Новые адъювантные композиции

Новые адъювантные композиции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Предшествующий уровень техники

Область изобретения

Изобретение относится в общем к новым адъювантным композициям для усиления иммунного ответа на антигены для применения в иммуногенных и вакцинных композициях, не продуцирующим токсические или нежелательные побочные действия у субъекта. Изобретение также относится к способам изготовления и применению адъювантной, иммуногенной и вакцинной композиций.

История и описание родственной области техники

Бактериальные, вирусные и паразитарные инфекции широко распространены у людей и животных. Заболевания, вызываемые этими инфекционными агентами, часто резистентны к антимикробной фармацевтической терапии, приводя к тому, что отсутствуют эффективные способы лечения. Поэтому вакцинный подход используют во все большей степени для контроля инфекционного заболевания. Цельный инфекционный патоген можно сделать подходящим для применения в вакцинной композиции после химической инактивации или подходящей генетической манипуляции. Альтернативно, белковая субъединица патогена может быть экспрессирована в рекомбинантной экспрессирующей системе и очищена для применения в вакцинной композиции. Вакцины могут быть приготовлены более эффективно путем включения подходящего адъюванта в композицию.

Также существует растущий интерес к использованию вакцинного подхода для лечения рака у животных и людей. Этот терапевтический подход к лечению рака включает вакцинацию пациентов, страдающих раком, вакциной, содержащей опухолеспецифический антиген и адъювант. Тем не менее, ни одна из множества разрабатываемых противораковых вакцин этой природы не была одобрена надзорными органами. Не было показано, что вакцины уменьшают размер опухолей, что представляет собой стандартный показатель эффективности противоракового лекарства.

Термин "адъювант" как правило, относится к любому материалу, которое увеличивает гуморальный или клеточный иммунный ответ на антиген. Адъюванты используются для осуществления двух задач: они замедляют высвобождение антигенов из области инъекции, и они стимулируют иммунную систему. Традиционные вакцины, как правило, состоят из неочищенного препарата инактивированных или убитых или модифицированных живых патогенных микроорганизмов. Примеси, ассоциированные с этими культурами патологических микроорганизмов, могут действовать как адъювант для усиления иммунного ответа. Однако, иммунитет, вызываемый вакцинами, в которых используются гомогенные препараты патологических микроорганизмов или очищенных белковых субъединиц в качестве антигенов, часто является плохим. Таким образом, возникает необходимость в добавлении некоторых экзогенных веществ, таких как адъювант. Кроме того, синтетические и субъединичные вакцины являются дорогими при изготовлении. Добавление адъюванта может дать возможность для использования меньшей дозы антигена для стимулирования эквивалентного иммунного ответа, таким образом уменьшая стоимость изготовления вакцины. Таким образом, эффективность некоторых инъецируемых медицинских агентов может быть значительно увеличена, когда агент комбинирован с адъювантом.

Множество факторов следует принять к рассмотрению при выборе адъюванта. Адъювант должен эффективно вызывать относительно низкую скорость высвобождения и абсорбции антигена при минимуме токсических, аллергенных, раздражающих и других нежелательных эффектов в отношении хозяина. Для того, чтобы быть желательным, адъювант должен быть невирулицидным, биодеградируемым, способным согласованно вызывать высокий уровень иммунитета, способным стимулировать перекрестную защиту, быть совместимым с множественными антигенами, быть эффективным для множества видов, быть нетоксичным и безопасным для хозяина (например, отсутствие реакций в области инъекции). Желательно, чтобы адъювант обладал способностью к микродозированию, щадящему режиму дозирования, обладал превосходной стабильностью, поддавался высушиванию, мог быть изготовлен без масла, мог существовать в виде либо твердого вещества, либо жидкости, был изотоническим, легко изготавливаемым и недорогим для изготовления. Наконец, весьма желательно, чтобы адъювант можно было изменять таким образом, чтобы вызывать гуморальный или клеточный иммунный ответ или оба в зависимости от требований схемы вакцинации. Однако, количество адъювантов, которые могут удовлетворять вышеприведенным требованиям, ограничено.

Выбор адъюванта зависит от потребностей в вакцине, в зависимости от того, увеличивает ли она степень или функцию гуморального ответа, увеличивает ли опосредованный клетками иммунный ответ, вызывает ли защитные свойства слизистых оболочек или уменьшает ли дозу антигена. Предлагается множество адъювантов, тем не менее, ни для одного из них не показано, что он идеально подходит для всех вакцин. Первый адъювант, о котором сообщалось в литературе, представлял собой полный адъювант Фрейнда (FCA), который содержал эмульсию вода в масле и экстракты микобактерии. К сожалению, FCA плохо переносится и может вызвать неконтролируемое воспаление. С тех пор, как FCA открыли около 80 лет назад, были осуществлены попытки уменьшить нежелательные побочные действия адъювантов.

Некоторые другие вещества, которые используют в качестве адъювантов, включают оксиды металлов (например, гидроксид алюминия), алюминиевые квасцы, неорганические хелаты солей, желатины, различные масла парафинового типа, синтезированные смолы, альгинаты, мукоидные и полисахаридные соединения, казеинаты и вещества, происходящие из крови, такие как фибриновые сгустки. Хотя эти вещества в общем эффективны для стимуляции иммунной системы, ни для одного из них не было обнаружено, чтобы они были полностью удовлетворительными вследствие неблагоприятных побочных действий в отношении хозяина (например, стерильные абсцессы, повреждение органа, канцерогенность или аллергические реакции) или нежелательных фармацевтических свойств (например, быстрой дисперсии или плохого контроля дисперсии из области инъекции, или набухание материала).

Синтезированные масла и продукты нефтепереработки используют в качестве адъювантов, поскольку они демонстрируют относительно медленную дисперсию в организме, но они могут быть нежелательными, поскольку они часто разрушаются до ароматических углеводородов, которые могут быть канцерогенными. Кроме того обнаружено, что некоторые из этих веществ способны приводить к стерильным абсцессам и могут никогда полностью не выводиться из организма. Если масла выбраны подходящим образом и приготовлены в правильных концентрациях, то они могут быть относительно безопасными и нетоксичными.

Сапонины, полученные из коры южноамериканского дерева Quillaja saponaria, используют в качестве адъювантов в течение некоторого времени. Смотри Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (A review of the biological and pharmacological activities of saponins. Phytomedicine vol.2 pp.363-386. 1996). Множество используемых в настоящее время ветеринарных вакцин содержат Quil A, который представляет собой сапониновую фракцию из коры южноамериканского дерева Quillaja saponaria molina. Дополнительное фракционирование Quil A позволило получить субфракции, включающие QS-7, QS-17, QS-18, и QS-21 (смотри патент США №5057540).

Применение сапонинов в качестве адъювантов связано со множеством недостатков. Сапонины являются растворимыми и таким образом стимулируют неспецифический иммунный ответ. Однако, задача вакцинации заключается в стимулировании направленного ответа на специфический антиген или антигены. Сапонины обладают сильной аффинностью в отношении холестерина. Они образуют комплекс с холестерином, обнаруженным в клеточных мембранах, вызывая гемолиз клетки. Также продемонстрировано, что они вызывают некроз в области инъекции, и их сложно готовить в виде частиц. Когда сапонины готовят в вакцинах, содержащих модифицированных живые вирусы с оболочкой, они разрушают вирусную оболочку и таким образом инактивируют вирусные антигены.

Для преодоления гемолитических и вирулицидных свойств Quil A, его комбинируют с холестерином и фосфолипидами, которые образуют специфическую структуру, известную как иммуностимулирующий комплекс (ISCOM) или ISCOM матрикс (ISCOMATRIX). Смотри Ozel M., et. al.; J. Ultrastruc. and Molec. Struc. Re 102, 240-248 (1989). ISCOM, будучи комбинированным с антигеном, как правило вызывает Th1 цитотоксический Т-клеточный ответ. Тем не менее, хотя комбинация Quil A с холестерином значительно уменьшает гемолитические свойства Quil A, она не устраняет их полностью. Еще одно ограничение ISCOM заключается в том, что белковый антиген должен иметь гидрофобные домены, достаточно большие для того, чтобы взаимодействовать с ISCOM для включения в ISCOM. Белок, являющийся высоко гидрофильным, не может быть включен в ISCOM. Наконец, ISCOM могут стимулировать нежелательный аутоиммунный ответ у субъекта.

Иммуномодуляторы используют в качестве адъювантов, примеры которых включают диметилдиоктадециламмоний бромид (далее "DDA"), и авирдин. DDA представляет собой липофильное четвертичное аммониевое соединение (амин) с двумя 18 углеродными алкильными цепями и двумя метильными группами, связанными с положительно заряженной четвертичной аммониевой молекулой, имеющей молекулярную массу 631. Его применение в качестве адъюванта раскрыто Gall (Immunol. V.11, р.369, 1966). Сообщается, что DDA стимулирует сильные опосредованные клетками иммунные ответы, и также показано, что он вызывает гуморальные иммунные ответы. Опубликовано множество работ, демонстрирующих эффективность DDA в качестве адъюванта для белковых антигенов, гаптенов, опухолей, вирусов, простейших и бактерий (Смотри Korsholm, К S., et al., Immunology, vol.121, pp.216-226, 2007.). Большинство исследований осуществляли на лабораторных животных, тогда как лишь некоторые проводили на более крупных животных, таких как куры (смотри Katz, D., et al. FEMS Immunol Med Microbiol. Vol 7 (4): 303-313, 1993.), свиньи и крупный рогатый скот. DDA эффективен для индукции реакции гиперчувствительности замедленного типа (DTH) у лабораторных животных и крупных животных. Однако, он плохо растворим в воде.

Полимеры также используют в качестве адъювантов, примеры которых включают диэтил-аминоэтил (ОЕАЕ)-декстран, полиэтиленгликоль и полиакриловую кислоту (например, CARBOPOL^®). Полисахарид DEAE-декстран известен в области техники как очень сильный адъювант. Однако, он ассоциируется с неприемлемой реакционноспособностью. Полимеры CARBOPOL^® представляют собой полимеры акриловой кислоты, перекрестно связанной с полиалкениловыми эфирами или дивинилгликолем. CARBOPOL^® используют во множестве вакцин, но его применение в качестве адъюванта не было подтверждено.

Показано, что некоторые адъюванты стимулируют Th2 ответ, где примеры включают N-(2-дезокси-2-L-лейциламино-β-D-глюкопиранозил)-N-октадецилдодеканоиламид гидроацетат, также известный под товарным знаком Bay R1005^®, когда в нем образуется ацетат, и алюминий. Bay R1005^® в комбинации с очищенными вирусными вакцинами или субъединичными вакцинами приводит к увеличенной продукции антител у сенсибилизированных вирусом мышей. Преклинические исследования на других видах животных (свиньи, овцы, лошади) дали сравнимые результаты в отношении продукции антител. Увеличение синтеза антител, вызванное Bay R1005^®, в особенности зависит от антигена, и не является результатом поликлональной стимуляции.

До настоящего изобретения ни одна из композиций адъюванта не обладала желаемым диапазоном желаемых характеристик, которыми должен обладать идеальный адъювант. Были сделаны попытки найти новые адъюванты для вакцин, которые могли бы преодолеть недостатки обычных адъювантов. В частности, весьма желательна композиция адъюванта, которая вызывает сильный опосредованный клетками и гуморальный иммунный ответы, в отношении широкого диапазона антигенов у людей и животных, лишенная побочных действий и трудностей изготовления, характерных для обычных адъювантов.

Краткое изложение сущности изобретения

Данное изобретение относится к новым адъювантным, иммуногенным и вакцинным композициям. В частности, данное изобретение относится к адъювантным композициям, содержащим стимуляторы Th1, иммуномодуляторы, полимеры и стимуляторы Th2. Данное изобретение также относится к иммуногенным и вакцинным композициям, содержащим такие адъювантные композиции и один или более чем один антиген, а также способам приготовления адъювантных и вакцинных композиций.

В одном из воплощений адъювантные композиции содержат комбинацию сапонина, стерола и четвертичного аммониевого соединения. В одном из воплощений комбинация адъювантов содержит Quil A, холестерин и DDA.

В еще одном воплощении адъювантные композиции содержат комбинацию сапонина, стерола, четвертичного аммониевого соединения и полимера. В одном из воплощений комбинация адъювантов представляет собой Quil A, холестерин, DDA и полиакриловую кислоту.

В еще одном воплощении адъювантные композиции содержат комбинацию сапонина, стерола, четвертичного аммониевого соединения, полимера и гликолипида. В одном из воплощений комбинация адъювантов представляет собой Quil A, холестерин, DDA, полиакриловую кислоту и Bay R1005^®.

В одном из воплощений иммуногенную композицию, содержащую адъювантную композицию и иммунологически эффективное количество антигена, где адъювантная композиция содержит сапонин, стерол, четвертичное аммониевое соединение и полимер, готовят способом, при котором

а) готовят композицию антигена в буфере,

б) добавляют сапонин к композиции со стадии (а);

в) добавляют стерол к композиции со стадии (б);

г) добавляют четвертичное аммониевое соединение к композиции со стадии (в),

д) добавляют полимер к композиции со стадии (г).

В одном из воплощений способа сапонин представляет собой Quil A, стерол представляет собой холестерин, четвертичное аммониевое соединение представляет собой DDA, и полимер представляет собой полиакриловую кислоту.

В одном из воплощений вакцину, содержащую адъювантную композицию и иммунологически эффективное количество антигена, где адъювантная композиция содержит сапонин, стерол, четвертичное аммониевое соединение, полимер и гликолипид, готовят способом, при котором

а) готовят композицию антигена в буфере,

б) добавляют сапонин к композиции со стадии (а);

в) добавляют стерол к композиции со стадии (б);

г) добавляют четвертичное аммониевое соединение к композиции со стадии (в),

д) добавляют полимер к композиции со стадии (г), и е) добавляют гликолипид к композиции со стадии (д).

В одном из воплощений этого способа сапонин представляет собой Quil A, стерол представляет собой холестерин, четвертичное аммониевое соединение представляет собой DDA, полимер представляет собой полиакриловую кислоту, и гликолипид представляет собой Bay R1005^®.

Обнаружено, что приведенные здесь адъювантные композиции обладают удивительными и неожиданными свойствами кроме тех, которые можно ожидать от такой комбинации. Неожиданно обнаружено, что вирулицидное свойство Quil A / холестерина устраняется в этих адъювантных композициях. Они подходят в качестве разбавителя для лиофилизированных модифицированных живых вирусных антигенов. Описанные здесь адъювантные композиции могут быть изменены для того, чтобы вызывать чрезвычайно сильный иммунный ответ, относящийся к опосредованному клетками иммунному ответу, гуморальному иммунному ответу или обоим. Кроме того, реакции в области инъекции можно в значительной степени избежать при использовании этих адъювантных композиций. Реактогенность является ниже, чем реактогенность некоторых индивидуальных компонентов, которые составляют комбинацию адъювантов. Дополнительно, эти адъювантные композиции обеспечивают способность к длительному хранению.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что эти новые адъювантные композиции являются высоко иммуногенными при комбинировании с одним или более чем одним из множества различных антигенов широкого диапазона видов. Они могут быть использованы с одним или более чем одним вирусным, бактериальным, паразитарным, рекомбинантным белком и синтетическим пептидным антигенами и их комбинациями. Новые вакцинные адъювантные композиции могут быть использованы в терапевтических вакцинах для лечения рака.

Таким образом, в настоящем изобретении предложены адъювантные, иммуногенные и вакцинные композиции. Дополнительно предложены способы приготовления композиций. Также предложено их применение в лечении заболевания. Также предложено их применение в изготовлении лекарственного средства для лечения субъекта от заболеваний, в частности от описанных ниже заболеваний. Также предложено их применение в изготовлении лекарственного средства для предупреждения или уменьшения заболевания у субъекта.

Также предложено их применение в изготовлении лекарственного средства для лечения животного семейства кошачьих от инфекции, вызванной вирусом лейкемии кошек, для лечения птицы от кокцидиоза птиц, для лечения животного, являющегося представителем крупного рогатого скота, от заболеваний, вызванных Escherichia со//, для лечения животного, являющегося представителем крупного рогатого скота, от заболеваний, вызванных вирусом диареи крупного рогатого скота, для лечения животного семейства свиней от заболеваний, вызванных Mycoplasma hyopneumonia, для лечения животного семейства кошачьих от заболеваний, вызванных вирусом кошачьего гриппа, субъекта от рака, для лечения животного семейства собачьих от заболеваний, вызванных коронавирусом собак, для лечения животного, являющегося представителем крупного рогатого скота, от заболеваний, вызванных ротавирусом крупного рогатого скота, и для лечения животного семейства собачьих от заболеваний, вызванных вирусом собачьего гриппа. Также предложено применение адъювантов в качестве маркерной вакцины, способствующей идентификации животных, которых вакцинируют. Также предложено применение CpG для усиления действий адъювантов.

Краткое описание графических материалов

На Фиг.1 изображен анализ на геле путем радиоиммунопреципитации, демонстрирующий различия в профиле антител между белками NS2/3 и белками Е2 вируса BVD. Группа, обработанная PreZent А, демонстрирует ответ в виде антител на белки NS2/3 и белки Е2, тогда как группы, обработанные QCDC и QCDCR, демонстрировали ответ в виде антител только на белок Е2, но не на белки NS2/3.

Подробное описание изобретения

Определения

"Около" или "приблизительно", когда используются в связи с измеряемой численной величиной, относятся к указанному значению переменной и ко всем значениям переменной, которые находятся в пределах экспериментальной ошибки указанной величины (например, в пределах 95% доверительного интервала для среднего значения) или в пределах 10 процентов относительно указанного значения, в зависимости от того, что больше, если только "приблизительно" не используется в отношении временных интервалов в виде недель, где "приблизительно 3 недели" составляют от 17 до 25 суток, и от приблизительно 2 до приблизительно 4 недель составляют от 10 до 40 суток.

"Адъювант" обозначает любое вещество, которое увеличивает гуморальный или клеточный иммунный ответ на антиген. Адъюванты как правило используются таким образом, чтобы реализовать две задачи: медленное высвобождение антигенов из области инъекции и стимуляция иммунной системы.

"Алкил" относится к прямоцепочечным и разветвленным насыщенным углеводородным группировкам.

"Амин" относится к химическому соединению, содержащему азот. Амины представляют собой группу соединений, являющихся производными аммиака, путем замещения углеводородных групп на атомы водорода. "Четвертичный амин" относится к соединению, основанному на аммиаке, имеющему четыре углеводородные группы.

"Антитело" относится к молекуле иммуноглобулина, которая может связываться со специфическим антигеном, как результат иммунного ответа на этот антиген. Иммуноглобулины представляют собой сывороточные белки, состоящие из "легкой" и "тяжелой" полипептидных цепей, имеющих "константную" и "вариабельную" области, и разделяющиеся на классы (например, IgA, IgD, IgE, IgG и IgM) на основе состава константных областей.

"Антиген" или "иммуноген" относится к любому веществу, которое стимулирует иммунный ответ. Этот термин включает убитые, инактивированные, ослабленные или модифицированные живые бактерии, вирусы или паразиты. Термин антиген также включает полинуклеотиды, полипептиды, рекомбинантные белки, синтетические пептиды, белковый экстракт, клетки (включающие опухолевые клетки), ткани, полисахариды или липиды или их фрагменты, индивидуально или в любой их комбинации. Термин антиген также включает антитела, такие как антиидиотипические антитела или их фрагменты, и синтетические пептидные мимеотопы, которые могут имитировать антиген или антигенную детерминанту (эпитоп).

"Бактерии" обозначает суспензию одной или более чем один убитой бактерии, которую можно использовать в качестве компонента вакцины или иммуногенной композиции.

"Буфер" обозначает химическую систему, которая предотвращает изменение концентрации другого химического вещества, например протонные донорная и акцепторная системы служат в качестве буферов, предотвращающих значительные изменения концентрации иона водорода (pH). Еще один пример буфера представляет собой раствор, содержащий смесь слабой кислоты и ее соли (конъюгатное основание) или слабого основания и ее соли (конъюгатная кислота).

"Клеточный иммунный ответ" или "опосредованный клетками иммунный ответ" представляет собой иммунный ответ, опосредованный Т-лимфоцитами или другими белыми кровяными клетками или теми и другими, и включает продукцию цитокинов, хемокинов и близких молекул, продуцированных активированными Т-клетками, белыми кровяными клетками или теми и другими.

"Холестерин" относится к белому кристаллическому веществу, имеющему химическую формулу С₂₇Н₄₅ОН. Он представляет собой циклический углеводородный спирт, который классифицируется как липид. Он не растворим в воде, но растворим во множестве органических растворителей.

"Гиперчувствительность замедленного типа (DTH)" относится к воспалительному ответу, который развивается через 24-72 часа после воздействия антигена, который распознается иммунной системой как чужеродный. Этот тип иммунного ответа включает в основном Т клетки, нежели чем антитела (которые продуцируются В-клетками).

"Доза" относится к вакцинной или иммуногенной композиции, вводимой субъекту. "Первая доза" или "примирующая вакцина" относится к дозе такой композиции, вводимой на 0 сутки. "Вторая доза" или "третья доза", или "годовая доза" относится к количеству такой композиции, вводимой за первой дозой, которая может представлять собой ту же самую вакцину или иммуногенную композицию, как первая доза, или нет.

"Эмульгатор" обозначает вещество, используемое для придания эмульсии большей стабильности.

"Эмульсия" обозначает композицию из двух несмешивающихся жидкостей, в которой небольшие капли одной жидкости суспендированы в непрерывной фазе другой жидкости.

"Сложные эфиры" относятся к любому классу органических соединений, соответствующих неорганическим солям, которые образуются в результате реакции конденсации, в которой молекула органической кислоты связывается с молекулой спирта с элиминацией молекулы воды.

"Эксципиент" относится к любому компоненту вакцины, который не представляет собой антиген.

"Гомогенизация" относится к способу смешивания одного или более чем одного компонента, похожего или отличающегося, в однородную смесь.

"Гуморальный иммунный ответ" относится к ответу, который опосредован антителами.

"Гидрофобный" обозначает не растворимый в воде, не абсорбирующий легко влагу, или на который вода отрицательно влияет; несовместимый с водой или обладающий небольшой аффинностью в отношении его.

"Иммунный ответ" у субъекта относится к развитию гуморального иммунного ответа, клеточного иммунного ответа или гуморального и клеточного иммунного ответа на антиген. Иммунные ответы обычно могут быть определены с использованием стандартных иммуноанализов и анализов нейтрализации, которые известны в области техники.

"Иммунологически защитное количество" или "иммунологически эффективное количество" или "эффективное количество для продукции иммунного ответа" антигена представляет собой количество, эффективное для индукции иммунного ответа у реципиента. Иммунный ответ может быть достаточным для диагностических задач или другого тестирования, или может быть адекватным для предупреждения признаков или симптомов заболевания, включающих неблагоприятные действия в отношении здоровья или их осложнения, вызванные инфицированием болезнетворным агентом. Может быть вызван гуморальный иммунитет или опосредованный клетками иммунитет. Иммунный ответ у животного на иммуногенную композицию может быть оценен, например, опосредовано путем измерения титров антител, анализов пролиферации лимфоцитов, или непосредственно путем отслеживания признаков и симптомов после сенсибилизации штаммом дикого типа, тогда как защитный иммунитет, вызываемый вакциной, может быть оценен путем измерения, например уменьшения клинических показателей, таких как смертность, заболеваемость, температура, общее психическое состояние и общее состояние здоровья и поведение субъекта. Иммунный ответ может включать без ограничения индукцию клеточного и/или гуморального иммунитета.

"Иммуногенный" обозначает вызывающий иммунный или антигенный ответ. Таким образом, иммуногенная композиция может представляет собой иммуногенную композицию, которая вызывает иммунный ответ.

"Иммуностимулирующий комплекс" или ISCOM относится к специфической структуре, которая образуется, когда Quil A комбинируют с холестерином и фосфолипидами.

"Иммуностимулирующая молекула" относится к молекуле, которая вызывает иммунный ответ.

"Липиды" относится к любой группе органических соединений, включая жиры, масла, воски, стеролы и триглицериды, которые нерастворимы в воде, но растворимы в неполярных органических растворителях, маслянистые на ощупь, и вместе с углеводородами и белками составляют основной структурный материал живых клеток.

"Липофильный" обозначает демонстрирующий значительное сродство к липидам или растворимость в липидах.

"Липосома" относится к микроскопической сферической частице, образуемой липидным бислоем, закрывающим водный компартмент, используемой в медицине для того, чтобы переносить лекарство, антиген, вакцину, фермент или другое вещество к клеткам-мишеням в организме.

"Медицинский агент" относится к любому агенту, который полезен для предупреждения, лечения или улучшения состояния при заболевании, или предупреждения некоторого физиологического состояния или проявления.

"Парентеральное введение" относится к введению вещества, такого как вакцина, в организм субъекта при помощи или путем, который не включает пищеварительный тракт. Парентеральное введение включает подкожное, внутримышечное, чрескожное, внутрикожное, интраперитонеальное, внутриглазное и внутривенное введение.

"Фармацевтически приемлемый" относится к веществам, которые находятся в объеме тщательной медицинской оценки, подходящим для применения в контакте с тканями субъекта без излишней токсичности, раздражения, аллергического ответа и т.п, сопоставимым с приемлемым отношением выгоды к риску, и эффективным для их предполагаемого применения.

"Реактогенность" относится к побочным действиям, вызываемым у субъекта в ответ на введение адъюванта, иммуногенной или вакцинной композиции. Они могут проявляться в области введения, и обычно оцениваются с точки зрения развития множества симптомов. Эти симптомы могут включать воспаление, покраснение и абсцесс. Их также оценивают с точки зрения частоты, длительности и тяжести. "Низкая" реакция может, например, включать набухание, которое только обнаруживается путем пальпации, но не глазами, или может иметь небольшую длительность. Более тяжелая реакция может представлять собой, например, реакцию, которая видна глазами или имеет большую длительность.

"Комнатная температура" обозначает температуру от 18 до 25°C.

"Сапонин" относится к группе поверхностно-активных гликозидов растительного происхождения, состоящих из гидрофильной области (обычно несколько цепей сахара) в ассоциации с гидрофобной областью стероидной или тритерпеноидной структуры.

"Стероиды" относится к любой группе органических соединений, относящихся к биохимическому классу липидов, которые легко растворимы в органических растворителях и слаборастворимы в воде. Стероиды содержат систему из четырех конденсированных колец, из которых три кольца представляют собой конденсированные кольца циклогексанов (шестиуглеродные) плюс четвертое кольцо представляет собой циклопентан (пятиуглеродное).

"Стеролы" относятся к соединениям у животных, которые биологически продуцируются из терпеноидных предшественников. Они содержат стероидную кольцевую структуру, имеющую гидроксильную (ОН) группу, обычно присоединенную к углероду-3. Углеводородная цепь заместителя жирной кислоты варьирует по длине, обычно от 16 до 20 атомов углерода, и может быть насыщенной или ненасыщенной. Стеролы обычно содержат одну или более чем одну двойную связь в кольцевой структуре и также множество заместителей, присоединенных по кольцам. Стеролы и их эфиры с жирной кислотой по существу нерастворимы в воде.

"Субъект" относится к любому животному, для которого желательно введение адъювантной композиции. Он включает млекопитающих и отличных от млекопитающих особей, включая приматы, домашний скот, домашних животных, лабораторных животных, содержащихся в неволе диких животных, птиц (включая в яйцах), рептилий и рыб. Таким образом, этот термин включает обезьян, людей, свиней; крупный рогатый скот, овец, коз, лошадей, мышей, крыс, морских свинок, хомяков, кроликов, кошек, собак, кур, индюшек, уток, других домашних птиц, лягушек и ящериц, но не ограничивается ими.

"TCID₅₀" относится к "дозе, инфекционной для культуры тканей" и определяется как разведение вируса, которое требуется для инфицирования 50% данной партии инокулированных клеточных культур. Различные способы могут быть использованы для расчета TCID₅₀, включающие способ Спирмана-Карбера (Spearmann-Karber), использованный в данном описании. Описание способа Спирмана-Карбера смотри в B.W. Many & Н.О. Kangro, Virology Methods Manual, p.25-46 (1996).

"Терапевтически эффективное количество" относится к количеству антигена или вакцины, которое будет вызывать иммунный ответ у субъекта, получающего антиген или вакцину, который является подходящим для предупреждения или уменьшения признаков или симптомов заболевания, включая неблагоприятные для здоровья побочные эффекты или его осложнения, вызванного инфицированием патогеном, таким как вирус или бактерия. Может быть индуцирован гуморальный иммунитет или клеточный иммунитет или как гуморальный, так и клеточный иммунитет. Можно оценивать иммунный ответ животного на вакцину, например, опосредованно, посредством измерения титров антитела, анализов пролиферации лимфоцитов, или путем непосредственного контроля признаков и симптомов после сенсибилизации штаммом дикого типа. Защитный иммунитет, обеспечиваемый вакциной, можно оценивать путем измерения, например, по уменьшению клинических признаков, таких как смертность, заболеваемость, температурные показатели, общее физическое состояние и общее состояние здоровья и поведение субъекта. Количество вакцины, являющееся терапевтически эффективным, может варьировать в зависимости от конкретного используемого адъюванта, конкретного используемого антигена или состояния субъекта и может быть определено специалистом в данной области техники.

"Лечение" относится к предупреждению расстройства, состояния или заболевания, в отношении которого применяется этот термин, или к предупреждению или уменьшению одного или более чем одного симптома такого расстройства, состояния или заболевания.

"Процесс лечения" относится к акту "лечения", определенного выше.

"Тритерпеноиды" относятся к большому и разнообразному классу встречающихся в природе органических молекул, происходящих из шести пятиуглеродных изопреновых (2-метил-1,3-бутадиеновых) мономеров, которые могут быть собраны и модифицированы тысячами путей. Большая часть представляет собой мультициклические структуры, которые отличаются друг от друга функциональными группами и их основными углеродными скелетами. Эти молекулы могут быть найдены во всех классах живых существ.

"Вакцина" относится к композиции, которая включает антиген, как здесь определено. Введение вакцины субъекту приводит в результате к иммунному ответу, как правило против одного или более чем одного специфического заболевания. Количество вакцины, которое является терапевтически эффективным, может варьировать в зависимости от конкретного используемого антигена или состояния субъекта, и может быть определено специалистом в данной области техники.

Компоненты композиций

Тритерпеноиды и CpG

Тритерпеноиды, подходящие для применения в адъювантных композициях, могут происходить из множества источников, растительного происхождения или синтетических эквивалентов, включая Quillaja saponaria, томатин, экстракты женьшеня, грибы и алкалоидный гликозид, структурно близкий к стероидным сапонинами, но не ограничивающихся ими. Таким образом, Тритерпеноиды, подходящие для применения в адъювантных композициях, включают сапонины, сквален и ланостерол. Количество тритерпеноидов, подходящих для применения в адъювантных композициях, зависит от природы используемого тритерпеноида. Тем не менее, они как правило используются в количестве, составляющем от приблизительно 1 мкг до приблизительно 5000 мкг на дозу. Они также используются в количестве от приблизительно 1 мкг до приблизительно 4000 мкг на дозу, от приблизительно 1 мкг до приблизительно 3000 мкг на дозу, от приблизительно 1 мкг до приблизительно 2000 мкг на дозу, и от приблизительно 1 мкг до приблизительно 1000 мкг на дозу. Они также используются в количестве от приблизительно 5 мкг до приблизительно 750 мкг на дозу, от приблизительно 5 мкг до приблизительно 500 мкг на дозу, от приблизительно 5 мкг до приблизительно 200 мкг на дозу, от приблизительно 5 мкг до приблизительно 100 мкг на дозу, от приблизительно 15 мкг до приблизительно 100 мкг на дозу, и в количестве от приблизительно 30 мкг до приблизительно 75 мкг на дозу.

Если используют сапонин, то адъювантные композиции, как правило, содержат иммунологически активную фракцию сапонина из коры Quillaja saponaria. Сапонин может представлять собой, например, Quil A или другой очищенный или частично очищенный препарат сапонина, которые имеются в продаже. Таким образом, экстракты сапонина могут быть использованы в виде смесей или очищенных индивидуальных компонентов, таких как QS-7, QS-17, QS-18 и QS-21. В одном из воплощений Quil A имеет чистоту по меньшей мере 85%. В других воплощениях Quil A имеет чистоту по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99%.

CpG ODN представляют собой описанный недавно класс фармакотерапевтических агентов, которые характеризуются присутствием неметилированного CG динуклеотида в специфических контекстах основной последовательности (мотив CpG). (Hansel TT, Barnes PJ (eds): New Drugs for Asthma, Allergy and COPD. Prog Respir Res. Basel, Karger, 2001, vol 31, pp 229-232, включенная сюда путем ссылки). Эти мотивы CpG не обнаруживаются в эукариотической ДНК, в которой динуклеотиды CG подвергаются супрессии и, когда присутствуют, обычно метилированы, но присутствуют в бактериальной ДНК, которой они придают иммуностимулирующие свойства. Эти иммуностимулирующие свойства включают индукцию ответа Th1-типа со значительным высвобождением IFN-A, IL-12, и IL-18. CpG ODN (длиной 18-24 п.о.) обладают иммуномодулирующими свойствами, близкими к бактериальной ДНК. Белки клеточной поверхности могут захватывать эти молекулы с различными результатами. Тем не менее, с носителем, таким как QCDC, QCDCR и другими комбинациями, цитированными в этом патенте, иммуномодулирующие свойства и захват CpG значительно усиливается.

Количество CpG для применения в адъювантных композициях зависит от прир