Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii

Мультиспецифическая связывающая антиген молекула, которая обладает альтернативной функцией к функции фактора свертывания крови viii

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Настоящее изобретение относится к мультиспецифическим связывающим антиген молекулам, которые функционируют вместо фактора свертывания крови VII, кофактора, способствующего ферментативным реакциям, и фармацевтическим композициям, включающим такую молекулу в качестве активного ингредиента.

Предшествующий уровень техники

Гемофилия A представляет собой нарушение кровотечения, вызванное врожденным снижением или отсутствием функции фактора коагуляции крови VIII (F.VIII). Пациентам с гемофилией A обычно при кровотечении назначается композиция F.VIII (по мере необходимости). В последние годы F.VIII композиции также вводятся с профилактической целью для предотвращения случаев кровотечения (превентивное введение; непатентные документы 1 и 2). Период полураспада композиции F.VIII в крови составляет приблизительно от 12 до 16 часов. Таким образом, для беспрерывного предотвращения композиции F.VIII вводятся пациентам три раза в неделю (непатентные документы 3 и 4). По мере надобности композиции F.VIII также дополнительно вводятся тогда, когда это является необходимым, с регулярными интервалами для предотвращения повторного кровотечения. Кроме того, введение композиции F.VIII осуществляют внутривенно. Таким образом, существует острая необходимость в фармацевтических агентах с меньшей нагрузкой, чем композиции F.VIII.

Иногда у пациентов с гемофилией возникают анти-F.VIII антитела (ингибиторы). Такие ингибиторы отменяют эффекты композиций F.VIII. При кровотечении у пациентов, которые образуют ингибиторы (ингибирующие пациенты), вводятся обходные композиции. Механизмы их действия не являются зависимыми от функции F.VIII, то есть основываются на функции активации фактора коагуляции крови Х (F.X) с помощью активированного фактора свертывания крови IX (F.IXa). Таким образом, в некоторых случаях обходные композиции не могут в достаточной мере останавливать кровотечение. В соответствии с этим существует острая необходимость в фармацевтических агентах, которые не подвергаются влиянию со стороны ингибиторов и которые могут функционально заменять F.VIII.

Недавно в качестве средств для решения этой проблемы были раскрыты антитела, которые функционально заменяют F.VIII, и их применение (непатентные документы 1, 2 и 3). Антитела могут быть эффективными для приобретенной гемофилии, при которой присутствуют анти-F.VIII аутоантитела, и при болезни фон Виллебранда, которая вызывается патологией или недостаточностью функции фактора фон Виллебранда (vWF), но активность функционального замещения F.VIII не является достаточной. Таким образом, в качестве фармацевтических агентов, которые демонстрируют высокий гемостатический эффект, являются желательными антитела с более высокой активностью функционального замещения F.VIII, чем упомянутые выше антитела.

Документы уровня техники

[Патентный документ]

[Патентный документ 1] WO 2005/035754

[Патентный документ 2] WO 2005/035756

[Патентный документ 3] WO 2006/109592

[Непатентный документ]

[Непатентный документ 1] Blood 58, 1-13 (1981)

[Непатентный документ 2] Nature 312, 330-337 (1984)

[Непатентный документ 3] Nature 312, 337-342 (1984)

[Непатентный документ4] Biochim. Biophys. Acta 871, 268-278 (1986)

Краткое изложение сущности изобретения

[Проблемы, которые решаются с помощью изобретения]

Задача настоящего изобретения заключается в обеспечении мультиспецифических связывающих антиген молекул, которые функционально заменяют F.VIII, кофактор, который способствует ферментативным реакциям.

[Средства решения проблем]

В качестве результата специального исследования изобретатели в соответствии с данной заявкой преуспели в раскрытии биспецифического антитела, имеющего улучшенную активность, которая способствует образованию F.Xa, по сравнению с известными антителами среди различных биспецифических антител, которые специфически связываются как с F.IX/F.IXa, так и с F.X и заменяют функцию кофактора F.VIII, то есть основываются на функции способствования активации F.X с помощью F.IXa (функции способствования образованию F.Xa).

Кроме того, авторы настоящего изобретения преуспели в раскрытии положений аминокислотных последовательностей биспецифического антитела, обладающих активностью функциональных замен F.VIII, которые являются важными для улучшения активности в отношении способствования образованию F.Xa этих антител, и, таким образом, они являются успешно полученными биспецифическими антителами, в которых активность функциональной замены F.VIII является дополнительно повышенной путем замены этих аминокислот. Они также преуспели в получении биспецифических антител, которые не только обладают высокой активностью функциональной замены F.VIII, а также имеют низкую ингибиторную активность по отношению F.Хазе. Удовлетворение соответствия этим двум условиям является весьма сложным.

В частности, настоящее изобретение относится к мультиспецифическим связывающим антиген молекулам, которые функционально заменяют F.VIII, кофактор, который способствует ферментативным реакциям, и фармацевтическим композициям, включающим такую молекулу в качестве активного ингредиента, и, в частности, относится к следующим:

[1] мультиспецифической связывающей антиген молекуле, которая функционально заменяет фактор свертывания крови VIII, включающей первый сайт связывания антигена, который узнает фактор свертывания крови IX и/или активированный фактор свертывания крови IX, и второй сайт связывания антигена, который узнает фактор свертывания крови X, где функциональная замена фактора свертывания крови VIII является следствием активности в отношении способствования образованию активированного фактора свертывания крови X (F.Xa), более высокой, чем активность биспецифического антитела (hA69-KQ/hB26-PF/hAL-AQ), которое включает H цепь, содержащую SEQ ID NO: 165 и 166, и общую L цепь, которая включает SEQ ID NO: 167;

[2] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [1], которая включает первый полипептид, содержащий первый сайт связывания антигена, который узнает фактор свертывания крови IX и/или активированный фактор свертывания крови IX, и третий полипептид, включающий третий сайт связывания антигена, который узнает фактор свертывания крови IX и/или активированный фактор свертывания крови IX, а также второй полипептид, включающий второй сайт связывания антигена, который узнает фактор свертывания крови X, и четвертый полипептид, включающий четвертый сайт связывания антигена, который узнает фактор свертывания крови X;

[3] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [2], в которой первый полипептид и третий полипептид, каждый включает сайт связывания антигена H цепи или L цепи антитела против фактора свертывания крови IX или активированного фактора свертывания крови IX соответственно; и второй полипептид, и четвертый полипептид, каждые, включают сайт связывания антигена H цепи или L цепи антитела против фактора свертывания крови X соответственно;

[4] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [3], в которой сайт связывания антигена первого полипептида включает сайт связывания антигена, который включает CDR H цепи, состоящие из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из следующих (a1)-(a11), или сайт связывания антигена, функционально эквивалентный им, и сайт связывания антигена второго полипептида включает сайт связывания антигена, который включает CDR H цепи, состоящие из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из следующих (b1)-(b11), или сайт связывания антигена, функционально эквивалентный им:

(a1) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 75, 76 и 77 (CDR Н цепи Q1) соответственно;

(a2) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 78, 79 и 80 (CDR Н цепи Q31) соответственно;

(a3) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 81, 82 и 83 (CDR Н цепи Q64) соответственно;

(a4) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 84, 85 и 86 (CDR Н цепи Q85) соответственно;

(a5) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 87, 88 и 89 (CDR Н цепи Q153) соответственно;

(a6) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 90, 91 и 92 (CDR Н цепи Q354) соответственно;

(a7) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 93, 94 и 95 (CDR Н цепи Q360) соответственно;

(a8) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 96, 97 и 98 (CDR H цепи Q405) соответственно;

(a9) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 99, 100 и 101 (CDR H цепи Q458) соответственно;

(a10) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 102, 103 и 104 (CDR H цепи Q460) соответственно;

(a11) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 H цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 105, 106 и 107 (CDR Н цепи Q499) соответственно;

(b1) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 108, 109 и 110 (CDR Н цепи J232) соответственно;

(b2) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 111, 112, и 113 (CDR H цепи J259) соответственно;

(b3) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 114, 115 и 116 (CDR Н цепи J268) соответственно;

(b4) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 117, 118 и 119 (CDR Н цепи J300) соответственно;

(b5) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 120, 121 и 122 (CDR Н цепи J321) соответственно;

(b6) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 123, 124 и 125 (CDR Н цепи J326) соответственно;

(b7) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 126, 127,и 128 (CDR Н цепи J327) соответственно;

(b8) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 129, 130 и 131 (CDR Н цепи J339) соответственно;

(b9) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 132, 133 и 134 (CDR Н цепи J344) соответственно;

(b10) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 135, 136 и 137 (CDR Н цепи J346) соответственно; и

(b11) сайт связывания антигена, который включает CDR 1, 2 и 3 Н цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 174, 175 и 176 (CDR Н цепи J142) соответственно;

[5] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [3], в которой сайт связывания антигена первого полипептида включает сайт связывания антигена, включающий вариабельный участок Н цепи, состоящий из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из следующих (a1)-(a11), или сайт связывания антигена, функционально эквивалентный им, а сайт связывания антигена второго полипептида включает сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок Н цепи, состоящий из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из следующих (b1)-(b11), или сайт связывания антигена, функционально эквивалентный им:

(a1) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 35 (вариабельный участок Н цепи Q1);

(a2) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 36 (вариабельный участок Н цепи Q31);

(a3) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 37 (вариабельный участок Н цепи Q1);

(a4) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 38 (вариабельный участок Н цепи Q85);

(a5) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 39 (вариабельный участок Н цепи Q153);

(a6) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 40 (вариабельный участок Н цепи Q354);

(a7) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 41 (вариабельный участок Н цепи Q360);

(a8) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 42 (вариабельный участок Н цепи Q405);

(a9) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 43 (вариабельный участок Н цепи Q458);

(a10) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 44 (вариабельный участок Н цепи Q460);

(a11) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 45 (вариабельный участок Н цепи Q499);

(b1) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 46 (вариабельный участок Н цепи J232);

(b2) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 47 (вариабельный участок Н цепи J259);

(b3) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 48 (вариабельный участок Н цепи J268);

(b4) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 49 (вариабельный участок Н цепи J300);

(b5) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 50 (вариабельный участок Н цепи J321);

(b6) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 51 (вариабельный участок Н цепи J326);

(b7) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 52 (вариабельный участок H цепи J327);

(b8) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 53 (вариабельный участок Н цепи J339);

(b9) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 54 (вариабельный участок Н цепи J344);

(b10) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 55 (вариабельный участок Н цепи J346); и

(b11) сайт связывания антигена, который включает аминокислотную последовательность вариабельного участка Н цепи SEQ ID NO: 172 (вариабельный участок Н цепи J142);

[6] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [3], в которой сайты связывания антигена, включенные в третий полипептид и в четвертый полипептид, включают сайт связывания антигена, которая включает CDR L цепи, состоящие из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из следующих (c1)-(c10), или сайт связывания антигена, функционально эквивалентный им:

(c1) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 138, 139 и 140 (CDR L цепи L2) соответственно;

(c2) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 141, 142 и 143 (CDR L цепи L45) соответственно;

(c3) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 144, 145 и 146 (CDR L цепи L248) соответственно;

(c4) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 147, 148 и 149 (CDR L цепи L324) соответственно;

(c5) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 150, 151 и 152 (CDR L цепи L334) соответственно;

(c6) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 153, 154 и 155 (CDR L цепи L377) соответственно;

(c7) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 156, 157 и 158 (CDR L цепи L404) соответственно;

(c8) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 159, 160 и 161 (CDR L цепи L406) соответственно;

(c9) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 137, 138 и 139 (CDR L цепи L408) соответственно; и

(c10) сайт связывания антигена, который включает CDR L цепи с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO: 177, 178 и 179 (CDR L цепи LI 80) соответственно;

[7] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [3], в которой сайты связывания антигена, включенные в третий полипептид и в четвертый полипептид, включают сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи, состоящий из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из следующих (c1)-(c10), или сайт связывания антигена, функционально эквивалентный им:

(c1) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 56 (вариабельный участок L цепи L2);

(c2) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 57 (вариабельный участок L цепи L45);

(c3) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 58 (вариабельный участок L цепи L248);

(c4) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 59 (вариабельный участок L цепи L324);

(c5) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 60 (вариабельный участок L цепи L334);

(c6) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 61 (вариабельный участок L цепи L377);

(c7) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 62 (вариабельный участок L цепи L404);

(c8) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 63 (вариабельный участок L цепи L406);

(c9) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 64 (вариабельный участок L цепи L408); и

(c10) сайт связывания антигена, который включает вариабельный участок L цепи с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 173 (вариабельный участок L цепи L180);

[8] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [3], в которой первый и второй полипептиды дополнительно включают константный участок Н цепи антитела, а третий и четвертый полипептиды включают константный участок L цепи антитела;

[9] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [3], в которой первый и второй полипептиды включают константный участок H цепи антитела, а третий и четвертый полипептиды включают константный участок L цепи антитела, и где третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь;

[10] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [8] или [9], где первый полипептид включает константный участок Н цепи антитела, состоящий из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, которая состоит из следующих (d1)-(d6), или из группы, состоящей из следующих (d7)-(d9), а второй полипептид включает константный участок Н цепи антитела, который состоит из любой одной из аминокислотных последовательностей, выбранных из группы, отличной от такой упомянутого выше первого полипептида:

(d1) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 65 (G4k);

(d2) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 66 (z7);

(d3) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 67 (z55);

(d4) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 68 (z106);

(d5) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 69 (z118);

(d6) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 70 (z121);

(d7) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 71 (G4h);

(d8) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 72 (z107); и

(d9) константный участок Н цепи SEQ ID NO: 73 (z119);

[11] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [8] или [9], где третий и четвертый полипептиды включают константный участок L цепи антитела, состоящий из следующей аминокислотной последовательности:

(e) константный участок L цепи антитела SEQ ID NO: 74 (k);

[12] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [8] или [9], где первый полипептид включает любую одну Н цепь антитела, выбранную из следующих (a1)-(a14), второй полипептид включает любую одну Н цепь антитела, выбранную из следующих (b1)-(b12), а третий полипептид и четвертый полипептиды включают любую одну L цепь антитела, выбранную из следующих (c1)-(c10):

(a1) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1 (Q1-G4k);

(a2) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 (Q31-z7);

(a3) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3 (Q64-z55);

(a4) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10 (Q64-z7);

(a5) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11 (Q85-G4k);

(a6) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12 (Q153-G4k);

(a7) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13 (Q354-z106);

(a8) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14 (Q360-G4k);

(a9) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15 (Q360-z118);

(a10) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16 (Q405-G4k);

(a11) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17 (Q458-z106);

(a12) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18 (Q460-z121);

(a13) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19 (Q499-z118);

(a14) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20 (Q499-z121);

(b1) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4 (J268-G4h);

(b2) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5 (J321-G4h);

(b3) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6 (J326-z107);

(b4) Н цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7 (J344-z107);

(b5) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21 (J232-G4h);

(b6) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22 (J259-z107);

(b7) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23 (J300-z107);

(b8) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24 (J327-z107);

(b9) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25 (J327-z119);

(b10) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 26 (J339-z119);

(b11) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27 (J346-z107);

(b12) H цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 170 (J142-G4h);

(c1) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8 (L2-k);

(c2) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9 (L45-k);

(c3) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 28 (L248-k);

(c4) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 29 (L324-k);

(c5) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 30 (L334-k);

(c6) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 31 (L377-k);

(c7) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 32 (L404-k);

(c8) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 33 (L406-k);

(c9) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 34 (L408-k); и

(c10) L цепи антитела, состоящей из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 171 (L180-k);

[13] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [1], в которой первый полипептид включает сайт связывания антигена, который связывается с эпитопом, который перекрывается с эпитопом, который связывается с антителом, состоящим из Н цепи антитела, которая представляет собой любую одну из (a1)-(a14), и L цепи антитела, которая представляет собой любую из (c1)-(c10) [12], а второй полипептид включает сайт связывания антигена, который связывается с эпитопом, который перекрывается с эпитопом, который связывается с антителом, которое состоит из Н цепи антитела, которая представляет собой любую одну из (b1)-(b12), и L цепи антитела, которая представляет собой любую из (c1)-(c10) [12];

[14] мультиспецифической связывающей антиген молекуле [8] или [9], в которой первый полипептид включает любую одну Н цепь антитела, выбранную из следующих (e1)-(e3), второй полипептид включает любую одну Н цепь антитела, выбранную из следующих (f1)-(f3), а третий полипептид и четвертый полипептид включают любую одну L цепь антитела, выбранную из следующих (g1)-(g4):

(e1) Н цепь антитела, которое связывается с эпитопом, перекрывающимся с эпитопом, который связывается с антителом, состоящим из Н цепи антитела, которая представляет собой любую одну из (a1)-(a14), и L цепи антитела, которая представляет собой любую одну из (c1)-(c10) [12];

(e2) Н цепь антитела, в которой, по крайней мере, один аминокислотный остаток, выбранный из аминокислотных остатков в положениях 34, 35, 49, 61, 62, 96, 98, 100, 100b и 102 в соответствии с нумерацией Кабат в любой одной Н цепи антитела, выбранной из (e1), является замещенным другой аминокислотой;

(e3) Н цепь антитела, в которой в соответствии с нумерацией Кабат, аминокислота в положении 34 представляет собой изолейцин, аминокислота в положении 35 представляет собой аспарагин, глутамин или серин, аминокислота в положении 49 представляет собой серин, аминокислота в положении 61 представляет собой аргинин, аминокислота в положении 62 представляет собой глутаминовую кислоту, аминокислота в положении 96 представляет собой серин или треонин, аминокислота в положении 98 представляет собой лизин или аргинин, аминокислота в положении 100 представляет собой фенилаланин или тирозин, аминокислота в положении 100 представляет собой глицин, или аминокислота в положении 102 представляет собой тирозин в любой Н цепи антитела, выбранной из (e1);

(f1) H цепь антитела, которое связывается с эпитопом, перекрывающимся с эпитопом, который связывается с антителом, состоящим из H цепи антитела, которая представляет собой любую из (b1)-(b12) [12], и L цепи антитела, которая представляет собой любую из (c1)-(c10) [12];

(f2) Н цепь антитела, в которой, по крайней мере, один аминокислотный остаток, выбранный из аминокислотных остатков в положениях 35, 53, 73, 76, 96, 98, 100, и 100a в соответствии с нумерацией Кабат в любой Н цепи антитела (f1), является замещенным другой аминокислотой;

(f3) Н цепь антитела, в которой в соответствии с нумерацией Кабат аминокислота в положении 35 представляет собой аспарагиновую кислоту, аминокислота в положении 53 представляет собой аргинин, аминокислота в положении 73 представляет собой лизин, аминокислота в положении 76 представляет собой глицин, аминокислота в положении 96 представляет собой лизин или аргинин, аминокислота в положении 98 представляет собой тирозин, аминокислота в положении 100 является тирозином или аминокислота в положении 100a является гистидином в любой одной Н цепи антитела, выбранной из (f1);

(g1) L цепь антитела, которое связывается с эпитопом, перекрывающимся с эпитопом, который связывается с антителом, состоящим из Н цепи антитела, которая представляет собой любую из (a1)-(a14), и L цепи антитела, которая представляет собой любую одну из (c1)-(c10) [12];

(g2) L цепь антитела, которое связывается с эпитопом, перекрывающимся с эпитопом, который связывается с антителом, состоящим из Н цепи антитела, которая представляет собой любую из (b1)-(b12), и L цепи антитела, которая представляет собой любую одну из (c1)-(c10) [12];

(g3) L цепь антитела, в которой, по крайней мере, один аминокислотный остаток, выбранный из аминокислотных остатков в положениях 27, 30, 31, 32, 50, 52, 53, 54, 55, 92, 93, 94 и 95 в соответствии с нумерацией Кабат в L цепи антитела либо (g1), либо (g2), является замещенным другой аминокислотой; и (g4) H цепь антитела, в которой в соответствии с нумерацией Кабат аминокислота в положении 27 представляет собой лизин или аргинин, аминокислота в положении 30 представляет собой глутаминовую кислоту, аминокислота в положении 31 представляет собой аргинин, аминокислота в положении 32 представляет собой глутамин, аминокислота в положении 50 представляет собой аргинин или глутамин, аминокислота в положении 52 представляет собой серин, аминокислота в положении 53 представляет собой аргинин, аминокислота в положении 54 является лизином, аминокислота в положении 55 является глутаминовой кислотой, аминокислота в положении 92 представляет собой серин, аминокислота в положении 93 является серином, аминокислота в положении 94 является пролином или аминокислота в положении 95 представляет собой пролин в L цепи антитела любой из либо (g1), либо (g2);

[15] мультиспецифической связывающей антиген молекуле любой одной из [1]-[14], где специфическая связывающая антиген молекула представляет собой мультиспецифическое антитело;

[16] биспецифическое антитело в соответствии с одним из следующих (a)-(u):

(a) биспецифическое антитело (Q1-G4k/J268-G4h/L45-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 9;

(b) биспецифическое антитело (Q1-G4k/J321-G4h/L45-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 9;

(c) биспецифическое антитело (Q31-z7/J326-z107/L2-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 8;

(d) биспецифическое антитело (Q64-z55/J344-z107/L45-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 9;

(e) биспецифическое антитело (Q64-z7/J326-z107/L334-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 30;

(f) биспецифическое антитело (Q64-z7/J344-z107/L406-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 33;

(g) биспецифическое антитело (Q85-G4k/J268-G4h/L406-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 33;

(h) биспецифическое антитело (Q85-G4k/J321-G4h/L334-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 30;

(i) биспецифическое антитело (Q153-G4k/J232-G4h/L406-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 33;

(j) биспецифическое антитело (Q354-z106/J259-z107/L324-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 22, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 29;

(k) биспецифическое антитело (Q360-G4k/J232-G4h/L406-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 33;

(l) биспецифическое антитело (Q360-z118/J300-z107/L334-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 23, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 30;

(m) биспецифическое антитело (Q405-G4k/J232-G4h/L248-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 16, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 21, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 28;

(n) биспецифическое антитело (Q458-z106/J346-z107/L408-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 17, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 34;

(o) биспецифическое антитело (Q460-z121/J327-z119/L334-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 30;

(p) биспецифическое антитело (Q499-z118/J327-z107/L334-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 30;

(q) биспецифическое антитело (Q499-z118/J327-z107/L377-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 24, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 31;

(r) биспецифическое антитело (Q499-z118/J346-z107/L248-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 19, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 27, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 28;

(s) биспецифическое антитело (Q499-z121/J327-z119/L404-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, второй полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 25, а третий полипептид и четвертый полипептид имеют общую L цепь последовательности SEQ ID NO: 32;

(t) биспецифическое антитело (Q499-z121/J339-z119/L377-k), в котором первый полипептид представляет собой Н цепь, состоящую из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20, втор