Фармацевтическая композиция, средство для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии и способ его получения

Фармацевтическая композиция, средство для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии и способ его получения

Реферат

Изобретение относится к медицине и фармацевтической промышленности и, более конкретно, к фармацевтической композиции, средству и способу ее получения для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии и может быть использовано для производства на их основе препарата в лекарственной форме таблеток, таблеток, покрытых пленочной оболочкой, или капсул.

Известная фармацевтическая композиция, содержащая активные вещества таурин, экстракт травы пустырника, экстракт плодов боярышника и вспомогательные вещества, описана в патенте Украины как средство Кратал для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы (патент Украины №39141, МПК А61К 31/195, 35/78, 2001). Известная композиция предназначена для получения гранул, содержащих таурин и густые экстракты плодов боярышника и пустырника, полученные путем влажной грануляции с картофельным крахмалом с последующей их сушкой.

Известное средство Кратал для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы, содержащее активные вещества - таурин, экстракт травы пустырника, экстракт плодов боярышника и вспомогательные вещества (патент Украины №39141, МПК А61К 31/195, 35/78, 2001). Состав гранул Кратала подобран при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Таурин	85,0-86,8
Экстракт травы пустырника густой	8,3-8,7
Экстракт плодов боярышника густой	4,1-4,4
Вспомогательные вещества	остальное

Комбинированное средство гранулы Кратала в силу своих фармако-терапевтических свойств обладает мягким кардиотоническим действием, антиангинальной, коронаролитической и антиаритмической активностью. Механизм фармакотерапевтического действия препарата связан с ингибирующим влиянием на ренин-ангиотензиновую и калликреин-кининовую систему с одновременным положительным влиянием на продукцию цАМФ и с ингибированием процессов перекисного окисления липидов.

Однако гранулы имеют неприятные органолептические свойства (чрезвычайно выраженную горечь) при их пероральном применении. Дозирование лекарственного средства в гранулах также неоднозначно и затруднено не только для взрослых, но особенно при назначении детям.

Весьма проблематичной является технология получения этой композиции, поскольку влажная грануляция крахмальным клейстером всех активных компонентов с целью получения гранул, последующие операции их сушки, затем сухого гранулирования путем перетирки через сита и, наконец, классификация гранул - довольно энергозатратные и долговременные операции. Кроме этого применение крахмального клейстера как агента для гранулирования легкорастворимых в воде активных ингредиентов - таурина и густых экстрактов растительных субстанций плодов боярышника (Crataegus janguinca) и травы пустырника (Leonurus cardiaca L.), является довольно трудно воспроизводимой технологической операцией.

Важной фармацевтической проблемой для Кратала остается подбор надежной блистерной упаковки вследствие значительной гигроскопичности этого препарата. Широко применяемый блистер на основе поливинилхлоридной пленки с алюминиевой подложкой не всегда является надежным средством в качестве гидробарьера для сохранности таких лекарственных средств, как Кратал, в течение длительного времени их хранения (более 1 года, фармакопейные требования) даже в узком диапазоне показателей влажности. В такой упаковке Кратал даже при комнатной температуре и с влажностью воздуха 60-70% не выдерживает 2-2,5 месячного срока хранения. В итоге таблетки приобретают темно-коричневый цвет и становятся эластичными, а при легком механическом воздействии при извлечении из блистера подвергаются деформации, подобно резине.

В соответствии с патентом UA 39141 гранулы Кратала предназначаются для лечения сердечно-сосудистой системы, что является весьма широким определением возможностей медицинского применения этого лекарственного средства с неоднозначностью понимания его терапевтической эффективности. В Инструкции по медицинскому применению для препарата Кратал производства НПЦ «Борщаговский химфармзавод» (регистрация UA 3866/01/01 до 29.10.2015 г.) показаниями в лечении являются «нейроциркуляторные дистонии, в составе комбинированной терапии при хронической ИБС, пострадиационный синдром».

В основу изобретений положена задача создания такой фармацевтической композиции, средства и способа его получения для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии, в которых выбором нового количественного и качественного состава компонентов в композиции и средстве на ее основе, и новыми условиями выполнения операций в способе обеспечивалась бы коррекция по отношению составляющих метаболический синдром - митохондриальных биоэнергетических процессов сердечно-сосудистой системы, профилактика и лечение диабетической нефропатии.

Поставленная задача решается тем, что в фармацевтической композиции для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии, содержащей активные вещества таурин, экстракт травы пустырника, экстракт плодов боярышника и вспомогательные вещества, согласно изобретению компоненты взяты при следующем соотношении масс.%:

Боярышника экстракт жидкий* или густой* или сухой	2-5
Пустырника экстракт жидкий* или густой* или сухой	6-10
Таурин	65-80
Вспомогательные вещества	остальное

* - (в пересчете на сухое вещество)

Кроме того, сухие экстракты боярышника и пустырника введены в состав в виде комплекса со вспомогательными веществами.

Целесообразно, чтобы средство для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии, содержащее активные вещества таурин, экстракт травы пустырника, экстракт плодов боярышника и вспомогательные вещества, согласно изобретению содержало фармацевтическую композицию при следующем соотношении компонентов, масс.%:

Боярышника экстракт жидкий* или густой* или сухой	2-5
Пустырника экстракт жидкий* или густой* или сухой	6-10
Таурин	65-80
Вспомогательные вещества	остальное

* - (в пересчете на сухое вещество)

Кроме того, в качестве вспомогательных веществ выбраны вещества, выполняющие функции связующих материалов, агентов, вызывающих дезинтеграцию, и материалов, способствующих скольжению и смазке гранулята при прессовании, и материалов пленочного покрытия.

Кроме того, в качестве веществ, выполняющих функции связующих материалов, средство содержит крахмал картофельный или микрокристаллическую целлюлозу для получения гранулятов для таблетирования или капсулирования.

Кроме того, в качестве агентов, вызывающих дезинтеграцию, средство содержит кроскармелозу натрия для получения гранулятов с жидкими, или густыми, или сухими растительными экстрактами.

Кроме того, в качестве материалов, способствующих скольжению гранулята при прессовании и материалов пленочного покрытия, средство содержит коллоидный диоксид кремния.

Кроме того, в качестве материалов, способствующих смазке, средство содержит стеарат магния, вводимый в состав сухих комплексов с растительными экстрактами и при получении гранулятов для таблетирования и капсулирования.

Кроме того, средство содержит компоненты в виде лекарственных форм таблеток или таблеток, покрытых пленочной оболочкой, или капсул при суточной их дозе по таурину 100 мг на кг массы тела.

Целесообразно, чтобы способ получения средства для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии характеризовался тем, что предварительно жидкий, густой или сухой экстракты плодов боярышника и травы пустырника получали экстрагированием водным или водно-этанольным растворителем методом мацерации, или перколяции, фильтрационной экстракцией, или реперколяцией с последующим вакуумным концентрированием для густого экстракта и/или последующей сушкой для сухого экстракта, после чего их смешивали с таурином и вспомогательными веществами, выполняющими функции связующих материалов, агентов, вызывающих дезинтеграцию, и материалов, способствующих скольжению и смазке гранулята при прессовании.

Фармацевтическая разработка лекарственных форм основывалась на применении фармацевтической композиции с постоянным составом фармакологически активных компонентов при различных соотношениях вспомогательных веществ с применением различных технологических методов.

В доклинических исследованиях было установлено выраженное антиоксидантное, антигипергликемическое, гиполипидемическое сосудорасширяющее, антисклеротическое, антиагрегантное и антитоксическое действие нового препарата. Оказалось, что выявленные фармакологические свойства препарата, направленные на коррекцию метаболических нарушений, индуцированных инсулинорезистентностью и инсулиновой недостаточностью, реализуются за счет снижения оксидативного стресса и митохондриальной дисфункции, играющей ключевую роль в патогенезе вышеуказанных заболеваний. Следует отметить, что нормализация биоэнергетических процессов вследствие восстановления митохондриальной функции и оксидантного статуса происходит благодаря синергизму фармакологического действия всех компонентов препарата.

При изготовлении фармацевтической композиции в лекарственных формах таблеток или капсул применялся один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей, выполняющих функции связующих материалов, агентов, вызывающих дезинтеграцию, материалов, способствующих скольжению и смазке гранулята при прессовании.

Как связующие компоненты предпочтительными оказались картофельный крахмал и микрокристаллическая целлюлоза. Согласно настоящему изобретению количество связующего материала может изменяться в диапазоне от 1 до 50%, предпочтительно от 5 до 25%, в пересчете на общую массу таблетки. Состав таблетки или капсулы по связующим компонентам подбирался таким образом, чтобы обеспечивалась приемлемая дозированная форма для орального приема и удобная для пациента с немедленным высвобождением активных ингредиентов.

Предпочтение, как агентам, вызывающим дезинтеграцию, было отдано кроскармелозе натрия и кросповидону. Количество дезинтегранта может изменяться в диапазоне от 0,5 до 20%, предпочтительным стало от 1 до 10%.

Агентом для скольжения компонентов гранулята предпочтительным оказался коллоидный диоксид кремния. Количество компонента для скольжения может изменяться в диапазоне от 0,1 до 10%, предпочтительно выбрано от 0,25 до 5%.

В качестве смазочного компонента применялся стеарат магния. Количество смазочного компонента может изменяться в диапазоне от 0,1 до 5%, предпочтительным стало от 0,5 до 2%.

В качестве материалов для покрытия таблеток оболочкой были использованы такие продукты, как Opadry® фирмы Colorcon, Advantia® фирмы ISP, Sepifilm® фирмы Seppic, которые оказались фармацевтически приемлемыми компонентами. Количество пленочного покрытия может изменяться в диапазоне от 1 до 10%, приемлемым оказалось от 1,5 до 5%.

По данным фармацевтической разработки из-за разной степени гигроскопичности сухих экстрактов, их комплексов со вспомогательными веществами и некоторых видов таблеток требовалось применение соответствующей упаковки. При испытании лекарственных форм в различных влаго-температурных условиях при длительном времени хранения (фармакопейные требования) наиболее приемлемыми оказались пластиковые контейнеры для таблеток и капсул, блистерная упаковка типа полимер/металл, а именно композит PVC/PVDC/Alu (поливинилхлорид-поливинилдихлорид-алюминий) или Alu/Alu.

Установленная совокупность фармакотерапевтических свойств препарата позволяет прогнозировать перспективность применения в профилактике и лечении метаболического синдрома, сахарного диабета 2 типа, его микро- и макрососудистых осложнений и диабетической нефропатии.

Пример 1.

Получение сухого комплекса, содержащего экстракты боярышника или пустырника, микрокристаллическую целлюлозу и кремния диоксид коллоидный, следующего компонентного состава:

Компонент сухого комплекса	Содержание, %
Боярышника или пустырника экстракт густой (содержание сухого вещества 60%), в пересчете на сухой экстракт	70,0
Целлюлоза микрокристаллическая	25,0
Кремния диоксид коллоидный	5,0
Всего:	100

Густые экстракты, содержащие 60% сухих веществ, помещают в реактор с перемешивающим устройством. В процессе перемешивания добавляют микрокристаллическую целлюлозу и кремния диоксид коллоидный, затем гомогенную смесь сушат в вакуумной ленточной сушилке и измельчают. Гранулят, полученный после добавления вспомогательных веществ, применяют для таблетирования или капсулирования.

Пример 2.

Получение сухого комплекса отличается от Примера 1 тем, что в густые экстракты при перемешивании перед сушкой вводят микрокристаллическую целлюлозу до получения следующего компонентного состава:

Компонент сухого комплекса	Содержание, %
Боярышника или пустырника экстракт густой (содержание сухого вещества 60%), в пересчете на сухой экстракт	70,0
Целлюлоза микрокристаллическая	30,0
Всего:	100

Пример 3.

Получение сухого комплекса отличается от Примеров 1 и 2 тем, что в густой экстракт при перемешивании перед сушкой вводят крахмал картофельный и кремния диоксид коллоидный до получения следующего компонентного состава:

Компонент сухого комплекса	Содержание, %
Боярышника или пустырника экстракт густой (содержание сухого вещества 60%), в пересчете на сухой экстракт	72,0
Крахмал картофельный	25,0
Кремния диоксид коллоидный	3,0
Всего:	100

Пример 4.

Отличается от Примеров 1, 2 и 3 тем, что в густой экстракт при перемешивании перед сушкой вводят крахмал картофельный до получения следующего компонентного состава:

Компонент сухого комплекса	Содержание, %
Боярышника или пустырника экстракт густой (содержание сухого вещества 60%), в пересчете на сухой экстракт	75,0
Крахмал картофельный	25,0
Всего:	100

Пример 5.

Получение сухого комплекса отличается от Примеров 1, 2, 3 и 4 тем, что смешивают густые экстракты боярышника и пустырника в массовом соотношении 1:2, далее к полученной смеси при перемешивании перед сушкой вводят микрокристаллическую целлюлозу и кремния диоксид коллоидный до получения следующего компонентного состава:

Продукт	Содержание, %
Боярышника экстракт густой (содержание сухого вещества 60%), в пересчете на сухой экстракт	23,3
Пустырника экстракт густой (содержание сухого вещества 60%), в пересчете на сухой экстракт	46,7
Целлюлоза микрокристаллическая	25,0
Кремния диоксид коллоидный	5,0
Всего:	100

Согласно изобретению разработаны несколько способов получения конкретной желаемой лекарственной формы - таблетки, таблетки, покрытые оболочкой, или капсулы.

Пример 6.

Фармацевтическая композиция в лекарственной форме таблеток получают при смешивании всех компонентов в сухом виде, прессовании смеси при составе всех компонентов в весовой массе и массовых %.

Состав лекарственной формы в таблетках:

Компонент	№	Состав на 1 таблетку (мг)	%
Экстракт боярышника сухой	(6.1)	43	3,91
Экстракт пустырника сухой	(6.1)	87	7,91
Таурин	(6.2)	867	78,82
Целлюлоза микрокристаллическая	(6.2)	70	6,36
Кроскармелоза натрия	(6.3)	11	1,00
Кремния диоксид коллоидный	(6.3)	11	1,00
Магния стеарат	(6.3)	11	1,00
Общая масса		1100	100,00

Пример 7.

Отличается от Примера 6 тем, что таблетки получают при использовании густых экстрактов пустырника и боярышника с содержанием влаги до 50% по массе. Путем влажного гранулирования смеси компонентов (7.2) с экстрактами (7.1), сушки полученного гранулята, калибровки гранулята, смешивания с компонентами (7.3), прессования нового гранулята полученные таблетки упаковывают в блистерную упаковку.

Состав лекарственной формы в таблетках:

Компонент	№	Состав на 1 таблетку (мг)	%
Боярышника экстракт густой (содержание сухого вещества 50%), в пересчете на сухой экстракт	(7.1)	43	3,91
Пустырника экстракт густой (содержание сухого вещества 50%), в пересчете на сухой экстракт	(7.1)	87	7,91
Таурин	(7.2)	867	78,82
Целлюлоза микрокристаллическая	(7.2)	70	6,36
Кроскармелоза натрия	(7.3)	11	1,00
Кремния диоксид коллоидный	(7.3)	11	1,00
Магния стеарат	(7.3)	11	1,00
Общая масса		1100	100,00

Пример 8.

В этом способе получение таблеток для детей отличается от Примеров 6 и 7 тем, что таблетки имеют вдвое меньшую дозировку и покрываются водной дисперсией пленочной смеси (8.4).

Состав таблеток детской лекарственной формы:

Компонент		Состав на 1 таблетку (мг)	%
Экстракт боярышника густой	(8.1)	21,5	3,741
Экстракт пустырника густой	(8.1)	43,5	7,561
Таурин	(8.2)	433,5	75,39
Целлюлоза микрокристаллическая	(8.2)	35	6,08
Кроскармелоза натрия	(8.3)	5,5	0,96
Кремния диоксид коллоидный	(8.3)	5,5	0,96
Магния стеарат	(8.3)	5,5	0,96
Пленкообразующая смесь:	(8.4)	25	4,35
Общая масса		575	100,00

Покрытие таблеток может осуществляться в машинах с перфорированным котлом, котлом с вытяжной трубой или в аппаратах псевдоожиженного слоя.

Пример 9.

Способ получения массы для наполнения капсул отличается от описанного в Примере 6 тем, что увлажнение и гранулирование смеси таурина (9.2) с целлюлозой микрокристаллической (9.2) осуществляют жидкими растительными экстрактами (50 и более % по массе) (9.1), а также тем, что высушенный гранулят смешивают с компонентами (9.3). Полученную массу фасуют в твердые желатиновые капсулы. Данный способ отличается одновременным проведением процесса влажной грануляции и сушки с использованием сушилки-гранулятора с псевдоожиженным слоем.

Состав лекарственной формы в капсулах:

Компонент	№	Состав на 1 капсулу (мг)	%
Экстракт боярышника жидкий	(9.1)	43	3,91
Экстракт пустырника жидкий	(9.1)	87	7,91
Таурин	(9.2)	867	78,82
Целлюлоза микрокристаллическая	(9.2)	81	7,36
Кремния диоксид коллоидный	(9.3)	11	1,00
Магния стеарат	(9.3)	11	1,00
Общая масса		1100	100,00

Пример 10.

Способ получения таблеток отличается от описанного в Примере 6 тем, что смесь таурина, сухих экстрактов боярышника и пустырника, кросповидона (компоненты 10.1) гранулируют сухим способом с помощью компактера или брикетированием, полученный гранулят смешивают с магния стеаратом (10.2) и прессуют в таблетки.

Состав лекарственной формы в таблетках:

Компонент	№	Состав на 1 таблетку(мг)	%
Экстракт боярышника сухой	(10.1)	43	3,91
Экстракт пустырника сухой	(10.1)	87	7,91
Таурин	(10.1)	867	78,82
Кросповидон	(10.1)	92	8,36
Магния стеарат	(10.2)	11	1,00
Общая масса		1100	100,00

Пример 11.

Этот способ отличается от описанных в Примерах 6-8 и 10 тем, что выше полученную массу не прессуют в таблетки, а наполняют ею твердые желатиновые капсулы.

Пример 12.

Способ приготовления лекарственной формы заключается в том, что сухой комплекс, полученный соупариванием густых экстрактов пустырника, боярышника с вспомогательными веществами, полученный по одному из приведенных Примеров 1-5, смешивают с таурином в рассчитанном соотношении, смесь компактируют и гранулятом наполняют твердые желатиновые капсулы.

Состав лекарственной формы в капсулах:

Компонент	№	Состав на 1 капсулу (мг)	%
Комплекс экстракта боярышника и пустырника сухой (Примеры 1-5)	(12.1)	193	18,21
Таурин	(12.2)	867	81,79
Общая масса		1060	100,00

Пример 13.

Отличается от Примера 12 тем, что сухой комплекс смешивают с таурином и другими вспомогательными компонентами и прессуют в таблетки.

Состав лекарственной формы в таблетках:

Компонент	№	Состав на 1 капсулу (мг)	%
Комплекс экстракта боярышника и пустырника сухой (Примеры 1-5)	(13.1)	193	17,54
Таурин	(13.1)	867	78,82
Кросповидон	(13.1)	29	2,64
Магния стеарат	(13.2)	11	1,00
Общая масса		1100	100,00

Доклинические исследования фармацевтической композиции приведенного состава были направлены на изучение влияния ее на основные факторы риска сердечно-сосудистой патологии в условиях метаболического синдрома (предиабета) и сахарного диабета. С целью установления механизмов кардиопротекторного эффекта препарата было изучено его влияние на биоэнергетические процессы и оксидативный статус митохондрий миокарда у животных с метаболическим синдромом.

Теоретическим обоснованием перспективности использования фармацевтической композиции, содержащей таурин, экстракты боярышника и пустырника для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии стали установленные фармакотерапевтические свойства вышеуказанных компонентов.

При изучении влиянии таурина на многие звенья патогенеза инсулинорезистентности, преждевременного атеросклероза и диабетической нефропатии было показано позитивное корректирующее действие этой аминосульфокислоты [1-3]. Установлено, что таурин способствует улучшению чувствительности периферических тканей к действию инсулина и снижению абдоминального ожирения у крыс с сахарным диабетом 2 типа [1], уменьшению концентрации триглицеридов в сыворотке крови крыс со стрептозотоциновым диабетом [4], повышению уровня восстановленного глутатиона в изолированных гепатоцитах [5]. Показано, что потребление высоких доз таурина предупреждает развитие функциональных и структурных нарушений почек у животных со стрептозоциновым диабетом, снижая степень протеинурии, снижая гипертрофию клубочков и развитие гломерулосклероза [6]. Из литературных источников известно, что таурин проявляет выраженное фармакологическое действие в отношении сердечно-сосудистой системы. Регулируя функционирование ренин-ангиотензинальдестероновой и калликреин-кининовой систем, влияя на активность кальцийзависимых ферментов и ферментных систем, выполняющих каталитические функции в плазматических мембранах кардиомиоцитов, саркоплазматическом ретикулуме кардиомиоцитов, эндоплазматическом ретикулуме клеток мозга, в митохондриях кардиомиоцитов и в тромбоцитах, таурин проявляет ангио- и кардиопротекторное действие [7, 8, 9].

Весьма важным является гипогликемическое действие таурина, нашедшее свое подтверждение в лекарственном средстве Дибикор, применяемом при сахарном диабете 2 типа [10, 11]. Фармакологические эффекты таурина свидетельствуют о его специфическом модулирующем действии в отношении многих биохимических и физиологических процессов клетки в норме и в условиях патологии.

Учитывая фармакологические свойства экстрактов пустырника и боярышника, обусловленные высокой антиоксидантной активностью и способностью к регуляции биоэнергетических процессов в клетках миокарда, предполагалось проявление ими достоверного выраженного кардиопротекторного действия и в составе фармацевтической композиции.

Ранее в эксперименте было показано, что антиатеросклеротический эффект экстрактов боярышника и пустырника обуславливается комплексом фармакологически активных компонентов - флавоноидов, фенольных кислот, тритерпенов, катехинов, сапонинов и цианидиновых производных [12, 13], т.е. веществ с высоким антиоксидантным потенциалом. Подтверждением этому стало то, что кардиотонические лекарственные средства боярышника проявляют ритмогенное действие, обуславливающее позитивное изотропное и отрицательное хронотропное влияние на работу миокарда. Этот терапевтический эффект проявляется в увеличении амплитуды сердечных сокращений и уменьшении их частоты [14]. При этом было показано, что последующее развитие гипотензивного эффекта непосредственно связано с фармакологическими свойствами сапонинов экстрактов боярышника [15]. Следует отметить, что выраженное гипохолестеринемическое действие препаратов боярышника также связано с этими веществами [16].

Седативные свойства экстракта пустырника в зависимости от дозы в 2-3 раза превышают препараты валерианы. С этим эффектом связано угнетающее действие препаратов пустырника на ЦНС, регуляторное влияние на ССС с обязательным уменьшением ритма сердечных сокращений, с удлинением диастолы с последующим снижением артериального давления [15]. В клинике нейрогенных кардиомиопатий, неусложненных органическими нарушениями, препараты экстрактов пустырника проявляли выраженный эффект на 5-6 день их применения [17].

Приведенные примеры фармакологических эффектов таурина, экстрактов боярышника и пустырника свидетельствуют о перспективности применения заявляемой фармацевтической композиции для профилактики и лечения метаболического синдрома и диабетической нефропатии.

В способе профилактики и лечении метаболического синдрома (МС) и диабетической нефропатии используют фармацевтическую композицию Х (ФК X) в виде гранулята, полученного в Примере 6.

Способ апробирован на самцах крыс Вистар весом 290-300 г. Изучение влияния ФК Х на развитие метаболического синдрома и диабетической нефропатии проводили с использованием экспериментальных моделей метаболического синдрома и сахарного диабета, которые по патогенетическим признакам максимально приближены к соответствующим патологиям у человека.

Метаболический синдром, индуцированный высокожировой диетой.

Метаболический синдром индуцировали 8 недельным содержанием животных на высокожировой диете (ВЖД), в которой белки, углеводы, жиры составляли 4,9; 26,4; 68,8% соответственно от общих калорий [18].

ФК Х применяли перорально с помощью зонда в виде водной суспензии в дозах 100 или 300 мг таурина на кг массы тела в течение 8 недель, начиная с первого дня эксперимента.

Метаболический синдром, индуцированный высокофруктозной диетой.

Модель метаболического синдрома вызывали у крыс хроническим (в течение двух месяцев) поступлением фруктозы с питьевой водой в концентрации 200 г/л [19].

ФК X применяли перорально с помощью зонда в виде водной суспензии в течение 8 недель, начиная с первого дня эксперимента в дозе 100 мг таурина на кг массы тела.

Модель стрептозотоцинового диабета.

Диабет вызывали одноразовым внутрибрюшинным введением стрептозотоцина в дозе 60 мг/кг массы тела [20]. Через неделю после индукции диабета животных с базальной гликемией более чем 14 ммоль/л включали в эксперимент. ФК Х применяли перорально с помощью зонда в виде водной суспензии в дозах 100 и 300 мг таурина на кг массы тела с первого дня эксперимента в течение 8 недель.

Контрольные группы по аналогичной схеме получали плацебо (состав плацебо: крахмал картофельный; магния стеарат; аэросил).

В качестве препарата сравнения использовали масляный раствор витамина Е (Токоферола ацетат, фирмы «Словакофарма») в дозе 50 мг/кг массы тела.

В конце эксперимента состояние глюкозного гомеостаза оценивали по показателям базальной гликемии, глюкозурии, во время внутрибрюшинного теста толерантности к глюкозе (ВБТТГ) (3 г/кг массы тела) и по уровню фруктозамина в сыворотке крови [21]. Чувствительность к инсулину определяли с помощью внутрибрюшинного теста толерантности к инсулину (ВБТТИ) (инсулин 0,5 Ед/кг, глюкоза 2 г/кг массы тела через 10 мин после введения инсулина) [22] и короткого инсулинового теста (0,5 Ед/кг массы тела) [23]. Висцеральное ожирение характеризовали по массе висцерального жира, которую рассчитывали как сумму епигонадального, епинефрального и мезентериального жира.

Уровень неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке крови и гомогенате печени оценивали фотоколориметрическим методом [24]. Уровень общего холестерина и триглицеридов в сыворотке крови и гомогенатах печени и сердца определяли спектрофотометрическими методами [25, 26]. Биохимические показатели в органах выражали на мг белка, который оценивали по методу Бред форда [27].

Интенсивность оксидативного стресса характеризовали по концентрации церуллоплазмина [28] и диеновых конъюгатов (ДК) [29] в сыворотке крови, в гомогенате почек и сердца, а также по содержанию малонового диальдегида (МДА) [30] в гомогенате почек и печени. Состояние антиоксидантной системы защиты в печени и сердце оценивали по содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) [31], а также по активности супероксиддисмутазы (СОД) [32]. Уровень стабильных метаболитов оксида азота (NOx) в сыворотке крови определяли с помощью реактива Грисса [33].

Состояние системы свертывания крови определяли по степени и скорости АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов [34]. Митохондрии сердца крыс получали методом дифференциального центрифугирования. Дыхание митохондрий определяли полярографическим методом с помощью закрытого кислородного электрода Кларка [35].

Влияние препарата на состояние антиоксидантной защиты митохондриальной системы оценивали по содержанию восстановленного глутатиона [31] в суспензии изолированных митохондрий. Интенсивность свободнорадикального окисления в митохондриях сердца оценивали по уровню гидропероксидов липидов [36]. При анализе электрокардиограмм (ЭКГ) в трех стандартных отведениях от конечностей учитывали такие показатели: амплитуда зубцов R, P, S и Т, частота сердечных сокращений (ЧСС), длительность интервалов R-R, Т-Q, Q-T и комплекса QRS [37].

С целью верификации микрососудистой патологии в почках крыс со стрептозотоциновым диабетом проводили гистологическое исследование с помощью электронной микроскопии [38]. Толщину гломерулярной базальной мембраны определяли по методу Hirose et al. [39].

Функциональное состояние почек определяли по показателям суточного диуреза, рН мочи, содержанием креатинина [40] и мочевины [41] в моче и сыворотке крови, а также по уровню микроальбуминурии, которую определяли с помощью ИФА-наборов фирмы «Гранум».

Статистический анализ полученных результатов проводили методами вариационной статистики. Для определения характера распределения полученных результатов исследования использовали критерий Шапиро-Уилка. В случае нормального распределения проводили дисперсионный анализ ANOVA, для множественного сравнения использовали критерий Нъюмена-Кейлса [42].

Влияние ФК Х на развитие метаболического синдрома, индуцированного высокожировой диетой, у крыс.

В результате проведенных исследований установлено, что применение ФК Х в значительной степени тормозит развитие инсулинорезистентности и интолерантности к углеводам у крыс с МС, индуцированным ВЖД, подтверждением чему было существенное повышение коэффициента чувствительности к инсулину и уменьшение площади под гликемическими кривыми по сравнению с показателями для группы, которая получала плацебо (табл.1). Следует отметить, что эффект ФК Х на глюкозный гомеостаз не уступал препарату сравнения - витамину Е и не усиливался при повышении дозы препарата до 300 мг/кг массы тела.

Установлено, что применение ФК Х как в дозе 100 мг/кг, так и 300 мг/кг массы тела, в отличие от витамина Е приводило к достоверному снижению относительной массы висцерального жира более чем на 30% и предотвращало прирост массы тела крыс по сравнению с контрольными животными. Причем применение ФК Х в большей дозе сопровождалось более выраженным влиянием на относительную массу мезентерального жира (табл.2).

Таблица 1Влияние ФК Х на показатели глюкозного гомеостаза у крыс с метаболическим синдромом, индуцированным высокожировой диетой (X±Sx, n=6)
Группа	Базальная гликемия, ммоль/л	Площадь под гликемической кривой, ммоль/л·мин	Коэффициент чувствительности к инсулину, %
Интактный контроль	5,14±0,51	852,4±48,2	39,4±3,6
ВЖД + плацебо	5,37±0,36	1365,1±89,41	14,0±1,841
ВЖД+ФК Х(100 мг/кг)	5,60±0,47	994,6±36,82	36,5±1,72
ВЖД+ФК Х(300 мг/кг)	5,04±0,45	893,0±15,92	35,1±2,72
ВЖД + Витамин Е	5,22±0,15	922,0±17,92	40,1±3,72
Примечания:
1 - Статистически значимые отличия в сравнении с показателями для группы «интактный контроль», р<0,05;
2 - Статистически значимые отличия в сравнении с показателями для группы «ВЖД + плацебо», р<0,05;
3 - Статистически значимые отличия в сравнении с показателями для группы «ВЖД+ФК Х (100 мг/кг массы тела)», р<0,05;
4 - Статистически значимые отличия в сравнении с показателями для группы «ВЖД + витамин Е», р<0,05.

Таблица 2
Влияние ФК Х на прирост массы тела и относительную массу висцерального жира у крыс с метаболическим синдромом, индуцированным высокожировой диетой (X±Sx, n=6)
Группа	Прирост массы тела, %	Относительная масса висцерального жира, %
Интактный контроль	42,01±2,71	2,33±0,24
ВЖД + плацебо	69,12±4,101	6,28±0,781
ВЖД+ФК Х(100 мг/кг)	41,83±5,512,4	4,48±0,431,2,4
ВЖД+ФК Х(300 мг/кг)	46,82±5,332,4	3,84±0,181,2,4
ВЖД + Витамин Е	66,23±4,101	6,13±0,811

Примечание. Показатели достоверности аналогичны таблице 1.

В результате проведенных исследований установлено, что применение ФК Х в обеих дозах в отличие от витамина Е способствует нормализации триглицеридемии (табл.3). Гиполипидемический эффект фармацевтической композиции Х также проявлялся в снижении уровня общего холестерина в сыворотке крови даже по сравнению с интактным контролем.

Таблица 3
Влияние ФК Х на показатели липидного обмена в сыворотке крови крыс с метаболическим синдромом, индуцированным высокожировой диетой (X±Sx, n=6)
Группа	Триглицериды, ммоль/л	Общий холестерин, ммоль/л
Интактный контроль	0,77±0,04	2,35±0,20
ВЖД + плацебо	1,54±0,201	2,01±0,16
ВЖД+ФК Х(100 мг/кг)	0,89±0,072,4	1,61±0,121,4
ВЖД+ФК Х(300 мг/кг)	0,91±0,022	1,57±0,131,4
ВЖД + Витамин Е	1,41±0,191	2,21±0,11
Примечание. Показатели достоверности аналогичны таблице 1.

Применение ФК Х в обеих дозах приводило к снижению уровня неэстерифицированных жирных кислот в гомогенате печени крыс с МС. В то же время, нормализация уровня триглицеридов в данном органе наблюдалась лишь при использовании ФК Х в дозе 300 мг/кг (табл.4).

Таблица 4Влияние ФК Х на показатели липидного обмена в печени и сердце у крыс с метаболическим синдромом, индуцированным высокожировой диетой (X±Sx, n=6)
Группа	Печень	Сердце
Триглицериды, нмоль/мг белка	НЕЖК, нмоль/мг белка	Триглицериды, нмоль/мг белка	НЕЖК, нмоль/мг белка
Интактный контроль	34,68±4,27	89,87±3,01	16,46±0,64	51,74±2,51
ВЖД + плацебо	102,88±17,651	128,61±8,021