Способ получения стандартного качественного образца фации слюны для кристаллографии

Способ получения стандартного качественного образца фации слюны для кристаллографии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно - клинической лабораторной диагностике, микробиологическим методам исследования, и направлено на стандартизацию исследования слюны методом клиновидной дегидратации/кристаллографии.

Изучение физико-химических и метаболических показателей слюны, доступной биологической жидкости для неинвазивных методов исследования, становится все более актуальным. В настоящее время приобретает все большую значимость метод клиновидной дегидратации/кристаллографии слюны, который был открыт исследователем Е.Г. Рапис. Российские ученые В.Н. Шабалин и С.Н. Шатохина выявили основные закономерности формирования структур твердой фазы биожидкостей, классифицировали и дали предметное описание их системных и локальных морфологических особенностей (Барер Г.М., Денисов А.Б., Ревокатова И.П., Михалева И.Н. / Кристаллизация ротовой жидкости. Состав и частота поверхности подложки //. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2007. - 12. - С.693-696). Реализация метода состоит в том, что при высыхании капли биологической жидкости образуется сухая пленка или фация, представляющая собой структурный макропортрет сухого остатка, в котором четко видны различающиеся по форме, направленности, занимаемой площади и другим параметрам фигуры фации (твердого остатка слюны). Важнейшими факторами, определяющими характер структурообразования слюны, являются вода и общая концентрация растворенных в ней минеральных и органических веществ, а также их соотношение.

Существует способ клиновидной дегидратации/кристаллографии смешанной слюны, разработанный российскими учеными В.Н. Шабалиным и С.Н. Шатохиной (г. Москва 2001 г.).

Но недостатками прототипа являются:

- нанесение капли исследуемой жидкости на предметное стекло неопределенного объема, что затрудняет идентификацию и приводит к необъективности данных;

- высушивание капли исследуемой жидкости на предметном стекле проводится в термостате, что ведет к быстрому, неравномерному высыханию капли, к искажению фигур фации слюны и, как следствие, ложному результату;

- отсутствие в термостате ровной горизонтальной поверхности не позволяет капле равномерно высохнуть, что приводит к искажению соотношения центральной и периферической зон фации - главного параметра исследования;

- вероятность попадания в высушиваемую каплю инородных частиц за счет отсутствия защитного изолирующего покрытия приводит к артефактам фации слюны.

Задача - получить качественный стандартный образец фации смешанной слюны для исследования методом клиновидной дегидратации / кристаллографии.

Технический результат состоит в том, что для получения качественного стандартного образца фации смешанной слюны для кристаллографии используется устройство портативное лабораторное со встроенными уровнями по осям X и Y, регулируемыми по высоте ножками и изолирующей крышкой.

Технический результат достигается тем, что на этапе подготовки образца слюны для ее нанесения на предметное стекло и дальнейшего высушивания используется устройство портативное лабораторное с изолирующей крышкой. Предварительно выполняется выравнивание горизонтальной поверхности устройства портативного лабораторного с помощью регулируемых по высоте ножек под контролем встроенных в поверхность уровней по оси X и Y. После получения ровной горизонтальной без погрешности угла наклона плоскости на поверхность устройства лабораторного портативного кладутся предметные стекла от 20 до 40 штук одновременно. Затем с помощью микропипетки "Ленпипет" на каждое предметное стекло наносится один образец смешанной слюны в количестве 0,02 мл, предварительно центрифугированный в течение 20 мин при 3000 об/мин. В результате получают соответствующую стандартным параметрам каплю смешанной слюны: высота капли 1,0 мм, диаметр капли от 4,0 до 5,0 мм, форма капли округлая без искажения формы. Далее стандартная по размерам капля на предметном стекле, помещенном на поверхность устройства портативного лабораторного, настроенного по уровням, высушивается при комнатной температуре +18…+25°C под изолирующей крышкой устройства в течение 5 часов, далее проводится микроскопия стандартного качественного образца фации слюны. Таким образом, полученный образец позволяет интерпретировать показатели кристаллографии без искажений, поскольку получена стандартная по объему, размерам и форме капля смешанной слюны, а высыхание капли проводится на идеальной горизонтальной поверхности устройства, в результате отсутствует смещение центра кристаллизации, нарушение фигур фации слюны (рисунка кристаллографии), а соотношение центральной и периферической зон фации точно соответствуют состоянию организма, что снижает процент ложных результатов кристаллографии.

Используемое устройство портативное лабораторное представлено на Фиг.1, где указатель 1 - столешница из экструдированного акрилового стекла, указатель 2 - уровни по оси X и Y, указатель 3 - регулируемые по высоте ножки, указатель 4 - предметные стекла, указатель 5 - изолирующая крышка, предотвращающая воздействие внешней среды и поддерживающая постоянную влажность и температуру, 6 - отверстия изолирующей крышки.

Внутри устройства портативного лабораторного имеются два уровня, расположенные под прямым углом друг относительно друга. При помощи уровней можно оценить наклон поверхности относительно горизонта по оси X и по оси Y. При выставлении уровня по оси X и по оси Y пузырек внутри должен располагаться в центральном положении. Схема получения качественного стандартного образца фации слюны для кристаллографии представлена на Фиг.2, где А - стандартный образец фации смешанной слюны.

Когда после фиксации параметров, необходимых для получения ровной горизонтальной поверхности с использованием портативного лабораторного устройства, на предметное стекло микропипеткой наносится 0,02 мл смешанной слюны. Получают каплю смешанной слюны со стандартными параметрами: высота капли 1,0 мм, диаметр 5,0 мм, форма капли округлая без искажения формы, а при ее высушивании получают образец фации слюны без смещения центра кристаллизации и без нарушения фигур фации, соотношения центральной и периферической зон соответствует состоянию организма.

В случае когда выравнивание поверхности не осуществляется посредством уровня, получают каплю смешанной слюны с нестандартными параметрами: высота капли 1,0 мм, диаметр 10,0 мм, форма капли с деформированным краем, искаженная по форме, а при ее высушивании получают нестандартный образец фации слюны со смещением центра кристаллизации и нарушением текстурного рисунка фации без возможности определения соотношения центральной и периферической зоны, что приводит к получению ложного результата в диагностике, что представлено на Фиг.3, где Б - искаженный образец фации слюны, который невозможно исследовать методом кристаллографии.

Преимущество предлагаемого способа состоит в следующем:

- выравнивание горизонтальной поверхности посредством дополнительного оснащения уровнями по осям X и Y в устройстве портативном лабораторном позволяет получить каплю смешанной слюны, соответствующую стандартным параметрам: высота капли 1,0 мм, диаметр от 4,0 до 5,0 мм, форма капли округлая без искажения, а после высушивании получают образец фации слюны без смещения центра кристаллизации и без нарушения текстурного рисунка фации слюны, где соотношение центральной и периферической зон визабильно и соответствует состоянию организма.

- использование изолирующей крышки устройства портативного лабораторного во время высушивания капли смешанной слюны предотвращает попадание инородных частиц в каплю, что позволяет избежать артефактов.

- снижение количества ложных результатов при применении устройства портативного лабораторного достигает 50%. Результаты предоставлены в таблице 1.

- способ технически доступен и не требует специальной квалификации персонала и затрат труда.

Пример 1.

Ребенок Б., 9 лет, с компенсированной формой кариеса, из категории здоровых детей, с индексом КПУ 1, Гигиенический индекс по Грин-Вермильону составил 0,2 балла, с хорошей гигиеной полости рта. С помощью стерильной пробирки был произведен забор ротовой жидкости в количестве 2,0 мл с последующим получением фации слюны из 0,02 мл капли смешанной слюны, в соответствии с предлагаемым методом нанесение на предметное стекло и высушивания с применением портативного лабораторного устройства. Получен стандартный качественный образец фации слюны высотой 1,0 мм, диаметром 4,0 мм, формой ровной округлой без искажения, и стандартный образец фации слюны без смещения центра кристаллизации и без нарушения текстурного рисунка фации. Для центральной зоны характерен четкий рисунок с образованием крупных удлиненных кристаллопризматических структур, идущих от центра капли, сросшихся между собой и имеющих древовидную и папаротникообразную форму. Соотношение зон следующее: центральная зона - 70%, периферическая зона - 30%. Полученные данные свидетельствуют об отсутствии общесоматической патологии и патологии полости рта, что соответствует данным истории болезни.

Пример 2.

Ребенок Н., 12 лет, с декомпенсированной формой кариеса, из категории часто болеющих детей, индексом КПУ 9, гигиеническим индексом по Грину-Вермильону 2,3 балла с неудовлетворительной гигиеной полости рта. С помощью стерильной пробирки был произведен забор смешанной слюны в количестве 2,0 мл с последующим получением фигур фации слюны из 0,02 мл капли смешанной слюны по методике, предложенной: В.Н. Шабалиным, С.Н. Шатохиной, 2001 г., без применения устройства портативного лабораторного. В результате получен нестандартный образец слюны высотой 1,0 мм, диаметром 10,0 мм, формой капли с деформированным краем, искаженной, а после высушивании в термостате получен нестандартный образец фации слюны со смещением центра кристаллизации и нарушением текстурного рисунка фации, что сделало невозможным определение важного параметра в диагностике - соотношения центральной и периферической зоны, что способствовало получению ложного результата исследования.

Пример 3.

Ребенок Н., 12 лет, с декомпенсированной формой кариеса, из категории часто болеющих детей, индексом КПУ 9, гигиеническим индексом по Грину-Вермильону 2,3 балла с неудовлетворительной гигиеной полости рта. С помощью стерильной пробирки был произведен забор ротовой жидкости в количестве 2,0 мл с последующим получением фигур фации слюны из 0,02 мл капли смешанной слюны в соответствии с предлагаемым способом. В начале получен стандартный качественный образец слюны высотой 1,0 мм, диаметром 5,0 мм, ровной округлой формы, а после высушивания с использованием устройства получен стандартный образец фации слюны без смещения центра кристаллизации и без нарушения текстурного рисунка фации. Центральная зона представлена аморфным рисунком, по всей площади капли просматривается большое количество изометрически расположенных кристаллических структур звездчатой и неправильной формы. Выявляется разрушение кристаллов рисунка. Соотношение зон в процентах: центральная зона 90%, периферическая зона 10%. Что свидетельствует об общесоматических нарушениях у пациента.

Таблица 1
Способ получения стандартного качественного образца фации слюны для кристаллографии
Метод кристаллографии	Количество исследуемых фаций слюны (в абс. числах)	Количество неудовлетворительных результатов (в абс. числах)	Количество неудовлетворительных результатов (в процентах)	Вероятность Р
Кристаллография слюны способом по прототипу (В.Н. Шабалин, С.Н. Шатохина, г. Москва, 2001 г.)	300	190	63%±m	<0,05
Кристаллография слюны по предлагаемой методике с применением устройства портативного лабораторного "Crystallina"	300	50	16,6%±m	<0,05

Способ получения стандартного качественного образца фации слюны для кристаллографии, включающий забор смешанной слюны в стерильную пробирку объемом 2,0 мл, с последующим нанесением капли смешанной слюны на предметное стекло и высушиванием, отличающийся тем, что смешанная слюна предварительно центрифугируется в течение 20 минут при 3000 об/мин, берется установленный объем 0,02 мл центрифугированной слюны с помощью микропипетки и наносится на предметное стекло, помещенное на поверхность устройства портативного лабораторного, установленного по уровням X и Y, относительно горизонта, с получением стандартной по форме и размерам капли смешанной слюны высотой 1,0 мм, диаметром от 4,0 до 5,0 мм, округлой формы, в дальнейшем капля высушивается также на поверхности устройства портативного лабораторного при комнатной температуре +18…+25°C под изолирующей крышкой устройства в течение 5 часов с получением фигур фации слюны без искажения кристаллического рисунка и без смещения центра кристаллизации.