Пероральная композиция с эффектом, направленным против старения кожи

Иллюстрации

Показать все

Изобретение относится к области косметологии и представляет собой композицию, адаптированную для перорального потребления и способную обеспечить эффект, направленный против старения кожи потребителя, содержащую лиганд PPAR, содержащий жирную кислоту омега-3, выбранную из DHA, EPA или их смесей, средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, содержащее изофлавоны сои, средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, представляющее собой витамин С и каротиноид, причем композиция содержит один или несколько дополнительных компонентов, выбранных из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов, причем композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена, причем композиция находится в форме капсулы, при условии, что когда композиция содержит по меньшей мере 0,01 вес. % фосфолипидного эмульгатора пищевого качества, общее количество докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (EPA) в композиции составляет более 0,6 вес. % или менее 0,024 вес. %. Изобретение обеспечивает синергетическое воздействие на проколлаген I, тем самым обеспечивая улучшенный положительный эффект, направленный против старения кожи. 5 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 пр., 2 ил.

Реферат

Это изобретение относится к композиции, адаптированной для перорального приема, и к применению этой и некоторых родственных ей композиций.

Улучшение внешнего вида и ощущения кожи человека стало объектом значительных усилий исследователей. Однако в случае огромного большинства коммерчески доступных продуктов эту проблему решают воздействием на наружную часть кожи. Наиболее распространенной формой является топический крем для кожи. Однако такое топическое нанесение обладает своими ограничениями и воздействует преимущественно на омертвевшие поверхностные слои кожи. Известно, что некоторые ингредиенты могут обеспечивать улучшения внешнего вида и структуры кожи при приеме внутрь. Такие ингредиенты, таким образом, действуют с внутренней стороны кожи и, таким образом, могут обеспечить большие возможности улучшения кожи за счет доступа к живой внутренней части. Более того, такое действие может восприниматься широкой общественностью как являющееся более эффективным или лечебным по своей природе, чем топическое нанесение.

Известно, что пищевой рыбий жир при приеме внутрь обеспечивает существенную защиту от эритемы, индуцированной УФ-излучением.

Также показано, что каротиноиды, такие как ликопин и β-каротин, при пероральном введении дают значительную защиту от эритемы, индуцированной УФ-излучением.

Сходным образом также показано, что витамины E и C при пероральном введении в сочетании обеспечивают защиту от эритемы, индуцированной УФ-излучением.

В US 6589535 (Johnson & Johnson) описана пищевая добавка, которая содержит масло с высоким содержанием жирных кислот ω-3 и ω-6 и каротиноида в комбинации для противодействия вредным эффектам ксенобиотиков на кожу, в частности на иммунную систему кожи. Однако это ограничено пищевыми добавками, такими как капсулы или таблетки, и не описано, как такие вещества можно доставлять с напитками или другой пищевой продукцией. Масло семян черной смородины предпочтительно в качестве источника жирных кислот, однако оно содержит менее эффективную ω-3-PUFA, α-линоленовую кислоту и в целом не так богато ω-3-PUFA, как рыбий жир.

В US 2003/0082275 описан питьевой препарат ω-3, который стабилен при хранении. Описанный напиток содержит очень большое количество масла и, следовательно, является нестабильным, формируя при хранении двухфазный напиток. Примером служит напиток, содержащий 4% мас. масла, что дает концентрацию ω-3 1,6% мас. Яичный желток используют как эмульгатор, который содержит приблизительно 8% мас. лецитина.

Находящаяся на совместном рассмотрении международная заявка авторов настоящего изобретения № PCT/EP2005/011658 относится к стабильным годным к употреблению эмульсиям.

В WO 02/074308 описана композиция для профилактики остеопороза, которая содержит сочетание изофлавонов и полиненасыщенных жирных кислот.

US 5976606 относится к способу получения содержащего DHA тофу или напитка на основе соевого молока. Цель состоит в устранении нежелательного вкуса и/или запаха рыбьего жира.

В EP-A-1340427 описаны кисломолочные продукты, содержащие EPA и/или DHA. Этот документ направлен на получение составов, которые стабильны в отношении окисления и разделения на фазы.

В DE-U-20304752 описан ряд пищевых антиоксидантных композиций, которые содержат ряд разных компонентов, включая цинк, селен, ликопин, витамин C, витамин E, экстракт виноградных косточек и жирные кислоты омега-3.

Сохраняется потребность в композициях, которые могут обеспечить благоприятные эффекты, направленные против старения кожи. В частности, существует потребность в композициях, которые могут оказывать усиленные эффекты на кожу.

Изобретение относится к композиции, адаптированной для перорального потребления и способной обеспечить эффект против старения на кожу потребителя, содержащей:

(i) лиганд PPAR;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид,

где композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена, причем композиция находится в форме капсулы, при условии, что когда композиция содержит по меньшей мере 0,01 вес.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества, общее количество докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (EPA) в композиции составляет более 0,6 вес.% или менее 0,024 вес.%.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, адаптированной для перорального потребления, содержащей:

(i) лиганд PPAR;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид,

где композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена,

для получения эффекта, направленного против старения кожи.

В другом аспекте изобретение относится к применению композиции, адаптированной для перорального потребления, содержащей:

(i) лиганд PPAR;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид,

для усиления синтеза коллагена в коже. Предпочтительно, композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена.

Изобретение также относится к способу достижения эффекта, направленного против старения кожи человека или не являющегося человеком млекопитающего (предпочтительно человека), который включает получение человеком или не являющимся человеком млекопитающим количества композиции по изобретению, которое эффективно для достижения указанного эффекта, направленного против старения. Изобретение дополнительно относится к способу усиления синтеза коллагена в коже млекопитающего (предпочтительно человека), который включает получение человеком или не являющимся человеком млекопитающим количества композиции по изобретению, которое эффективно для достижения указанного повышенного синтеза коллагена. Как правило, эффекты заметны после нескольких недель или месяцев потребления композиции.

Лиганд PPAR

Рецепторы, активируемые пролифератором пероксисом (в настоящем описании сокращено называемые PPAR), представляют собой факторы транскрипции, которые контролируют метаболизм липидов. Лиганды PPAR известны и описаны, например, в WO 02/102337, содержание которой включено в настоящее описание путем ссылки.

Лиганд PPAR содержит жирную кислоту омега-3 (т.е. ненасыщенную карбоновую кислоту, содержащую от 12 до 26 атомов углерода), выбранную из DHA, EPA и их смесей.

Как правило, жирная кислота омега-3 присутствует в композиции в количестве от 0,001% до 10% от массы композиции. Более предпочтительные количества составляют от 0,01% до 5 вес.%, например от 0,1% до 1 вес.% или от 0,1 до 0,5 вес.%.

Жирная кислота омега-3 предпочтительно присутствует в форме рыбьего жира или она получена из микробного источника. Жирная кислота омега-3 может находиться в форме свободной кислоты, сложного C1-C6 алкилового эфира, глицерида (включая моно-, ди- и триглицериды) или их смесей. Предпочтительно, жирная кислота омега-3 находится в форме глицерида (например, триглицерида). В настоящем описании под жирной кислотой омега-3 пронимают свободную кислоту или сложные алкиловые эфиры или глицериды, или их смеси.

Предпочтительными жирными кислотами омега-3 являются DHA и EPA.

DHA представляет собой ω-3 полиненасыщенную жирную кислоту с 22 атомами углерода. Она также присутствует в большом количестве в некоторых жирах рыб (таких как тунец и луфарь) и жирах морских животных.

Как правило, количество DHA в композициях по изобретению варьирует от 0,001% до 10% массы композиции. Более предпочтительные количества составляют от 0,01% до 5 вес.%, например от 0,1% до 1 вес.% или от 0,1 до 0,5 вес.%.

В одном из альтернативных вариантов осуществления композиция может содержать менее 0,2 вес.% масла, содержащего DHA. В другом альтернативном варианте осуществления композиция может содержать более 5% мас. масла, содержащего DHA.

DHA может присутствовать вместе с EPA.

Эйкозапентаеновая кислота (EPA) является одной из нескольких жирных кислот ω-3, используемых в организме. Показано, что усиление потребления EPA является благоприятным при коронарной болезни сердца, высоком кровяном давлении и воспалительных расстройствах, таких как ревматоидный артрит.

Эйкозапентаеновую кислоту (EPA) и докозагексаеновую кислоту (DHA) получают из рыб, обитающих в холодных водах, таких как дикий лосось (не разводимый искусственно), скумбрия, сардины, сельдь, и других северных морских животных. Рыбы могут синтезировать EPA и DHA из незаменимой жирной кислоты ω-3, альфа-линоленовой кислоты (LNA), но получают большую часть EPA и DHA из бурых и красных водорослей, которые производят EPA и DHA из углеводов - сахара, крахмала, целлюлозы и т.д.

Позднее начали коммерческое выращивание бурых и красных водорослей для получения EPA и DHA. Они вырабатывают от 10 до 14% длинноцепочечных ω-3 (в расчете на сухую массу), и их можно использовать в качестве пищевых источников EPA- и DHA-содержащих триглицеридов.

Если в композициях по изобретению присутствуют и DHA, и EPA, то отношение массы DHA к массе EPA составляет, как правило, от 1:10 до 10:1, более предпочтительно от 5:1 до 1:5, более предпочтительно от 3:1 до 1:3, как например от 1:1 до 1:2.

Средство, связывающееся с эстрогенным рецептором

Композиции по изобретению содержат средство, связывающееся с эстрогенным рецептором. Средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, представляет собой предпочтительно природный продукт или его производное или экстракт.

Предпочтительно, средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, содержит один или несколько изофлавонов сои. Предпочтительным изофлавоном сои является генистеин.

Композиция по изобретению предпочтительно содержит генистеин в количестве от 0,0001% до 0,1 вес.%, более предпочтительно от 0,001% до 0,05 вес.%, более предпочтительно от 0,005% до 0,04 вес.%, наиболее предпочтительно от 0,005% до 0,025 вес.%, например от 0,01% до 0,025 вес.%.

Предпочтительно, чтобы композиция содержала от 0,0002 до 0,2 вес.% изофлавонов сои. Это эквивалентно от 20 до 200 мг/100 г композиции. Предпочтительно, композиция содержит от 0,02 до 0,05 вес.% изофлавонов сои.

Генистеин может находиться в гликозилированной или негликозилированной форме или в смеси этих двух форм. Под генистеином в настоящем описании понимают гликозилированную или негликозилированную формы или смеси этих двух форм, если конкретно не указано иное. Количества генистеина вычисляют, исходя из негликозилированной формы (т.е., как если бы гликозилированный генистеин являлся негликозилированным). Генистеин предпочтительно присутствует в композиции по изобретению в виде компонента природного продукта или его экстракта или концентрата. Предпочтительно, природный продукт является соей или красным клевером, более предпочтительно соей.

Генистеин, полученный из сои, предпочтительно очищают, по меньшей мере до некоторой степени, путем удаления соевого белка. Таким образом, композиции по изобретению предпочтительно содержат менее 1 вес.% соевого белка, более предпочтительно менее 0,5 вес.% соевого белка, более предпочтительно менее 0,1 вес.% соевого белка, например менее 0,01% или менее 0,001%, или менее 0,0001 вес.%. Композиция по изобретению может не содержать соевого белка или по существу не содержать соевого белка.

Средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена

Композиции по изобретению содержат компонент, который является средством (например, соединением), участвующим в посттрансляционной модификации коллагена. Предпочтительно, средство является кофактором гидроксилирования остатков пролина.

Предпочтительно, средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, является витамином C.

Как правило, витамин C присутствует в композиции по изобретению в количестве от 0,01% до 1 вес.%, более предпочтительно от 0,05% до 0,5 вес.%, наиболее предпочтительно от 0,1% до 0,3 вес.%.

Каротиноид

Композиции по изобретению содержат один или несколько каротиноидов.

Предпочтительно, композиция содержит от 0,0005 до 0,1 вес.% каротиноидов. Это эквивалентно от 0,5 до 100 мг/100 г. Предпочтительно, композиция содержит от 0,002 до 0,04 вес.% каротиноидов. Каротиноиды, будучи жирорастворимыми, должны содержаться преимущественно в масляной фазе. Очень предпочтительными каротиноидами являются β-каротин и ликопин. Эти каротиноиды обеспечивают умеренную защиту от эритемы, индуцированной УФ, благодаря, как считается, их антиоксидантной функции, включая связывание активных форм кислорода.

Предпочтительно, каротиноид выбран β-каротина, ликопина и их смесей.

Как правило, каротиноид присутствует в количестве от 0,001% до 0,1 вес.%, более предпочтительно от 0,01% до 0,05 вес.%.

Необязательные компоненты

Композиции по изобретению могут содержать один или несколько дополнительных компонентов. Предпочтительные необязательные дополнительные компоненты включают компоненты, выбранные из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов, и их комбинаций.

Композиция предпочтительно содержит один или несколько дополнительных компонентов, выбранных из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов.

Композиция по изобретению предпочтительно имеет pH от 3 до 5, например от 3 до 4.

Один или несколько антиоксидантов предпочтительно присутствуют в композициях по изобретению для предотвращения или замедления естественного окислительного разложения окисляемых веществ, таких как любая жирная кислота омега-3. Прогорклый рыбий жир не только обладает неприятным вкусом, но даже может обладать негативными эффектами на здоровье (Kubow S., «Toxicity of dietary lipid peroxidation products», Trends in Food Sciences & Technology, September, 67-71 (1990)).

Подходящие антиоксиданты можно выбирать, хотя не исключительно, из следующего списка, как индивидуально, так и в комбинации: TBHQ, аскорбиловые сложные эфиры (например, аскорбилпальмитат), аскорбиновая кислота, токоферолы, экстракт розмарина, фруктовые концентраты или экстракты, экстракт черного или зеленого чая, пропилгаллат, эфирные масла или смолы, бутилированный гидроксианизол (BHA), бутилированный гидрокситолуол (BHT), лимонная кислота или сложные эфиры, кофермент Q10, токотриенолы, хелаторы (например, EDTA), носители, полифенолы, фенольные соединения, флавоноиды, поглотители кислорода.

Особенно предпочтительным антиоксидантом является витамин E.

Количество добавляемого антиоксиданта должно быть достаточным для предотвращения прогоркания жирной кислоты омега-3 в течение обычного срока годности в 6 месяцев. Очевидно, что количество антиоксиданта будет зависеть от типа и активности используемого антиоксиданта.

Для этих целей антиоксидантную активность измеряют с использованием подходящего анализа (например, тролоксового эквивалента антиоксидантной способности).

Композиции по изобретению предпочтительно содержат ароматизатор. Подходящие ароматизаторы могут являться природными или синтетическими. Ароматизатор может потребоваться для того, чтобы сделать продукт более аппетитным для употребления.

В другом варианте осуществления композиция по изобретению содержит менее 50 вес.% воды и/или по существу не содержит консервантов и/или ароматизаторов.

Предпочтительно, композиция содержит по меньшей мере 0,01 вес.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества. Предпочтительно, эмульгатор присутствует в количестве от 0,05 до 3 вес.%, более предпочтительно от 0,1 до 1 вес.%.

Обнаружено, что фосфолипидные эмульгаторы являются очень подходящими для использования.

Фосфолипидный эмульгатор пищевого качества может потребоваться для того, чтобы стабилизировать композицию в виде эмульсии «масло-в-воде». Предпочтительно, фосфолипидный эмульгатор представляет собой лецитин. Фосфолипидные эмульгаторы являются жирорастворимыми, но лецитин можно добавлять в любую фазу перед эмульгированием. Предпочтительно, его добавляют в водную фазу.

В другом варианте осуществления композиция по изобретению содержит менее 0,01 вес.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества.

Композицию по изобретению, как правило, потребляют от одного до четырех раз в сутки (предпочтительно один раз в сутки).

Композиции по изобретению по существу не содержат добавленного цинка и/или селена. Композиции по изобретению могут содержать следовые количества цинка и/или селена из коммерчески доступных компонентов композиции, но не содержат добавленного цинка или селена в форме их металлов или солей. Таким образом, композиции по изобретению, например, могут содержать менее 0,5 мг цинка и/или менее 0,01 мг селена или менее 0,0005% цинка и менее 0,00001% селена, соответственно, более предпочтительно менее 0,0001% цинка и менее 0,000005% селена.

В частных случаях композиции по изобретению включают следующее.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) витамин C; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) ликопин и/или бета-каротин.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Композиции, содержащие:

(i) жирную кислоту омега-3, предпочтительно DHA и/или EPA;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Композиции, содержащие:

(i) лиганд PPAR;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) каротиноид.

Композиции, содержащие:

(i) лиганд PPAR;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Композиции, содержащие:

(i) лиганд PPAR;

(ii) генистеин, предпочтительно из изофлавонов сои;

(iii) витамин C; и

(iv) бета-каротин и/или ликопин.

Отношение массы (i) к массе (ii) в композициях по изобретению составляет предпочтительно от 100:1 до 1:10, более предпочтительно от 50:1 до 1:1, более предпочтительно от 40:1 до 10:1.

Форма продукта

Композиция по изобретению пригодна к употреблению в пищу, и ее получают предпочтительно на водной основе, т.е. она содержит по меньшей мере 50 вес.% воды, предпочтительно по меньшей мере 60% мас. или даже по меньшей мере 70% мас. воды. Она может быть как жидкой, так и замороженной. Продукт, таким образом, создает ощущение обычного продукта на водной основе, и его можно употреблять на регулярной основе как часть обычного питания потребителей. Например, он может заменять фруктовый сок, обычно употребляемый во время завтрака.

Композиция по изобретению может принимать любую подходящую форму, включая, например, пищевые продукты и пищевые добавки. Композиции для перорального потребления, которые можно использовать согласно изобретению, включают напитки, бруски и другие жидкие и твердые формы, такие как таблетки, пилюли, капсулы и порошки (которые могут содержать кристаллический материал), а также пастообразные продукты, маргарины, сливки, соусы, дрессинги, майонезы, мороженое, начинки, кондитерские изделия и хлопья.

Предпочтительно, композиции по изобретению находятся в форме по существу гомогенной водной эмульсии, суспензии или дисперсии.

Композиция по изобретению предпочтительно упакована в виде напитка.

Предпочтительно композиция имеет вязкость от 2 до 100 сантипуаз при скорости сдвига 1 с-1 и при 25°C.

Композицию по настоящему изобретению можно получать из водной фазы и масляной фазы. Как правило, водорастворимые ингредиенты объединяют в водной фазе, а жирорастворимые ингредиенты - в масляной фазе. Исключением является эмульгатор. Неожиданно было обнаружено, что эмульгатор, который является жирорастворимым, дает более стабильную эмульсию при добавлении к водной фазе.

Две фазы затем смешивают вместе в обычном устройстве для эмульгирования. Полученная эмульсия является стабильной при хранении, и масло не прогоркает в течение месяцев.

Масляную фазу и водную фазу затем смешивают вместе для формирования гомогенной стабильной эмульсии.

В предпочтительном способе масло находится на порошкообразном материале-носителе, что способствует формированию эмульсии.

Стабильную эмульсию можно затем упаковать в закрытый контейнер, такой как контейнер из металла, картона с покрытием (например, tetra Pak) или пластика. Контейнер затем, предпочтительно, запаивают так, чтобы не оставить свободного пространства, или свободное пространство заполняют газом (например, азотом или диоксидом углерода). Это способствует еще большему предотвращению окисления.

Альтернативно, эмульсию можно заморозить и упаковать, и продавать как замороженный потребительский продукт.

Применения по изобретению

Композиция по изобретению предпочтительно способна усиливать синтез коллагена в коже.

Композиция может вызывать эффект, направленный против старения кожи. Под термином «против старения» авторы настоящего изобретения подразумевают, что кожа может выглядеть менее морщинистой (т.е. существует эффект против морщин, направленный на морщины и/или тонкие морщины, включая уменьшение глубины морщин), и что композиция может сообщать одно или несколько дополнительных преимуществ для кожи, выбранных из: пониженной сухости; повышенной плотности; повышенной эластичности; повышенной гладкости; более чистой кожи; меньшего количества пятен, пустул и прыщей (включая акне); более чистой кожи; менее чувствительной кожи; и в целом, более здоровой кожи.

Композиции по изобретению могут обладать эффектом, направленным против старения, путем усиления синтеза коллагена в коже, и композиции по изобретению можно использовать для усиления синтеза коллагена (как часть эффекта, направленного против старения, или независимо от него); предпочтительно синтез коллагена усиливается по меньшей мере на 10%, более предпочтительно по меньшей мере на 20%, например по меньшей мере на 25 вес.% (например, как определяют на основе массы синтезированного коллагена, предпочтительно в течение периода 14 недель).

Кожа может включать кожу всего организма, предпочтительно лица, шеи и/или рук. Кожа может также включать кожу головы с благоприятным действием на волосы (включая замедление старения) и зуд или раздражение кожи головы.

Следующие неограничивающие примеры иллюстрируют изобретение и никоим образом не ограничивают его объем. В примерах и в настоящем описании все процентные доли, части и отношения являются весовыми, если не указано иное.

ПРИМЕРЫ

Определение усиления синтеза коллагена

Описание экспериментального подхода

Биохимический анализ и способ выделения белка были разработаны для определения изменений в синтезе нового коллагена в коже.

А. Биоптаты кожи отбирали для исходного состояния (T1) и в конце (T15) периода воздействия.

B. Для каждого момента времени отбирали дерматомом два биоптата по 3 мм (глубиной 4 мм), помещали в контейнер для криопробирок и сразу же замораживали в жидком азоте.

C. Эти биоптаты затем хранили при -80°C.

Материалы и методы

Получение клеточного лизата

Все полученные дерматомом биоптаты помещали в гомогенизатор Даунса с 1 мл буфера для лизиса клеток и полностью измельчали (таким образом, чтобы не оставалось значительных кусков кожи или внеклеточного матрикса). Буфер для лизиса содержал 1% NP-40, 0,1% дезоксихолата натрия, 0,1% SDS, 6 мМ хлорида натрия и 0,05М триса при pH 7,6. Смесь ингибиторов протеаз (1000X; Sigma P8340) добавляли перед использованием до концентрации 10 мкл на мл буфера для лизиса. После полной гомогенизации ткани нежелательный клеточный дебрис удаляли центрифугированием в течение 20 минут при 20000 g при 4ºC. Осветленный клеточный лизат замораживали при -80ºC до возникновения необходимости.

Анализ общего белка (Pierce)

Концентрацию общего белка для каждого клеточного лизата измеряли с использованием набора для анализа белка Pierce BCA. Набор из восьми стандартных растворов, варьирующих от 0 до 1200 мкг/мл белка, получали из поставляемого маточного раствора 2 мг/мл BSA. 10 мкл стандарта или клеточного лизата добавляли в двух параллелях в лунки плоскодонного 96-луночного планшета для микротитрования. Раствор реагента получали согласно инструкциям к набору из 50 частей реагента A и 1 части реагента B. 200 мкл окончательного реагента добавляли в каждую лунку планшета для микротитрования. Планшет перемешивали, закрывали и инкубировали при 37ºC в течение 30 минут и измеряли поглощение при 562 нм. Строили калибровочную кривую для белка и использовали ее для определения концентрации белка для каждого клеточного лизата.

Набор для EIA C-пептида проколлагена I (Takara Bio Inc.)

Коллаген I синтезируется из молекулы-предшественника, проколлагена I. Количество свободного пропептида, таким образом, стехиометрически отражает количество синтезированного коллагена I. Набор для ферментного иммуноанализа (EIA) C-пептида проколлагена I типа дает возможность количественно определить C-пептид проколлагена I типа (PIP).

Восемь стандартов PIP получали в разбавителе для образцов в концентрациях, варьирующих от 0 до 640 нг/мл. 100 мкл раствора конъюгата антитело-пероксидаза и 20 мкл клеточного лизата (1 мкг белка) или стандарта добавляли в двух параллелях в лунки. Планшет герметично закрывали и инкубировали при 37ºC в течение 3 часов с последующей промывкой четыре раза 400 мкл PBS. В каждую лунку затем добавляли 100 мкл раствора субстрата и планшет инкубировали при комнатной температуре на столе в течение 15 минут. После этого периода добавляли в каждую лунку 100 мкл останавливающего раствора и измеряли поглощение при 450 нм помощью планшета-ридера.

Строили калибровочную кривую среднего значения поглощения в зависимости от концентрации PIP и вычисляли линию наилучшего соответствия путем регрессионного анализа. Из нее определяли неизвестную концентрацию PIP во всех образцах.

Измерение гидратации кожи

Различные способы определения состояния гидратации рогового слоя суммированы в Fluhr et al., Skin Res Technol 1999; 5:161-170. В кратком изложении, с помощью корнеометра (Courage & Khazaka) измеряют гидратацию кожи посредством детекции емкости эпидермиса. Датчик состоит из двух расположенных рядом друг с другом металлических пластин пальцевого типа с глубиной измерения приблизительно 30 мм. Инструмент определяет уровень влажности наиболее наружных слоев кожи рогового слоя. Принцип действия корнеометра® основан на изменении электрических емкостей детектора, который сконструирован в форме конденсатора. При контакте с кожей поверхности измерительной головки происходит изменение ее электрической емкости в соответствии с уровнем влажности кожи. Увеличение величины, измеряемой корнеометром, указывает на улучшение гидратации кожи.

Измерение трансэпидермальной потери воды (TEWL)

Анализ способов измерения TEWL осуществляли согласно Wilson & Maibach, (1989) Transepidermal water loss, A review, In: Cutaneous Investigation in Health and Disease, Noninvasive Methods and Instrumentation (Leveque, J.L., ed.), pp. 113-130, Dekker, New York, NY. Кожный барьер действует как регулятор водного баланса кожи. При его повреждении происходит дестабилизация системы регуляции водного обмена. Это означает, что происходит более легкая миграция воды во внешнюю среду, что повышает трансэпидермальную потерю воды. Эффективность кожного барьера снижается с возрастом. Однако при улучшении состояния кожного барьера происходит снижение потери воды, так как механизм регуляции водного обмена возвращается в состояние равновесия. Измерения трансэпидермальной потери воды можно осуществлять с помощью эвапориметра EP-3® Servomed. Через датчик, состоящий из двух уловителей, проходит поток водяного пара. Разницу парциального давления измеряют между двумя уловителями. Эта величина соответствует скорости испарения летучего вещества (в данном случае, воды). Уменьшение TEWL указывает на улучшение барьерных свойств кожи.

Измерение эластичности и плотности кожи

Измерения эластичности и плотности кожи осуществляют с помощью кутометра, и они описаны в Escoffier et al, J Invest Dermatol, 93(3):353-7. Измерение осуществляют с помощью инструмента, который, с использованием вакуумного принципа, всасывает определенные области поверхности кожи и оптически это регистрирует. Анализ кривых зарегистрированного измерения дает возможность определить эластические и пластические характеристики кожи. Молодая кожа обладает высокой степенью эластичности и утрачивает форму только постепенно, в то время как восстанавливает свое изначальное состояние после окончания процедуры засасывания. Кожа, которая является молодой, здоровой, мягкой и адекватно увлажненной, будет обладать более высокой степенью эластичности по сравнению со старческой сухой, грубой кожей. Кутометр, таким образом, дает набор измерений, которые позволяют количественно определить характеристики эластичности. Способ состоит в засасывании кожи с помощью датчика измерения. Кожа засасывается в отверстие датчика под действием отрицательного давления, создаваемого внутри устройства. Глубина, до которой кожа проникает в датчик, измеряется бесконтактной оптической измерительной системой. Эта система состоит из источника света и приемника света, а также двух призм, обращенных друг к другу, которые направляют свет от трансмиттера к приемнику. Интенсивность света изменяется в зависимости от глубины проникновения кожи. Сопротивление кожи по отношению к засасыванию указывает на плотность кожи, и способность возвращаться в свое исходное состояние указывает на эластичность кожи. В конце каждого измерения отображается кривая, которая позволяет осуществить несколько вычислений, соответствующих механическим свойствам кожи.

Анализ тонких морщин, морщин и гладкости кожи

Грубость и морщинистость кожи можно оценивать с использованием реплик и профилометрии кожи, как описано в Cook, J Soc Cosmet Chem, 1980; 31:339-359. Получают материал из силиконовой резины, такой как Silflo, и прикладывают его к тестируемой области. После приложения его перемещают и осуществляют анализ с использованием оптической профилометрии. С помощью этого способа измерения изображение из параллельных полос проецируют на поверхность кожи и запечатлевают на CCD-матрицу камеры. Трехмерный эффект измерения достигают благодаря тому, что незначительные различия в оценке на поверхности кожи отклоняют параллельные полосы проекции, и что эти отклонения образуют качественное и количественное измерение профиля кожи. Профили кожи регистрируют на CCD-камеру, подвергают цифровой обработке и передают на измерительный и вычислительный компьютер для количественной оценки.

Пример 1 - Композиция по изобретению

Следующий пример представляет собой пример композиции по изобретению.

Ингредиент % мас.
Рыбий жир (содержащий 12% DHA и EPA) 3,2
Изофлавон сои (40%) 0,083
Витамин C 0,17
Витамин E 0,25
Ликопин (20% активного) 0,027
Бета-каротин (30%) 0,008
Лимонная кислота 0,18
Ароматизатор, подсластитель, загуститель, эмульгатор q.v.
Вода До 100%

Композицию можно получить добавлением компонентов в воду и гомогенизацией смеси.

Пример 2

Композицию по изобретению тестировали в течение 14 недель и получили следующие результаты:

Измерение Способ Изменение после 14 недель (среднее значение из 50)
Плацебо Тест
Цвет кожи Хромометр (условные единицы) -0,2 0,72
Плотность кожи Кутометр (Ur/Uf) -0,027 0,022
Глубина морщин Анализ PRIMOS реплик кожи (величина Rz) 7,82 -5,74
Проколлаген I ELISA (%) 3 24,3

На фиг.1 представлена реплика области кожи вокруг глаза потребителя перед лечением композицией (левая сторона фигуры) и после потребления композиции в течение 14 недель (правая сторона фигуры).

Фиг.2 представляет собой параллельное сравнение того же типа, что и на фиг.1, для разных частей кожи вокруг глаза потребителя.

Как на фиг.1, так и на фиг.2 заметно значительное снижение морщинистости после потребления композиции.

1. Композиция, адаптированная для перорального потребления и способная обеспечить эффект, направленный против старения кожи потребителя, содержащая:(i) лиганд PPAR, содержащий жирную кислоту омега-3, выбранную из DHA, EPA и их смесей;(ii) средство, связывающееся с эстрогенным рецептором, содержащее изофлавоны сои;(iii) средство, которое участвует в посттрансляционной модификации коллагена, представляющее собой витамин С; и(iv) каротиноид,причем композиция содержит один или несколько дополнительных компонентов, выбранных из антиоксидантов, ароматизаторов, консервантов и стабилизаторов,причем композиция по существу не содержит добавленного цинка и/или селена, причем композиция находится в форме капсулы, при условии, что когда композиция содержит по меньшей мере 0,01 вес.% фосфолипидного эмульгатора пищевого качества, общее количество докозагексаеновой кислоты (DHA) и эйкозапентаеновой кислоты (EPA) в композиции составляет более 0,6 вес.% или менее 0,024 вес.%.

2. Композиция по п.1, где отношение массы (i) к массе (ii) составляет от 100:1 до 1:10.

3. Композиция по п.1, где жирная кислота омега-3 присутствует в количестве от 0,01 вес.% до 1,0 вес.%.

4. Композиция по п.1, где изофлавоны сои присутствуют в количестве от 0,01 вес.% до 0,1 вес.%.

5. Композиция по п.1, где витамин С присутствует в количестве от 0,01 вес.% до 1 вес.%.

6. Композиция по по п.1 или 2, где каротиноид выбран из β-каротина, ликопина и их смесей.

7. Композиция по п.6, где каротиноид присутствует в количестве от 0,001 вес.% до 0,1 вес.%.

8. Композиция по п.1 или 2, которая способна усиливать синтез коллагена в коже.

9. Способ борьбы со старением кожи человека или не являющегося человеком млекопитающего, состоящий из стадии получения человеком или не являющимся человеком млекопитающим эффективного количества композиции по любому из пп.1-8.

10. Способ усиления синтеза коллагена в коже человека или не являющегося человеком млекопитающего, включающий стадию получения человеком или не являющимся человеком млекопитающим эффективного количества композиции по любому из пп.1-8.

11. Применение композиции по п.1 для получения эффекта, направленного против старения кожи.

12. Применение композиции по п.1 для усиления синтеза коллагена в коже.

13. Применение по п.11 или 12, где отношение массы (i) к массе (ii) составляет от 100:1 до 1:10.