Инъекционная форма 5α андростан-3β,5,6β-триола и способ ее получения
Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой инъекционную форму 5α-андростан-3β,5,6β-триола, включая жидкую инъекционную форму, содержащую растворитель, или твердую инъекционную форму, содержащую по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, причем указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество включает гидроксипропил-β-циклодекстрин. Изобретение обеспечивает получение стабильной инъекционной формы 5α-андростан-3β,5,6β-триола. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 7 пр., 4 табл.
Реферат
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение представляет собой изобретение в области фармацевтики и относится к инъекционной форме 5α-андростан-3β,5,6β-триола и способу ее получения.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
5α-андростан-3β,5,6β-триол (далее - YC-6) представляет собой недавно открытое нейропротекторное соединение. В настоящее время острый ишемический инсульт (ОИИ) в основном лечат с помощью тромболитической или нейропротекторной терапии. Нейропротекторные агенты могут уменьшать область инфаркта мозга и предотвращать геморрагические осложнения, которые могут возникать во время тромболитической или антикоагулянтной терапии. Кроме того, данное соединение можно применять даже в отсутствие какого-либо этиологического диагноза, что позволяет проводить раннее лечение. Поэтому нейропротекторные агенты привлекают все большее внимание при исследовании ОИИ.
Однако на сегодняшний день нейропротекторные агенты с доказанной безопасностью и эффективностью отсутствуют. Большое количество соединений, имеющих потенциальную ценность для клинического применения, находятся на стадии клинических испытаний, включая блокаторы кальциевых каналов (БКК), модуляторы кальциевых каналов, ингибиторы высвобождения глутамата, агонисты рецепторов γ-аминомасляной кислоты (ГАМК), ловушки свободных радикалов, антитела к факторам межклеточной адгезии и так далее.
Среди большого числа соединений все более привлекательными становятся нейроактивные стероиды благодаря их широкому спектру действия в отношении защиты нейронов. В частности, действие недавно открытого нейропротекторного химического соединения YC-6 не ограничивается защитой нейронов. Данное соединение эффективно не только против ишемии головного мозга, но также и против ишемии спинного мозга при ежедневной дозе 50-100 мг.
YC-6 нерастворим в воде. Хотя его растворимость возрастает в традиционных неводных растворителях или их смесях, эти растворители вызывают раздражение, а при разбавлении водой YC-6 может выпадать в осадок. Это негативно сказывается на эффективности и безопасности инъекций YC-6 и ограничивает возможность их применения.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для преодоления недостатков, обсуждаемых выше, согласно настоящему изобретению предложены инъекционные формы YC-6 и способы их получения. Согласно настоящему изобретению применяют гидроксипропил-β-циклодекстрин в качестве солюбилизирующего агента для приготовления инъекционных форм YC-6. Раздражение, вызываемое неводными растворителями, успешно снижается при одновременном повышении растворимости YC-6.
Для достижения этого предложены инъекционные формы YC-6 в жидкой или твердой форме. Инъекционные формы содержат по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, включая гидроксипропил-β-циклодекстрин. Указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество может также содержать агент, регулирующий изотоничность, или наполнитель для сублимационной сушки.
Предпочтительно, YC-6 присутствует в массовом отношении 1~20:40~500 к гидроксипропил-β-циклодекстрину.
Инъекционные формы также могут быть получены с применением следующих компонентов (по массе): 1~20 частей YC-6, 40~500 частей гидроксипропил-β-циклодекстрина, 1~100 частей агента, регулирующего изотоничность, 0~200 частей наполнителя для сублимационной сушки и 0~2000 частей растворителя.
Агент, регулирующий изотоничность, выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.
Наполнитель для сублимационной сушки выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.
Для приготовления жидкой инъекционной формы растворитель выбран из группы, состоящей из пропандиола, этанола, полиэтиленгликоля 400, полиэтиленгликоля 200, глицерина, воды и их смесей.
Инъекционная форма согласно настоящему изобретению может быть получена способом, включающим стадии, согласно которым последовательно растворяют в воде для инъекций гидроксипропил-β-циклодекстрин, YC-6 и по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество с получением исходного раствора; далее указанный исходный раствор последовательно подвергают обесцвечиванию, фильтрации и стерилизации с получением инъекционной формы согласно настоящему изобретению.
Лиофильно высушенный порошок получают путем наполнения ампул фильтратом, полученным на стадии фильтрации выше, и проведением сублимационной сушки.
Стерильный порошок получают путем распылительной сушки фильтрата, полученного на стадии фильтрации выше, с последующей фасовкой.
Обесцвечивание может быть осуществлено при помощи 0,1~0,3% активированного угля, а стерилизация может быть осуществлена при температуре 115°C в течение 30 мин или при 121°C в течение 15 мин.
Следует отметить, что YC-6 также может быть приготовлен в виде YC-6 для инфузий путем смешивания инъекционной формы YC-6 с традиционными растворами для инфузий без лекарственных средств, такими как глюкоза для инфузий, натрия хлорид для инфузий или глюкоза и натрия хлорид для инфузий.
Настоящее изобретение обеспечивает преимущества по сравнению с традиционными методиками. Применение гидроксипропил-β-циклодекстрина или неводных растворителей/смешанных растворителей повышает растворимость YC-6 таким образом, что YC-6 может быть получен в виде раствора для инъекций, стерильного порошка, лиофилизированного порошка, YC-6 для инфузий на основе глюкозы, хлорида натрия или глюкозы и хлорида натрия, что обеспечивает возможность внутривенного введения YC-6 в случае необходимости. Кроме того, при приготовлении в инъекционной форме согласно настоящему изобретению YC-6 имеет достаточную растворимость и эффективность, не вызывая раздражения. Процесс получения также прост и широко доступен.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Пример 1. Получение 200 ампул с инъекционной формой YC-6 (спецификация 5 мл: 50 мг)
Состав:
YC-6 | 10 г |
2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин | 200 г |
Натрия хлорид | 1,25 г |
Вода для инъекций до | 1000 мл |
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют хлорид натрия и растворяют его при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 5 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 121°C в течение 15 мин.
Пример 2. Получение 200 ампул YC-6 для инъекций (спецификация 10 мл: 80 мг)
Состав:
YC-6 | 16 г |
2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин | 400 г |
Глюкоза | 13,9 г |
Вода для инъекций до | 2000 мл |
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют глюкозу и растворяют ее при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема до 2000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 10 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 121°C в течение 15 мин.
Пример 3. Получение 200 ампул YC-6 для инъекций (спецификация 5 мл: 100 мг)
Состав:
YC-6 | 20 г |
2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин | 400 г |
Вода для инъекций до | 1000 мл |
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют воду для инъекций до объема 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат собирают и разливают с получением 5 мл инъекционной формы, затем стерилизуют при 115°C в течение 30 мин.
Пример 4. Получение 200 ампул со стерильным порошком YC-6 (спецификация 80 мг/ампула)
Состав:
YC-6 | 16 г |
2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин | 400 г |
Натрия хлорид | 2,5 г |
Фасовка в | 200 ампул |
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют хлорид натрия и растворяют его при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема 2000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат сушат путем распылительной сушки и затем расфасовывают в 200 ампул.
Пример 5. Получение 200 ампул с лиофильно высушенным порошком YC-6 (спецификация 5 мл: 60 мг)
Состав:
YC-6 | 12 г |
2-Гидроксипропил-β-циклодекстрин | 200 г |
Глюкоза | 7 г |
Вода для инъекций до | 1000 мл |
Приготовление: 2-гидроксипропил-β-циклодекстрин растворяют в 80% свежеприготовленной воды для инъекций и добавляют YC-6, затем перемешивают при комнатной температуре в течение 10~20 минут до полного растворения YC-6. Добавляют глюкозу и растворяют ее при перемешивании, затем добавляют воду для инъекций до объема до 1000 мл. В указанный выше раствор добавляют 0,1% активированного угля, перемешивают в течение 15 мин при 60°C, а затем охлаждают раствор естественным путем до комнатной температуры. Для фильтрации применяют 0,22 мкм микропористый мембранный фильтр. Фильтрат разливают в 5 мл ампулы и затем лиофильно сушат.
Пример 6. Совместная стабильность инъекционной формы YC-6 и общепринятых растворов для инфузий.
Две ампулы инъекционной формы YC-6 (5 мл Х 2) из примера 1 добавляют в общепринятый раствор для инфузий для оценки совместной стабильности YC-6 в течение 8 часов. Показатели для оценки совместной стабильности включают цветность, прозрачность, pH и содержание YC-6. Результаты представлены в следующих таблицах.
Таблица 1 | |
Тесты на совместимость инъекционной формы YC-6 и общепринятых растворов для инфузий | |
Обозначение | Тесты на совместимость (25-30°C) |
A | Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+5% раствор глюкозы для инъекций 250 мл |
B | Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+0,9% раствор натрия хлорида для инъекций 250 мл |
C | Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+раствор глюкозы и NaCl для инъекций 250 мл |
D | Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+состав с NaCl для инъекций 500 мл |
E | Инъекционная форма YC-6 5 мл Х 2+5% раствор натрия бикарбоната для инъекций 250 мл |
Таблица 2 | |||||
Изменения в цветности и прозрачности общепринятых растворов для инфузий | |||||
Обозначение | Перед добавлением | После добавления (ч) | |||
0 | 2 | 4 | 8 | ||
А | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, |
прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | |
В | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, |
прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | |
С | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, |
прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | |
D | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, |
прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | |
Е | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, | Бесцветный, |
прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный | прозрачный |
Таблица 3 | |||||
Изменение рН в общепринятых растворах для инфузий | |||||
Обозначение | Перед добавлением | Послe добавления (ч) | |||
0 | 2 | 4 | 8 | ||
А | 4,05 | 4,06 | 4,05 | 4,02 | 4,08 |
В | 5,60 | 5,62 | 5,58 | 5,46 | 5,58 |
С | 4,02 | 4,04 | 4,03 | 4,00 | 4,04 |
D | 5,64 | 5,62 | 5,60 | 5,59 | 5,59 |
Е | 7,99 | 7,94 | 7,90 | 8,04 | 8,00 |
Таблица 4 | ||||
Изменение концентрации YC-6 в традиционных растворах для инфузий | ||||
Обозначение | 0 ч | 2 ч | 8 ч | 24 ч |
А | 375,4 | 364,7 | 367,7 | 363,4 |
В | 379,2 | 373,5 | 380,4 | 386,1 |
С | 385,6 | 387,6 | 383,4 | 384,5 |
D | 382,0 | 383,7 | 387,2 | 380,8 |
Е | 386,7 | 375,1 | 381,3 | 376,5 |
Пример 7. Предварительная оценка безопасности YC-6
Мышей Куньмин помещали в клетку по массе и случайным образом делили на 5 групп. Каждая группа состояла из 10 мышей, половина самцов и половина самок. Инъекционную форму YC-6, полученную согласно примеру 3 (20 мг/мл), вводили внутривенно в хвостовую вену в различных дозах. Всех мышей умерщвляли после одной недели наблюдения. Токсическую реакцию и количество умерших животных регистрировали каждый день. Рассчитывали ЛД50 и 95% доверительный интервал. ЛД50 YC-6 составила более чем 400±121 мг/кг.
Клетки крови получали в соответствии с общепринятыми методами из свежей крови, полученной от новозеландских кроликов. Клетки крови разводили физиологическим раствором с получением 2% суспензии. Инъекционную форму YC-6, полученную согласно примеру 1, затем добавляли к 2% суспензии и инкубировали при 37°C в течение 3 часов. Коэффициент гемолиза определяли колориметрическим методом. Коэффициент гемолиза YC-6 для инъекций составил менее 1%.
Морских свинок-альбиносов подвергали анафилактическим испытаниям в соответствии с общепринятыми методиками. Анафилактической реакции после внутривенного введения инъекционной формы YC-6, полученной согласно примеру 1, не наблюдалось.
Новозеландских кроликов использовали для теста на раздражение сосудов при внутривенном введении инъекционной формы YC-6, полученной согласно примеру 1. Результаты показали, что изменения тканей краевой ушной вены в тестируемой группе и контрольной группе аналогичны. У каждого кролика были целые стенки сосудов краевой ушной вены и нормальное строение вен. Каких-либо патологических изменений, таких как повреждение клеток эндотелия или отек окружающих тканей, не наблюдалось.
1. Инъекционная форма 5α-андростан-3β,5,6β-триола, включая жидкую инъекционную форму, содержащую растворитель, или твердую инъекционную форму, содержащая по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество, причем указанное по меньшей мере одно растворимое вспомогательное вещество включает гидроксипропил-β-циклодекстрин.
2. Инъекционная форма по п.1, отличающаяся тем, что 5α-андростан-3β,5,6β-триол присутствует в массовом отношении 1~20:40~500 к гидроксипропил-β-циклодекстрину.
3. Инъекционная форма по п.1 или 2, отличающаяся тем, что растворимое вспомогательное вещество дополнительно содержит агент, регулирующий изотоничность, и/или наполнитель для сублимационной сушки.
4. Инъекционная форма по п.3, отличающаяся тем, что агент, регулирующий изотоничность, выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.
5. Инъекционная форма по п.3, отличающаяся тем, что наполнитель для сублимационной сушки выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, глюкозы, маннита, лактозы, ксилита, сорбита, мальтита и их смесей.
6. Инъекционная форма по п.1 или 2, отличающаяся тем, что растворитель для жидкой инъекционной формы выбран из группы, состоящей из пропандиола, этанола, полиэтиленгликоля 400, полиэтиленгликоля 200, глицерина, воды и их смесей.
7. Инъекционная форма по п.3, отличающаяся тем, что указанная инъекционная форма состоит из (по массе): 1~20 частей 5α-андростан-3β,5,6β-триола, 4~500 частей гидроксипропил-β-циклодекстрина, 1~100 частей агента, регулирующего изотоничность, 0~200 частей наполнителя для сублимационной сушки и 0~2000 частей растворителя.
8. Способ получения инъекционной формы по п.1, включающий стадии, согласно которым:(а) последовательно растворяют гидроксипропил-β-циклодекстрин, 5α-андростан-3β,5,6β-триол и дополнительные растворимые вспомогательные вещества в воде для инъекций с получением исходного раствора для инъекций, и(b1) указанный исходный раствор для инъекций подвергают обесцвечиванию, депирогенизации, фильтрации и стерилизации с получением указанной инъекционной формы, или(b2) указанный исходный раствор для инъекций подвергают обесцвечиванию, депирогенизации, фильтрации и помещению полученного фильтрата в ампулы с последующей сублимационной сушкой с получением лиофильно высушенного порошка, или(b3) указанный исходный раствор для инъекций подвергают обесцвечиванию, депирогенизации, фильтрации и распылительной сушке фильтрата с последующей упаковкой.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что обесцвечивание обеспечивают путем применения активированного угля в количестве 0,05~0,3 масс.% от массы инъекционной формы.
10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что стерилизацию осуществляют при 115°C в течение 30 минут или при 121°C в течение 15 минут.