Вакцинная композиция для иммунизации животного против кокцидиоза и способ ее использования

Вакцинная композиция для иммунизации животного против кокцидиоза и способ ее использования

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА СВЯЗАННЫЕ ЗАЯВКИ

Эта заявка согласно разделу 35 § 119(e) Свода законов США устанавливает приоритет предварительной заявки США с серийным № 61/057003, зарегистрированной 29 мая 2008 года, содержание которой, таким образом, включено в полном объеме в качестве ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к вакцинам, обеспечивающим защиту от кокцидиоза. Также предусмотрены способы получения и применения вакцин самостоятельно или в сочетании с другими защитными средствами.

ПРЕДПОСЫЛКИ

Кокцидиоз является заболеванием кишечника животных, повсеместно поражающим домашний скот. Бизнес, связанный с разведением животных, вследствие кокцидиоза часто сталкивается со значительными затратами, включающими финансовые потери, связанные с больными животными, а также стоимость профилактических мер, направленных на снижение и/или предотвращение заболевания. Такие затраты особенно характерны для промышленного птицеводства, в котором интенсивное разведение птиц способствует распространению кокцидиоза.

Этиологическими факторами кокцидиоза являются представители облигатных внутриклеточных споровиков подкласса Coccidia. Eimeria является одним из родов данного подкласса, имеющим большое значение при разведении домашних животных. Так же как и близкородственные Isospora, Cystoisospora и Cryptosporidium, Eimeria нуждаются только в одном животном-хозяине для прохождения своего жизненного цикла. В естественных условиях этот жизненный цикл начинается с поглощения спорулированных ооцист из окружающей среды.

Eimeria являются одноклеточными паразитами со сложным моноксенным жизненным циклом, проявляющими высокую степень видо- и тканеспецифичности. Разновидности Eimeria включают выявленные у кур E. tenella, E. acervulina, E. maxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. mivati и E. brunetti; и выявленные у индюков E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua и E. subrotunda. Стадии жизненного цикла Eimeria по существу одинаковы для всех видов Eimeria, хотя каждый вид характеризуется характерным местом размножения в кишечнике и временем, необходимым для прохождения жизненного цикла, которое также варьирует между видами.

Многочисленные виды Eimeria способны инфицировать определенного хозяина через ротовую полость, носовую полость и/или посредством попадания инфекционных частиц в слезный проток. Поглощенные паразиты проникают в клетки слизистой кишечника и проходят бесполые и половые стадии жизненного цикла. Возникающее повреждение кишечника может в конечном итоге приводить к нарушенному росту (низкорослости), сниженному усваиванию пищи, потери пигментации и повышенной смертности. Кроме того, повреждение выстилки кишечника предрасполагает животное к другим инфекционным заболеваниям, например, пораженные курицы становятся более подверженными некротическим энтеритам, вызываемым Clostridium perfringens.

Инфекция начинается с поглощения хозяином спорулированных ооцист Eimeria. Поглощенные ооцисты затем высвобождают спороцисты в кишечнике хозяина. Спороцисты высвобождают спорозоиты, которые проникают в кишечные эпителиоциты и затем превращаются в трофозоиты. Трофозоиты в свою очередь подвергаются процессу, известному как мерогония, для образования первого поколения шизонтов. Благодаря относительно большому размеру именно шизонты обусловливают основной патогенетический эффект инфекции, т.е. повреждение тканей хозяина.

Раннее поколение шизонтов образует многочисленные мерозоиты, которые высвобождаются и затем растут и формируют следующее поколение шизонтов. Эта бесполая фаза продолжается на протяжении различного количества поколений перед началом половой фазы. Половая фаза начинается, когда шизонты образуют микрогаметоциты и макрогаметы.

Микрогаметоциты в дальнейшем развиваются в микрогаметы, которые оплодотворяют макрогаметы с образованием потомства в виде неспорулированных ооцист. Неспорулированные ооцисты затем попадают в просвет кишечника и экскретируются с фекалиями хозяина. Завершение жизненного цикла, соответствующее появлению неспорулированных ооцист в фекалиях хозяина, известно как экзогенный период.

Споруляция ооцист происходит вне организма хозяина в благоприятных условиях окружающей среды. Неизбежное поглощение спорулированных ооцист хозяином начинает новый цикл инфекции. Время от момента поглощения хозяином спорулированных ооцист до появления неспорулированных ооцист в фекалиях называется эндогенным периодом. Эндогенный период различается среди разных видов Eimeria.

Домашняя птица, периодически подвергающаяся инфицированию Eimeria, может приобретать иммунитет против кокцидиоза. В действительности, ежедневное инфицирование бройлеров небольшим количеством спорулированных ооцист может приводить к приобретению птицами полноценного иммунитета после как минимум двух инфекций в зависимости от иммуногенности конкретного вида Eimeria. Таким образом, настоящие протоколы, использующие живые вакцины с Eimeria, основаны на принципе приобретенного иммунитета, т.е. ревакцинирования небольшим количеством инфекционных ооцист.

Вакцинацию, как правило, проводят на инкубаторной станции в день рождения птицы посредством введения живой вакцины Eimeria непосредственно птицам или путем ее добавления в их пищу и/или питьевую воду. Внутри пищеварительного тракта птицы инфекционные ооцисты, как описано выше, проходят свой жизненный цикл, заканчивающийся высвобождением нового поколения неспорулированных ооцист на 5-11 сутки, в зависимости от вида Eimeria. Выделенные с фекалиями неспорулированные ооцисты затем становятся инфекционными, т.е. образуют споры в окружающей среде и ревакцинируют птиц после поглощения хозяином. Через два или три таких цикла птицы становятся иммунизированными против кокцидиоза. Такой иммунитет характеризуется: (i) уменьшением численности и/или отсутствием выявляемых с помощью микроскопа паразитов в кишечнике, (ii) сокращением выделения ооцист, (iii) снижением повреждения кишечника, (iv) улучшением клиники заболевания и/или (v) снижением или предотвращением потери веса. В отсутствие дополнительной дозы инфекционных ооцист приобретенный иммунитет постепенно идет на убыль в течение трех или четырех месяцев.

Как правило, при вспышках клинического заболевания в поголовье домашних птиц выделяют дикие типы Eimeria, которые можно выращивать для применения в качестве заразных патогенных штаммов. Типичные неослабленные вакцины составлены из инфекционных ооцист слабых или умеренно патогенных штаммов различных видов Eimeria, которые поддерживают путем пересева в лаборатории. В случае поглощения большого количества таких неослабленных Eimeria они способны вызывать кокцидиоз. Производители и потребители вакцин должны соблюдать осторожность для того, чтобы быть уверенными, что вакцинация обеспечивает незараженного хозяина достаточным количеством инфекционных ооцист лишь для стимуляции иммунитета, а не заболевания. После первичной дозы процесс вакцинации продолжается исключительно при ревакцинации за счет поглощения хозяином спорулированных ооцист из помета.

Ослабленные вакцины получают из инфекционных ооцист, обладающих сниженной патогенностью. Вследствие выраженной корреляции между ослабленной патогенностью и более коротким эндогенным периодом многие ослабленные штаммы также являются ранними. Кроме того, ослабленные линии, обладающие укороченными эндогенными периодами, обычно называют "ранними линиями".

Таким образом, можно получить определенное снижение патогенности Eimeria путем отбора ранних ооцист в процессе повторных пассажей паразитов в животном-носителе. Таким способом были выявлены популяции определенных видов Eimeria, имеющие значительно укороченные эндогенные периоды и значительно сниженную патогенность. Хотя причина наблюдаемой сниженной патогенности до конца не изучена, в целом считается, что это связано с исчезновением и/или уменьшением размеров по меньшей мере одного поколения шизонтов и тем самым уменьшением повреждения тканей хозяина.

У неослабленных и ослабленных вакцин существуют свои достоинства и недостатки. Одним из достоинств вакцин, приготовленных из неослабленных паразитов, является интенсивное размножение паразитов, приводящее к быстрому накоплению ооцист в окружающей среде, которое необходимо для ревакцинации и последующей иммунизации птиц. С другой стороны, процесс размножения неослабленных Eimeria в пищеварительном тракте непривитой курицы может вызывать повреждения, которые приводят к ухудшению здоровья животного, снижению эффективности питания и другим негативным эффектам, включая вторичные инфекции и воспаление.

Другим недостатком неослабленных вакцин является необходимость подтверждения того, что каждая птица получает адекватную первоначальную дозу, поскольку слишком большой прививочный материал вызовет тяжелые нарушения кишечника, а слишком малый прививочный материал вызовет задержку начала процесса иммунизации для всего поголовья. В последнем случае птицы, получающие недостаточную первоначальную дозу, в ходе прививания могут становиться подверженными заражению резко увеличенным количеством инфекционных ооцист, выделяемых другими особями поголовья после первоначального эндогенного периода. Более того, отсутствие достаточного иммунитета перед последующими прививочными дозами возможно служит причиной большинства нарушений, регистрируемых при использовании живых неослабленных вакцин.

Одним из главных достоинств ослабленных вакцин является то, что они вызывают лишь незначительные повреждения. Однако ослабленные вакцины производят меньше ооцист, чем неослабленные штаммы, что приводит к снижению накопления инфекционных ооцист в окружающей среде, тем самым снижая вероятность ревакцинации после первоначального эндогенного периода.

Это в свою очередь приводит к увеличению периода времени, необходимого для полного завершения иммунизации и даже может нарушить весь процесс иммунизации. Замедленное накопление инфекционных ооцист в окружающей среде особенно проблематично в случае иммунизации против вида Eimeria, E. maxima, поскольку дикий тип E. maxima производит относительно большое количество ооцист.

Поскольку животных, являющихся одиночными хозяевами, можно инфицировать различными видами Eimeria, обычно создают живые вакцины против кокцидиоза, содержащие ооцисты нескольких видов Eimeria. До настоящего времени существовало только три типа таких живых вакцин: неослабленные вакцины, состоящие только из ооцист, культивируемых в лабораторных условиях; ослабленные вакцины, состоящие только из ослабленных ооцист; и смешанные вакцины, в которых ооцисты одного вида Eimeria неослабленные, а ооцисты другого вида Eimeria ослабленные. К сожалению, ни одна из этих вакцин не лишена описанных выше недостатков, более того, с точки зрения явных недостатков каждого из существующих типов живых вакцин против Eimeria, совместно с выраженными убытками птицеводство от кокцидиоза, вызываемого инфекциями Eimeria, по-прежнему остается потребность в улучшенных вакцинах, способных надежнее защищать домашнюю птицу от этого убыточного кишечного заболевания.

Упоминание любой изложенной в настоящем документе ссылки не должно истолковываться в качестве допущения, что такая ссылка доступна в качестве "известного уровня техники" для настоящего практического применения.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, настоящее изобретение относится к новым иммуногенным композициям, которые можно использовать для вакцинаций против кокцидиоза. В одном из аспектов настоящего изобретения предусматривается вакцина, содержащая по меньшей мере два различных штамма одного вида споровиков рода Coccidia, и что по меньшей мере два различных штамма одного вида споровиков рода Coccidia имеют асинхронный в отношении друг друга эндогенный период.

В одном из вариантов осуществления вакцинная композиция содержит первый штамм вида из рода Coccidia совместно со вторым штаммом того же вида, в которой первый и второй штаммы имеют асинхронный эндогенный период. В одном таком варианте осуществления родом Coccidia является Isospora. В другом варианте осуществления родом Coccidia является Cystoisospora. В другом варианте осуществления родом Coccidia является Cryptosporidium. В конкретном варианте осуществления родом Coccidia является Eimeria.

Также предусмотрены мультивалентные вакцины, содержащие все различные комбинации родов Coccidia. В конкретных вариантах осуществления предусмотрены вакцины, которые содержат два или более штаммов двух или более таких отдельных родов Coccidia. В варианте осуществления такого типа вакцина содержит пары штаммов множества родов Coccidia, в которых множество пар штаммов отдельного вида из рода(ов) Coccidia имеют асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления вакцина содержит пары штаммов отдельного вида Cystoisospora, имеющих асинхронный эндогенный период и пары штаммов отдельного вида Isospora, имеющих асинхронный эндогенный период. В другом варианте осуществления все пары штаммов отдельного вида из рода(ов) Coccidia в вакцине имеют асинхронные эндогенные периоды.

В одном из вариантов осуществления первый штамм вида споровиков из рода Coccidia в вакцине является неослабленным штаммом, и второй штамм является ранним штаммом. В конкретном варианте осуществления такого типа ранний штамм также является ослабленным штаммом.

Вакцинами по настоящему изобретению могут быть споровики на любой стадии их жизненного цикла, включая комбинации одного или нескольких или даже всех стадий их жизненных циклов. В конкретном варианте осуществления споровики в вакцине представляют собой ооцисты. В другом варианте осуществления споровики представляют собой спорозоиты. Еще в другом варианте осуществления споровики представляют собой мерозоиты. В еще одном варианте осуществления споровики представляют собой смесь мерозоитов и/или спорозоитов и/или ооцист.

В одном из аспектов настоящего изобретения предусмотрены вакцины, содержащие неослабленные споровики и ранние споровики одного вида из рода Coccidia в определенных соотношениях и/или количествах. Таким образом, в конкретном варианте осуществления вакцина по настоящему изобретению содержит неослабленные споровики и ранние споровики одного вида из рода Coccidia, в которой соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам в вакцине равно приблизительно 1 неослабленному споровику к приблизительно 4 ранним споровикам. В другом варианте осуществления такого типа соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 1 неослабленному споровику к приблизительно 2 ранним споровикам. В другом варианте осуществления соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 1 неослабленному споровику к приблизительно 1 раннему споровику. В еще одном варианте осуществления соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 2 неослабленным споровикам к приблизительно 1 раннему споровику. В другом варианте осуществления соотношение неослабленных споровиков к ранним споровикам одного вида равно приблизительно 4 неослабленным споровикам к приблизительно 1 раннему споровику. В специфическом варианте осуществления такого типа неослабленные споровики представляют собой неослабленные ооцисты. В другом варианте осуществления ранние споровики представляют собой ранние ооцисты. Еще в другом варианте осуществления вакцины неослабленные споровики представляют собой неослабленные ооцисты, и ранние споровики представляют собой ранние ооцисты.

Также предусмотрены вакцины, содержащие любую и/или все комбинации и количества штаммов одного вида из рода Coccidia, имеющие асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления такого типа вакцина содержит приблизительно от 10 до приблизительно 1000 неослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 25 до приблизительно 500 неослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 250 неослабленных ооцист. В еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 200 неослабленных ооцист.

В смежном варианте осуществления такого типа вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 20000 неослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 10000 неослабленных ооцист. Еще в другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 250 до приблизительно 5000 неослабленных ооцист. В еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 500 до приблизительно 3000 неослабленных ооцист. В еще другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 750 до приблизительно 2000 неослабленных ооцист.

В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 20000 ранних и/или ослабленных ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 10000 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 250 до приблизительно 5000 ранних ооцист, в еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 500 до приблизительно 3000 ранних ооцист. Еще в другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 750 до приблизительно 2000 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина по настоящему изобретению содержит приблизительно от 10 до приблизительно 1000 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 25 до приблизительно 500 ранних ооцист. В другом варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 50 до приблизительно 250 неослабленных ранних ооцист, в еще одном варианте осуществления вакцина содержит приблизительно от 100 до приблизительно 200 ранних ооцист. В конкретных вариантах осуществления ранние ооцисты представляют собой ослабленные ооцисты.

Если вакцина по настоящему изобретению включает, в частности, споровиков рода Coccidia, например Eimeria, то может быть использован любой из таких видов. В одном таком варианте осуществления вакцина, содержащая вид Eimeria, может помочь защитить кур от кокцидиоза. В одном таком варианте осуществления видом Eimeria является E. tenella. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. acervulina. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. necatrix. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. mivati. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. mitis. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. praecox. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. brunetti. В конкретном варианте осуществления видом Eimeria является E. maxima.

Также предусмотрены вакцины, содержащие все возможные комбинации таких видов Eimeria. Кроме того, предусмотрены вакцины, содержащие два или более штамма двух или более таких отдельных видов. В одном из вариантов осуществления такого типа вакцина содержит пары штаммов различных видов Eimeria, в которой различные пары штаммов определенного вида Eimeria имеют асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления такого типа все пары штаммов определенного вида Eimeria в вакцине имеют асинхронные эндогенные периоды.

В конкретном варианте осуществления вакцина содержит дикий тип и/или неослабленный штамм E. maxima и ослабленный и/или ранний штамм E. maxima. В одном таком варианте осуществления дикий тип и/или неослабленный штамм E. maxima обладает, по существу, всеми основными характеристиками и/или, по существу, всеми свойствами штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой COCCIVAC®. В другом специфическом варианте осуществления такого типа вакцина содержит ослабленный и/или ранний штамм E. maxima, который обладает, по существу, всеми основными характеристиками и/или, по существу, всеми свойствами штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой PARACOX®. В другом варианте осуществления вакцина содержит дикий тип и/или неослабленный штамм E. maxima, имеющий по существу, все основные характеристики и/или, по существу, все свойства штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой COCCIVAC® и ослабленный, ранний штамм E. maxima, который обладает, по существу, всеми основными характеристиками и/или, по существу, всеми свойствами штамма E. maxima, находящегося в вакцине, продаваемой под маркой PARACOX®.

Другая вакцина по настоящему изобретению содержит один или более видов Eimeria, которые могут помогать защищать индюков от кокцидиоза. В одном таком варианте осуществления видом Eimeria является E. meleagrimitis. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. adenoeides. Еще в другом варианте осуществления видом Eimeria является E. gallopavonis. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. dispersa. В другом варианте осуществления видом Eimeria является E. meleagridis. В еще одном варианте осуществления видом Eimeria является E. innocua. Еще в другом варианте осуществления видом Eimeria является E. subrotunda. Также предусмотрены вакцины, содержащие любую и все комбинации индюшачьих видов Eimeria, кроме того, предусмотрены вакцины, содержащие два или более штаммов двух или более таких отдельных видов. В одном из вариантов осуществления такого типа вакцина содержит пары штаммов различных индюшачьих видов Eimeria, в которой различные пары штаммов каждого индюшачьего вида Eimeria имеют асинхронные эндогенные периоды. В конкретном варианте осуществления такого типа все пары штаммов каждого индюшачьего вида Eimeria в вакцине имеют асинхронные эндогенные периоды.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрены вакцины, включающие один или более видов и/или штаммов вида Isospora, Cystoisospora и/или Cryptosporidium. В вариантах осуществления такого типа по меньшей мере два штамма вида Isospora, Cystoisospora и/или Cryptosporidium также имеют асинхронный эндогенный период. Кроме того, любая из вакцин Eimeria по настоящему изобретению может сочетаться с такими вакцинами Isospora, Cystoisospora и/или Cryptosporidium.

В конкретном варианте осуществления вакцина включает неослабленный штамм вида Cryptosporidium и ранний штамм того же вида Cryptosporidium. В другом варианте осуществления такая вакцина Cryptosporidium дополнительно содержит неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora. В другом варианте осуществления вакцина Cryptosporidium дополнительно содержит неослабленный штамм вида Cystoisospora и ранний штамм того же вида Cystoisospora. В еще одном варианте осуществления вакцина Cryptosporidium дополнительно содержит неослабленный штамм вида Cystoisospora, ранний штамм того же вида Cystoisospora, неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora.

В смежном варианте осуществления настоящее изобретение относится к вакцине, включающей неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora. В другом варианте осуществления вакцина включает неослабленный штамм вида Cystoisospora и ранний штамм того же вида Cystoisospora. В другом варианте осуществления вакцина содержит неослабленный штамм вида Cystoisospora, ранний штамм того же вида Cystoisospora, неослабленный штамм вида Isospora и ранний штамм того же вида Isospora.

В другом аспекте по изобретению предусмотрены способы иммунизации особей животных против кокцидиоза. Один такой вариант осуществления содержит введение животному иммунологически эффективного количества любой вакцины по настоящему изобретению. В одном из вариантов осуществления вакцину вводят перорально. В другом варианте осуществления вакцину вводят in ovo. В другом варианте осуществления вакцину вводят местно. В еще одном варианте осуществления вакцину вводят посредством инъекции.

В одном конкретном варианте осуществления вакцину вводят c питьевой водой животного. В другом варианте осуществления вакцину вводят с пищей животного. Еще в другом варианте осуществления вакцину одновременно вводят с пище и питьевой водой животного.

В еще одном варианте осуществления вакцину вводят посредством опрыскивания. В одном таком варианте осуществления раствором, содержащим вакцину, опрыскивают однодневных цыплят. В конкретном варианте осуществления такого типа однодневных цыплят вакцинируют в специальном шкафу для опрыскивания на инкубаторной станции. В другом варианте осуществления вакцину вводят посредством контакта вакцины с глазом животного. В конкретном варианте осуществления такого типа нанесение вакцины на глаз животного производят с помощью глазной пипетки. В другом варианте осуществления вакцину вводят двумя, тремя, четырьмя или более способами введения.

В конкретном варианте осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят птицам. В одном из вариантов осуществления птицей является домашняя птица. В одном таком варианте осуществления животным является курица. В другом варианте осуществления домашней птицей является индюк. В еще одном варианте осуществления домашней птицей является утка. В другом варианте осуществления домашней птицей является пернатая дичь. В конкретном варианте осуществления такого типа пернатой дичью является перепел. В другом варианте осуществления пернатой дичью является фазан. В другом варианте осуществления вакцину вводят млекопитающему. В конкретном варианте осуществления такого типа, млекопитающее не относится к человеку.

Эти и другие аспекты по настоящему изобретению будут более понятны после изучения Подробного описания и Примера.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает вакцину против кокцидиоза, разработанную для улучшения преимуществ отдельных свойств неослабленных и ранних вакцин Coccidia, соответственно, и при этом для минимизирования их индивидуальных недостатков. В одном из аспектов изобретения вакцина содержит комбинацию одного или нескольких штаммов дикого типа вида Coccidia с одним или несколькими штаммами ослабленных Coccidia того же вида. Такая вакцина может вызывать более сильный иммунный ответ в организме хозяина, чем вызываемый двумя индивидуальными типами штаммов по отдельности. Кроме того, суммарные двойные и различающиеся паразитические жизненные циклы этих двух штаммов могут ускорять приобретение напряженного иммунитета организмом хозяина.

В основном, приобретение напряженного иммунитета против данного вида Eimeria за счет вакцины, содержащей ранний штамм, длится дольше, чем при использовании неослабленного штамма, несмотря на то, что экзогенный период у ранних вакцин наступает раньше. Этот результат позволяет предположить, что дополнительные репликативные циклы, которые неослабленные штаммы проходят в эндогенном периоде, могут усиливать иммунный ответ у хозяина по сравнению с таковым в отношении ранних штаммов, и/или, что значительно большее количество ооцист, высвобожденное во время экзогенного периода после инфекции/вакцинации неослабленным Eimeria, может способствовать приобретению животным-носителем полного иммунитета при меньшем количестве паразитических жизненных циклов.

Не будучи ограниченным конкретным механизмом действия, настоящее изобретение согласуется с теми, которые оказывают на иммунную систему хозяина синергический эффект, возникающий посредством вакцинации животного-носителя вакциной, содержащей два или более штаммов выбранного вида из рода Coccidia, например Eimeria, в которой по меньшей мере два штамма имеют асинхронный эндогенный период. Такой асинхронный эндогенный период позволяет процессу иммунизации протекать быстрее, чем при самостоятельном использовании каждого штамма, благодаря усиливающему эффекту различных экзогенных периодов. В самом деле, более быстрое чередование эндогенных периодов способствует процессу ревакцинации посредством увеличения доступности новообразованных ооцист для поглощения хозяином. Усиливающий эффект, обозначаемый в настоящем документе как "эффект эха", может, таким образом, вызывать более ранний иммунитет у этого животного-носителя.

Таким образом, в одном из аспектов настоящее изобретение относится к вакцине, содержащей ослабленный штамм, обладающий укороченным эндогенным периодом, совместно с неослабленным штаммом того же вида, обладающим более долгим эндогенным периодом, но гораздо большей способностью к размножению и заражению окружающей среды новым поколением ооцист. Одна из таких примерных вакцин по настоящему изобретению включает два различных штамма (или линии) Eimeria maxima: ослабленный, ранний штамм, полученный из исходной культуры, используемой при производстве вакцин, продаваемых под маркой PARACOX®, и неослабленный штамм, полученный из исходной культуры, используемой при производстве вакцин, продаваемых под маркой COCCIVAC®. Оба этих штамма обеспечивают эффективность в отношении заражения E. maxima. Однако вакцинация поголовья бройлеров неослабленным штаммом приводит к появлению полного иммунитета к концу 3 недели, тогда как вакцинация ранними и/или ослабленными вакцинами занимает по меньшей мере четыре недели до полного укрепления иммунитета.

Вследствие различной продолжительности эндогенных периодов более ранний иммунитет у животного-носителя можно получать посредством эффекта эха. Таким образом, за счет достижения асинхронной стимуляции иммунного ответа, т.е. эффекта эха, комбинированные штаммы Eimeria maxima могут стимулировать более продолжительное воздействие антигена на иммунную систему и, таким образом, ускорять процесс развития защитного иммунитета.

В действительности, совместное введение двух штаммов может повышать эффективность процесса иммунизации. Как неослабленные, так и ранние ооцисты одновременно начинают соответственные жизненные циклы в организме хозяина, однако неослабленный штамм завершает свой эндогенный период приблизительно через 11-31 часа после раннего штамма. Неослабленный штамм также выделяет значительно большее количество ооцист в фекалии.

Таким образом, ранний штамм проходит свой жизненный цикл в организме хозяина первым, тем самым инициируя иммунный ответ хозяина. Затем ранние ооцисты экскретируются, образуют споры, и после их поглощения хозяином начинают свой второй жизненный цикл. В то же время первый жизненный цикл неослабленного штамма продолжает производить одно или более новых поколений шизонтов, что обязательно заканчивается образованием гаметоцитов, усиливающих и развивающих вызванный ранним штаммом иммунный ответ. Выделенные неослабленные ооцисты затем образуют споры в помете и поглощаются хозяином, который уже содержит ранний штамм, вступивший во второй жизненный цикл. Такие одновременные асинхронные жизненные циклы, таким образом, помогают укорачивать время, необходимое для достижения напряженности иммунитета у хозяина. Суммарный процесс также позволяет вакцинам содержать меньше неослабленных ооцист в первоначальной дозе, что способствует снижению частоты и/или ослаблению серьезности повреждений, возникающих в кишечнике хозяина вследствие инфекции неослабленным штаммом.

Применение специфических терминов для удобства описания ни в коей мере не подразумевает четкого ограничения. Таким образом, например, упоминание композиции, содержащей "количество", включает упоминание одного или нескольких таких количеств. Кроме того, упоминание "ооциста", если не указано иначе, включает упоминание множества таких ооцист.

Как применяют в настоящем документе, следующие термины должны иметь значения, изложенные ниже:

Термины "адъювант" и "иммуностимулятор" используются в настоящем документе взаимозаменяемо и определены как один или более веществ, вызывающих стимуляцию иммунной системы. Адъюванты представляют собой средства, которые неспецифически повышают иммунный ответ на конкретный антиген, тем самым снижая количество антигена, необходимое в любой данной вакцине и/или частоту инъекций, необходимую для возбуждения адекватного иммунного ответа на интересующий антиген. В этой связи адъювант используют для усиления иммунного ответа на один или более вакцинных антигенов/изолятов. Адъювант можно вводить запланированному животному до, в сочетании с или после введения вакцины.

Как применяют в настоящем документе, термин "приблизительно" используется взаимозаменяемо с термином "примерно" и означает, что значение находится в области колебания пятидесяти процентов от указанного значения, т.е. композиция, содержащая "приблизительно" 100 ооцист, содержит от 50 до 150 ооцист.

Как применяют в настоящем документе, "ослабленный" штамм вида из рода Coccidia (такой как "ослабленный Eimeria") представляет собой штамм, выбранный на основании сниженной патогенности в организме хозяина. Такое ослабление может достигаться различными способами, включая серийный пассаж (такой как серийный эмбриональный пассаж), химический мутагенез и лучевую обработку.

Как применяют в настоящем документе, "ранний" штамм вида из рода Coccidia (такой как "ранний Eimeria") представляет собой a штамм, имеющий укороченный эндогенный период относительно неослабленного штамма того же вида. Ранний штамм также может быть ослабленным штаммом.

Как применяют в настоящем документе, штамм "дикого типа" вида из рода Coccidia (такой как "дикий тип Eimeria") представляет собой исходный изолят, не измененный путем пассажа или любой другой обработки, включая отбор посредством: выделения отдельных ооцист, иммунологической толерантности или другого сегрегационного процесса.

Как применяют в настоящем документе, "неослабленный" штамм вида из рода Coccidia (такой как "неослабленный Eimeria") представляет собой штамм, не имеющий ни укороченного эндогенного периода, ни сниженной патогенности в организме хозяина относительно штамма дикого типа того же вида.

Как применяют в настоящем документе, "штамм" вида из рода Coccidia (например, вида Eimeria) представляет собой субпопуляцию вида из рода Coccidia, которую можно выделить среди общей популяции по одному или нескольким следующим критериям: патогенность, иммуногенность, эндогенный период, и/или популяция, возникающая из отдельных ооцист.

Термин "асинхронный эндогенный период времени" относится к эндогенным периодам времени двух или более видов из рода Coccidia и/или двух или более штаммов вида из рода Coccidia, различающихся на 10% или более, в конкретном варианте осуществления два или более видов из рода Coccidia и/или два или более штаммов отдельного вида из рода Coccidia имеют асинхронные эндогенные периоды, различающиеся на 20% или более. В еще другом варианте осуществления два или более видов из рода Coccidia и/или два или более штаммов отдельного вида из рода Coccidia имеют асинхронные эндогенные периоды, различающиеся на 25% или более.

При указании асинхронных эндогенных периодов для ранних и/или ослабленных штаммов с неослабленными штаммами, различающихся во времени на определенный процент (%), процентное отношение отсчитывается от эндогенного периода времени неослабленного штамма. Таким образом, если неослабленный штамм рода Coccidia имеет эндогенный период 120 часов и ранний штамм того же вида из рода Coccidia имеет эндогенный период 108 часов, то два штамма имеют асинхронные эндогенные периоды, различающиеся на 10%.

Как применяют в настоящем документе термин "домашняя птица(ы)", если не указано иначе, включает кур, индюков, уток, пернатую дичь (включая в качестве неограничивающих примеров перепелов, фазанов и гусей) и бескилевых птиц (включая в качестве неограничивающих примеров эму и страусов).

Как применяют в настоящем документе, термин "Eimeria", если не указано иначе, означает один или более видов из рода Eimeria, которые инфицируют домашних птиц. Виды Eimeria включают представителей, выявленных у кур, и включает, например,