Пролонгированная доставка аналогов компстатина из гелей

Пролонгированная доставка аналогов компстатина из гелей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительных заявок на патент США №USSN 60/976,919 от 2 октября 2007 года, и USSN 61/026,460 от 5 февраля 2008 года. Содержание этих заявок включено в настоящую заявку посредством ссылки.

ПРЕДПОСЫЛКИ К СОЗДАНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Система комплемента включает более 30 сывороточных и клеточных белков, вовлеченных в три больших сигнальных пути, известных как классический, альтернативный и пектиновый путь. Классический путь, как правило, запускается при связывании комплекса антигена и антитела IgM или IgG с С1 (хотя и другие определенные активаторы могут инициировать этот каскад). Активированный С1 расщепляет С4 и С2 с образованием С4а и C4b, а также С2а и C2b. C4b и С2а объединяются с образованием С3-конвертазы, которая расщепляет С3 с образованием С3а и C3b. Связывание С3b с С3-конвертазой приводит к образованию С5-конвертазы, которая расщепляет С5 на С5а и C5b. С3а, С4а и С5а являются анафилатоксинами и опосредуют различные реакции при остром воспалительном ответе. С3а и С5а также являются хемотаксическими факторами, которые привлекают клетки иммунной системы, такие как нейтрофилы.

[0003] Активацию альтернативного пути инициируют поверхности бактериальных клеток и различные сложные полисахариды. В этом каскаде C3b, образующийся при расщеплении С3, которое происходит самопроизвольно на низком уровне, связывается с мишенями, например, с поверхностями клеток, и формирует комплекс с фактором В, который позднее расщепляется фактором D, образуя С3-конвертазу. Расщепление С3 и связывание другой молекулы C3b с С3-конвертазой приводит к образованию С5-конвертазы. Активность С3- и С5-конвертаз этого пути регулируется белками CR1, DAF, МСР и fH. Действие этих белков связано либо с их способностью усиливать активность распада (т.е., способностью расщеплять конвертазы), либо со способностью служить кофакторами фактора I при расщеплении C3b или C4b, либо и с тем, и с другим.

[0004] С5-конвертазы, которые образуются в ходе обоих путей, расщепляют С5 с образованием С5а и C5b. C5b затем связывается с С6, С7 и С8 с образованием C5b-8, который является катализатором полимеризации С9, ведущей к образованию C5b-9 мембран-атакующего комплекса (MAC). MAC сам встраивается в мембраны клеток-мишеней и провоцирует лизис клетки. Присутствие малых количеств MAC на клеточной мембране может повлечь за собой ряд событий, отличных от гибели клетки.

[0005] Лектиновый путь комплемента инициируется связыванием манноза-связывающего лектина (MBL) и MBL-ассоциированной сериновой протеазы (MASP) с углеводами. Ген MBL-1 (у человека известный как LMAN-1) кодирует интегральный мембранный белок I типа, локализованный в промежуточной области между эндоплазматическим ретикулумом и аппаратом Гольджи. Ген MBL-2 кодирует растворимый манноза-связывающий белок, обнаруженный в сыворотке. У человека в пектиновом каскаде MASP-1 и MASP-2 вовлечены в протеолиз С4 и С2, ведущий к образованию С3-конвертазы, описанной выше.

[0006] Активность системы комплемента у млекопитающих регулируется различными белками, которые относятся к белкам контроля комплемента (ССР) или белкам-регуляторам активации комплемента (RCA) (Патент США №6,897,290). Эти белки различаются по своей специфичности к лиганду и механизмам подавления комплемента. Они могут ускорять нормальный распад конвертаз и/или действовать как кофакторы для фактора I при ферментативном расщеплении C3b и/или C4b на более мелкие фрагменты. ССР характеризуются наличием нескольких (обычно 4-56) гомологичных мотивов, которые называются короткими консенсусными повторами (SCR), модулями белка контроля комплемента (ССР) или SUSHI доменами. Для этих доменов, состоящих приблизительно из 50-70 аминокислот, как правило, приблизительно из 60 аминокислот, характерно наличие консервативного мотива, который включает четыре цистеина, связанных дисульфидными связями (две дисульфидные связи), пролин, триптофан и много гидрофобных остатков. Семейство белков ССР включает рецептор комплемента 1 типа (CR1; C3b:C4b рецептор), рецептор комплемента 2 типа (CR2), мембранный кофакторный белок (МСР; CD46), фактор, ускоряющий распад (DAF-фактор), фактор комплемента Н (fH) и C4b-связывающий белок (C4bp). CD59 - это связанный с мембраной регулятор комплемента, структурно не относящийся к ССР.

[0007] Более полную информацию относительно системы комплемента и путей ее активации можно найти в следующих ссылках: Makrides, SC, Pharm Rev., 50(1): 59-87, 1998;

Lisczewski, MK and Atkinson, JP, The Human Complement System in Health and Disease, Volanakis, JE and Frank, MM, eds., Dekker, New York, pp.149-66, 1998; Kuby Immunology, 2000; Paul, W.E., Fundamental Immunology, Lippincott Williams & Wilkins; 5^th ed., 2003; and Walport MJ., Complement. First of two parts. N Engi J Med., 344(14): 1058-66, 2001.

[0008] Наряду с тем, что активация системы комплемента играет важную роль в реакциях врожденного и приобретенного иммунитета, все больше данных указывает на то, что система комплемента вовлечена в процессы повреждения тканей при различных ишемических, воспалительных и аутоиммунных заболеваниях (Makrides, SC, Pharm Rev., 50(1): 59-87, 1998; Lisczewski, MK and Atkinson, JP, in The Human Complement System in Health and Disease, Volanakis, JE and Frank, MM, eds., Dekker, New York, pp.149-66, 1998). Подавление системы комплемента было предложено в качестве терапевтической стратегии при многих подобных заболеваниях. Компстатин и его аналоги являются циклическими пептидами, которые связываются с СЗ и ингибируют его активацию. В данной области существует необходимость в создании новых составов и способов введения аналогов компстатина. Также существует необходимость в создании усовершенствованной системы доставки лекарств.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0009] Настоящее изобретение предлагает новые составы и способы введения аналогов компстатина с пролонгированным высвобождением в организм млекопитающих. В одном из аспектов изобретения предлагается жидкий состав, содержащий аналог компстатина в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры при введении его во внесосудистое пространство в теле млекопитающего. В некоторых вариантах реализации изобретения внесосудистое пространство представляет собой стекловидную камеру глазного яблока. В других вариантах реализации внесосудистое пространство представляет собой субконъюнктивальное пространство. В некоторых вариантах реализации внесосудистое пространство представляет собой ретробульбарное, субконъюнктивальное, субтеноново или субретинальное пространство. В некоторых вариантах реализации изобретения аналог компстатина имеет активность по меньшей мере в 100 раз большую активности компстатина. В некоторых вариантах осуществления изобретения аналог компстатина имеет активность по меньшей мере в 150 раз большую активности компстатина. В некоторых вариантах реализации изобретения аналог компстатина имеет активность по меньшей мере в 200 раз большую активности компстатина. В некоторых вариантах реализации изобретения аналог компстатина имеет активность по меньшей мере в 250 раз большую активности компстатина. В некоторых вариантах реализации любого способа согласно изобретению, включающего этап введения состава субъекту, субъектом является обезьяна. В некоторых вариантах реализации любого способа согласно изобретению, включающего этап введения состава субъекту, субъектом является человек.

[0010] В некоторых вариантах реализации изобретения жидкий состав включает аналог компстатина и второй активный агент в дополнение к аналогу компстатина. Второй активный агент может представялть собой полипептид, пептид, непептидное низкомолекулярное вещество, нуклеиновую кислоту и т.д. В некоторых вариантах реализации второй активный агент представляет собой ингибитор комплемента. В некоторых вариантах реализации второй активный агент представляет собой ингибитор ангиогенеза.

[0011] Изобретение дополнительно предлагает способ лечения комплемент-опосредованных заболеваний у млекопитающих, включающий введение субъекту какого-либо из вышеперечисленных жидких составов. В одном аспекте изобретения предлагается способ лечения комплемент-опосредованных заболеваний, включающий этап введения жидкого состава, который содержит эффективное количество аналога компстатина, во внесосудистое пространство в теле субъекта, где указанное эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, содержащей аналог компстатина, в указанном внесосудистом пространстве. В некоторых вариантах реализации изобретения указанное эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и становится фактически не обнаруживаемой по меньшей мере в течение 2 недель. В некоторых вариантах реализации макроскопическая гелеподобная структура со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме с достижением терапевтической концентрации во внесосудистом пространстве по меньшей мере в течение 2 недель, по меньшей мере в течение 4 недель, по меньшей мере в течение 2 месяцев, по меньшей мере в течение 3 месяцев, по меньшей мере в течение 6 месяцев, 9 месяцев или 12 месяцев. В некоторых вариантах макроскопические гелеподобные структуры остаются легко обнаруживаемыми, например, по меньшей мере в течение 2 недель, по меньшей мере в течение 4 недель, по меньшей мере в течение 2 месяцев, по меньшей мере в течение 3 месяцев, по меньшей мере в течение 6 месяцев, 9 месяцев или 12 месяцев, вплоть до 18 или 24 месяцев. Аналог компстатина в «активной форме» сохраняет способность связываться с С3 и ингибировать его расщепление.

[0012] В некоторых вариантах реализации изобретения состав вводится в полость стекловидного камеру глазного яблока субъекта, находящегося в группе риска или страдающего возрастной дегенерацией желтого пятна (ВДЖП). В некоторых вариантах реализации субъект находится в группе риска или страдает атрофической ВДЖП. В некоторых вариантах реализации субъект находится в группе риска или страдает диабетической ретинопатией, увеитом, глаукомой или пигментной дегенерацией сетчатки.

[0013] В некоторых вариантах реализации изобретения состав вводится в интратекальную полость в теле субъекта. Субъект может страдать от повреждения спинного мозга или хронических болей.

[0014] В некоторых вариантах реализации состав вводится в полость черепа субъекта, например, в желудочек мозга. Субъект может страдать различными склерозами, болезнью Паркинсона, болезнью Альцгеймера, или от инсульта.

[0015] В некоторых вариантах реализации состав вводится в синовиальную полость или синовиальную сумку субъекта. Субъект может страдать артритом, например, ревматоидным артритом, псориазным артритом, синдромом Рейтера, ювенильным артритом или подагрой. [0016] В одном из аспектов изобретения также предлагаются способы получения составов согласно изобретению.

[0017] Некоторые из аспектов изобретения предлагают способ лечения комплемент-опосредованных заболеваний, включающий этап введения жидкого состава, содержащего эффективное количество аналога компстатина, во внесосудистое пространство субъекта, где эффективное количество является достаточным для формирования дискретной макроскопической гелеподобной структуры, содержащей аналог компстатина в указанном внесосудистом пространстве. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и остается легко обнаруживаемой по меньшей мере в течение 2 недель. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме по меньшей мере в течение 2 недель. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и остается легко обнаруживаемой по меньшей мере в течение 3 месяцев. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме по меньшей мере в течение 3 месяцев. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме с достижением терапевтической концентрации указанного аналога компстатина во внесосудистом пространстве или прилежащей ткани по меньшей мере в течение 2 недель. В некоторых вариантах реализации изобретения эффективное количество является достаточным для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме с достижением терапевтической концентрации указанного аналога компстатина во внесосудистом пространстве или прилежащей ткани по меньшей мере в течение 3 месяцев. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина включает пептид, последовательность которого включает последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 и 7. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина имеет по меньшей мере в 100 раз большую активность, чем активность последовательности SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина имеет по меньшей мере в 200 раз большую активность, чем активность последовательности SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 и 36. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина имеет последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 28, 32 и 34. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина представляет собой пептид последовательности SEQ ID NO: 14. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина представляет собой пептид последовательности SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина представляет собой пептид последовательности SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина представляет собой пептид поеследовательности SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина представляет собой пептид последовательности SEQ ID NO: 34. В некоторых вариантах реализации концентрация указанного аналога компстатина в жидком составе находится в пределах от 1 мг/мл до 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация указанного аналога компстатина в жидком составе находится в пределах от 2 мг/мл до 25 мг/мл. В некоторых вариантах реализации в стекловидную камеру глазног яблока вводят от 50 мкг до 5000 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации в стекловидную камеру глазного яблока вводят от 400 мкг до 1500 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации в стекловидную камеру глазного яблока вводят примерно 450 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации в стекловидную камеру глазного яблока вводят примерно 1050 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации в стекловидную камеру глазного яблока вводят аналог компстатина в объеме от 25 мкл до 125 мкл. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина вводят в стекловидную камеру глазного яблока в объеме примерно 50 мкл. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина вводят в стекловидную камеру глазного яблока в объеме примерно 75 мкл. В некоторых вариантах реализации субъект страдает возрастной дегенерацией желтого пятна, и жидкий состав вводится в стекловидную камеру глазного яблока. В некоторых вариантах реализации жидкий состав содержит эффективное количество второго терапевтического агента. В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой ингибитор комплемента, ингибитор ангиогенеза, стероид, противовоспалительный агент, противоинфекционный агент или анальгетик. В некоторых вариантах реализации состав вводится путем инъекции в стекловидное тело. В некоторых вариантах реализации состав содержит множество микрочастиц и наночастиц. Микрочастицы и наночастицы могут содержать терапевтический агент, который может являться, но не обязательно, аналогом компстатина; и в случае, если терапевтический агент представляет собой аналог компстатина, он может представлять собой тот же, но не обязательно, аналог компстатина, который формирует гель. В некоторых вариантах реализации по меньшей мере некоторые из микрочастиц или наночастиц включаются в гель после введения состава.

[0018] Изобретение предлагает гелеподобную структуру, содержащую аналог компстатина и по меньшей мере один эндогенный полипептид, в норме присутствующий во внесосудистом пространстве субъекта. В некоторых вариантах реализации изобретения полипептид представляет собой полипептид, присутствующий во внесосудистом пространстве, выбранном из следующей группы: стекловидная камера глазного яблока, субконъюнктивальное пространство, теноново пространство, субретинальное пространство, синовиальная полость и цереброспинальная полость.

[0019] Изобретение предлагает жидкий состав, содержащий аналог компстатина, отличающийся тем, что указанный состав характеризуется способностью формировать макроскопическую гелеподобную структуру при введении его в стекловидную камеру глазного яблока субъекта-млекопитающего. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования дискретной макроскопической гелеподобной структуры при введении его в стекловидную камеру глазного яблока субъекта путем инъекции, например, в стекловидное тело, в объеме примерно от 50 мкл до 100 мкл. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и остается легко обнаруживаемой по меньшей мере в течение 2 недель. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме по меньшей мере в течение 2 недель. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и остается легко обнаруживаемой по меньшей мере в течение 3 месяцев. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме по меньшей мере в течение 3 месяцев. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и остается легко обнаруживаемой по меньшей мере в течение 6 месяцев. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме по меньшей мере в течение 6 месяцев. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме с достижением терапевтической концентрации указанного аналога компстатина в стекловидной камере глазного яблока или прилежащей ткани по меньшей мере за 2 недели. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина присутствует в количестве, достаточном для формирования макроскопической гелеподобной структуры, которая со временем уменьшается в размере и высвобождает аналог компстатина в активной форме с достижением терапевтической концентрации указанного аналога компстатина в стекловидной камере глазного яблока или прилежащей ткани по меньшей мере за 3 месяца. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина содержит пептид, последовательность которого включает последовательность, выбранную из следующей группы последовательностей: SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 и 7. В некоторых вариантах реализации активность аналога компстатина превышает активность последовательности SEQ ID NO: 8 по меньшей мере в 100 раз. В некоторых вариантах реализации активность аналога компстатина превышает активность последовательности SEQ ID NO: 8 по меньшей мере в 200 раз. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 и 36. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 28, 32 и 34. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает SEQ ID NO: 28. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает SEQ ID NO: 32. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает SEQ ID N0: 34. В некоторых вариантах реализации количество указанного аналога компстатина в жидком составе находится в пределах от 1 мг/мл до 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации количество указанного аналога компстатина в жидком составе находится в пределах от 3 мг/мл до 25 мг/мл. В некоторых вариантах реализации состав содержит от 150 мкг до 5000 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации состав содержит от 250 мкг до 2000 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации состав содержит от 400 мкг до 1500 мкг аналога компстатина. В некоторых вариантах реализации состав имеет объем от 25 мкл до 125 мкл. В некоторых вариантах реализации состав содержит от 150 мкг до 2000 мкг аналога компстатина в объеме от 50 мкл до 100 мкл. В некоторых вариантах реализации состав состоит по существу из аналога компстатина в воде. В некоторых вариантах реализации состав по существу не содержит вспомогательных веществ. В некоторых вариантах реализации состав включает компонент, выбранный из следующей группы: сахарные спирты и аминокислоты. В некоторых вариантах реализации присутствие указанного компонента модулирует скорость исчезновения включения в условиях in vivo. В некоторых вариантах реализации состав содержит гистидин. В некоторых вариантах реализации состав содержит буфер. В некоторых вариантах реализации состав содержит ацетат натрия. В некоторых вариантах реализации состав содержит маннит. В некоторых вариантах реализации жидкий состав дополнительно содержит эффективное количество второго терапевтического агента. В некоторых вариантах реализации второй терапевтический агент представляет собой ингибитор комплемента, ингибитор ангиогенеза, стероид, противовоспалительный агент, противоинфекцйонный агент или анальгетик.

[0020] Изобретение также предлагает способ получения состава для пролонгированной доставки терапевтического агента, включающий приготовление жидкого состава, содержащего терапевтический агент и аналог компстатина, где аналог компстатина присутствует в достаточном количестве для формирования макроскопической гелеподобной структуры при введении состава во внесосудистое пространство субъекта-млекопитающего. В некоторых вариантах реализации способ дополнительно включает введение жидкого состава во внесосудистое пространство в теле млекопитающего. В некоторых вариантах реализации внесосудистое пространство представляет собой стекловидную камеру. В некоторых вариантах реализации внесосудистое пространство представляет собой стекловидную камеру, при этом субъект страдает ВДЖП.

[0021] Некоторые аспекты изобретения предлагают способ лечения субъектов, находящихся в группе риска или страдающих ВДЖП, включающий введение жидкого состава, содержащего аналог компстатина, непосредственно в стекловидную камеру глазного яблока субъекта, где жидкий состав содержит достаточное количество аналога компстатина для формирования макроскопической гелеподобной структуры после введения. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина содержит пептид, последовательность которого включает последовательность из следующей группы: SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 и 7. В некоторых вариантах реализации активность аналога компстатина превышает активность последовательности SEQ ID NO: 8 по меньшей мере в 100 раз. В некоторых вариантах реализации аналог компстатина имеет активность по меньшей мере в 200 раз превышающую активность SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 и 36. В некоторых вариантах реализации последовательность аналога компстатина включает последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 28, 32 и 34. В некоторых вариантах реализации количество аналога компстатина находится в пределах от 2 мг/мл до 20 мг/мл. В некоторых вариантах реализации от 100 мкг до 2000 мкг аналога компстатина вводится в глаз. В некоторых вариантах реализации от 250 мкг до 1500 мкг аналога компстатина вводится в глаз. В некоторых вариантах реализации от 400 мкг до 1200 мкг аналога компстатина вводится в глаз. В некоторых вариантах реализации жидкий состав дополнительно содержит ингибитор ангиогенеза.

[0022] Изобретение предлагает жидкий состав, содержащий аналог компстатина и воду, где концентрация аналога компстатина находится в пределах от 3 до 50 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация аналога компстатина находится в пределах от 5 до 30 мг/мл. В некоторых вариантах реализации концентрация аналога компстатина находится в пределах от 8 до 25 мг/мл. В некоторых вариантах реализации любого из этих составов аналог компстатина содержит пептид, выбранный из группы, включающей последовательности: SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 и 7. В некоторых вариантах реализации любого из этих составов активность аналога компстатина превышает активность SEQ ID NO: 8 по меньшей мере в 100 раз. В некоторых вариантах реализации любого из этих составов активность аналога компстатина превышает активность SEQ ID NO: 8 по меньшей мере в 200 раз. В некоторых вариантах реализации любого из этих составов последовательность аналога компстатина включает последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 14, 21, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 и 36. В некоторых вариантах реализации любого из этих составов последовательность аналога компстатина включает последовательность, выбранную из последовательностей SEQ ID NO: 28, 32 и 34. В некоторых вариантах реализации любого из этих составов состав по существу состоит из аналога компстатина и воды. В некоторых вариантах реализации любого из этих составе состав дополнительно содержит вспомогательное вещество, выбранное из аминокислот и сахарных спиртов. Изобретение предлагает жидкий состав, содержащий аналог компстатина и воду, где концентрация аналога компстатина находится в пределах от 100 до 2000 мг/мл, например, от 100 мг/мл до 1000 мг/мл или от 100 до 500 мг/мл, где состав содержит компонент, который меняет свойства состава таким образом, что гель, сформированный при введении состава во внесосудистое пространство (например, стекловидную камеру глазного яблока), разлагается или распадается быстрее, чем в случае отсутствия компонента. В некоторых вариантах реализации компонент представляет собой вспомогательное вещество, выбранное из сахарного спирта и аминокислоты. В некоторых вариантах реализации аминокислота представляет собой стандартную аминокислоту, например, гистидин. В некоторых вариантах реализации сахарный спирт представляет собой маннит. В некоторых вариантах реализации компонент представляет собой буфер, например, ацетат натрия.

[0023] Если иное не указано, в настоящем изобретении применяются стандартные способы молекулярной биологии, химии, культивирования клеток, содержания животных, проведения медицинских и ветеринарных анализов и т.д., и используются принятые в соответствующей области значения терминов. Эта заявка содержит ссылки на различные патенты и публикации. Список всех научных статей, книг, патентов, заявок на патенты и других публикаций, указанных в настоящей заявке, включены в данную заявку посредством ссылок: Current Protocols in Molecular Biology, Current Protocols in Immunology, Current Protocols in Protein Science, Current Protocols in Cell Biology, John Wiley & Sons, N.Y., edition as of July 2002; Sambrook, Russell, and Sambrook, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3^rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, 2001; Kuby Immunology, 4^th ed., Goldsby, R.A., Kindt, T.J., and Osbome, B. (eds.), W.H. Freeman, 2000, Goodman and Oilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 10^th Ed., McGraw Hill, 2001, Katzung, B. (ed.) Basic and Clinical Pharmacology, McGraw-Hill/Appleton & Lange; 9th edition (December 2003); Goldman & Ausiello, Cecil Textbook of Medicine, 22^nd ed., W.B. Saunders, 2003. В случае противоречия или несоответствия между любыми включенными ссылками и настоящим изобретением, описание настоящего изобретения (включая любые дополнения) имеет преимущественную силу. В настоящей заявке используются общепринятые аббревиатуры для аминокислот, если иное особо не указано.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

[0024] На Фигуре 1 показана макроскопическая гелеподобная структура, выделенная из стекловидного тела кролика, которому был введен активный аналог компстатина путем инъекции в стекловидное тело.

[0025] На Фигуре 2 показаны результаты ультразвукового сканирования животных через 12 дней (слева) и 8 недель (справа) после инъекции активного аналога компстатина. Через 12 дней после инъекции наблюдается крупное включение, и намного меньшее, но все еще обнаруживаемое включение наблюдается через 8 недель.

[0026] На Фигуре 3 показаны белки, входящие в состав включения наряду с активным аналогом компстатина, выявленные при окраске геля после SDS-электрофореза. Также показаны белки, обнаруженные в стекловидном теле после введения аналога компстатина, или же без его введения.

[0027] На Фигуре 4 представлен график, показывающий, что аналог компстатина, присутствующий во включении, остается стабильным и сохраняет ингибирующую комплемент активность с течением времени. Синие области - аналог компстатина (стандарт); зеленые области - аналог компстатина, полученный из геля, извлеченного из стекловидного тела кролика через 6 недель после инъекции; коричневые пятна - аналог компстатина, полученный из геля, извлеченного из стекловидного тела кролика через 8 месяцев после инъекции; красные овалы: неактивный контрольный пептид G8A.

[0028] На Фигуре 5 представлен график, показывающий результат измерений концентрации аналога компстатина в сыворотке и стекловидных телах яванских макак через 14 дней после введения в стекловидное тело 0, 450, 1050 или 2100 мкг состава. Все оценки представлены как среднее значение ± стандартная ошибка; n=4 для каждого стекловидного тела, и n=8 для сыворотки. Следует отметить, что реальные величины для концентрации в сыворотке в 100 раз ниже, чем показано на графике, т.е. каждое значение концентрации в сыворотке примерно в 100 раз ниже, чем соответствующая концентрация в стекловидном теле при той же дозе введения.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

[0029] Прежде чем перейти к подробному описанию изобретения, необходимо уточнить, что настоящее изобретение не ограничивается конкретными примерами систем или параметров, которые, безусловно, могут различаться. Также необходимо понимать, что использование в данной заявке терминологии предназначено только для описания особых вариантов реализации изобретения, и никоим образом не направлено на ограничение объема изобретения. Нижеследующие определения представлены для удобства читателя, и их использование не противоречит использованию таких терминов в соответствующей области, если только иное особо не указано.

[0030] Термины «ингибитор ангиогенеза» и «антиангиогенный агент» являются взаимозаменяемыми и используются в данной заявке для описания агентов, которые способны подавлять или замедлять один или более связанных с формированием, ростом и/или развитием новых кровеносных сосудов процессов, которые включают пролиферацию эндотелиальных клеток, миграцию эндотелиальных клеток, формирование капилляров, но не ограничиваются ими. Кроме того, такие агенты могут ингибировать экссудацию жидкости из кровеносных сосудов.

[0031] Термин «антагонист» относится к соединению, которое ингибирует (противодействует, ослабляет, понижает, блокирует или отменяет) эффект конкретной молекулы. Антагонист способен действовать некоторым образом на определенную активность молекулы так, что биологическая активность молекулы снижается или блокируется по принципу антагонизма (например, противодействия, конкурентного или обратного действия) по отношению к одному или более природным действиям молекулы. Неограничивающими примерами антагонистов являются антитела или их антиген-связывающие фрагменты, белки, пептиды, нуклеиновые кислоты (такие как посредники РНКи, рибозимы, антисмысловые последовательности), или малые молекулы.

[0032] Термин «антитело» подразумевает иммуноглобулин или его производное, содержащее иммуноглобулиновый домен, способный связываться с антигеном. Антитела могут быть любого происхождения, например, человеческие, мышиные, кроличьи, козлиные, куриные и т.д. Антитело может являться представителем какого-либо класса иммуноглобулинов, включая любой из классов человеческих иммуноглобулинов: IgG, IgM, IgA, IgD и IgE, или их подклассов, таких как IgGI, IgG2 и т.д. В различных вариантах реализации изобретения антителом является фрагмент, такой как Fab', F(ab')₂, scFv (вариабельный одноцепочечный) или другой фрагмент, сохраняющий сайт связывания антигена, или же scFv фрагмент, полученный путем рекомбинации, как пример полученных путем рекомбинации фрагментов. См., например, Alien, Т., Nature Reviews Cancer, Vol.2, 750-765, 2002 и включенные ссылки. Антитело может быть моновалентным, бивалентным или мультивалентным. Антитело может быть химерным или «гуманизированным» антителом, в котором, например, вариабельная область грызуна прививается к константной области человеческого происхождения, при этом сохраняется специфичность антитела грызуна. Область человеческого происхождения не обязательно должна быть получена от человека, т.е. быть впервые синтезированной в организме человека. Вместо этого, «человеческие» области могут быть синтезированы в теле грызуна, чей геном включает гены человеческих иммуноглобулинов. См., например, Vaughan, et al., (1998), Nature Biotechnology, 16: 535-539. Антитело может быть частично или полностью гуманизировано. Антитело может быть поликлональным или моноклональным, хотя для целей настоящего изобретения моноклональные антитела в целом предпочтительнее. Способы получения антител, которые специфически связываются фактически с любой интересующей молекулой, известны в данной области. Например, моноклональные или поликлональные антитела могут быть выделены из крови или асцитической жидкости животного, которое продуцирует антитело (например, после естественного воздействия или иммунизации молекулой или ее антигенным фрагментом), могут быть получены при использовании рекомбинантных технологий в культуре клеток или с помощью трансгенных организмов, или могут быть созданы хотя бы частично путем химического синтеза.

[0033] Термины «приблизительно» или «примерно» в отношении числовых значений, как правило, подразумевают числа, которые находятся в пределах ±10%, в некоторых вариантах ±5%, в некоторых вариантах ±1%, в некоторых вариантах ±0,5% от числа, если иное не указано или не следует из контекста (за исключением тех случаев, когда такое число превосходит 100% от возможной величины).

[0034] Термин «биосовместимый» используется в соответствии с его употреблением в данной области и относится к веществу, которое по существу не токсично для клеток in vitro; например, в некоторых вариантах реализации, если его добавление к клеткам в культуре в количествах, приближенных к концентрации, предусмотренной для использования in vivo, приводит к гибели не больше, чем 20% клеток. Вещество считается биосовместимым для реципиента в том случае, если оно по существу не токсично для клеток и тканей рец