Способ выбора пищевого рациона, обеспечивающего получение молока, обладающего иммуностимулирующим действием

Способ выбора пищевого рациона, обеспечивающего получение молока, обладающего иммуностимулирующим действием

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способу выбора пищевого рациона, обеспечивающего получение молока, обладающего иммунорегуляторным действием, который может использоваться в областях продуктов питания, кормов для животных и тому подобном.

Уровень техники

Иммунитет живых организмов функционирует по существу с целью «защиты» против внешних воздействий. Например, «защитой» являются упреждение и устранение раковых клеток, и усиление иммунитета в таком случае действует эффективно.

С другой стороны, сверхответ иммунитета, т.е. «гипериммунитет» может отрицательно влиять на живые организмы. К примерам этого относятся аллергические реакции, аутоиммунные заболевания, хроническое воспаление и тому подобное. Известно, что в таком случае симптомы смягчаются при супрессии продукции провоспалительных цитокинов, таких как IL-6, TNF-α и IL-1.

Кроме того, становится понятно, что иммуностимулирующие воздействия, функционирующие с целью «защиты» против внешних воздействий, и иммуносупрессивные воздействия, функционирующие для супрессии аллергических реакций, аутоиммунных заболеваний, хронического воспаления и т.д., индуцированных гипериммунореакцией, регулируются посредством микроРНК (далее также обозначаемой как «miRNA»).

После транскрипции miRNA с генома она дважды подвергается расщеплению и становится некодирующей малой РНК размером около 22 нуклеотидов. Известно, что в качестве своей функции она связывается с 3'-нетранслируемым регионом мРНК-мишеней по принципу комплементарности последовательностей, супрессируя трансляцию мРНК-мишеней. Один из видов miRNA ингибирует трансляцию большинства видов мРНК в клетке, регулируя большое число функций клетки. Особенно много сообщений было сделано по ее связи с развитием и прогрессированием рака и связи между miRNA и заболеваниями, привлекающими внимание.

Например, в отношении miR-181 было сообщено, что она включена в развитие В-клеток, активацию Т-клеток и становление иммунитета (непатентные документы 1-3).

В отношении miR-155 известно, что она вовлечена в развитие иммунитета через активацию врожденного иммунитета (непатентные документы 1-4) и регуляцию дифференциации и функций Т-клеток и В-клеток (непатентные документы 1-5) и она вовлечена в противоаллергическое и противовоспалительное действие за счет регуляции баланса Th1/Th2 (непатентные документы 1-6) и поддержание функций регуляторных Т-клеток, которые супрессируют гипериммунореакции (непатентный документ 7).

miR-17 и miR-92 взаимодействуют, регулируя дифференцировку и развитие В-клеток и Т-клеток, и таким образом принимают участие в развитии иммунитета (непатентные документы 1, 8 и 9).

Известно, что miR-223 принимает участие в иммунитете, контролируя пролиферацию и активацию нейтрофилов (непатентные документы 1-10), miR-150 принимает участие в иммунитете, супрессируя дифференциацию В-клеток (непатентный документ 1 и 11), и let-7i принимает участие в иммунитете, контролируя экспрессию TLR4 в холангиоцитах (непатентный документ 12).

Известно, что miR-125 принимает участие в противовоспалительном действии путем супрессии продукции TNF-α (непатентные документы 1и 13).

Известно, что miR-146 принимает участие в иммунитете путем отрицательной регуляции врожденного иммунитета (непатентные документы 1 и 14) и принимает участие в противоаллергическом действии за счет контроля баланса Th1/Th2 (непатентный документ 15).

Недавно было сообщено, что miRNA, которые функционируют в клетках в качестве молекул, регулирующих трансляцию, присутствуют в липидном бислое, называемом экзосомой, и секретируются из клетки (непатентный документ 16). Поскольку также было подтверждено, что секретированные miRNA встраиваются в другие клетки, было описано наличие межклеточных взаимодействий посредством miRNA. Кроме того, известно, что экзосомы присутствуют в большом числе видов жидкостей организма человека. В частности, уже было сообщено о наличии miRNA в плазме и сыворотке человека, и была предположена возможность их применения в качестве биомаркера рака простаты или рака матки (непатентный документ 17).

К жидкостям организма, содержащим экзосомы, относятся помимо плазмы и сыворотки слюна, моча, амниотическая жидкость и грудное молоко (непатентный документ 17). Среди них грудное молоко представляет собой жидкость организма, продуцируемую млекопитающими в определенный период и отвечающую за перенос веществ между индивидуумами, т.е. от матери к ребенку. Более того, грудное молоко не только добавляет ребенку питательные вещества, но также дает иммунные вещества, поставляемые матерью ребенку.

Грудное молоко содержит секреторный IgA, лактоферрин, лизозим, цитокины и тому подобное, и полагают, что оно защищает младенца от инфекций и стимулирует развитие иммунитета ребенка (непатентный документ 19). В действительности, известно, что дети, выросшие на грудном молоке, имеют меньший риск инфицирования бронхиального и кишечного тракта по сравнению с детьми, не выросшими таким образом. Грудное молоко содержит IgA, лактоферрин, гликопротеины, гликолипиды и т.д., у которых наблюдается антибактериальная активность, а также цитокины, которые регулируют иммуноциты. Тем не менее, объекты, проанализированные в исследованиях до настоящего времени, представляют собой, главным образом, белки, содержащиеся в грудном молоке, и несмотря на то, что существуют сообщения о нуклеиновых кислотах, содержащихся в грудном молоке, не было сообщено об исследованиях по нуклеиновым кислотам, содержащимся в грудном молоке и имеющим конкретные последовательности.

Более того, также известно, что развитие железистых клеток молочной железы, контролируемое экспрессией циклооксигеназы 2, регулируется с помощью miR-101а (непатентный документ 20). Тем не менее, полагают, что в молоке нет miRNA.

Кроме того, после даты приоритета настоящей заявки было сообщено, что микроРНК присутствуют в микровезикулах, полученных из коровьего молока (непатентный документ 21), и микроРНК идентифицируют в свежем молоке коров различных периодов лактации, коммерческом жидком молоке и сухом молоке (патентный документ 22).

Ссылки на документы уровня техники

Непатентные документы

Непатентный документ 1: Lindsay, M.A., Trends Immunol, 29:343-351, 2008.

Непатентный документ 2: Li, Qi-Jing et al., Cell, 129:147-161, 2007.

Непатентный документ 3: Chen, Chang-Zheng et al., Science, 303:83-86, 2004.

Непатентный документ 4: O'Connel, R.M. et al., PNAS, 104 (5):1604-1609, 2007.

Непатентный документ 5: Vigorito, E. et al., Immunity, 27:847-859, 2007.

Непатентный документ 6: Rodriguez, A. et al., Science, 316:608-611, 2007.

Непатентный документ 7: Kohlhaas, S. et al., J. Immunol., 182:2578-2582, 2009.

Непатентный документ 8: Koralov, S.B. et al., Cell, 132:860-874, 2008.

Непатентный документ 9: Xiao, C. et al., Nat. Immunol., 9:405-414, 2008.

Непатентный документ 10: Jonathan, B. et al., Nature, 451:1125-1129, 2008.

Непатентный документ 11: Zhou, B. et al., PNAS, 104 (17):7080-7085, 2007.

Непатентный документ 12: Chen, Xian-Ming et al., J. Biol. Chem., 282 (39):28929-28938, 2007.

Непатентный документ 13: Tili, E. et al., J. Immunol., 179:5082-5089, 2007.

Непатентный документ 14: Taganov, K.D. et al., PNAS, 103 (33):12481-12486, 2006.

Непатентный документ 15: Monticelli, S. et al., Genome Biol., 6, R71, 2005.

Непатентный документ 16: Valadi, H. et al., Nat. Cell Biol., 9:654-659, 2007.

Непатентный документ 17: Gilad, S. et al., PLoS One, 3 (9):e3148, 2008.

Непатентный документ 18: Admyre, C., J. Immunol., 179:1969-1978, 2007.

Непатентный документ 19: Goldman, A.S., Breastfeed Med., 2 (4):195-204, 2007.

Непатентный документ 20: Tanaka, T. Et al., Differentiation, 77:181-187, 2009.

Непатентный документ 21: Hata, T. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 396 (2):528-533, 2010.

Непатентный документ 22: Chen, X. et al., Cell Research, (2010):1-10.

Сущность изобретения

Цель, достигаемая изобретением

Цель настоящего изобретения - предложение способа выбора пищевого рациона, обеспечивающего получение молока, обладающего иммунорегуляторным действием, и нового продукта питания, обладающего иммунорегуляторным действием, и способа его продукции.

Средства достижения цели

Авторы настоящего изобретения провели исследования, сконцентрировав внимание на том факте, что грудное молоко влияет на зрелость иммунной системы младенца. В результате они обнаружили, что в грудном молоке в значительной степени экспрессируются связанные с иммунитетом miRNA, и завершили настоящее изобретение.

Настоящее изобретение, таким образом, относится к способу выбора пищевого рациона или вещества, обеспечивающего получение грудного молока, обладающего иммунорегуляторным действием, который содержит установление пищевого рациона или вещества, которое повышает или снижает количество микроРНК, присутствующее в молоке млекопитающего, используя корреляцию профиля микроРНК в молоке и пищевом рационе, полученном млекопитающим, или веществе, содержащемся в пищевом рационе, в виде индекса.

В одном из вариантов осуществления вышеуказанного способа иммунорегуляторное действие представляет собой иммуностимулирующее действие, и при увеличении количества микроРНК полагают, что пищевой рацион или вещество обеспечивает получение грудного молока, обладающего иммуностимулирующим действием.

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа сравнивают в молоке профили микроРНК, наблюдаемые до и после получения пищевого рациона, и если количество по меньшей мере одного вида микроРНК, наблюдаемое после получения, выше, чем количество, наблюдаемое до получения, то полагают, что пищевой рацион повышает количество микроРНК в молоке.

В другом предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа сравнивают профили микроРНК в молоке и профили микроРНК в сыворотке или плазме, и если количество микроРНК, содержавшееся и в молоке, и в сыворотке или плазме, возрастает в молоке при получении пищевого рациона в 1,2 раза или больше по сравнению с количеством, обнаруженным в сыворотке или плазме, то полагают, что пищевой рацион повышает количество микроРНК в молоке.

В другом варианте осуществления вышеуказанного способа иммунорегуляторное действие представляет собой иммуносупрессивное действие, и при снижении количества микроРНК полагают, что пищевой рацион или вещество обеспечивает получение грудного молока, обладающего иммуносупрессивным действием.

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа сравнивают в молоке профили микроРНК, наблюдаемые до и после получения пищевого рациона, и если количество по меньшей мере одного вида микроРНК, наблюдаемое после получения, меньше, чем количество, наблюдаемое до получения, то полагают, что пищевой рацион снижает количество микроРНК в молоке.

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа сравнивают профили микроРНК в молоке и профили микроРНК в сыворотке или плазме, и если количество микроРНК, содержавшееся и в молоке, и в сыворотке или плазме, снижается в молоке при получении пищевого рациона в 0,8 раз или меньше по сравнению с количеством, обнаруженным в сыворотке или плазме, то полагают, что пищевой рацион снижает количество микроРНК в молоке.

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа млекопитающее представляет собой человека.

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа профили микроРНК состоят из количества микроРНК, выбранной из группы, состоящей из

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа профили микроРНК состоят из количества микроРНК, выбранной из группы, состоящей из

В предпочтительном варианте осуществления вышеуказанного способа профили микроРНК состоят из количества микроРНК, выбранной из группы, состоящей из

Настоящее изобретение также относится к способу продукции молока или молочных продуктов, обладающих иммунорегуляторным действием, который содержит стадию получения пищевого рациона или вещества, как установлено посредством вышеуказанного способа выбора для млекопитающего (за исключением человека), повышающего или снижающего количество микроРНК в молоке млекопитающего, и стадию сбора молока млекопитающего.

В одном из вариантов осуществления вышеуказанного способа иммунорегуляторное действие представляет собой иммуностимулирующее действие, и определяют пищевой рацион или вещество, повышающие количество микроРНК.

В одном из вариантов осуществления вышеуказанного способа иммунорегуляторное действие представляет собой иммуносупрессивное действие, и определяют пищевой рацион или вещество, снижающие количество микроРНК.

Настоящее изобретение также относится к композиции для перорального приема, обладающей иммуностимулирующим действием, которая содержит основу композиции для перорального приема и добавленную к основе микроРНК.

В предпочтительном варианте осуществления композиции для перорального приема микроРНК выбирают из группы, состоящей из

В предпочтительном варианте осуществления композиции для перорального приема микроРНК выбирают из группы, состоящей из

В предпочтительном варианте осуществления композиции для перорального приема микроРНК выбирают из группы, состоящей из

В предпочтительном варианте осуществления композиции для перорального приема композиция представляет собой продукт питания грудных детей или продукт питания маленьких детей.

В предпочтительном варианте осуществления композиции для перорального приема продукт питания грудных детей или продукт питания маленьких детей представляет собой молочную смесь или прикорм.

Краткое описание чертежей

На фиг.1 представлены результаты определения miRNA в грудном молоке человека, полученные с помощью микрочипового анализа.

На фиг.2 показано сравнение уровней miR-181а в грудном молоке для ребенка первых шести месяцев после рождения и шести последующих месяцев. hsa представляет человека и cel представляет нематоду (Caenorhabditis elegans) (то же применимо к последующим чертежам).

На фиг.3 представлено сравнение уровней miR-155, miR-17 и miR-92 в грудном молоке для ребенка первых шести месяцев после рождения и шести последующих месяцев.

На фиг.4 представлено сравнение уровней связанных с иммунитетом miRNA в грудном молоке и сыворотке человека.

На фиг.5 показано сравнение уровней miRNA, обнаруженных до и после замораживания-оттаивания.

На фиг.6 показано сравнение уровней miRNA, обнаруженных до и после хранения при низкой величине рН (рН 1).

На фиг.7 показано сравнение уровней miRNA, обнаруженных после обработки РНКазами и в отсутствие обработки РНКазами.

Варианты осуществления изобретения

Способ по настоящему изобретению представляет собой способ выбора пищевого рациона или вещества, обеспечивающего получение грудного молока, обладающего иммунорегуляторным действием, который содержит установление пищевого рациона или вещества, которое повышает или снижает количество микроРНК, присутствующее в молоке млекопитающего, на основе сопоставления профилей микроРНК в молоке и пищевом рационе, получаемом млекопитающим, или веществе, содержащемся в пищевом рационе.

В одном из вариантов осуществления вышеуказанного способа по настоящему изобретению иммунорегуляторное действие представляет собой иммуностимулирующее действие, и при увеличении количества микроРНК полагают, что пищевой рацион или вещество обеспечивает получение грудного молока, обладающего иммуностимулирующим действием. В другом варианте осуществления вышеуказанного способа по настоящему изобретению иммунорегуляторное действие представляет собой иммуносупрессивное действие, и при снижении количества микроРНК полагают, что пищевой рацион или вещество обеспечивает получение грудного молока, обладающего иммуносупрессивным действием.

Настоящее изобретение основано на предположении, что иммунорегуляторное действие должно достигаться пероральным введением miRNA, благодаря новой находке, что miRNA содержатся в молоке, и факту, что miRNA могут устойчиво существовать даже при кислотных условиях в желудке, и грудное молоко активирует развитие иммунитета у младенцев, получающих грудное молоко (например, статья Breastfeed Med., 2(4):195-204, 2007). И исходя из предположения, что на профиль miRNA в молоке влияет пищевой рацион, предполагалось установить пищевой рацион или активный ингредиент, содержащийся в нем, которые могли бы повысить или снизить количество miRNA, присутствующее в молоке.

К иммунорегуляторному действию, определенному в отношении способа выбора, молока, молочного продукта и тому подобного по настоящему изобретению, относятся, например, как действие усиления иммунопотенцирующего действия, которое функционирует с целью «защиты» против внешних воздействий (иммуностимулирующее действие), так и иммуносупрессивное действие, функционирующее для подавления против сверхответа иммунитета, т.е. аллергических реакций, аутоиммунных заболеваний, хронического воспаления и т.д., в которых «гипериммунореакция» негативно влияет на живые организмы.

Термины «иммуностимулирующее действие» и «иммуносупрессивное действие» используются в относительном смысле. При усилении иммунопотенцирующего действия, обычно наблюдаемого для грудного молока некоторого млекопитающего после получения пищевого рациона или вещества, грудное молоко обладает иммуностимулирующим действием, и при снижении иммунопотенцирующего действия грудное молоко обладает иммуносупрессивным действием. При усилении иммунопотенцирующего действия, наблюдаемого после получения млекопитающим пищевого рациона или вещества, по сравнению с наблюдаемым до получения грудное молоко млекопитающего обладает иммуностимулирующим действием, и при снижении иммунопотенцирующего действия по сравнению с наблюдаемым до получения грудное молоко обладает иммуносупрессивным действием.

Корреляция профилей miRNA в молоке млекопитающего и пищевом рационе, получаемом млекопитающим, или веществе, содержащемся в пищевом рационе, может быть исследована, например, согласно следующему.

Молоко собирают от млекопитающего, которое получило пищевой рацион, и оценивают профиль miRNA в молоке.

Млекопитающее особенно не ограничивается, и к примерам относятся человек, корова, коза, овца, свинья, обезьяна, собака, кошка, крыса, мышь, хомяк, морская свинка и тому подобное. Млекопитающее предпочтительно представляет собой человека или корову.

По настоящему изобретению профиль miRNA состоит из типа и количества miRNA. miRNA может состоять из одного вида miRNA или двух или больше видов miRNA. Тип miRNA особенно не ограничивается при условии, что выбирают типы, существующие в молоке, и к их примерам относятся

Эти miRNA представляют собой такие miRNA, наличие которых подтверждают либо в одном грудном молоке человека, молозиве крысы, либо молозиве коровы. Как описано выше, известно, что грудное молоко стимулирует развитие иммунитета грудных детей, которые его получают (например, документ Breastfeed Med., 2 (4):195-204, 2007). Более того, было сообщено о предположении, что многие компоненты, важные для иммунной системы грудных детей (включая детенышей животных), как правило, содержатся в молозиве (J. Anim. Sci., 2009, 87: (Suppl.1): 3-9). Поэтому полагают, что указанные выше miRNA, наличие которых в молоке подтверждается, вовлечены в иммунные функции.

Среди указанных выше miRNA предпочтительны miR-15

Существуют miRNA, для которых сообщается о иммунорегуляторном действии, miRNA, наличие которых подтверждалось в молозиве как крысы, так и коровы, или miRNA, количество которых повышено в молозиве крысы, получавшей бактерии Bifidobacterium.

Более того, среди указанных выше miRNA особенно предпочтительны

Существуют miRNA, наличие которых подтверждалось в молозиве как крысы, так и коровы.

Некоторые miRNA имеют подтипы, и, например, известно от 2 до 4 видов подтипов для каждой из miR-181, miR-92, miR-125, miR-146 и тому подобных, таких как miR-181а, miR-

соответственно. Некоторые другие miRNA также имеют подтипы, и по настоящему изобретению miRNA могут представлять собой любой из таких подтипов. К примерам подтипов относятся подтипы, наличие которых в молоке подтверждалось в примерах, описанных далее (ссылка на примеры 1, 3, 4 и 5).

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-155 человека hsa-mir-155 (MI0000681) и его активного сайта hsa-mir-155 (MIMAT0009241) представлены в SEQ ID NOS: 1 и 2, соответственно. В скобках представлены добавочные номера в базе данных miRNA (miRBase::Sequences, http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/index.shtml) (то же должно использоваться для последующих описаний).

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-155 коровы bta-mir-155 (MI0009752) и его активного сайта bta-mir-155 (MIMAT0000646) представлены в SEQ ID NOS: 3 и 4, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-181а человека hsa-mir-181а-1 (MI0000289) и hsa-mir-181а-2 (MI0000269) и их активного сайта hsa-mir-181а (MIMAT0000256) представлены в SEQ ID NOS: 5, 6 и 7, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-181b человека hsa-mir-181b-1 (MI0000270) и hsa-mir-181b-2 (MI0000683) и их активного сайта hsa-mir-181b (MIMAT0000257) представлены в SEQ ID NOS: 8, 9 и 10, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-181а коровы bta-mir-181а (MI0004757) и bta-mir-181а-1 (MI0010484) и их активного сайта bta-mir-181а (MIMAT0003543) представлены в SEQ ID NOS: 11, 12 и 13, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-181b коровы bta-mir-181b-1 (MI0010485) и bta-mir-181b-2 (MI0005013) и их активного сайта bta-mir-181b (MIMAT0003793) представлены в SEQ ID NOS: 14, 15 и 16, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-223 человека hsa-mir-223 (MI0000300) и его активного сайта hsa-mir-223 (MIMAT0000280) представлены в SEQ ID NOS: 17 и 18, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-223 коровы bta-mir-223 (MI0009782) и его активного сайта bta-mir-223 (MIMAT0009270) представлены в SEQ ID NOS: 19 и 20, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-17 человека hsa-mir-17 (MI0000071) и его активного сайта hsa-mir-17 (MIMAT0000070) (также называемого hsa-mir-17-5р) представлены в SEQ ID NOS: 21 и 22, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-17 коровы bta-mir-17 (MI0005031), его активных сайтов bta-mir-17-5р (MIMAT0003815) и bta-mir-17-3р (MIMAT0003816) представлены в SEQ ID NOS: 23, 24 и 25, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-92а человека hsa-mir-92а-1 (MI0000093) и hsa-mir-92а-2 (MI0000094) и их активного сайта hsa-mir-92а (MIMAT0000092) представлены в SEQ ID NOS: 26, 27 и 28, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-92b человека hsa-mir-92b (MI0003560) и его активного сайта hsa-mir-92b (MIMAT0003218) представлены в SEQ ID NOS: 29 и 30, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-92 коровы bta-mir-92 (MI0005024) и его активного сайта bta-mir-92 (MIMAT0003808) представлены в SEQ ID NOS: 31 и 32, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-92а коровы bta-mir-92а (MI0009905) и его активного сайта bta-mir-92а (MIMAT0009383) представлены в SEQ ID NOS: 33 и 34, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-92b коровы bta-mir-92b (MI0009906) и его активного сайта bta-mir-92b (MIMAT0009384) представлены в SEQ ID NOS: 35 и 36, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника let-7i человека hsa-let-7i (MI0000434) и его активного сайта hsa-let-7i (MIMAT0000415) представлены в SEQ ID NOS: 37 и 38, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника let-7i коровы bta-let-7i (MI0005065) и его активного сайта bta-let-7i (MIMAT0003851) представлены в SEQ ID NOS: 39 и 40, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-125a человека hsa-mir-125a (MI0000469) и его активных сайтов hsa-mir-125а-5р (MIMAT0000443) и hsa-mir-125а-3р (MIMAT0004602) представлены в SEQ ID NOS: 41, 42 и 43, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-125b человека hsa-mir-125b-1 (MI0000446) и hsa-mir-125b-2 (MI0000470) и их активного сайта hsa-mir-125b (MIMAT0000423) представлены в SEQ ID NOS: 44, 45 и 46, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-125a коровы bta-mir-125a (MI0004752) и его активного сайта bta-mir-125а (MIMAT0003538) представлены в SEQ ID NOS: 47 и 48, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественников miR-125b коровы bta-mir-125b-1 (MI0004753) и bta-mir-125b-2 (MI0005457) и их активного сайта bta-mir-125b (MIMAT0003539) представлены в SEQ ID NOS: 49, 50 и 51, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-146a человека hsa-mir-146a (MI0000477) и его активного сайта hsa-mir-146a (MIMAT0000449) представлены в SEQ ID NOS: 52 и 53, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-146b человека hsa-mir-146b (MI0003129) и его активных сайтов hsa-mir-146b-5p (MIMAT0002809) (также обозначаемого hsa-mir-146b) и hsa-mir-146b-3р (MIMAT0004766) представлены в SEQ ID NOS: 54, 55 и 56, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-146a коровы bta-mir-146a (MI0009746) и его активного сайта bta-mir-146a (MIMAT0009236) представлены в SEQ ID NOS: 57 и 58, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-146b коровы bta-mir-146b (MI0009745) и его активного сайта bta-mir-146b (MIMAT0009235) представлены в SEQ ID NOS: 59 и 60, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-150 человека hsa-mir-150 (MI0000479) и его активного сайта hsa-mir-150 (MIMAT0000451) представлены в SEQ ID NOS: 61 и 62, соответственно.

Нуклеотидные последовательности предшественника miR-150 коровы bta-mir-150 (MI0005058) и его активного сайта bta-mir-150 (MIMAT0003845) представлены в SEQ ID NOS: 63 и 64, соответственно.

Помимо указанных выше miRNA в таблицах 1-10 представлены miRNA, наличие которых подтверждали в молоке крысы или коровы, и miRNA других животных, соответствующие этим miRNA.

miRNA не ограничивается имеющими вышеуказанные последовательности, miRNA может включать замены, делеции, вставки, добавки или инверсии одного или нескольких нуклеотидов при условии функционирования miRNA в качестве miRNA, т.е. miRNA может регулировать экспрессию генов-мишеней. Конкретно, к примерам такой miRNA относятся РНК, имеющие нуклеотидную последовательность с гомологией 80% или больше, предпочтительно 90% или больше, более предпочтительно 95% или больше с любой из вышеуказанных последовательностей.

Количество miRNA может представлять собой абсолютное количество или относительное количество. Относительное количество может представлять собой относительное количество в зависимости от среднего количества у животных, или может представлять собой относительное количество, обнаруженное после получения пищевого рациона, в зависимости от количества, наблюдаемого до получения. Для измерения количества нуклеиновой кислоты могут быть использованы способы, обычно используемые для измерения количества miRNA, такие как количественная ПЦР с обратной транскрипцией (qRT-PCR). Количество miRNA также может быть измерено с помощью микрочипового способа. Для экстракции miRNA из молока могут быть использованы способы, обычно используемые для экстракции miRNA, а также может быть использован коммерчески доступный набор для выделения miRNA.

Кроме того, количество miRNA, присутствующее в молоке, также может быть косвенно измерено путем измерения экспрессируемого количества miRNA в железистых клетках молочной железы.

Оценивают корреляцию профилей miRNA в молоке млекопитающего и пищевом рационе, полученном млекопитающим, или веществе, содержащемся в пищевом рационе. Корреляция профилей miRNA в молоке млекопитающего и пищевом рационе, полученном млекопитающим, или веществе, содержащемся в пищевом рационе, соотносится с корреляцией профиля miRNA и наличия или отсутствия вещества или количества вещества. Например, если количества одного или нескольких видов miRNA в молоке животного, которое получило некоторое вещество, больше или меньше, чем количества, обнаруженные у животного, которое не получило вещество, то вещество и профили miRNA обладают положительной или отрицательной корреляцией, соответственно. Кроме того, если получение некоторого вещества не влияет на профили miRNA, то вещество и профили miRNA не коррелируют друг с другом.

Конкретно, например, если при сравнении профилей miRNA в молоке, обнаруженных до и после получения пищевого рациона, количество или количества одного вида, предпочтительно двух видов или больше, более предпочтительно пяти видов или больше miRNA, обнаруженные после получения, больше, чем обнаруженные до получения, то полагают, что пищевой рацион повышает количества miRNA, присутствующие в молоке.

Кроме того, если при сравнении профилей miRNA в молоке, обнаруженных до и после получения пищевого рациона, количество или количества одного вида, предпочтительно двух видов или больше, более предпочтительно пяти видов или больше miRNA, обнаруженные после получения, меньше, чем обнаруженные до получения, то полагают, что пищевой рацион снижает количества miRNA, существующие в молоке.

Более того, измерение профилей miRNA до получения пищевого рациона не обязательно, и корреляция пищевого рациона и количества miRNA также может быть оценена путем сравнения профиля miRNA, измеренного после получения пищевого рациона, с типичными профилями miRNA целевого млекопитающего, измеренными ранее.

В другом варианте осуществления сравнивают профили miRNA в молоке и профили miRNA в сыворотке или плазме, и если количество miRNA, содержащееся и в молоке, и в сыворотке или плазме, при получении пищевого рациона повышается в большей степени в молоке по сравнению с обнаруженным в сыворотке или плазме, то полагают, что пищевой рацион повышает количество miRNA, присутствующее в молоке. Степень повышения количества miRNA в молоке составляет, например, в 1,2 раза или больше, предпочтительно в 2 раза или больше, более предпочтительно в 5 раз или больше, еще более предпочтительно в 10 раз или больше количества, обнаруженного в сыворотке или плазме.

Кроме того, при сравнении профилей miRNA в молоке и профилей miRNA в сыворотке или плазме если количество miRNA, содержащееся и в молоке, и в сыворотке или плазме, при получении пищевого рациона снижается в меньшей степени в молоке по сравнению с обнаруженным в сыворотке или плазме, то полагают, что пищевой рацион снижает количество miRNA, присутствующее в молоке. Степень снижения количества miRNA в молоке составляет, например, в 0,8 раз или меньше, предпочтительно в 0,5 раз или меньше, более предпочтительно в 0,2 раза или меньше, еще более предпочтительно в 0,1 раз или меньше количества, обнаруженного в сыворотке или плазме.

Пищевой рацион может состоять из одного вещества или может представлять собой композицию при условии, что она может быть получена перорально. Кроме того, «до получения» и «после получения» может означать «до и после однократного получения пищевого рациона» или «до и после двух или больше раз получения пищевого рациона». Кроме того, два или больше раз получения пищевого рациона может представлять собой два или больше раз получения одного и того же пищевого рациона или получение двух или больше видов пищевых рационов.

Пищевой рацион может быть получен по намеченной схеме или получен свободно. В последнем случае корреляция пищевого рациона и профилей miRNA в молоке может быть оценена путем рассмотрения состава полученного пищевого рациона в случае человека. При получении или введении пищевого рациона по намеченной схеме пищевой рацион может рассматриваться как «тестируемый образец». Пищевой рацион может представлять собой привычный пищевой рацион или привычный пищевой рацион, содержащий тестируемое вещество. Количество получаемого пищевого рациона, время получения и кратность получения особенно не ограничиваются.

При выборе пищевого рациона, который повышает количество miRNA в молоке, вещество, которое содержится в пищевом рационе и повышает количество miRNA в молоке, может быть определено тем же способом, что и указанный выше. Кроме того, при выборе пищевого рациона, который снижает количество miRNA в молоке, вещество, которое содержится в пищевом рационе и снижает количество miRNA в молоке, может быть определено тем же способом, что и указанный выше.

При определении пищевого рациона или вещества, которое повышает или снижает количество miRNA в молоке, может быть составлен пищевой рацион, который повышает или снижает количество miRNA в молоке. То есть полагают, что для получения молока, обладающего иммуностимулирующим действием, предпочтителен пищевой рацион, который повышает количество miRNA в молоке, или вещество, содержащееся в нем, и пищевой рацион, который снижает количество miRNA в молоке, или вещество, содержащееся в нем, не предпочтительны для получения молока, обладающего иммуностимулирующим действием.

Кроме того, полагают, что для получения молока, обладающего иммуносупрессивным действием, предпочтителен пищевой рацион, который снижает количество miRNA в молоке, или вещество, содержащееся в нем, и пищевой рацион, который повышает количество miRNA в молоке, или вещество, содержащееся в нем, не предпочтительны для получения молока, обладающего иммуносупрессивным действием.

Выбор пищевого рациона или вещества, обеспечивающего получение грудного молока, обладающего иммунорегуляторным действием, или пищевого рациона или вещества, не подходящего для получения грудного молока, обладающего иммунорегуляторным действием, может быть осуществлен, как описано выше. Как показано в примерах, описанных позже, наличие большого числа видов miRNA подтверждалось в молозиве крысы и коровы. Это подтверждает предположение настоящего изобретения, что пероральное введение miRNA обеспечивает иммунорегуляторное действие. Кроме того, как показано в примерах, описанных позже, при пероральном введении крысам бактерий Bifidobacterium (Bifidobacterium longum) повышались количества 52 видов miRNA.

Известно, что бактерии Bifidobacterium функционируют в качестве пробиотиков и обладают в частности иммунорегуляторным действием. Поэтому то обстоятельство, что введение бактерий Bifidobacterium повысило количества miRNA в молоке, также подтверждает вовлеченность miRNA в молоке в иммунорегуляцию. Демонстрация повышения количеств miRNA в молоке, индуцированного введением бактерий Bifidobacterium, т.е. взаимосвязи бактерий Bifidobacterium и профилей miRNA, показывает, что способ выбора по настоящему изобретению осуществим. Кроме того, несмотря на то, что существовали также miRNA, количества которых в молоке не изменялись при введении бактерий Bifidobacterium, не отрицается вероятность, что количества этих miRNA могут быть повышены другим видом пищевого рациона или вещества, содержащегося в нем.

Благодаря пробиотическим функциям бактерий Bifidobacterium имеет место известная профилактика или смягчение инфекций дыхательных путей, острой инфекционной диареи, диареи, ассоциированной с приемом антибиотиков, диареи, ассоциированной с Clostridium dificile, некротизирующего энтероколита, диареи путешественников, инфицирования Helicobacter pylori и тому подобного (The Journal of Nutrition, 2010 Mar;140(3):698S-712S. Epub 2010 Jan 27). Полагают, что у животных, которые ее получают, miRNA, количество которой в молоке повышается при введении бактерий Bifidobacterium, не только регулирует иммунитет, но также обладает функциями, сходными с вышеуказанными пробиотическими функциями.

При получении пищевого рациона или вещества, которое повышает количество miRNA в молоке, выбранного, как описано выше для млекопитающего, и сборе молока у животного может быть получено молоко, обладающее иммуностимулирующим действием, или молоко, иммуностимулирующее действие которого усиливается. Кроме того, при снижении или отмене получения млекопитающим пищевого рациона или вещества, которое снижает количество miRNA в молоке, выбранного