Способ получения средства, обладающего противовоспалительной, мочегонной и антиоксидантной активностью

Способ получения средства, обладающего противовоспалительной, мочегонной и антиоксидантной активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа производства лекарственных препаратов из растительного сырья.

В последние годы отмечается неуклонный рост воспалительных заболеваний мочеполовой системы, желудочно-кишечного тракта, связанных с неблагоприятной экологической обстановкой, неправильным и нерациональным питанием. В России заболеваниями данной группы страдает каждый десятый житель [Электронный ресурс. URL: http://www.pharmvestnik.ru/publs/staryi-arxiv-gazetv/12455.html#.UlIe21DIYlQ]. В терапии воспалительных заболеваний широко используются синтетические лекарственные средства. Однако, при выраженном терапевтическом эффекте, они имеют побочные действия, противопоказания и ограничения к применению, не всегда предотвращают развитие рецидива заболевания после их отмены.

Преимуществом лекарственных растений и препаратов из них является их малая токсичность, возможность длительного применения без побочного действия, широкий спектр фармакологического действия.

Для лечения воспалительных заболеваний используется водный настой цветков ноготков лекарственных в соотношении (1:10) [Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 02.04.2012 [Электронный ресурс] URL: http://grls.rosminzdrav.ru]. Также применяют настои из цветков ромашки аптечной [Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология / С.Я. Соколов. - М.: МИА, 2000. - 970 с.].

Использование водных извлечений в виде настоев и отваров имеют недостатки, заключающиеся в том, что сроки их годности после изготовления составляют 2 суток при температуре +4°C [Фармацевтическая технология. Технология лекарственных форм: учебник / И.И. Краснюк, Г.В. Михайлова, Т.В. Денисова, В.И. Скляренко; под ред. И.И. Краснюка, Г.В. Михайловой. - М.: ГОЭТАР - Медиа, 2011. - 657 с.]. При экстракции растительного сырья водой очищенной не происходит извлечение полного комплекса биологически активных веществ [Минина, С.А. Химия и технология фитопрепаратов: учебное пособие // С.А. Минина, И.Е. Каухова. - М.: ГОЭТАР - Медиа, 2009. - 560 с.]. От 50 до 90% действующих веществ остается в сырье.

В настоящее время хорошо себя зарекомендовали фитопрепараты на основе экстрактов сухих. В процессе получения экстрактов сухих обеспечивается максимальный выход биологически активных веществ (БАВ), возможна разработка дозированных лекарственных форм в виде гранул и таблеток.

Наиболее близким к заявляемому является способ получения средства, обладающего диуретической и противовоспалительной активностью [патент РФ 2342945, М. кл. A61K 36/73, A61P 13/00, A61P 29/00, опубл. 10.01.2009 г.]. Данный способ заключается в том, что в качестве источника сырья используют листья земляники садовой - Fragaria ananassa L. Воздушно-сухие листья измельчают до размера частиц 3 мм и экстрагируют 3 раза по 30 минут водой очищенной в соотношении сырье-экстрагент 1:10 в реакторе из нержавеющей стали с ложным дном вместимостью 100 л, снабженным якорной мешалкой, паровой рубашкой и гильзой для термометра. Водные извлечения объединяют. Очистку объединенных водных извлечений осуществляют фильтрацией через друк-фильтр и сепарированием. Упаривание объединенного водного извлечения проводят в циркуляционном вакуум-выпарном аппарате до 0,1 объема. Сушку проводят на распылительной сушилке. Выход готового продукта составляет 20% от массы растительного сырья.

К недостаткам известного способа относится то, что он не обеспечивает извлечение всего комплекса биологически активных веществ из растительного сырья, так как в данном способе извлекаются только водорастворимые соединения.

Техническим результатом предлагаемого способа является увеличение выхода целевого продукта, расширения сырьевой базы и спектра фармакологического действия.

Технический результат обеспечивается путем экстракции растительного сырья спиртом этиловым 40%, упаривания и сушки.

Новым в достижении технического результата является то, что в качестве растительного сырья используют побеги обмолоченные спиреи иволистной (Spiraea salicifolia L), представляющие собой смесь листьев, цветков и веточек не толще 3 мм.

Спирея иволистная представляет собой кустарник, высотой до 1,5 м, широко распространена на территории России. Надземные органы содержат кумарины, фенолкарбоновые кислоты (кофейная, феруловая), флавоноиды (гиперозид, дипентозид кверцетина). Их максимальное количество накапливается в побегах текущего года в период цветения. В народной медицине спирея иволистная применяется при заболеваниях желудочно-кишечного тракта и мочеполовой системы [Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeaceae-Haloragaceae. - СПб., 1991. - С.101].

Целью настоящего изобретения является повышение выхода биологически активных веществ и расширение спектра фармакологического действия, которые обеспечиваются экстракцией побегов спиреи иволистной - Spiraea salicifolia L. спиртом этиловым 40% трехкратной экстракцией, при соотношении сырье-экстрагент 1:14 в динамических условиях перемешивание сырья, температурой экстракции 55°C, тем, что после объединения извлечений проводят отстаивание.

Оптимальные параметры экстракции были установлены экспериментально (табл.1-5).

Новым является то, что в качестве экстрагента используется спирт этиловый 40%. Для установления оптимального экстрагента были получены извлечения с использованием воды очищенной и 10-90% спирта этилового. Содержание экстрактивных веществ в полученных извлечениях определяли по ГФ XI, флавоноидов спектрофотометрическим методом, основанном на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом, расчет процентного содержания проводили в пересчете на рутин. Выход в извлечения фенолкарбоновых кислот контролировали спектрофотометрическим методом. Расчет процентного содержания суммы фенолкарбоновых кислот проводили в пересчете на кофейную кислоту по удельному показателю поглощения кофейной кислоты, равном 782 при длине волны 325 нм.

Вода очищенная извлекает меньше всего экстрактивных веществ, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот. С увеличением концентрации спирта этилового идет увеличение выхода биологически активных веществ. Максимальное их количество извлекается с использованием 40% спирта этилового (табл.1). Дальнейшее увеличение концентрации спирта этилового в экстагенте приводит к снижению выхода экстрактивных веществ и суммы флавоноидов.

Новым является также и то, что для экстракции используют сырье с размером частиц 2 мм. Известно, что размер частиц сырья обусловливает полноту и скорость перехода в раствор экстрагируемых веществ. Оптимальная степень измельченности, при которой достигается наибольший выход экстрактивных веществ и флавоноидов при соотношении сырья и экстрагента 1:10 и комнатной температуре, составляет 2 мм (табл.2).

При экстракции сырья с измельчением менее 1 мм, возникают сложности с очисткой извлечения от мельчайших частиц сырья, поэтому в данном случае оптимальный размер частиц - 2 мм.

На выход экстрактивных и, соответственно, биологически активных веществ оказывает влияние соотношение сырье-экстрагент. Наибольшее количество экстрактивных и биологически активных веществ - флавоноидов и фенолкарбоновых кислот извлекается при соотношении сырья и экстрагента 1:14 (табл.3), что также является новым.

На повышение выхода экстрактивных веществ из лекарственного растительного сырья оказывает влияние температурный фактор и процесс перемешивания. Наибольшее количество экстрактивных веществ, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот из побегов спиреи иволистной извлекается при температуре 55°C (табл.4). Использование более высоких температур в данном случае невыгодно с экономической точки зрения и обеспечивает стабильность химического состава целевого продукта.

Новым является - продолжительность ступеней экстракции: 1-я ступень - 120 мин, 2-я ступень - 90 мин, 3-я ступень - 60 мин (табл.5), обеспечивающая увеличение выхода целевого продукта.

Новым является то, что перед фильтрацией объединенных извлечений осуществляется их отстаивание при температуре +5°C в течение трех суток, что обеспечивает дополнительную очистку от сопутствующих и балластных веществ, которые выпадают в осадок. Это дает повышение содержания в целевом продукте основных биологически активных веществ - флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ.

Для расчета эффективности экстракции определяли выход экстрактивных веществ на каждой ступени экстракции, суммировали и рассчитывали выход по отношению к массе сухого сырья (табл.6).

Расчет процентного выхода экстрактивных веществ к массе сырья (Y,%) проводили по формуле:

, где

X - рассчитанная масса сухого остатка в общем объеме по трем ступеням, г, равная 3,3935;

m - масса абсолютно сухого сырья (9,279 г).

Эффективность экстракции S (%), по экстрактивным веществам рассчитывали по формуле:

, где

Y - выход экстрактивных веществ к абсолютно сухому сырью, %;

E - содержание экстрактивных веществ в сырье, %, равное 42,86%.

Эффективность экстракции сырья (по экстрактивным веществам) составляет 85,33%.

Авторами были проведены исследования по количественному содержанию суммы флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ, в целевых продуктах, полученных по известному способу и предлагаемому. Так, содержание по известному способу суммы флавоноидов составляет 5,12%, по предлагаемому - 6,83%; суммы фенолкарбоновых кислот по известному способу - 3,26%, по предлагаемому - 7,54%; дубильных веществ по известному способу - 11,28%, по заявляемому - 14,31% (табл.12).

Выход целевого продукта по известному способу - 20%, по предлагаемому - 28%.

Новым является то, что комплекс экстрагируемых биологически активных веществ по предлагаемому способу обладает не только противовоспалительным и мочегонным действием, а также антиоксидантной активностью (табл.7-11).

Сопоставительный анализ заявляемого решения и прототипа показывает, что заявляемый способ отличается от известного тем, что в качестве сырья используют побеги обмолоченные спиреи иволистной с размером частиц сырья - 2 мм. Экстракцию проводят спиртом этиловым 40% при соотношении сырье-экстрагент 1:14, при температуре экстракции 55°C со следующим временным контактом фаз: 1 контакт - 120 мин, 2 контакт - 90 мин, 3 контакт - 60 мин; отстаиванием извлечения при температуре +5°C перед фильтрацией, что соответствует критерию «новизна».

Новая совокупность существенных признаков обеспечивает увеличение целевого продукта на 40% и расширение сырьевой базы за счет широко произрастающей спиреи иволистной, что соответствует критерию «промышленная применимость».

При анализе известных способов было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков заявляемого способа на достижение технического результата, следовательно, изобретение соответствует «изобретательскому уровню».

В результате экспериментально подобранных параметров процесса экстракции составлена схема технологического процесса получения экстракта сухого из побегов спиреи иволистной (рис.1).

Оптимальные условия экстракции были положены в основу технологического процесса. Пример конкретного выполнения способа.

Описание технологического процесса

100 г воздушно-сухих побегов спиреи иволистной с размером частиц сырья 2 мм помещают в экстрактор и заливают 1400 мл 40% спирта этилового. Экстракцию проводят на магнитной мешалке при температуре 55°C. Первый контакт фазы - 120 минут. Извлечение сливают в количестве 860 мл (плотность - 0,935 г/см³). Далее проводят еще две экстракции, заливая в экстрактор 40% этиловый спирт в объеме, равном объему слитого извлечения, и экстрагируют при втором контакте фаз 90 минут, при третьем контакте фаз - 60 мин. Получают 500 мл второго извлечения (плотность - 0,933 г/см) и 300 мл третьего извлечения (плотность 0,931 г/см).

Извлечения объединяют и отстаивают при температуре +5°C в течение 3 суток, фильтруют через друк-фильтр.

Фильтрат подают на упарку в ротационный испаритель. Упарку ведут при температуре реакционной массы 55°C и давлении 9,81 гПа до 1л первоначального объема. Водный остаток, содержащий биологически активные вещества, передают на операцию сепарирования. Получают очищенное извлечение в количестве 420 мл (плотность 1,039 г/см³) и осадок балластных веществ - 6,8 г (влажность - 62%), который не используется. Сушку проводят в распылительной сушилке.

Получают экстракт сухой в количестве 28 г, что составляет 28% от массы воздушно-сухого сырья.

Экстракт сухой представляет собой порошок от светло-коричневого до темно-коричневого цвета со слабым запахом и горьковатым слегка вяжущим вкусом.

Параметры стандартизации конечного продукта - экстракта сухого.

Качественное обнаружение биологически активных веществ:

- 0,1 г экстракта сухого растворяют в 20 мл 40% спирта этилового при нагревании на водяной бане в течение 10 мин, фильтруют через бумажный фильтр. К 2 мл фильтрата прибавляют 0,1 г порошка магния и 1 мл кислоты хлористоводородной концентрированной; перемешивают и нагревают на водяной бане 5 минут; постепенно появляется красное окрашивание (флавоноиды);

- 0,5 г экстракта сухого растворяют в 10 мл воды, перемешивают, нагревают на водяной бане в течение 10 минут и фильтруют. К 2 мл фильтрата прибавляют 2-3 капли раствора железоаммониевых квасцов; появляется черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества).

Количественное определение суммы флавоноидов

Дифференциальный УФ-спектр спиртового раствора экстракта в присутствии алюминия хлорида имеет максимум поглощения в длинноволновой области при 412 нм и совпадает с максимумом поглощения рутина в комплексе с алюминием хлоридом (рис.2).

Около 0,1 г (точная навеска) экстракта сухого помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 40% спирта этилового, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 15 мин. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры. Содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем раствора доводят 40% спиртом этиловым до метки, перемешивают (раствор A).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора A, прибавляют 1 мл 1% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят раствор до метки 96% спиртом этиловым. Через 40 минут измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 412 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора A, 1 капли 10% раствора кислоты уксусной и доведенный 96% спиртом этиловым до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО рутина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухой экстракт в процентах (X) вычисляют по формуле:

,

где D - оптическая плотность испытуемого раствора; D₀ - оптическая плотность раствора РСО рутина; m - масса экстракта, г; m₀ - масса РСО рутина, г; W - потеря в массе при высушивании экстракта в процентах.

Примечание. Приготовление раствора РСО рутина: около 0,05 г (точная навеска) РСО рутина, предварительно высушенного при температуре 130-135°C в течение 3 ч, растворяют в 85 мл 95% спирта этилового в мерной колбе вместимостью 100 мл при нагревании на водяной бане, охлаждают, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают.

Содержание суммы флавоноидов в экстракте сухом 6,83%.

Методика количественного определения суммы фенолкарбоновых кислот в сухом экстракте спиреи иволистной.

Для количественного определения фенолкарбоновых кислот применяли метод прямого спектрофотометрирования с использованием в качестве стандартного образца кофейную кислоту, т.к. максимум поглощения спиртового раствора экстракта сухого спиреи иволистной при 325 нм и совпадает с кофейной кислотой.

1 мл раствора А (полученного для количественного определения содержания суммы флавоноидов) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки.

Оптическую плотность раствора определяют на спектрофотометре СФ-46 при длине волны 325 нм в кювете с длиной рабочего слоя 1 см. В качестве раствора сравнения используют 95% спирт этиловый.

Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на кофейную кислоту и воздушно-сухой экстракт в процентах (X) рассчитывают по формуле:

,

где D - оптическая плотность испытуемого раствора; m - масса сырья, г; W - потеря в массе при высушивании сырья, %; 782 - удельный показатель поглощения кофейной кислоты при 325 нм.

Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в экстракте сухом 7,54%.

Количественное содержание дубильных веществ и влажность в экстракте сухом определяли по методикам ГФХ1 [Государственная Фармакопея СССР. - XI-е изд. - М.: Медицина. Т.1, 2 (1987, 1990)].

Содержание дубильных веществ составило 14,31%, влажность экстракта сухого 4,35%.

Противовоспалительная активность

Исследования выполнены на 60 крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г, содержащихся на стандартном рационе питания при свободном доступе к воде и пище в условиях вивария. Исследования с животными проводились в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».

В эксперименте использовали методики исследования противовоспалительной активности на разных стадиях процесса воспаления: альтерации - по И.А. Ойвину [Ойвин, И.А. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости / И.А. Ойвин, СЛ. Шетель // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. - Душанбе, 1961. - Т. 49, №5. - С.167-173], экссудации - по Ю.Е. Стрельникову [Стрельников, Ю.С. Сравнительная характеристика противовоспалительного действия некоторых пиримидиновых производных / Ю.С. Стрельников // Фармакология и токсикология. - 1960. - №6 - С.167-173], пролиферации - Ф.Н. Тринусу [Тринус, Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф.П. Тринус, Н.А. Мохорт, Б.М. Клебанов. - Киев, 1975. - 240 с.]. Экстракт сухой спиреи иволистной вводили крысам энтерально в виде водного раствора в дозе 100 мг/кг веса крысы, крысы контрольной группы получали воду очищенную в объеме 1 мл.

О воздействии экстракта сухого спиреи иволистной на альтерацию тканей и интенсивность процессов регенерации судили по динамике заживления кожно-мышечного дефекта у крыс, вызванного подкожным введением в область спины 0,5 мл 9% кислоты уксусной с одновременным введением раствора декстрана в дозе 300 мг/кг массы животного. Первое введение препаратов осуществляли за 1 час до введения уксусной кислоты, затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 29 дней. На 9 и 29 сутки эксперимента оценивали площадь некротизированной ткани путем нанесения контура некроза на прозрачную пленку.

Оценку влияния спиреи иволистной экстракта сухого на экссудативную фазу воспаления проводили путем однократного введения в заднюю конечность животных 0,1 мл 3% формалина. Исследуемые препараты вводили за 1 час до инъекции, а затем через 5 и 18 часов. Оценку антиэкссудативной активности вычисляли, рассчитывая процент угнетения отека по отношению к контролю.

При изучении процесса образования фиброзно-грануляционной ткани стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали крысам под кожу в области спины в асептических условиях. Изучаемые препараты вводили 1 раз в сутки в течение 7 дней. Затем образовавшиеся гранулемы взвешивали на аналитических весах сразу после извлечения и после высушивания (при 70°C в течение 24 часов до постоянной массы).

Результаты эксперимента статистически обрабатывали при доверительной вероятности 95%.

Как видно из таблицы 7, экстракт сухой спиреи иволистной в дозе 100 мг/кг оказывает противовоспалительное действие, о чем свидетельствуют уменьшение степени альтерации ткани и повышении интенсивности регенерации процессов в очаге воспаления. Площадь повреждения тканей на 9 и 29 день уменьшается на 14,9 и 19,9% соответственно.

Испытанная доза экстракта сухого спиреи иволистной оказывает антиэкссудативное действие, снижая отек лапки животных на 36,5% по сравнению с контрольной группой (табл.8).

Результаты изучения влияния исследуемых препаратов на стадию пролиферации представлены в таблице 9.

Процент стимуляции образования гранулемы под влиянием экстракта сухого спиреи иволистной составляет 30,9%. Стимуляция образования гранулемы экстрактом сухим возрастает по сравнению с контролем в 1,3 раза.

Мочегонная активность

Исследования проводили на 20 белых мышах массой 20 г по методу Е.Б. Берхина [1977]. Для исследования мочегонного действия использовали две группы животных по 10 мышей в каждой группе: опытной, контрольной. При изучении водного диуреза крыс содержали на постоянном пищевом рационе при свободном доступе к воде. До водной нагрузки животных выдерживали в течение двух часов без пищи и воды. Затем мышам вводили в желудок с помощью зонда водный раствор экстракта сухого в дозе 100 мг/кг. Объем вводимой жидкости с экстрактом составлял 2 мл одновременно с водной нагрузкой в количестве 0,3 мл на 10 г массы тела животного. Мочу собирали через каждый час в течение 4 часов. Контрольная группа мышей получала воду очищенную.

Сухой экстракт спиреи иволистной вызывал увеличение диуреза у животных на 87% в сравнении с контрольной группой (табл.10), что указывает на его мочегонную активность.

Антиоксидантная активность

Определение антиоксидантной активности экстракта сухого проводили in vitro на сыворотке донорской крови человека. К 2 мл сыворотки прибавляли 1 мл тестируемого экстракта, 0,1 мл 0,5 М раствора сульфата меди (II), в качестве индуктора ПОЛ, и инкубировали при t=37°C в течение 16 ч. В контрольном опыте вместо тест-препарата прибавляли 1 мл 0,05 М раствора этилендиаминтетрацетата (ЭДТА) как ингибитора ПОЛ. [Шаварда, А.Л. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая / А.Л. Шаварда и [др.] // Растит, ресурсы. - 1998. - т.34. - вып.2. - С.1-8].

Определяли содержание ДК и МДА [Гончаренко, М.С. Метод оценки перекисного окисления липидов / М.С. Гончаренко, A.M. Латинова // Лабораторное дело. - 1985. - №1. - С.60-61].

Экстракт сухой снижал образование ДК в сравнении с контролем на 15%, МДА на 58% (табл.11), что свидетельствует об антиоксидантной активности предлагаемого средства.

Литература

1. Гончаренко, М.С. Метод оценки перекисного окисления липидов / М.С. Гончаренко, A.M. Латинова // Лабораторное дело. - 1985. - №1. - С.60-61.

2. Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 02.04.2012 [Электронный ресурс] URL: http://grls.rosminzdrav.ru

3. Государственная Фармакопея СССР. - XI-е изд. - М.: Медицина. Т.1, 2 (1987, 1990).

4. Минина, С.А. Химия и технология фитопрепаратов: учебное пособие // С.А. Минина, И.Е. Каухова. - М.: ГОЭТАР - Медиа, 2009. - 560 с.

5. Ойвин И.А. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости / И.А. Ойвин, СЛ. Шетель // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. - Душанбе, 1961. - Т. 49, №5. - С.167-173. Растительные ресурсы СССР: цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Hydrangeaceae-Haloragaceae. - СПб., 1991. - С.101.

6. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология / С.Я. Соколов. - М.: МИА, 2000. - 970 с.

7. Стрельников, Ю.С. Сравнительная характеристика противовоспалительного действия некоторых пиримидиновых производных / Ю.С.Стрельников // Фармакология и токсикология. - 1960. - №6 - С.167-173.

8. Тринус, Ф.П. Нестероидные противовоспалительные средства / Ф.П. Тринус, Н.А. Мохорт, Б.М. Клебанов. - Киев, 1975. - 240 с.

9. Фармацевтическая технология. Технология лекарственных форм: учебник / И.И. Краснюк, Г.В. Михайлова, Т.В. Денисова, В.И. Скляренко; под ред. И.И. Краснюка, Г.В. Михайловой. - М.: ГОЭТАР - Медиа, 2011. - 657 с.

10. Шаварда, А.Л. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая / А.Л. Шаварда и [др.] // Растит, ресурсы. - 1998. - т.34. - вып.2. - С.1-8.

Таблица 1
Выход суммы экстрактивных веществ, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в зависимости от типа и концентрации экстрагента
Экстрагент	Содержание, %
Экстрактивные вещества	Сумма флавоноидов	Сумма фенолкарбоновых кислот
Вода очищенная	31,49	0,55	1,30
Спирт этиловый
10%	32,11	0,69	1,36
20%	34,40	1,08	1,50
30%	34,95	1,17	1,53
40%	35,60	1,76	1,69
50%	34,16	1,51	1,60
60%	31,09	1,54	1,63
70%	28,59	1,52	1,60
80%	28,93	1,40	1,61
90%	19,05	0,75	1,60

Таблица 2
Влияние соотношения сырье-экстрагент на выход экстрактивных веществ, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот
Размер частиц сырья, мм	Содержание, %
Экстрактивные вещества	Сумма флавоноидов	Сумма фенолкарбоновых кислот
1	32,35	1,41	2,45
2	36,23	1,76	2,66
3	33,79	1,22	2,64
5	30,76	0,90	2,33

Таблица 3
Выход экстрактивных веществ, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в зависимости от соотношения сырья и экстрагента
Соотношение сырья и экстрагента	Содержание, %
Экстрактивные вещества	Сумма флавоноидов	Сумма фенолкарбоновых кислот
1:8	35,20	0,81	1,98
1:10	39,07	1,20	2,06
1:12	39,32	1,30	2,64
1:14	40,53	2,13	2,67
1:16	29,90	1,95	2,65

Таблица 4
Выход и экстрактивных веществ, флавоноидов, фенолкарбоновых кислот в зависимости от температуры экстракции
Температура экстракции, °C	Содержание, %
Экстрактивные вещества	Сумма флавоноидов	Сумма фенолкарбоновых кислот
30	40,51	2,14	2,68
40	40,76	2,18	2,78
45	40,82	2,20	2,81
50	40,94	2,74	2,90
55	41,16	2,31	3,39
60	41,18	2,32	3,38
65	41,17	2,30	3,37
70	41,19	2,31	3,38

Таблица 5
Выход экстрактивных веществ в зависимости от числа ступеней и времени экстракции
Ступень экстракции	Время, мин	Выход экстрактивных веществ, %
I	60	41,16
90	43,82
120	44,27
150	44,26
II	60	15,77
75	16,22
90	17,88
120	17,79
III	30	10,83
60	10,81
90	10,82

Таблица 6
Результаты определения эффективности экстракции (из 10 г сырья)
Содержание в сырье, %	Влажность сырья, %	Ступень экстракции	Содержание в г на ступени экстракции	Эффективность экстракции, %
Экстрактивные вещества
42,86	7,21	1	2,57398	85,33%
2	0,64617
3	0,17332
всего по трем ступеням	3,39347

Таблица 7
Влияние экстракта сухого спиреи иволистной на альтерацию и регенерацию при остром асептическом воспалении (M±m), n=6
Группа животных	9 сутки	29 сутки
Площадь некротизированной ткани, см2	Степень уменьшения повреждения кожных покровов, %	Площадь некротизированной ткани, см2	Степень уменьшения повреждения кожных покровов, %
Контроль (H2O)	5,50±0,20	-	3,26±0,10	-
Спирея иволистная	4,68±0,12	-14,9	2,71±0,11	-16,9

Таблица 8
Влияние экстракта сухого спиреи иволистной на экссудативную фазу воспаления (M±m), n=6
Группа животных	Разность между объемами воспаленной и невоспаленной лапок, мл	Угнетения отека, %
Контроль (H2O)	2,44±0,034	0
Спирея иволистная	1,55±0,10	-36,5

Таблица 9
Влияние экстракта сухого спиреи иволистной на пролиферативную фазу воспаления (M±m), n=6
Группа животных	Масса образовавшейся грануляционно-фиброзной ткани, мг	Стимуляция образования гранулемы, %
Контроль (Н2О)	93,80	0
Спирея иволистная	122,78±2,51	+30,9

Таблица 10
Мочегонная активность экстракта сухого спиреи иволистной (M±m), n=6
Условие	Контроль (вода очищенная)	Экстракт спиреи иволистной
Количество мочи, мл	1,5±0,1	2,8±0,05
Увеличение диуреза в сравнении с контролем		+87%

Таблица 11
Антиоксидантная активность экстракта сухого спиреи иволистной (M±m), n=6
Условия опыта	Контроль	Сухой экстракт спиреи иволистной
Диеновый коньюгат (ДК), Оптические единицы	3,98±0,1	3,39±0,1
Степень снижения уровня ДК, %		-15%
Малоновый диальдегид (МДА), мкМ/млмин	2,15±0,1	1,71±0,05
Степень снижения уровня МДА, %		-58%

Таблица 12
Сравнительная характеристика заявленного способа с выбранным прототипом
№ п/п	Параметр сравнения	Известный способ	Заявленный способ
1	Растительное сырье	Листья земляники лесной	Побеги спиреи иволистной
2	Экстрагент	Вода очищенная	Спирт этиловый 40%
3	Соотношение сырья и экстрагента	1:10	1:14
4	Степень измельченности сырья, мм	от 1 до 3	2
5	Температура экстракции, °C	75	55
6	Продолжительность контакта фаз в минутах:
- первый контакт	30	120
- второй контакт	30	90
- третий контакт	30	60
7	Отстаивание при +5°C, 3 суток	-	+
8	Выход целевого продукта, %	20	28
9	Содержание в экстракте сухом суммы флавоноидов, %	5,12	6,83
10	Содержание в экстракте сухом суммы фенолкарбоновых кислот, %	-	7,54
11	Содержание в экстракте сухом дубильных веществ, %	-	14,31
12	Фармакологическое действие
- противовоспалительное	+	+
- мочегонное	+	+
- антиоксидантное		+

Способ получения средства, обладающего противовоспалительной, мочегонной и антиоксидантной активностью, включающий измельчение побегов спиреи иволистной, представляющих собой смесь листьев, цветков и веточек не толще 3 мм, до частиц размером 2,0 мм, их трехкратную экстракцию методом дробной мацерации 40% этиловым спиртом в соотношении сырье - экстрагент 1:14, при температуре 55°C, перемешивание при настаивании, при этом первый контакт фаз - 120 минут, далее извлечение сливают, проводят еще две экстракции, заливая этиловый спирт в объеме, равном слитому извлечению, второй контакт фаз - 90 минут, третий контакт фаз - 60 минут; извлечения объединяют, отстаивают в течение суток, фильтруют, сгущают, сепарируют, сушат.