Средство против ожирения, питание или напиток против ожирения, улучшающее толерантность к глюкозе средство и питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе

Средство против ожирения, питание или напиток против ожирения, улучшающее толерантность к глюкозе средство и питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к средству против ожирения, питанию или напитку против ожирения, улучшающему толерантность к глюкозе средству и питанию или напитку для улучшения толерантности к глюкозе, содержащему определенные штаммы Bifidobacterium breve в качестве активного ингредиента.

Приоритет испрашивается по заявке Японии № 2009-215836 от 17 сентября 2009 года, содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Поскольку образ жизни японцев становится более западным, и старение популяции быстро продолжает расти, продолжает расти и количество пациентов с заболеваниями, связанными с образом жизни, такими как ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярные болезни и диабет. Одной из основных причин данных типов заболеваний, связанных с образом жизни, является ожирение, и важность предотвращения и лечения ожирения подчеркивают повсеместно. Кроме того, ожирение также считают нежелательным с точки зрения внешности и красоты, и диеты для предотвращения или лечения ожирения вызывают значительный интерес.

На фоне повышенного внимания к ожирению, диагностический критерий, известный как "метаболический синдром", определяют как повышение вероятности будущего развития связанного с образом жизни заболевания, и в целях предотвращения и/или лечения метаболического синдрома на медицинских осмотрах применяют измерение окружности талии.

Примеры способов, общепринято применяемых для лечения ожирения, включают диетические (диетические ограничения и голодание) способы лечения на основе физических упражнений (способствующие потреблению энергии посредством упражнений) и способы лечения на основе лекарственных средств. Примеры лекарственных средств, применяемых в настоящее время в способах лечения на основе лекарственных средств, включают орлистат, ингибирующий абсорбцию жира в кишечнике (такой как лекарственные средства "Ксеникал" (зарегистрированная торговая марка), производимое Roche Ltd., и "Алли" (зарегистрированная торговая марка), производимое GlaxoSmithKline plc.)), и акарбозу, являющуюся ингибитором гликолитического фермента (α-глюкозидазы) (такую как лекарственное средство "Глюкобай" (зарегистрированная торговая марка), производимое Bayer AG).

Однако чрезмерное применение данных способов лечения может вызывать ряд проблем, включая нарушение здоровья пациента, повышение веса по причине возобновления симптомов и сложность достижения непрерывного или долговременного лечения. В частности, в случае способов лечения на основе лекарственных средств проблемой также могут являться побочные эффекты. Кроме того, лекарственные средства, применяемые в способах лечения на основе лекарственных средств, являются фармацевтическими лекарственными средствами, и их не так легко применять.

Ранее сообщали об исследованиях ингибирования ожирения с применением микроорганизмов, таких как лактобактерии. Например, в непатентном документе 1 сообщают, что экзогенно гиперхолистеринемическим (ExHC) крысам, крысам с ожирением (Wistar fatty) и мышам с ожирением и диабетом (KK-A^y) вводили питание, содержащее 10% живых высушенных Bifidobacterium bifidum G9-1, снижали уровни триацилглицерина и холестерина в крови и печени. Однако при применении указанного выше бактериального штамма для получения указанных выше эффектов питание необходимо смешивать с большим количеством бактерий, и соблюдение режима и непрерывное поедание их в эффективном количестве затруднительно.

Кроме того, известно, что конъюгированная линолевая кислота (CLA) проявляет физиологическую активность, включая действие против ожирения. Например, в непатентном документе 2 сообщают об исследовании на животных, в котором при смешивании CLA с питанием в количествах 0, 0,25, 0,5 и 1% выявляли, что при количествах 0,5% или выше масса тела и телесный жир снижались в зависимости от концентрации.

В отношении CLA известно, что бактерии, такие как бактерии рода Bifidobacterium, обладают способностью превращать линолевую кислоту (LA) в CLA (функция превращения в CLA), и предлагаются различные способы с применением данных бактерий. Например, в патентном документе 1 описывают, что все из Bifidobacterium breve CBG-C2, Bifidobacterium pseudocatenulatum CBG-C4 и Enterococcus faecium CBG-C5 проявляют повышенную функциональность относительно превращения CLA, и в таблице 1 указано, что Bifidobacterium breve CBG-C2 превращает LA в CLA с высоким коэффициентом превращения в CLA 54,7%. Кроме того, в патентном документе 1 также описывают применение производящих CLA композиций, содержащих данные бактериальные штаммы, в качестве активных ингредиентов для предотвращения или лечения заболеваний, ингибируемых CLA (таких как злокачественные новообразования, атеросклероз, диабет и ожирение).

Однако, при введении CLA или бактерий, обладающих повышенной функцией превращения в CLA, в качестве части диеты, нацеленной на лечение ожирения или предотвращение ожирения, существует опасность возникновения побочных эффектов.

В качестве примера данных побочных эффектов CLA в непатентном документе 3 сообщают, что при смешивании 1% CLA с кормом для мышей и введении в течение более 8 месяцев, наблюдали атрофию жировой ткани, повышение уровня инсулина и снижение толерантности к глюкозе. Кроме того, в непатентном документе 4 сообщают, что при приеме людьми приблизительно 3 г CLA ежедневно в течение продолжительного периода толерантность к глюкозе обладает тенденцией к ухудшению, о чем свидетельствует снижение чувствительности к инсулину и повышение маркеров окисления в моче.

Кроме того, среднее количество потребляемой японцами LA составляет приблизительно 11 г (смотри непатентный документ 5), и, таким образом, при введении бактерий, обладающих повышенной функцией превращения в CLA, CLA будет продуцироваться в больших количествах. Например, если 11 г LA превращают в CLA с указанным выше коэффициентом превращения 54,7%, то получают 6,02 г CLA. Если таким образом получать большое количество CLA, то возникает опасность возникновения указанных выше побочных эффектов.

ДОКУМЕНТЫ УРОВНЯ ТЕХНИКИ

ПАТЕНТНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

[Патентный документ 1] Опубликованный перевод PCT № 2005-522216 на японский язык.

НЕПАТЕНТНЫЕ ДОКУМЕНТЫ

[Непатентный документ 1] "Effects of bifidobacteria on obese and diabetic animal models", Igaku no ayumi [Progress in Medicine], 205(4), 273 to 274 (2003).

[Непатентный документ 2] "Conjugated linoleic acid rapidly reduces body fat content in mice without affecting energy intake", The American Journal of Physiology, 25 276, 1172 to 1179(1999).

[Непатентный документ 3] "Conjugated linoleic acid supplementation reduces adipose tissue by apoptosis and develops lipodystrophy in mice", DIABETES, 49, 1534 to 1541 (2000).

[Непатентный документ 4] "Effects of cis-9, trans-11 conjugated linoleic acid 5 supplementation on insulin sensitivity, lipid peroxidation, and proinflammatory markers in obese men", The American Journal of Clinical Nutrition, 80, 279 to 283 (2004).

[Непатентный документ 5] "The current state of linoleic acid ingestion", Shishitsu Eiyougaku [Lipid Nutrition], 11, 25 to 31 (2002).

ЗАДАЧИ, РЕШАЕМЫЕ ИЗОБРЕТЕНИЕМ

Принимая во внимание указанные выше обстоятельства, целью настоящего изобретения является предоставление средства против ожирения и улучшающего толерантность к глюкозе средства, эффективных для предотвращения или лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, а также обладающих повышенной безопасностью, а также предоставление питания или напитков, содержащих данные средства.

СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ЗАДАЧ

В результате интенсивных исследований авторы настоящего изобретения обнаруживали, что Bifidobacterium breve, проявляющий низкий коэффициент превращения в конъюгированную линолевую кислоту, обладает действием против ожирения и улучшающим толерантность к глюкозе действием, независящими от конъюгированной линолевой кислоты, и на основе этих данных они способны осуществлять настоящее изобретение.

Для достижения указанной выше цели, настоящее изобретение принимает описанные ниже формы.

(1) Средство против ожирения, содержащее в качестве активного ингредиента Bifidobacterium breve, для которого коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту, определяемый описываемым ниже способом, составляет не более 10%.

Бактериальные клетки указанного выше Bifidobacterium breve суспендировали при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, и количество получаемой конъюгированной линолевой кислоты измеряли после инкубации в течение 48 часов при 37°C, и коэффициент превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту определяли по формуле ниже.

Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100

(2) Средство против ожирения по (1), где Bifidobacterium breve является Bifidobacterium breve MCC 1274 и/или Bifidobacterium breve ATCC 15700.

(3) Питание или напиток против ожирения, содержащие средство против ожирения по (1) или (2).

(4) Улучшающее толерантность к глюкозе средство, содержащее в качестве активного ингредиента Bifidobacterium breve, для которого коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту, определяемый описываемым ниже способом, составляет не более 10%.

Бактериальные клетки указанного выше Bifidobacterium breve суспендировали при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, и количество получаемой конъюгированной линолевой кислоты измеряли после инкубации в течение 48 часов при 37°C, и коэффициент превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту определяли по формуле ниже.

Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота) × 100

(5) Улучшающее толерантность к глюкозе средство по (4), где Bifidobacterium breve является Bifidobacterium breve MCC 1274 и/или Bifidobacterium breve ATCC 15700.

(6) Питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе, содержащие улучшающее толерантность к глюкозе средство по (4) или (5).

Кроме того, настоящее изобретение относится к указанным ниже аспектам.

<1> Бактерия рода Bifidobacterium для применения в лечении ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, где

бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<2> Применение бактерии рода Bifidobacterium для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, где

бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<3> Применение бактерии рода Bifidobacterium для получения композиции и, предпочтительно, фармацевтической композиции для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, где

бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<4> Фармацевтическая композиция, содержащая бактерию рода Bifidobacterium, применяемую для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, и фармацевтически приемлемый носитель, причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<5> Применение фармацевтической композиции, содержащей бактерию рода Bifidobacterium и фармацевтически приемлемый носитель, для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе, причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<6> Бактерия рода Bifidobacterium по п. <1>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<7> Бактерия рода Bifidobacterium по п. <6>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<8> Применение бактерии рода Bifidobacterium по п. <2> или <3>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<9> Применение бактерии рода Bifidobacterium по п. <8>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<10> Фармацевтическая композиция по п. <4>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<11> Фармацевтическая композиция по п. <10>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<12> Применение фармацевтической композиции по п. <5>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<13> Применение фармацевтической композиции по п. <12>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<14> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство, содержащее бактерию рода Bifidobacterium в качестве активного ингредиента, где

бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<15> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по п. <14>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<16> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по п. <15>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<17> Питание или напиток против ожирения или питание или напиток для улучшения толерантности к глюкозе, содержащие средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по любому из пп. с <14> по <16>.

<18> Бактериальный штамм, являющийся Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175).

<19> Бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для применения в лечении ожирения или улучшении толерантности к глюкозе.

<20> Применение бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

<21> Применение бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для получения композиции для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

<22> Фармацевтическая композиция, содержащая бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, для применения в лечении ожирения или улучшении толерантности к глюкозе, и фармацевтически приемлемый носитель.

<23> Применение фармацевтической композиции, содержащей бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, и фармацевтически приемлемый носитель, для лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе.

<24> Средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство, содержащее в качестве активного ингредиента бактериальный штамм, выбранный из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<25> Способ лечения или предотвращения ожирения, включающий введение нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму бактерии рода Bifidobacterium, в количестве, эффективном для лечения или предотвращения ожирения,

причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<26> Способ лечения или предотвращения ожирения по п. <25>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<27> Способ лечения или предотвращения ожирения по п. <26>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<28> Способ улучшения толерантности к глюкозе, включающий введение нуждающемуся в улучшении толерантности к глюкозе индивидууму бактерии рода Bifidobacterium, в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе, причем бактерия рода Bifidobacterium проявляет коэффициент превращения линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту не более 10%, коэффициент превращения, определяемый суспендированием бактериальных клеток бактерии рода Bifidobacterium при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную линолевую кислоту в концентрации 500 мкг/мл, проведением инкубации в течение 48 часов при 37°C с последующим измерением количества получаемой конъюгированной линолевой кислоты и затем вычислением коэффициента превращения (%) линолевой кислоты в конъюгированную линолевую кислоту по формуле: Коэффициент превращения (%) = (получаемая конъюгированная линолевая кислота/добавляемая линолевая кислота)×100.

<29> Способ улучшения толерантности к глюкозе по п. <28>, где бактерия рода Bifidobacterium является Bifidobacterium breve.

<30> Способ улучшения толерантности к глюкозе по п. <29>, где Bifidobacterium breve выбрана из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700.

<31> Способ лечения или предотвращения ожирения, включающий введение нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, в количестве, эффективном для лечения или предотвращения ожирения.

<32> Способ улучшения толерантности к глюкозе, включающий введение нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму бактериального штамма, выбранного из группы, состоящей из Bifidobacterium breve MCC 1274 (FERM BP-11175) и Bifidobacterium breve ATCC 15700, в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе.

ТЕХНИЧЕСКИЙ РЕЗУЛЬТАТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к средству против ожирения и улучшающему толерантность к глюкозе средству, эффективному для предотвращения или лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе и также обладающему повышенной безопасностью, а также относится к питанию или напиткам, содержащим данные средства. Кроме того, настоящее изобретение относится к бактерии рода Bifidobacterium и, в частности, Bifidobacterium breve, эффективной для предотвращения или лечения ожирения или улучшения толерантности к глюкозе или резистентности к инсулину, а также обладает повышенной безопасностью, а также фармацевтической композиции, содержащей бактерию рода Bifidobacterium.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 является графиком, иллюстрирующим тенденции повышения массы тела для контрольной группы и группы, которой вводят Bifidobacterium breve ATCC 15700, в тестовом примере 2.

Фиг. 2 является графиком, иллюстрирующим тенденции повышения массы тела для контрольной группы и группы, которой вводят Bifidobacterium breve MCC 1274, в тестовом примере 2.

Фиг. 3 является графиком, иллюстрирующим результаты измерения массы эпидидимальной жировой ткани в тестовом примере 2.

Фиг. 4 является графиком, иллюстрирующим результаты измерения величины HOMA-IR (Гомеостатическая модель оценки резистентности к инсулину) в тестовом примере 2.

ВАРИАНТЫ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Bifidobacterium breve (далее в настоящем документе часто сокращаемая как "B. breve"), принадлежащая роду Bifidobacterium, применяемому в настоящем изобретении, является B. breve, для которой коэффициент превращения линолевой кислоты (LA) в конъюгированную линолевую кислоту (CLA) (далее в настоящем документе также обозначаемый как "коэффициент превращения в CLA"), определяемый описываемым ниже способом, составляет не более 10%.

Бактериальные клетки указанного выше B. breve суспендируют при концентрации 2×10⁷ КОЕ/мл в жидкой среде, содержащей добавленную LA в концентрации 500 мкг/мл, и количество получаемой CLA измеряют после инкубации в течение 48 часов при 37°C, и коэффициент превращения (%) в CLA определяют по формуле ниже.

Коэффициент превращения (%) = (количество получаемой CLA/количество добавленной LA)×100

Указанное выше "количество получаемой CLA" можно измерять, например, с применением описываемого ниже способа.

Во-первых, после 48 часов инкубации указанную выше жидкую среду подвергают разделению центрифугированием.

Удаляют супернатант, к супернатанту добавляют объем изопропилового спирта, равный двум объемам супернатанта, и перемешивают, затем в смесь добавляют объем гексана, равный 1,5 объемам супернатанта, и после перемешивания в течение 3 минут смесь оставляют отстаиваться, и удаляют слой гексана. Коэффициент поглощения слоя гексана измеряют при 233 нм, и концентрацию CLA (мкг/мл) в слое гексана определяют на основе сравнения со стандартными материалами (цис-9,транс-11-конъюгированной линолевой кислотой), и вычисляют количество CLA (мкг), содержащейся в указанном выше супернатанте.

При этом к полученному после удаления супернатанта остатку добавляют количество дистиллированной воды, в 5 раз превышающее количество остатка, и перемешивают, таким образом, получая суспензию. В суспензию добавляют объем изопропилового спирта, равный двум объемам суспензии, и перемешивают, в смесь добавляют объем гексана, равный 1,5 объемам суспензии, и после перемешивания в течение 3 минут смесь оставляют отстаиваться, и удаляют слой гексана. Концентрацию CLA (мкг/мл) в слое гексана определяют тем же способом, что указано выше, и вычисляют количество CLA (мкг), содержащейся в остатке.

Общие количества CLA, содержащейся в супернатанте и остатке, записывают как "количество получаемой CLA".

Жидкая среда может являться любой средой, подходящей для культивирования B. breve, и ее можно соответствующим образом выбирать из общепринятых жидких сред. Конкретные примеры включают среду MRS (de Man Rogossa Sharpe), ABCM (среда для культивирования анаэробных бактерий) и среда RCA (усиленный клостридиальный агар).

В изложенном выше описании приводят пример, в котором в качестве стандартного материала применяют цис-9,транс-11-конъюгированную линолевую кислоту, но вычисляемые количества CLA, по существу, являются теми же даже при применении другого изомера, такого как транс-10,цис-12-конъюгированная линолевая кислота.

Коэффициент превращения в CLA является индикатором величины функции превращения в CLA (способности превращать LA в CLA), которой обладает B. breve.

B. breve, проявляющий коэффициент превращения в CLA не более 10% (далее в настоящем документе также обозначаемый как "B. breve с низким превращением в CLA"), обладает независящим от CLA действием против ожирения.

"Действие против ожирения" описывает действие, предотвращающее или снижающее ожирение посредством супрессии повышения массы и/или супрессии повышения телесного жира.

В настоящем изобретении термин "ожирение" относится не только к простому состоянию наличия большой массы тела, но также и к состоянию, при котором доля жировой ткани среди структурных компонентов тела является аномально большой.

В последние годы сообщали, в терминах накопления подкожного жира и висцерального жира, что заболевания зрелого возраста, такие как высокое артериальное давление, гиперлипидемия и диабет, больше связаны с ожирением с накоплением висцерального жира, при котором жир накапливается между органами, чем с ожирением с накоплением подкожного жира, при котором жир накапливается в подкожной ткани. Как показано в тестовом примере 2 ниже, B. breve с низким превращением в CLA обладает ингибирующим повышение массы тела эффектом и, в частности, обладает эффектом ингибирования накопления висцерального жира. Таким образом, питание и напитки, содержащие средство против ожирения и улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению, эффективны для предотвращения и лечения указанных выше заболеваний.

Кроме того, поскольку B. breve с низким превращением в CLA обладает ограниченной способностью превращать LA в CLA, существует минимальная опасность возникновения вызываемых CLA побочных эффектов, таких как атрофия жировой ткани, повышение уровня инсулина и снижение толерантности к глюкозе. Другими словами, если, как описано в указанном выше непатентном документе 5, среднее количество потребляемой японцами LA составляет приблизительно 11 г, и коэффициент превращения в CLA является высоким, то LA превращается в CLA in vivo, и существует значительная опасность возникновения вызываемых CLA побочных эффектов, но, поскольку применяемый настоящем изобретении B. breve проявляет низкий коэффициент превращения в CLA, предполагают, что вызываемые CLA побочные эффекты не возникнут, что делает лечение чрезвычайно безопасным.

Таким образом, можно безопасно принимать средство против ожирения по настоящему изобретению и можно достигать действия против ожирения смешиванием средства против ожирения с питанием или напитком и затем введением в количестве, эффективном количества питания или напитка пациенту с ожирением или нуждающемуся в диете здоровому человеку или домашнему животному ежедневно или в течение продолжительного периода времени, если потребуется.

Кроме того, B. breve с низким превращением в CLA не вызывает аномальной толерантности к глюкозе, являющейся одним из известных побочных эффектов CLA, и, как показано в тестовом примере 2 ниже, по существу, обладает улучшающим толерантность к глюкозе действием и улучшающим резистентность к инсулину действием.

Таким образом, можно безопасно принимать улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению и можно достигать улучшающего толерантность к глюкозе действия и улучшающего резистентность к инсулину действия смешиванием улучшающего толерантность к глюкозе средства с питанием или напитком и затем введением в количестве, эффективном количества питания или напитка пациенту с диабетом или нуждающемуся в улучшении толерантности здоровому человеку или домашнему животному ежедневно или в течение продолжительного периода времени, если потребуется.

Применяемый в настоящем изобретении B. breve с низким превращением в CLA может являться любым B. breve, для которого коэффициент превращения в CLA составляет не более 10%, и например, новый штамм B. breve, выделенный и идентифицированный из образца, такого как экскременты малолетнего ребенка, или общепринятый штамм B. breve можно подвергать измерению коэффициента превращения в CLA с применением описанного выше способа, и затем соответствующим образом можно выбирать любой штамм, для которого измеренный коэффициент превращения составляет 10% или менее.

Примеры штаммов B. breve с низким превращением в CLA включают B. breve MCC 1274 и Β breve ATCC 15700.

B. breve MCC 1274 является принадлежащим роду Bifidobacterium бактериальным штаммом, полученным и идентифицированным авторами настоящего изобретения с применением описываемого ниже способа и хранящимся в Международном хранилище патентованных организмов Национального института прогрессивной промышленной науки и технологии (Central 6, 1-1-1 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, Japan (почтовый индекс: 305-8566)) на 25 августа 2009 года (учетный номер: FERM BP-11175).

(Получение и идентификация B. breve MCC 1274)

Применяя экскременты японского ребенка в качестве образца, образец разбавляли анаэробным разбавителем (разбавителем, описанным на странице 322 "Chounaikin no Sekai" [The World of Enteric Bacteria] (Tomotari Mitsuoka, опубликованного Soubunsha Co., Ltd., 1980), наносили на плоскую пластину агаровой среды BL (описанной на странице 319 "Chounaikin no Sekai") и затем инкубировали в анаэробных условиях при 37°C в течение 72 часов. Среди получаемых колоний проявляющие морфологические характеристики Bifidobacterium штаммы являлись грамположительными, и колонии, содержащие при микроскопическом исследовании нанесенного образца палочковидные, булавовидные или Y-образные бактериальные клетки, собирали и наносили полосками на агаровую среду BL, и затем повторяли инкубацию в анаэробных условиях с применением того же способа, как описано выше, для получения чистых выделенных бактериальных штаммов. Указанный выше бактериальный штамм называли B. breve MCC 1274.

Исследовали бактериологические свойства B. breve MCC 1274, включая форму клеток, подвижность, спорообразование, окрашивание по Граму, активность каталазы, газообразование при поглощении глюкозы и ферментацию сахаров. Оценку ферментации сахаров осуществляли с применением набора API 50CH (производимого bioMerieux, Japan) с определениями, производимыми по способу, описываемому в предоставляемой вместе с набором инструкции производителя. Другими словами, после инкубации в течение ночи бактериальную жидкость применяли для высевания на каждый из субстратов, затем субстраты инкубировали при 37°C внутри перчаточного бокса с анаэробными условиями и на седьмой день инкубации определяли состояние ферментации сахара каждого из субстратов. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1Бактериологические свойства Bifidobacterium breve MCC 1274
		MCC 1274
1	Форма клеток	Плеоморфные палочки
2	Подвижность	Отсутствует
3	Спорообразование	Отсутствует
4	Окрашивание по Граму	Положительное
5	Активность каталазы	-
6	Газообразование при поглощении глюкозы	-
7	Ферментация сахара(1) Контроль(2) Глицерин(3) Эритритол(4) D-Арабиноза(5) L-Арабиноза(6) Рибоза(7) D-Ксилоза	---±-+-
	(8) L-Ксилоза(9) Адонитол(10) β-метилксилозид(11) Галактоза(12) D-Глюкоза(13) D-Фруктоза(14) D-Маннит(15) L-Сорбоза(16) Рамноза(17) Дульцит(18) Инозитол(19) Маннит(20) Сорбит(21) α-Метил-D-манноза(22) α-Метил-D-глюкоза(23) N-ацетилглюкозамин(24) Амигдалин(25) Арбутин(26) Эскулин(27) Салицин(28) Целлобиоза(29) Мальтоза(30) Лактоза(31) Мелибиоза(32) Сахароза(33) Трегалоза(34) Инулин(35) Мелецитоза(36) D-рафиноза(37) Амидон(38) Гликоген(39) Ксилит(40) β-Генциобиоза(41) D-Тураноза(42) D-Ликсоза	---++++----++±++++++++++++-+++-+++-

(43) D-Тагатоза(44) D-Фукоза(45) L-Фукоза(46) D-арабит(47) L-арабит(48) Глюконат(49) 2-кето-глюконат(50) 5-кето-глюконат

--+----±

Затем для исследования генетических характеристик B. breve MCC 1274 идентифицировали последовательность генов рРНК 16S указанного выше бактериального штамма с применением общепринятых способов. Посредством определения последовательности генов рРНК 16S B. breve MCC 1274 с применением анализа BLAST для осуществления поиска гомологии последовательности в базе данных U.S. National Center for Biotechnology Information (NCBI) выявляли 99% гомологии со стандартным штаммом B. breve, известным как B. breve CM 1192^T, что свидетельствует о том, что штамм являлся Bifidobacterium breve.

Указанные выше результаты подтверждали, что Bifidobacterium breve MCC 1274 обладал бактериологическими свойствами Bifidobacterium breve и являлся бактериальным штаммом, принадлежащим к роду Bifidobacterium breve.

B. breve с низким превращением в CLA, включенный в средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению в качестве активного ингредиента, может являться одним бактериальным штаммом или двумя или более штаммами.

Кроме того, средство против ожирения или улучшающее толерантность к глюкозе средство по настоящему изобретению можно составлять только из указанного выше активного ингредиента, или оно может являться композицией или фармацевтической композицией, содержащей активный ингредиент и другие необязательные компоненты помимо активного ингредиента. Не существует конкретных ограничений данных необязательных компонентов при условии, что они являются фармацевтически приемлемыми, и можно включать любые добавки (такие как описываемые ниже фармацевтические носители), как правило, добавляемые в фармацевтические композиции.

Настоящее изобретение относится к способу лечения или предотвращения ожирения, включающему введение B. breve по настоящему изобретению нуждающемуся в лечении или предотвращении ожирения индивидууму в количестве, эффективном для лечения или предотвращения ожирения.

Кроме того, настоящее изобретение также относится к способу улучшения толерантности к глюкозе, включающему введение B. breve по настоящему изобретению нуждающемуся в улучшении толерантности к глюкозе индивидууму в количестве, эффективном для улучшения толерантности к глюкозе.

В настоящем описании "лечение" ожирения относится к вве