследование действий изобретения с обращением к фигурам 1-4 с прилагаемыми диаграммами.

Фигуры показывают диаграммы относительного процентного изменения апоптозной активности каспазы-3 в присутствии активных ингредиентов по изобретению, как подробно описано ниже.

Аббревиатуры на диаграммах имеют значения, указанные далее в таблице А.

Экспериментальное исследование

Материалы и методы

Активность каспазы-3

Активность каспазы-3 оценивают с использованием колориметрического теста ApoTargetTMCaspase-3/CPP32 с DEVD-pNA в качестве субстрата (BioSource International, Camarillo, СА). DEVD-pNA состоит из хромоформной группы (п-нитроанилид (pNA)) и синтетического тетрапептида (DEVD-Asp-Glu-Val-Asp), который представляет собой консенсусную последовательность для протеолитического разрыва, катализируемого каспазой-3. Тест осуществляют, обстоятельно следуя указаниям изготовителя, с использованием равного количества общего белка (200 мкг) для каждого образца.

Каждый образец испытывают дважды. Активность оценивают, измеряя поглощение при 405 нм (на диаграммах Абс.405 нм) автоматическим спектрометром для прочтения 96-луночных планшетов (MPT Reader DV990 BVG), что осуществляют двойным прочтением для каждой лунки.

Лизис клеток

Клеточный лизис представляет собой метод, применяемый для экстракции всех белков в анализируемых культивированных клетках. Существуют различные протоколы лизиса: один, используемый в экспериментах, описанных в данном описании, состоит в использовании сильно денатурирующего буфера (буфер для лизиса, имеющийся в наборе для испытания на активность каспазы-3). После инкубации с различными активными ингредиентами буфер для лизиса помещают на клеточные пластинки, затем используют скребок прямо по слою клеток, чтобы способствовать сбору их наибольшего возможного количества. Затем используют экстракцию белка с инкубацией на льду (4°C) в течение 10 минут. Клеточный дебрис осаждают центрифугированием при 10000×g в течение 1 минуты. Лизаты возвращают и замораживают при -80°C. Анализ белка: метод Лоури-Чикальтеу

Используют спектрометр для определения концентрации белков, измеряя поглощение монохроматического света веществом. Полученная величина является функцией числа молекул, сталкивающихся со световым лучом, которое, в свою очередь, зависит от двух факторов: толщины слоя раствора, через который проходит луч (как, правило, используют кювету толщиной один сантиметр) и концентрации проверяемого вещества. Для того, чтобы осуществить определение, строят калибровочную кривую, которая передает изменение поглощения как функцию известного количества белка в стандартных условиях анализа. Точки должны, без ошибки эксперимента, лежать на линии, проходящей через начало координат. Откладывая величину поглощения неизвестного образца по оси Y стандартной кривой можно определить соответствующую концентрацию образца по оси X. Определение повторяют как для образцов, так и для стандартной кривой. Стандартную кривую строят с использованием BSA.

Спектрофотометрическое измерение поглощения осуществляют при длине волны 605 нм для продукта взаимодействия между реагентом Фолина-Чикальтеу, раствором натриевых солей вольфрамовой, молибденовой и фосфорной кислот и спиртовыми группами тирозинов белка в присутствии ионов Cu²⁺. Химической основой образования окраски является восстановление реагента Фолина-Чикальтеу, выполненное ионами меди.

Оценка антиапоптозной активности зеаксантина, рутина и спермидина: ингибирование активации фермента каспазы-3

Антиапоптозное действие активных ингредиентов по изобретению зеаксантина, рутина и спермидина исследуют на клетках HFDPC-c (PromoCell®), поддерживаемых в культуре в присутствии среды для роста фолликульных дермальных сосочков, следуя указаниям изготовителя (PromoCell®).

Активность каспазы 3 оценивают с использованием колориметрического анализа ApoTargetTMCaspase-3/CPP32, и концентрацию белка оценивают с использованием метода Лоури-Чикальтеу и стандарта BSA, как описано выше.

Результаты

В клетках HFDPC-c индукцию апоптоза, свидетельством которой является возрастание активности каспазы-3, получают путем 24-часовой инкубации клеток со стауроспорином (1 мкМ), как показано на фигуре 1.

Активность различных активных ингредиентов по изобретению оценивают, добавляя их в различных концентрациях, как указано далее в таблице А, в среду для выращивания клеток сразу же после добавления стауроспорина (1 мкМ). В данном случае инкубацию также поддерживают в течение 24 часов.

По окончании инкубации планшеты, в которых культивировали клетки, выкладывают на слой льда, промывают один раз в холодном PBS и инкубируют в буфере для лизиса. После лизиса осуществляют анализ белка и тест на активность каспазы-3.

Таблица А
Активные ингредиенты, используемые в оценочных испытаниях активности каспазы-3
Активный ингредиент	[мкМ]	[мкг/мл]
Спермидин * (С)	0,1	0,026
1	0,264
Рутин (Р)	2	1,34
20	13,42
Зеаксантин (3)	0,4	4,54
4	45,44
2	22,72
1	11,36