Иммунологическая композиция

Иммунологическая композиция

Реферат

Перекрестная ссылка на родственные заявки

В этой заявке заявлен приоритет в соответствии с 35 U.S.С. §119 (a) предварительной заявки Австралии №2008904261, поданной 19 августа 2008 г., и в соответствии с 35 U.S.С. §119 (e) предварительной заявки США №61/092091, поданной 27 августа 2008 г. Полное содержание этих заявок включено в данную заявку посредством ссылки.

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к иммунологическим композициям, содержащим сульфолипо-циклодекстрин (SL-CD) и сапонин или Quil А и возможно по меньшей мере один антиген. Изобретение также относится к способам получения иммунологических композиций, содержащих SL-CD, сапонин или Quil А, и антиген. В настоящем изобретении также предложены способы применения иммуногенных композиций для индукции иммунного ответа на вирус эфемерной лихорадки крупного рогатого скота (BEFV), на герпесвирус 1 крупного рогатого скота (IBR) или вирус катаральной лихорадки овец (BTV). В настоящем изобретении предложены наборы, включающие иммунологическую композицию по изобретению.

Предшествующий уровень изобретения

Сапониновые адъюванты представляют собой известный класс адъювантов, которые были использованы в коммерческих вакцинах для животных. Сапонины представляют собой класс вторичных метаболитов, обнаруженных в различных видах растений. Они представляют собой амфипатические гликозиды, феноменологически сгруппированные по образованию мылоподобной пены, которую они производят при встряхивании в водных растворах. Структурно сапонины состоят из одной или более гидрофильных гликозидных группировок, объединенных с липофильным тритерпеновым производным. Коммерческие сапонины в основном выделяют из коры южноамериканского дерева Quillaja Saponaria Molina и растения Mohave Yucca, которое также называют Yucca schidigera. Сапонины доступны из нескольких источников, включая Berghausen Corporation (Cincinnati, ОН). Очищенная форма сапонина обычно называется Quil А и имеется в продаже из нескольких источников, включая Berghausen Corporation, Sergeant Chemical Company (Clifton, NJ), Superfos a/s (Vedbaek, Denmark) и Brenntag Biosector (Frederikssund, Denmark). Физические и химические характеристики Quil А изложены в доступном проспекте фирмы Superfos, озаглавленном "Очищенный сапониновый адъювант Quil-A". Quil-A характеризуется химически как углеводная группировка в гликозидной связи с тритерпеновой квилаевой (quillaic) кислотой.

Было опубликовано несколько патентов США, в которых обсуждался Quil А в качестве адъюванта. Например, патенты США №№6,416,764 и 6,291,228 относятся к вакцинам с использованием Quil А в качестве адъюванта и содержащим нецитопатогенный штамм вируса бычьей вирусной диареи. Патент США №4,432,969 относится к ингаляционной аллергенной композиции, содержащей ингаляционный аллерген и сапонин или адъювант Quil А.

В патенте США №4,900,549 описан способ получения иммуногенных комплексов, содержащих Quil А.

Патент США №6,165,995 относится к получению производных SL-CD. Патент США №6,610,310 относится к полиионным полимерам, таким как SL-CD, в качестве адъювантов.

Эфемерная лихорадка крупного рогатого скота (BEF) представляет собой истощающее вирусное заболевание, влияющее как на молочный, так на и мясной скот, особенно в северной Австралии. BEF также выявлен в большинстве азиатских стран, где крупный рогатый скот выращивается в промышленных масштабах. BEF известна как "трехдневная болезнь" и может значительно повлиять на молочную продуктивность или вызвать заболеваемость мясного и молочного скота (Walker, P.J., 2005, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 292: 57-80).

Возбудителем BEF является вирус эфемерной лихорадки крупного рогатого скота (BEFV). Этот вирус представляет собой рабдовирус, который был отнесен к роду Ephemerovirus. Вирион BEFV имеет палочковидную или коническую форму и содержит отрицательный однонитевой РНК-геном. Геном BEFV кодирует нуклеопротеин, связанный с полимеразой белок, матриксный белок, большую РНК-зависимую РНК-полимеразу и два гликопротеина.

Модифицированная живая BEF-вакцина была доступна в Австралии в течение многих лет и дается с помощью ежегодной бустерной иммунизации перед сезоном BEF. Эта вакцина требует ветеринарного рецепта и представлена в лиофилизированной форме, требующей растворения перед введением разбавителем, содержащим адъювант.Не подвергнутые иммунизации животные требовали двух доз вакцины с последующей ежегодной ревакцинацией.

Публикация РСТ №WO/1994004685 относится к получению вакцины против BEFV, содержащей поверхностный гликопротеин BEFV.

Vanselow с соавт.(1995, Vet. Microbiol. 46:117-130) описывает испытание различных BEF вакцин.

Hsieh с соавт.(2006, J. Vet. Med. Sci. 68: 543-548) касается BEFV вакцин с использованем вирусных штаммов Тn88128 и Тn73. Эти вакцины получали путем инактивации вируса в результате добавления бинарного этиленимина и гидрата окиси алюминия или адъювантов типа вода:масло:вода.

Рекомбинантная вакцина, содержащая структурный гликопротеин BEFV, клонированный в вектор на основе вируса нодулярного дерматита крупного рогатого скота (тип SA-Neethling), был описана у Wallace D.B. и Viljoen G.J. (2005, Vaccine 23:3061-3067).

Chuang с соавт.(2007, J. Virol. Meth. 145:84-87) касается применения РНК интерференции и супрессии экспрессии гена поверхностного гликопротеина BEFV.

Герпесвирус-1 крупного рогатого скота также известен как инфекционный вирус ринотрахеита крупного рогатого скота. Его можно найти в виде аббревиатуры BHV или IBR. Герпесвирус-1 крупного рогатого скота представляет собой вирус семейства Herpesviridae, который вызывает заболевания у крупного рогатого скота, включая ринотрахеит, вагинит, баланопостит, аборт, конъюктивит и энтерит. BHV-1 также является фактором, способствующим возникновению "корабельной" лихорадки (shipping fever). Он передается половым путем, при искусственном осеменении и аэрозольным путем. Подобно другим герпесвирусам, BHV-1 вызывает пожизненную латентную инфекцию и вирусоносительство. Существует доступная вакцина, которая уменьшает тяжесть и распространенность заболевания. Респираторное заболевание, вызываемое BHV-1, широко известно как инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота.

Вирус катаральной лихорадки овец (BTV) представляет собой прототипный вирус рода Orbivirus, который принадлежит к семейству Reoviridae с двухцепочечной РНК. BTV вызывает серьезные заболевания у домашнего скота, такого как овцы, козы, крупный рогатый скот и олени. В литературе сообщается о 24 серотипах, являющихся причиной расстройств, варьирующих от невыраженной инфекции до острой прогрессирующей инфекции. Также исследовали крупный рогатый скот, выделяющий хронический, персистирующий вирус. Вакцины являются доступными для лечения катаральной лихорадки у домашнего скота.

Краткое изложение сущности изобретения

В настоящем описании предложены иммунологические композиции, содержащие сульфолипо-циклодекстрин (SL-CD) и сапонин и возможно по меньшей один антиген. В некоторых воплощениях изобретения сапонин представляет собой Quil А. В некоторых воплощениях изобретения по меньшей мере один антиген выбран из бактерий, вирусов, пептидов, полипептидов, нуклеиновых кислот или их комбинации. В некоторых воплощениях изобретения по меньшей мере один антиген является ветеринарным антигеном. В некоторых воплощениях изобретения ветеринарный антиген представляет собой антиген крупного рогатого скота. В некоторых воплощениях изобретения антиген представляет собой вирусный антиген. В некоторых воплощениях изобретения вирусный антиген представляет собой герпесвирус 1 крупного рогатого скота (IBR), вирус катаральной лихорадки овец (BTV) или вирус эфемерной лихорадки крупного рогатого скота (BEFV). Вирусный антиген может быть живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях изобретения предложена иммуногенная композиция, где антиген представляет собой живой-ослабленный вирус. В некоторых воплощениях изобретения вирус представляет собой вирус эфемерной лихорадки крупного рогатого скота (BEFV). В различных воплощениях изобретения вирус происходит из замороженного концентрата, высушенного концентрата, лиофилизированного концентрата или свежего концентрата. В различных воплощениях сапонин присутствует в иммунологической композиции по изобретению в конечной концентрации примерно 0,5 мг/мл. В различных воплощениях Quil А присутствует в иммунологической композиции по изобретению в конечной концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 0,2 мг/мл. В некоторых воплощениях Quil А присутствует в иммунологической композиции по изобретению в конечной концентрации примерно 0,158 мг/мл. В различных воплощениях в иммунологической композиции по изобретению SL-CD присутствует в конечной концентрации примерно 0,2 мл/мл. В некоторых воплощениях иммунологическая композиция по изобретению, содержащая сапонин и SL-CD или содержащая Quil А и SL-CD, содержит по меньшей мере один дополнительный адъювант. В различных воплощениях изобретения дополнительный адъювант выбран из гидрата окиси алюминия, SP-масла или карбопола. В некоторых воплощениях изобретения антиген представляет собой полипептид, который в некоторых воплощениях является вирусной субъединицой. В некоторых воплощениях изобретения вирусная субъединица выбрана из BEFV, IBR или BTV.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ индукции иммунного ответа против ветеринарного антигена у животного, включающий введение указанному животному иммуногенной композиции, содержащей сапонин, SL-CD и по меньшей мере один ветеринарный антиген. В одном воплощении иммунный ответ индуцируется после введения одной дозы иммуногенной композиции. В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ индукции иммунного ответа против IBR у животного, включающий введение указанному животному иммуногенной композиции, содержащей сапонин, SL-CD и по меньшей мере IBR в качестве антигена. В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ индукции иммунного ответа против BTV у животного, включающий введение указанному животному иммуногенной композиции, содержащей сапонин, SL-CD и по меньшей мере BTV в качестве антигена.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ индукции иммунного ответа против BEFV у животного, включающий введение указанному животному иммуногенной композиции, содержащей Quil A, SL-CD и антиген. В одном воплощении иммунный ответ индуцируется после введения одной дозы иммуногенной композиции. В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ индукции иммунного ответа против IBR у животного, включающий введение указанному животному иммуногенной композиции, содержащей сапонин, SL-CD и антиген. В одном воплощении в настоящем изобретении предложен способ индукции иммунного ответа против BTV у животного, включающий введение указанному животному иммуногенной композиции, содержащей сапонин, SL-CD и антиген. В некоторых воплощениях изобретения иммунный ответ, индуцированный после введения иммуногенной композиции по изобретению, представляет собой защитный иммунный ответ.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложена иммуногенная композиция, полученная путем объединения Quil А и вируса с помледующим добавлением SL-CD. Вирус может быть живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях изобретения Quil А и вирус объединяют при комнатной температуре. В некоторых воплощениях изобретения Quil А и вирус объединяют в течение по меньшей мере15 минут. В некоторых воплощениях изобретения Quil А и вирус объединяют в течение по меньшей мере 120 минут.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложен набор, содержащий иммуногенную композицию по изобретению для индукции иммунного ответа у животного.

В различных воплощениях в настоящем изобретении предложены способы стимуляции иммунного ответа у крупного рогатого скота против вирусной инфекции или эфемерной лихорадки крупного рогатого скота, вызванной BEFV. Способы индукции иммунного ответа против BEFV включают введение крупному рогатому скоту композиции, содержащей BEFV, SL-CD и Quil А.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложена иммуногенная композиция или вакцина, содержащая иммунологически эффективное количество BEFV, SL-CD и Quil А.

В различных воплощениях в настоящем изобретении предложены способы индукции у крупного рогатого скота иммунного ответа против герпесвирусной инфекции или ринотрахеита крупного рогатого скота, вызванного IBR. Способы индукции иммунного ответа против IBR включают введение крупному рогатому скоту композиции, содержащей IBR, SL-CD и сапонин.

В различных воплощениях в настоящем изобретении предложены способы индукции у крупного рогатого скота иммунного ответа против вирусной инфекции или катаральной лихорадки овец, вызванной BTV. Способы индукции иммунного ответа против BTV включает введение крупному рогатому скоту композиции, содержащей BTV, SL-CD и сапонин.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложена иммуногенная композиция или вакцина, содержащая иммунологически эффективное количество IBR, SL-CD и сапонина.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложена иммуногенная композиция или вакцина, содержащая иммунологически эффективное количество BTV, SL-CD и сапонина.

Подробное описание изобретения

Настоящее описание основано, в частности, на открытии, что иммунологическая композиция, содержащая SL-CD и сапонин или Quil А, может увеличить иммуногенность по меньшей мере одного антигена. В различных воплощениях изобретения по меньшей мере один антиген может быть выбран из бактерий, вирусов, пептидов, полипептидов, нуклеиновых кислот или их комбинаций.

В некоторых воплощениях изобретения по меньшей мере один антиген представляет собой ветеринарный антиген. В различных воплощениях изобретения ветеринарный антиген может представлять собой антиген крупного рогатого скота.

В одном воплощении изобретения ветеринарный антиген может представлять собой вирусный антиген. В некоторых воплощениях изобретения вирусный антиген включает, но не ограничивается этим, штамм BEFV, IBR или BTV. BEFV представляет собой рабдовирус, который, как известно, вызывает эфемерную лихорадку крупного рогатого скота в Австралии, Африке, на Ближнем Востоке и Азии. Известны многие штаммы BEFV, такие как ВВ2271-919 и его родительский штамм (919), TN73, Тп88128, штаммы 1-11 BEFV2001 или штаммы 1-3 BEFV2004. Выбор штамма может варьироваться в зависимости от страны, где надлежит использовать иммуногенную композицию по изобретению. Герпесвирус-1 крупного рогатого скота, также упоминаемый как BHV или IBR, представляет собой вирус семейства Herpesviridae, который вызывает заболевания у крупного рогатого скота, включая ринотрахеит, вагинит, баланопостит, аборт, конъюктивит и энтерит.IBR является также фактором, способствующим возникновению "корабельной" лихорадки. Он передается половым путем, при искусственном осеменении и аэрозольным путем. Подобно другим герпесвирусам, IBR вызывает пожизненную латентную инфекцию и вирусоносительство. Респираторное заболевание, вызываемое IBR, широко известно как инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота.

Вирус катаральной лихорадки овец (BTV) представляет собой прототипный вирус рода Orbivirus, который принадлежит к семейству Reoviridae с двуцепочечной РНК. BTV вызывает серьезное заболевание у домашнего скота, такого как овцы, козы, крупный рогатый скот и олени. В литературе сообщается о 24 серотипах, являющихся причиной расстройств, варьирующих от невыраженных инфекции до острой прогрессирующей инфекции. Также исследовали крупный рогатый скот, выделяющий хронический, персистирующий вирус.Катаральная лихорадка овец наблюдалась в Австралии, Северной Америке, Африке, на Ближнем Востоке, Азии и Европе.

В различных воплощениях изобретения вирус в иммуногенной композиции может быть живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. Способы получения живого-ослабленного вируса хорошо известны в литературе. Например, вирус можно ослабить посредством пассирования вируса в чужеродном хозяине, таком как тканевая культура, яйца с развивающимися эмбрионами или живые животные. Ослабленный BEFV может быть выбран для предпочтительного роста в клетках, не являющихся клетками крупного рогатого скота, и в процессе селекции стать менее способным расти в клетках крупного рогатого скота. Поскольку эти ослабленные штаммы плохо реплицируются в хозяевах, представляющих собой крупный рогатый скот, они индуцируют иммунитет, но не заболевание, при введении крупному рогатому скоту. Вирус считается ослабленным, если он имеет пониженную вирулентность для нативного хозяина и увеличенную вирулентность для нового хозяина. Некоторые ослабленные вирусные штаммы могут появиться естественным путем. Генная инженерия может быть использована для ослабления вирусов определенными путями. Способы получения убитого или инактивированного вируса для применения в иммуногенных композициях, вакцинах и способах известны в данной области. В химическом процессе инактивации подходящий образец вируса или образец сыворотки, содержащей вирус, обрабатывают в течение достаточного периода времени достаточным количеством или достаточной концентрацией инактивирующего агента при достаточно высокой (или низкой, в зависимости от инактивирующего агента) температуре или pH для инактивации вируса. Например, вирус может быть обработан инактивирующими агентами, такими как формалин, бинарный этиленимин (BEI) или гидрофобные растворители, кислоты и т.д. Вирус можно инактивировать облучением ультрафиолетовым светом или рентгеновскими лучами, нагреванием и т.д. Инактивацию нагреванием проводят при температуре и в течение периода времени, достаточных для инактивации вируса. Инактивацию облучением осуществляют с использованием длины волны света или другого источника энергии в течение периода времени, достаточного для инактивации вируса. В некоторых воплощениях изобретения иммуногенная композиция содержит живой-ослабленный вирус.

В некоторых воплощениях изобретения иммуногенная композиция содержит антиген, полученный из замороженного концентрата, высушенного концентрата или свежего концентрата. Если антиген получен из высушенного концентрата, то он может быть получен из лиофилизированного концентрата. В некоторых воплощениях иммуногенная композиция по изобретению содержит антиген из замороженного концентрата.

Сапонины представляют собой стероидные или тритерпеновые гликозиды, широко распространенные в растениях и морских животных. Сапонины отличаются образованием коллоидных растворов в воде, которые пенятся при встряхивании, и осаждением холестерина. Когда сапонины находятся вблизи клеточных мембран, они образуют пороподобные структуры в мембране, которые вызывают ее разрыв. Сапонины используют в качестве адъювантов в вакцинах для животных. Адъювантная и гемолитическая активность отдельных сапонинов широко изучалась (Lacaille-Dubois and Wagner, 1996, A review of the biological and pharmacological activities of saponins" Phytomedicine vol 2 pp 363-386). Сапонины представляют собой класс вторичных метаболитов, обнаруженных в различных видах растений. Они представляют собой амфипатические гликозиды, сгруппированные феноменологически по способности образовывать пену при встряхивании в водных растворах. Структурно они состоят из одной или более гидрофильных гликозидных группировок, объединенных с липофильными тритерпеновыми производными. Коммерческие сапонины, в основном, извлекают из Quillaja saponaria Molina и Yucca schidigera. "Quil А" относится к очищенной форме сапонина.

Сапонин может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации от примерно 0,4 мг/мл до примерно 0,6 мг/мл. Сапонин может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации примерно 0,5 мг/мл. Quil А может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации от примерно 0,1 мг/мл до примерно 0,2 мг/мл. Quil А может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации от примерно 0,12 мг/мл до примерно 0,18 мг/мл. Quil А может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации от примерно 0,14 мг/мл до примерно 0,16 мг/мл. Quil А может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации примерно 0,158 мг/мл. В одном воплощении Quil А присутствует в конечной концентрации примерно 0,158 мг/мл в иммуногенной композиции по изобретению.

Сульфолипо-циклодекстрин в эмульсии сквалана в воде (SL-CD/сквалан) использовали для приготовления различных вакцин. SL-CD/сквален можно готовить, как описано у Hilgers et al. (Sulfolipo-cyclodextrin in squalane in-water as a novel and safe vaccine adjuvant. Vaccine. 17 (1999), pp.219-228; Fort Dodge Animal Health Holland, Weesp, The Netherlands).

SL-CD может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации от примерно 0,09 мл/мл до примерно 0,3 мл/мл. SL-CD может присутствовать в иммуногенной композиции по изобретению в конечной концентрации примерно 0,1 мл/мл, примерно 0,15 мл/мл, примерно 0,17 мл/мл, примерно 0,2 мл/мл или примерно 0,25 мл/мл. Иммуногенные композиции по изобретению могут дополнительно содержать по меньшей мере один адъювант в дополнение к Quil А и SL-CD. В качестве такого дополнительного адъюванта можно выбрать любой из адъювантов, известных в данной области, как обсуждается более подробно в настоящей заявке.

В некоторых воплощениях в изобретении предложен способ индукции иммунного ответа, включающий введение животному иммунологической композиции, содержащей сапонин и SL-CD. В некоторых воплощениях способ включает введение животному иммунологической композиции, содержащей сапонин, SL-CD и по меньшей мере один антиген. В некоторых воплощениях по меньшей мере один антиген представляет собой ветеринарный антиген. В некоторых воплощениях изобретения ветеринарный антиген представляет собой антиген крупного рогатого скота. В некоторых воплощениях изобретения ветеринарный антиген представляет собой вирусный антиген. В некоторых воплощениях вирусный антиген представляет собой BEHV, IBR или BTV. В некоторых воплощениях вирус является живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях вирус является убитым. В некоторых воплощениях антиген получен из замороженного концентрата, высушенного концентрата или свежего концентрата. Если антиген получен из высушенного концентрата, то он может быть получен из лиофилизированного концентрата. В некоторых воплощениях антиген получен из замороженного концентрата.

В некоторых воплощениях в изобретении предложен способ индукции иммунного ответа, включающий введение животному иммунологической композиции, содержащей Quil А и SL-CD. В некоторых воплощениях способ включает введение животному иммунологической композиции, содержащей Quil A, SL-CD и по меньшей мере один антиген. В некоторых воплощениях по меньшей мере один антиген, используемый в способе, представляет собой ветеринарный антиген. В некоторых воплощениях ветеринарный антиген, используемый в способе, представляет собой антиген крупного рогатого скота. В некоторых воплощениях антиген представляет собой вирусный антиген. В некоторых воплощениях вирусный антиген представляет собой IBR, BEFV или IBR. В некоторых воплощениях вирусный антиген является живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях вирус является живым-ослабленным. В некоторых воплощениях антиген получен из замороженного концентрата, высушенного концентрата или свежего концентрата. Если антиген получен из высушенного концентрата, то он может быть получен из лиофилизированного концентрата. В некоторых воплощениях антиген получен из замороженного концентрата.

Иммуногенные композиции по изобретению могут вызывать иммунный ответ после введения нескольких доз. В некоторых воплощениях иммуногенные композиции по изобретению могут вызывать иммунный ответ после введения двух доз. В некоторых воплощениях иммуногенные композиции по изобретению вызывают иммунный ответ после введения одной дозы. Иммунный ответ, вызванный иммуногенными композициями по изобретению, может представлять собой защитный иммунный ответ. После введения первоначальной дозы иммуногенной композиции по изобретению бустерную дозу можно вводить примерно через четыре недели для усиления иммуногенного ответа. Также можно вводить дополнительные бустерные дозы.

В одном воплощении в изобретении предложен набор для индукции иммунного ответа у животного. В некоторых воплощениях набор включает иммуногенную композицию, содержащую сапонин и SL-CD и возможно по меньшей мере один антиген. В некоторых воплощениях сапонин в наборе представляет собой Quil А. В некоторых воплощениях по меньшей мере один антиген в наборе представляет собой ветеринарный антиген. В некоторых воплощениях ветеринарный антиген в наборе представляет собой антиген крупного рогатого скота. В некоторых воплощениях ветеринарный антиген в наборе представляет собой вирусный антиген. В некоторых воплощениях вирусный антиген в наборе представляет собой BEFV, IBR или BTV. В некоторых воплощениях антиген в наборе может быть живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях антиген в наборе является живым-ослабленным. В некоторых воплощениях антиген в наборе является убитым. В некоторых воплощениях антиген в наборе получен из замороженного концентрата, высушенного концентрата или свежего концентрата. В некоторых воплощениях антиген в наборе получен из замороженного концентрата.

В изобретении предложены наборы, иммунологические композиции и вакцины, содержащие SL-CD и сапонин и/или Quil А, которые могут содержать по меньшей мере один дополнительный адъювант. Среди адъювантов, которые могут быть использованы, могут быть упомянуты в качестве примера гидрат окиси алюминия, авридин, диметилдиоктадециламмония бромид (также известный как DDAB или DODAB), полифосфазены, эмульсии масло-в-воде на основе минерального масла, такие как SPT эмульсия (см, например Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach, 1995, edited by Michael F. Powel and Mark J. Newman, Plennum Press, New York and London, pages 147-204), эмульсии вода-в-масле на основе метаболизируемого масла, как описано в патенте США №6,368,601, а также эмульсии, описанные в патенте США №5,422,109. Другие примеры подходящих адъювантов включают сквалан и сквален (или другие масла животного происхождения); блок-сополимеры, такие как pluronic® (L121) сапонин; детергенты, такие как Tween-80, минеральные масла, такие как DRAKEOL® или Marcol®; растительные масла, такие как арахисовое масло; адъюванты, происходящие из коринебактерий, таких как corynebacterium parvum; адъюванты, происходящие из пропионовокислых бактерий; Mycobacterium bovis (бацилла Кальметта-Герена, или BCG); интерлейкины, такие как интерлейкин-2 и интерлейкин-12; монокины, такие как интерлейкин 1; фактор некроза опухоли; интерфероны, такие как гамма-интерферон; липосомы; адъювант iscom; экстракт микобактериальных клеточных стенок; синтетические гликопептиды, такие как мурамилдипептиды, или другие производные; Авридин; Липид А; декстрансульфат; DEAE-Декстран или DEAE-Декстран с фосфатом алюминия; карбоксиполиметилен, такой как Carbopol®; ЕМА; эмульсии акриловых сополимеров, такие как Neocryl® А640 (см. патент США №5,047,238); белки вакцинии или поксвирусов животных; адъюванты на основе субвирусных частиц, такие как орбивирус; холерный токсин; диметилдиоктадециламмония бромид; или их смеси. Другие адъюванты могут быть выбраны из поверхостно-активных веществ (например гексадециламина, октадециламина, лизолецитина, диметилдиоктадециламмония бромида, N,N-диоктадецил-n'-N-бис(2-гидроксиэтилпропандиамина), метоксигексадецилглицерина и pluronic полиолов); полианионов (например пирана, декстрансульфата, поли-IC, полиакриловой кислоты, карбопола), пептидов (например мурамилдипептида, диметилглицина, тафтсина), масляных эмульсий, квасцов и их смесей. Кроме того, можно выбрать комбинации адъювантов.

В одном воплощении в изобретении предложена иммуногенная композиция, полученная путем объединения Quil А и антигена и последующего добавления дополнительного антигена, такого как SL-CD. Специалистам в данной области слудет понимать, что объединение вируса с Quil А снизит эффективный титр вируса (Walker, P.J., 2005, Curr. Top. Microbiol. Immunol. 292:57-80). Комбинирование Quil А и антигена и последующее добавление по меньшей мере одного другого ингредиента к иммуногенной композиции может быть осуществлено в течение любого периода времени. Специалист в данной области легко поймет, что иммуногенная композиция по изобретению может быть приготовлена путем объединения Quil А и антигена и последующеего добавления по меньшей мере одного другого ингредиента к иммуногенной композиции в течение различных периодов времени. Например, Quil А и антиген могут быть объединены в течение периода от по меньшей мере 5 минут до по меньшей мере 200 минут. В некоторых воплощениях Quil А и антиген объединяют в течение различных периодов времени, включающих от по меньшей мере 10 минут до по меньшей мере 190 минут.В некоторых воплощениях Quil А и антиген объединяют в течение по меньшей мере 15 минут. Специалистам в данной области следует понимать, что иммуногенную композицию по изобретению можно приготовить путем объединения Quil А и антигена при любой из многих температур. Объединение Quil А и антигена можно выполнить при температурах ниже или выше комнатной температуры до тех пор, пока полученная композиция является иммуногенной. Quil А и антиген могут быть объединены при комнатной температуре. В некоторых воплощениях антиген в иммуногенной композиции, полученной путем объединения Quil А и антигена перед добавлением SL-CD, представляет собой вирус. В некоторых воплощениях вирус представляет собой BEFV. В некоторых воплощениях вирус может быть живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях антиген является живым-ослабленным. В некоторых воплощениях антиген может быть получен из замороженного концентрата, высушенного концентрата или свежего концентрата. В некоторых воплощениях антиген получен из замороженного концентрата.

В одном воплощении в настоящем изобретении предложена иммуногенная композиция, вызывающая иммунный ответ и содержащая сапонин и SL-CD. В некоторых воплощениях изобретения иммуногенная композиция, вызывающая иммунный ответ, содержит сапонин и SL-CD; и по меньшей мере один антиген. В некоторых воплощениях изобретения сапонин в иммуногенной композиции, вызывающей иммунный ответ, представляет собой Quil А. В некоторых воплощениях изобретения по меньшей мере один антиген в иммуногенной композиции, вызывающей иммунный ответ, можно выбрать из бактерий, вирусов, пептидов, полипептидов, нуклеиновых кислот или их комбинаций. В некоторых воплощениях в иммуногенной композиции по изобретению по меньшей мере один антиген представляет собой ветеринарный антиген. В некоторых воплощениях в иммуногенной композиции по изобретению ветеринарный антиген представляет собой антиген крупного рогатого скота. В некоторых воплощениях в иммуногенной композиции по изобретению антиген представляет собой вирусный антиген. В некоторых воплощениях изобретения вирусный антиген представляет собой по меньшей мере штамм BEFV, BTV или IBR. В некоторых воплощениях сапонин или Quil А добавляют к вирусному антигену перед добавлением SL-CD. В некоторых воплощениях антиген может быть живым-ослабленным, рекомбинантным, убитым или инактивированным. В некоторых воплощениях антиген является живым-ослабленным. В некоторых воплощениях антиген является убитым. В некоторых воплощениях антиген может быть получен из замороженного концентрата, высушенного концентрата или свежего концентрата. В некоторых воплощениях антиген получен из замороженного концентрата.

Иммунологические композиции по изобретению можно приготовить из вирусных культур способами, которые являются стандартными в данной области. Например, вирус можно размножать в клетках культуры ткани, таких как эпителиальные клетки почек африканских зеленых мартышек (клетки Vera), человеческие диплоидные фибробласты, MDBK (почки быка Мадин-Дарби) или другие клетки крупного рогатого скота. Рост вируса контролируют стандартными способами (наблюдение за цитопатическим эффектом, иммунофлюоресценция или другие анализы на основе антител) и вирус собирают при достижении достаточно высокого вирусного титра (такого как 106 ТСЮ50/мл). Вирусные концентраты можно дополнительно концентрировать или лиофилизировать обычными способами перед включением в вакцинный препарат.Можно использовать другие способы получения вирусного концентрата, такие как способы, описанные Thomas, et al. (1986, Agri-Practice, 7 (5):26-30).

Иммунологические композиции по изобретению можно давать отдельно или в виде компонента поливалентной иммунологической композиции, т.е. в комбинации с другими иммунологическими композициями. Вирус в иммуногенном препарате может быть живым или убитым; живой или убитый вирус может быть лиофилизирован и возможно восстановлен известными в данной области способами. Иммуногенные композиции могут быть предложены в наборах, которые также могут включать соответствующую маркировку и инструкции по введению иммуногенной композиции субъекту-животному (например, домашнему скоту, копытным, домашнему животному) или птице (например, домашней птице).

Иммуногенные композиции, содержащие SL-CD и сапонин или Quil А; и по меньшей мере один вирусный антиген, также могут содержать фармацевтически и ветеринарно приемлемые носители. Такие носители хорошо известны специалистам в данной области и включают крупные, медленно метаболизирующие макромолекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, аминокислотные сополимеры и неактивные вирусные частицы. Фармацевтически и ветеринарно приемлемые соли также можно использовать в вакцине, например, минеральные соли, такие как гидрохлориды, гидробромиды, фосфаты или сульфаты, а также соли органических кислот, такие как ацетаты, пропионаты, малонаты или бензоаты. Вакцины также могут содержать жидкости, такие как вода, солевой раствор, глицерин и этанол, а также вещества, такие как увлажняющие агенты, эмульгирующие агенты или pH буферные агенты. Липосомы также можно использовать в качестве носителей для убитых вирусов (см., например, патент США №5,422,120, публикация РСТ №WO 95/13796, публикация РСТ №WO 91/14445 или европейский патент №524,968 B1.)

Иммуногенные композиции по настоящему изобретению можно вводить внутримышечным или подкожным путями или интраназальным, внутрибрюшинным, внутривенным, интрадермальным, внутрибронхиальным или пероральноым путями. Иммуногенные композиции по изобретению можно вводить с помощью спрея, инокуляции в глаз или скарификации. Другой удобный способ доставки иммуногенной композиции по изобретению млекопитающим (таким как домашний скот, копытные или домашние животные) осуществляется посредством перорального введения (например, в пище или питьевой воде или в приманке). Это особенно удобно для подкармливания или смешивания корма с иммуногенной композицией. Как правило, крупные животные (например, домашний скот/копытные, такие как крупный рогатый скот) получают дозу примерно 10⁶ ТСID₅₀/мл (средняя цитопатогенная доза, инфицирующая 50% клеток), может быть от 10^6,5 до 10⁷, TCID₅₀ на дозу иммуногенной композиции.

При введении однократной дозы иммуногенная композиция должна содержать количество BEFV, соответствующее от примерно 10⁴ до примерно 10⁷ TCID₅₀/мл, предпочтительно 10⁶ ТСID₅₀/мл. Примерно от одного до пяти мл иммуногенной композиции, предпочтительно 2 мл, можно вводить животному внутримышечно, подкожно или внутрибрюшинно.

Иммуногенная композиция должна содержать количество IBR, соответствующее примерно 6,8 log/мл. Примерно от одного до пяти мл иммуногенной композиции, содержащей IBR, предпочтительно 2 мл, можно вводить животному внутримышечно, подкожно или внутрибрюшинно.

Иммуногенная композиция должна содержать количество BTV, соответствующее примерно 10^6,7 TCID₅₀ BTV серотипа 1 и/или примерно 10^7,6 TCID₅₀ BTV серотипа 8. Примерно от одного до пяти мл иммуногенной композиции, содержащей BTV, предпочтительно 2 мл, можно вводить животному внутримышечно, подкожно или внутрибрюшинно.

Получение иммуногенных композиций можно найти в литературе, например, в "Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach", упомянутой выше, и "Vaccines" (2008, fifth edition, Plotkin, S.A. et