Планшет для образцов, его применение и способ фиксации гранулы или микросферы реагента в планшете для образцов

Планшет для образцов, его применение и способ фиксации гранулы или микросферы реагента в планшете для образцов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

сылка на связанные заявки

Приоритет данной заявки определяется датами подачи патентной заявки США №12/846,580, поданной 29.07.2010, международной патентной заявки PCT/GB2010/001443, поданной 29.07.2010, и патентных заявок Великобритании №№1101222.6 и 11066180, поданных соответственно 25.01.2011 и 19.04.2011. Содержание данных заявок полностью включено в данное описание посредством ссылки.

Область техники

Изобретение относится к планшету для образцов, к автоматизированному устройству, к диспенсеру гранул (микросфер) реагента, к набору для осуществления энзим-связывающего иммуносорбентного анализа (Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay, далее - ELISA), к набору для осуществления процедуры, использующей нуклеиново-кислотный зонд, к способу изготовления планшета для образцов и к компьютерной программе, выполняемой системой управления автоматизированного устройства.

Предложен автоматизированный диспенсер гранул (микросфер) реагента, служащий для распределения этих гранул (микросфер) по планшету для образцов. Планшет для образцов может быть использован для проведения диагностического тестирования, такого как ELISA, или других процедур, связанных с иммунным анализом. Альтернативно, планшет для образцов может быть использован для проведения тестирования на наличие ДНК- или РНК- последовательностей.

Уровень техники

Иммунологические исследования являются предпочтительным методом тестирования биологических продуктов. Эти исследования используют способность антител, продуцируемых телом человека, распознавать специфические антигены (которые могут, например, ассоциироваться с чужеродными частицами, такими как бактерии или вирусы, или с другими веществами, вырабатываемыми организмом, такими как гормоны) и взаимодействовать с ними. После образования специфического комплекса антиген-антитело, он может быть обнаружен с использованием хромогенных, флуоресцентных или хемилюминесцентных материалов или (что менее желательно) радиоактивных веществ. Радиоактивные вещества не относятся к предпочтительным вследствие проблем в отношении охраны окружающей среды и безопасности, связанных с использованием, хранением и утилизацией этих веществ. Для обнаружения и распознавания любых материалов, образующих специфические связанные пары, могут использоваться сходные методы, например с применением в качестве одного из компонентов пары пектинов, ревматоидного фактора, протеина или нуклеиновых кислот.

ELISA представляет собой особо предпочтительную форму иммунологического исследования, в которой один из членов связанной пары связывается (иммобилизуется) нерастворимой поверхностью-носителем ("твердой фазой"), такой как емкость для образца. После реакции связанная пара детектируется с помощью еще одного специфичного связывающего агента, конъюгированного с энзимом ("конъюгатом"). Операции для осуществления теста ELISA хорошо известны из уровня техники; они использовались как в исследовательских, так и в коммерческих целях в течение многих лет. Теория и практика иммунного анализа описана во множестве книг и обзорных статей. Например, сформулированы рекомендации по характеристикам и выбору твердых фаз для анализов методом захвата, по методам и реагентам для обеспечения покрытия твердых фаз захваченными компонентами, по природе и выбору меток и по методам маркирования компонентов. Примером стандартного справочника является "ELISA and Other Solid Phase Immunoassays, Theoretical and Practical Aspects", Editors D.M. Kemeny & S. J. Challacombe, John Wiley, 1988. Аналогичные рекомендации применимы и к анализам с другими комплексами.

В самом распространенном варианте анализа ELISA твердую фазу покрывают одним из компонентов комплекса. Аликвоту исследуемого образца инкубируют с твердой фазой с твердым покрытием, и любой аналит, который может присутствовать, захватывается твердой фазой. После промывки для удаления остаточного образца и любых посторонних материалов, которые он может содержать, к твердой фазе добавляют второй связывающий агент, специфичный по отношению к аналиту и конъюгированный с энзимом. Во время второй инкубации любой аналит, захваченный на твердой фазе, будет связываться с конъюгатом. После второй промывки для удаления любого несвязанного конъюгата к твердой фазе добавляют хромогенный субстрат для энзима. Любой присутствующий энзим начнет превращать субстрат в хромофорный продукт. По истечении определенного времени количество образовавшегося продукта можно измерить с помощью спектрофотометра, сразу же или после проведения останавливающей реакции.

Должно быть понятно, что выше было приведено в общем виде краткое описание процедуры для биологического анализа и что из уровня техники известны многие варианты, включающие использование флуорогенных и люминогенных субстратов для анализа ELISA, прямой метки для второго компонента комплекса, содержащей флуоресцентную или люминесцентную молекулу (в этом случае процедура не называется ELISA, но содержит весьма схожие с ней операции), а также нуклеиновых кислот или других специфичных комплексообразующих агентов в качестве связывающих агентов вместо антител. Однако все подобные анализы предусматривают, что жидкие образцы, например кровь, сыворотка и моча, отбираются из пробирки с образцом и затем диспенсируются в твердую фазу. Перед диспенсированием в твердую фазу образцы могут разбавляться; альтернативно, они подаются в микропланшеты с глубокими лунками и разбавляются in situ, после чего разбавленный аналит переносится на функциональную твердую фазу.

Самым распространенным типом твердой фазы является стандартная емкость для образцов, известная как микропланшет, которая является удобной для хранения и может использоваться с широким набором биологических образцов. Микропланшеты имеются в продаже, начиная с шестидесятых годов; они изготавливаются, например, из полистирола, поливинилхлорида, перспекса или люцита (акрилового пластика). Их размеры составляют 12,7 см в длину, 8,5 см в ширину и 1,4 см в высоту. Микропланшеты из полистирола являются особенно предпочтительными вследствие повышенной оптической прозрачности полистирола, облегчающей визуальную интерпретацию результатов любой реакции. При этом микропланшеты из полистирола являются компактными, легкими и хорошо моются. Микропланшеты, производимые заявителем изобретения, продаются под торговым наименованием "MICROTITRE"®. Известные микропланшеты содержат 96 лунок (часто именуемых также "микролунками"), которые расположены симметрично по схеме 8×12 микролунок. Максимальная емкость микролунок обычно составляет около 350 мкл. Однако обычно в микролунку подают 10-200 мкл жидкости. В некоторых вариантах микропланшетов микролунки могут быть сгруппированы в стрипы (линейки) по 8 или 12 лунок, которые могут переставляться и комбинироваться в держателе, чтобы получить заполненный планшет, имеющий обычные размеры.

Имеющиеся в продаже наборы обычно снабжаются средствами положительного и отрицательного контроля, которые используются для контроля качества и обеспечивают относительный уровень отсечения. После считывания микропланшета, в котором прошли требуемые процессы, результаты контроля сравниваются с подтвержденными значениями, подтвержденными изготовителем, чтобы удостовериться, что анализ был проведен правильным образом. После этого полученное значение используют, чтобы разделить образцы, давшие положительные и отрицательные результаты, и рассчитывают уровень отсечения. Для проведения количественных анализов обычно поставляются стандартные образцы, используемые для построения стандартной кривой, по которой можно, посредством интерполяции, определить концентрацию аналита в образце.

Следует отметить, что описанная процедура ELISA предусматривает много шагов, включая подачу образцов, инкубацию, промывку, перенос микропланшетов между различными операциями, считывание и анализ данных. В последние годы были разработаны системы с автоматическим выполнением шагов ("фаз"), входящих в процедуру ELISA, в том числе распределения образцов, разбавления, инкубации при определенных температурах, промывки, добавления энзима-конъюгата, добавления реагента, остановки реакции и анализа результатов. Пипеточный дозатор, применяемый для отбора и диспенсирования жидких образцов, использует одноразовые наконечники, которые автоматически сбрасываются после использования, чтобы исключить перекрестное загрязнение образцов, полученных от пациентов. Имеется множество автоматических проверок с целью гарантировать, что используются соответствующие объемы, временные интервалы, длины волн и температуры. Предусмотрены полная валидация и мониторинг передачи и анализа данных. В настоящее время автоматизированные устройства для выполнения процедур ELISA широко применяются в лабораториях, например, в фармацевтических компаниях, ветеринарных и ботанических лабораториях, больницах и университетах для диагностики in-vitro, например для тестирования на болезни и инфицирование, а также в процессе разработки новых вакцин и лекарств.

В продаже имеются наборы для осуществления анализа ELISA, состоящие из микропланшетов с микролунками, на которые изготовителем нанесено покрытие, содержащее определенные антитела (или антигены). Например, в случае набора для диагностики на антиген гепатита В изготовитель набора поместит в микролунки в составе микропланшета, в виде суспензии, антитела для антигепатита В. Затем проводят инкубацию микропланшета в течение заданного периода времени, в течение которого антитела фиксируются на стенках микролунок до уровня заполнения жидкостью (соответствующего обычно половине объема микролунки). Далее микролунки промывают, получая микропланшет с микролунками, стенки которых равномерно покрыты антителами для анти-гепатита В до уровня, которого в них достигала жидкость.

Лаборатория, проводящая тесты, будет получать большое количество пробирок, содержащих, например, жидкости организма от различных пациентов. С помощью пипеточного дозатора определенное количество жидкости отбирают из пробирки и подают в одну или более микролунок микропланшета, которые были предварительно подготовлены изготовителем, как это описано выше. Если представляется желательным провести тестирование пациента на различные заболевания, полученная от него жидкость должна быть подана в различные микропланшеты, каждый из которых имеет нанесенное изготовителем покрытие с различным связывающим агентом. После этого каждый микропланшет может быть обработан отдельно, чтобы детектировать соответствующую болезнь. Должно быть понятно, что для проведения анализа с использованием различных аналитов нужно иметь группу микропланшетов и вводить аликвоты одного и того же образца в различные микропланшеты. Это требует выполнения большого количества шагов и наличия инкубаторов и промывочных станций, способных практически одновременно обрабатывать несколько микропланшетов. Соответственно, приборы в составе автоматизированных систем также должны иметь по несколько инкубаторов; кроме того, чтобы избежать конфликтов между микропланшетами, отвечающими различным требованиям, необходимы сложные программы. Для работы вручную необходимы несколько лаборантов, иначе производительность оказывается слишком низкой. Имеется возможность группировать на одном носителе стрипы микролунок с различными покрытиями, вводить аликвоты одного и того же образца в ячейки различных типов и затем проводить анализ ELISA в таком, комбинированном микропланшете. Однако различные ограничения на проведение анализа делают такую комбинацию трудноосуществимой, и специалистам известно, что комбинирование стрипов описанным образом может приводить к ошибкам в отождествлении результатов, в то время как изготовление микропланшетов с несколькими различными покрытиями в различных микролунках создает трудности для контроля качества.

Традиционные методики ELISA концентрировались на проведении одного и того же теста с микропланшетом, содержащим множество образцов от различных пациентов, или на детектировании присутствия у этих пациентов одного или более аналитов без определения того, какой именно из возможных аналитов, действительно, присутствует. Например, типичным является определение с помощью единственной микролунки, имеет ли пациент антитела к ВИЧ-1 или к ВИЧ-2 или антигены ВИЧ-1 или ВИЧ-2, без определения того, какой именно аналит присутствует, и соответствует ли он антителам или антигенам для ВИЧ.

Однако разрабатывается новое поколение анализов, способное осуществлять мультиплексирование. Мультиплексирование позволяет проводить группу различных тестов по одному и тому же образцу, полученному от пациента.

Новый подход к мультиплексированию состоит в разработке микропланшета, содержащего 96 лунок, в каждую из которых помещен набор различных антител. Такой набор может состоять из пятен по 20 нл с диаметром 350 мкм. Пятна расположены с шагом 650 мкм. Каждое пятно соответствует антителам, отличным от остальных.

По сравнению с традиционными методиками ELISA, в которых каждый планшет для образцов предназначен для тестирования на один интересующий аналит, мультиплексирование позволяет получить в одном анализе большее количество точек данных и, следовательно, больше информации. Способность объединять в одном исследовании несколько тестов может дать большую экономию времени и затрат. Мультиплексирование позволяет также сократить площадь, занимаемую автоматическим устройством.

Несмотря на значительные достоинства существующих методик ELISA и разрабатываемых новых методик, продолжает оставаться желательным создание планшета для образцов и соответствующих автоматизированных устройств, имеющих улучшенный формат и обеспечивающих повышенную гибкость по сравнению с существующими устройствами для осуществления анализа ELISA.

В дополнение к процедурам ELISA известно также использование гибридных проб для тестирования на наличие ДНК- или РНК-последовательностей. Подобная проба обычно содержит фрагмент ДНК или РНК, который используется для обнаружения присутствия нуклеотидных последовательностей, комплементарных к ДНК- или РНК-последовательности в пробе. Гибридная проба гибридизируется в односпиральную (одноцепочечную) нуклеиновую кислоту (например, ДНК или РНК), базовая последовательность которой позволяет ей взаимодействовать с анализируемым образцом благодаря комплементарности гибридной пробы и образца. Гибридная проба может быть помечена молекулярным маркером, таким как радиоактивная или, более предпочтительно, флуоресцентная молекула. Пробы неактивны до того, как произойдет гибридизация; в этот момент происходит конформационное преобразование и молекулярный комплекс становится активным и способным к флуоресценции, которая может быть обнаружена путем визуализации под действием ультрафиолетового (УФ) излучения. Таким образом, посредством визуализации пробы УФ излучением детектируются ДНК-последовательности или РНК-транскрипты, имеющие схожесть последовательностей, от умеренной до значительной, с последовательностью пробы.

В патенте US 5620853 (принадлежащем фирме Chiron Corporation) описано устройство для проведения анализа с целью обнаружения аналита в жидком образце. Известное устройство содержит лунку, сформованную таким образом, что у нее имеются выступающие из дна пальцы, в которые может быть помещена гранула реагента. Гранула реагента захватывается пальцами, но все же она может смещаться вверх и вниз в пределах высоты пальцев. Известное устройство построено таким образом, чтобы гранула реагента максимально возможным образом взаимодействовала с потоком реагента, причем для получения результата используется сигнал, поступающий из-под гранулы.

С устройством, описанным в US 5620853, связано много проблем.

Во-первых, поскольку гранулы реагента могут свободно двигаться вверх и вниз в пределах высоты пальцев, существует вероятность того, что при проведении анализа или считывания данных гранула реагента застрянет на нежелательной высоте. Главное, лунка имеет довольно сложную и неудобную конструкцию, причем любое смещение или повреждение пальцев может привести к застреванию гранулы реагента на нежелательной высоте. Наличие выступающих из основания лунки пальцев делает их легко повреждаемыми, особенно на шагах подачи образца и промывки. Если гранула реагента застревает между пальцами на нежелательной высоте, это с высокой вероятностью неблагоприятно отразится на точности анализа.

Во-вторых, конструкция лунки с пальцами, приспособленными для приема единственной гранулы реагента, такова, что жидкость подается в лунку в непосредственной близости от гранулы, так что гранула покрывается жидкостью во время повышения ее уровня. Для отдельной лунки требуется около 300 мкл жидкости. В US 5620853 описан также вариант, в котором различные лунки сообщаются между собой. В таком варианте для каждой лунки также требуется около 300 мкл жидкости. Поэтому должно быть понятно, что устройство с сообщающимися лунками по сравнению с традиционными системами требует повышенного расхода жидкости.

В-третьих, наличие пальцев снижает максимальную плотность расположения лунок при заданном размере планшета для образцов, так что с таким планшетом можно провести меньшее количество анализов.

В-четвертых, вариант со связанными лунками согласно US 5620853 особенно подвержен перекрестным помехам.

В-пятых, описанное в US 5620853 устройство построено так, что когда используется единственная гранула, на однородность жидкости влияют выступающие пальцы. Вполне возможно наличие зон внутри лунки, которые будут удерживать несмешанную жидкость. Серьезная проблема, возникающая в варианте со связанными лунками, состоит в том, что любая жидкость, которая должна пройти над всеми гранулами, при переходе из одной лунки в другую должна двигаться по извилистому пути. Это будет создавать серьезные трудности в отношении перемешивания жидкости и повторяемости условий от гранулы к грануле. Схема с одиночными лунками полностью отличается от взаимосвязанной линейки лунок, описанной в US 5620853. Поэтому два различных варианта будут иметь существенно различные параметры для жидкости. Это с большой вероятностью будет приводить к зависимости поведения жидкости от того, какой формат (с одиночными или связанными лунками) был использован. Хотя в теории два различных варианта могут градуироваться независимо, это может привести к повышению стоимости и снижению производительности.

Наконец, лунка, описанная в US 5620853, относительно сложна в изготовлении и, вероятно, при ее изготовлении будут возникать проблемы надежности. Тонкие длинные пальцы трудно изготовить формованием, причем они могут быть повреждены как при производстве, так и в процессе использования. Кроме того, на вершине пальцев имеется выступ, который должен соответствовать вырезу в пресс-форме. При выбрасывании готового изделия пальцы должны изгибаться, чтобы данный выступ прошел мимо компонентов пресс-формы. Подобный процесс изготовления, как правило, представляется нежелательным, поскольку имеет низкую надежность. Далее, любое изменение параметров процесса с высокой вероятностью затруднит выведение изделия из пресс-формы и потребует изменения ее параметров с учетом заданных допусков. Взаимное положение пальцев может быть критичным для обеспечения правильного перемещения гранулы реагента вверх и вниз, а также для предотвращения выхода гранулы реагента за пределы пальцев по высоте. На практике это положение может оказаться трудновыполнимым при массовом производстве. Нужно также отметить, что конструкции вариантов с одиночными и с сообщающимися лунками сильно отличаются. В результате для них потребуются различные комплекты инструментов, что также заметно увеличит сложность изготовления. При крупномасштабном производстве сочетание конструктивных особенностей и проблем обеспечения качества сделают данный планшет для образцов чрезмерно дорогим.

В US 2009/0069200 описано устройство для приготовления биомолекулярных систем. Согласно методике, описанной в US 2009/0069200, сферические гранулы помещают в лунки, которые имеют квадратное поперечное сечение. Сферические гранулы не обеспечивают герметичное уплотнение по периметру стенки лунки. Как результат, жидкость, поднимаясь со дна выполненных в лунке гнезд, проходит рядом с гранулами и над их верхней частью, так что гранулы оказываются полностью погруженными в жидкость. С такой системой связан ряд проблем, которые будут подробно рассмотрены далее.

Раскрытие изобретения

В связи с изложенным представляется желательным создать улучшенный планшет для образцов, обеспечивающий фиксацию гранул реагента.

Согласно одному аспекту изобретения создан планшет для образцов, содержащий одну или более лунок для образцов, причем единственная или каждая из лунок имеет основание и одно или более открытых сквозных отверстий, выполненных в основании.

Планшет характеризуется тем, что при его использовании гранула (микросфера) реагента удерживается или фиксируется в указанном сквозном отверстии с формированием, по существу, непроницаемого для текучей среды периферийного уплотнения относительно стенки указанного основания, образующей указанное сквозное отверстие.

Единственное или каждое сквозное отверстие проходит от дна лунки для образцов к нижней (задней) поверхности планшета для образцов. Как следствие, если гранула реагента не зафиксирована в открытом сквозном отверстии, то любая жидкость, попавшая в лунку для образцов, может вытечь из нее через сквозное отверстие.

Согласно другому аспекту изобретения создан планшет для образцов, содержащий одну или более лунок для образцов, причем единственная или каждая лунка планшета имеет основание и одно или более углублений, выполненных в основании.

Планшет характеризуется тем, что при его использовании гранула (микросфера) реагента удерживается или фиксируется в указанном углублении с формированием, по существу, непроницаемого для текучей среды периферийного уплотнения относительно стенки указанного основания, образующей указанное углубление.

Должно быть понятно, что круглая гранула, помещенная в отверстие, гнездо или углубление с квадратным поперечным сечением, не может формировать непроницаемое для текучей среды периферийное уплотнение относительно стенки, образующей это отверстие, гнездо или углубление. Под формированием непроницаемого для текучей среды периферийного уплотнения в контексте описания понимается образование барьера для текучей среды по всему периметру сечения гранулы и стенки, образующей отверстие, гнездо или углубление.

Согласно изобретению гранулы (микросферы) реагента удерживаются (фиксируются) в сквозном отверстии или углублении, образованном в основании планшета для образцов, причем каждая гранула (микросфера) реагента образует уплотнение, непроницаемое для текучей среды (в частности для воды и/или воздуха), вдоль всего наружного диаметра (периферии) гранулы (микросферы) реагента.

Должно быть понятно, что сферические гранулы реагента в системе согласно US 2009/0069200 не формируют непроницаемое для текучей среды периферийное уплотнение относительно квадратной стенки, образующей гнездо, ячейку или выемку (далее - гнездо).

Введение гранулы (микросферы) реагента в сквозное отверстие или углубление, по существу, делает невозможным прохождение жидкости с одной стороны сквозного отверстия или углубления на другую его сторону мимо гранулы (микросферы), которая формирует герметичное уплотнение по всей периферии гранулы (микросферы).

Разработаны различные варианты изобретения.

Если планшет для образцов содержит одно или более углублений, то единственное или каждое углубление предпочтительно представляет собой глухое углубление, закрытое на одном своем конце. Отличие глухого углубления от сквозного отверстия состоит в том, что в отсутствие зафиксированной в глухом углублении гранулы реагента жидкий образец, поданный в лунку для образца, не будет вытекать из этой лунки.

Открытые сквозные отверстия или углубления, выполненные в основании лунки, могут быть, по существу, цилиндрическими и иметь диаметр, меньший, чем диаметр введенной в него гранулы (микросферы) реагента. В результате гранула (микросфера) реагента удерживается (фиксируется) в сквозном отверстии или в углублении посредством посадки с натягом или фрикционной посадки.

Согласно другому варианту открытое сквозное отверстие или углубление может быть коническим и иметь первый диаметр, который больше чем диаметр гранулы (микросферы) реагента, введенной в это отверстие (углубление), и второй диаметр, который меньше чем диаметр гранулы (микросферы) реагента, введенной в это отверстие (углубление). Наличие соответствующего сужения обеспечивает удерживание гранул (микросфер) реагента в сквозном отверстии.

По отношению к той части основания, на которую при использовании планшета подается жидкий образец, первый диаметр предпочтительно является дистальным, а второй диаметр - проксимальным.

Альтернативно, первый диаметр может быть проксимальным по отношению к той части основания, на которую при использовании планшета подается жидкий образец, а второй диаметр - дистальным.

Сужающаяся часть сквозного отверстия или углубления может иметь угол конусности, выбранный из группы, состоящей из следующих угловых интервалов: (i) <0,5°; (ii) 0,5°; (iii) 0,5°-1°; (iv) 1°-2°; (v) 2°-4°; (vi) 4°-6°; (vii) 6°-8°; (viii) 8°-10°; (ix) >10°.

На входе отверстие или углубление предпочтительно является круглым.

Сквозное отверстие или углубление предпочтительно имеет поперечное сечение круглой формы. Согласно одному варианту сквозные отверстия или углубления могут иметь поперечное сечение круглой формы на отрезке, составляющем по меньшей мере 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% или 100% полной длины (глубины) сквозного отверстия или углубления.

Диаметр сквозного отверстия или углубления предпочтительно выбран из группы, включающей следующие интервалы: (i) <0,5 мм; (ii) 0,5-1,0 мм; (iii) 1,0-1,5 мм; (iv) 1,5-2,0 мм; (v) 2,0-2,5 мм; (vi) 2,5-3,0 мм; (vii) 3,0-3,5 мм; (viii) 3,5-4,0 мм; (ix) 4,0-4,5 мм; (х) 4,5-5,0 мм; (xi) <5,0 мм; (xii) >5,0 мм.

Глубина сквозного отверстия или углубления предпочтительно выбрана из группы, включающей следующие интервалы: (i) <0,5 мм; (ii) 0,5-1,0 мм; (iii) 1,0-1,5 мм; (iv) 1,5-2,0 мм; (v) 2,0-2,5 мм; (vi) 2,5-3,0 мм; (vii) 3,0-3,5 мм; (viii) 3,5-4,0 мм; (ix) 4,0-4,5 мм; (х) 4,5-5,0 мм; (xi) <5,0 мм; и (xii) >5,0 мм.

Согласно одному варианту основание по меньшей мере одной лунки для образцов (или каждой лунки) предпочтительно снабжено группой открытых сквозных отверстий и/или углублений, причем по меньшей мере некоторые (или все) эти открытые сквозные отверстия и/или по меньшей мере некоторые (или все) эти углубления расположены таким образом, что отсутствует линия прямого видения между гранулами реагента, удерживаемыми или зафиксированными в смежных открытых сквозных отверстиях и/или в смежных углублениях.

Кроме того, по меньшей мере одна лунка для образцов (или каждая из выполненных в основании лунок) предпочтительно может быть снабжена группой открытых сквозных отверстий и/или углублений, а основание может быть разделено на сегменты, взаимно смещенные по высоте.

При этом основание по меньшей мере одной или каждой лунки для образцов может быть снабжено группой открытых сквозных отверстий и/или углублений, а лунка может быть дополнительно снабжена одной (одним) или более заслонок (разделителей), предпочтительно разделяющих указанное основание по меньшей мере на первую и вторую области.

Одна (один) или более указанных заслонок (разделителей) предпочтительно выполнены с возможностью: (i) ослаблять или устранять попадание света, отраженного от одной или более гранул реагента, находящихся в указанной первой области, на одну или более гранул реагента, находящихся в указанной второй области, и/или (ii) ослаблять или устранять попадание света, отраженного от одной или более гранул реагента, находящихся в указанной второй области, на одну или более гранул реагента, находящихся в указанной первой области.

Чтобы облегчить введение гранул (микросфер) реагента в одно или более открытых сквозных отверстий или углублений, в этом отверстии или углублении (в этих отверстиях или углублениях) можно выполнить внутреннюю фаску или расширенную часть.

Одна или более лунок предпочтительно содержат по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или 21 сквозное отверстие или углубление, каждое из которых выполнено с возможностью приема, в процессе использования указанного планшета, гранул (микросфер) реагента.

Сквозные отверстия или углубления, выполненные в основании лунки, предпочтительно размещены:

(i) по окружности вокруг центральной части лунки для образцов или

(ii) по окружности вокруг центрального сквозного отверстия или углубления, или,

(iii) по существу, с тесным расположением, или,

(iv) по существу, симметричным или асимметричным образом, или,

(v) no существу, вдоль прямой или кривой линии, или,

(vi) по существу, регулярным или иррегулярным образом, или

(vii) в виде прямоугольного массива, или

(viii) вдоль одной или более концентричных окружностей при отсутствии гнезда или углубления в центре основания.

Планшет для образцов предпочтительно содержит лунки для образцов, размещенные в формате А×В, причем значения А и В выбраны из группы, состоящей из: (i) 1; (ii) 2; (iii) 3; (iv) 4; (v) 5; (vi) 6; (vii) 7; (viii) 8; (ix) 9; (х) 10; (xi) более 10.

Согласно варианту одна или более лунок могут быть связаны с одной или более другими лунками одним или более ломкими участками или одним или более ломкими соединениями, так что каждый планшет для образцов может быть разделен пользователем на планшеты для образцов, имеющие меньшие размеры, стрипы или индивидуальные лунки для образцов.

Планшет для образцов может представлять собой планшет для образцов, предназначенный для иммунного анализа. Альтернативно, такой планшет может содержать гибридную пробу для обнаружения наличия образцов комплементарной ДНК или РНК.

Планшет для образцов предпочтительно содержит основание, снабженное охватываемым, охватывающим или иным участком для фиксации указанного планшета на соответствующем охватываемом, охватывающем или ином фиксаторе, выполненном на держателе планшетов.

Согласно другому аспекту изобретения разработана комбинация планшета для образцов, описанного выше, и одной или более гранул (микросфер) реагента, введенных в одно или более указанных гнезд одной или более лунок для образцов.

По меньшей мере, некоторые или, по существу, все гранулы (микросферы) реагента предпочтительно содержат указанный реагент или покрыты им, при этом указанный реагент выбран и расположен с возможностью проведения с его использованием анализа на наличие интересующего аналита в образце жидкости.

Согласно альтернативному варианту по меньшей мере некоторые или, по существу, все гранулы (микросферы) реагента содержат нуклеиново-кислотный зонд или покрыты им, при этом указанный зонд выбран и расположен с возможностью гибридизации ДНК или РНК посредством одноцепочечной нуклеиновой кислоты.

Согласно другому аспекту изобретения разработана комбинация держателя планшетов и планшета для образцов, описанного выше.

Держатель планшетов предпочтительно содержит охватываемый, охватывающий или иной фиксатор для надежной фиксации планшета для образцов на держателе планшетов.

Согласно одному из аспектов изобретения разработано автоматизированное устройство, содержащее:

один или более диспенсеров гранул (микросфер) реагента;

планшет для образцов, описанный выше, и

систему управления, выполненную с возможностью управления диспенсированием гранул (микросфер) реагента из указанных одного или более диспенсеров гранул (микросфер) реагента в одну или более лунок планшета для образцов.

Единственный или каждый из диспенсеров гранул (микросфер) реагента предпочтительно содержит:

корпус шприцевого дозатора, имеющий кольцевую камеру, окружающую продольный канал и выполненную с возможностью направлять, в процессе использования указанного устройства, находящиеся в ней гранулы (микросферы) реагента, к камере, выполненной в указанном канале;

плунжер, установленный в продольном канале, и

втулку или сужающийся участок.

При этом плунжер выполнен с возможностью диспенсирования, в процессе использования указанного устройства, гранулы (микросферы) реагента из указанной камеры во втулку или сужающийся участок.

Согласно аспекту изобретения разработано устройство для анализа жидкости на наличие одного или более интересующих аналитов, содержащее:

один или более диспенсеров гранул (микросфер) реагента и

планшет для образцов, описанный выше.

Согласно аспекту изобретения разработан способ, включающий:

обеспечение наличия планшета для образцов, содержащего одну или более лунок для образцов, причем одна или каждая лунка для образцов имеет основание и одно или более открытых сквозных отверстий, выполненных в основании, и

удерживание или фиксацию гранулы или микросфера реагента в сквозном отверстии с формированием, по существу, непроницаемого для текучей среды периферийного уплотнения относительно стенки указанного основания, образующей указанное сквозное отверстие.

Согласно другому аспекту изобретения разработан способ, включающий:

обеспечение наличия планшета для образцов, содержащего одну или более лунок для образцов, причем одна или каждая лунка для образцов имеет основание и одно или более углублений, выполненных в основании, и

удерживание или фиксацию гранулы или микросферы реагента в углублении с формированием, по существу, непроницаемого для текучей среды периферийного уплотнения относительно стенки указанного основания, образующей указанное углубление.

Согласно еще одному аспекту изобретения разработан способ, включающий:

обеспечение наличия одного или более диспенсеров гранул (микросфер) реагента;

обеспечение наличия описанного выше планшета для образцов и

управление диспенсированием гранул (микросфер) реагента из указанных одного или более диспенсеров в одну или более лунок для образцов.

Согласно аспекту изобретения разработан способ использования планшета для образцов при анализе образца на наличие различных аналитов, включающий:

обеспечение наличия описанного выше планшета для образцов;

введение гранул (микросфер) реагента в одно или более сквозных отверстий или углублений лунки для образцов и

добавление образца в лунку для образцов.

Гранулы (микросферы) реагента могут вводиться в одно или более гнезд лунок для образцов либо изготовителем планшета для образцов, либо конечным пользователем.

Согласно аспекту изобретения разработан способ применения энзим-связывающего иммуносорбентного анализа (ELISA) для определения в образце антигена или антитела, включающий:

обеспечение наличия описанного выше планшета для образцов;

введение одной или более гранул (микросфер) реагента в одно или более сквозных отверстий или углублений лунки для образцов и

добавление образца в лунку для образцов.

Гранулы (микросферы) реагента могут вводиться в одно или более гнезд лунок для образцов либо изготовителем планшета для образцов, либо конечным пользователем.

Согласно другому аспекту изобретения разработан способ применения нуклеиново-кислотного зонда для обнаружения в образце ДНК- или РНК-последовательностей, включающий:

обеспечение наличия описанного выше планшета для образцов;

введение одной или более гранул (микросфер) реагента в одно или более сквозных отверстий или углублений лунки для образцов и

добавление образца в лунку для образцов.

Гранулы (микросферы) реагента могут вводиться в одно или более гнезд лунок для образцов либо изготовителем планшета для образцов, либо конечным пользователем.

Кроме того, представлен способ анализа на наличие в образце различных аналитов, включающий:

введение одной или более гранул (микросфер) реагента в одно или более сквозных отверстий или углублений одной или более лунок планшета для образцов при обеспе