Нелипидизированные варианты антигенов neisseria meningitidis orf2086

Нелипидизированные варианты антигенов neisseria meningitidis orf2086

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Данная заявка ссылается на приоритет предварительной заявки США серийный №61/381,837, поданной 10 сентября 2010 года, которая включена в данный документ в качестве ссылки в полном объеме.

Область техники изобретения

Представленное изобретение касается нелипидизированных вариантов антигенов Neisseria meningitidis ORF2086 в иммуногенных композициях, как описано в данном документе. Представленное изобретение, кроме того, касается способов фиксирования конформации нелипидизированных вариантов антигенов Neisseria meningitidis ORF2086. Представленное изобретение дополнительно включает композиции и способы, относящиеся к улучшенной экспрессии нелипидизированных антигенов N. meningitidis ORF2086, по сравнению с соответствующим диким типом антигена.

Уровень техники изобретения

rLP2086 представляет собой рекомбинантный 28 - кДа липопротеин, который индуцирует перекрестные бактериальные антитела к ряду штаммов Neisseria meningitidis, включая штаммы Neisseria meningitidis серотипа В (MnB), или более точно, штаммы серогруппы В (MnB). Основываясь на гомологичности расшифрованной аминокислотной последовательности, были идентифицированы два разных подсемейства rLP2086, А и В. Данные два подсемейства были использованы в формуляции образцов MnB-rLP2086 вакцины, содержащих 20, 60,120 и 200 мкг/мл каждого в 10 мМ гистидина (рН 6,0), 150 мМ NaCl и 0,5 мг/мл алюминия с различными уровнями полисорбата 80 (PS-80). Нативный LP2086 является липопротеином. Fletcher et al. Infection & Immunity, vol. 72(4):2088-2100 (2004) продемонстрировали, что rLP2086 с аминотерминальным липидом был более иммуногенным, чем нелипидизированный варианты того же протеина у мышей. Дополнительные доклинические и клинические исследования продемонстрировали, что комбинирование данных двух липидизированный протеинов может обеспечить широкий охват всего fHBP семейства. Менингококковый менингит представляет собой тяжелое заболевание, которое может убивать детей и молодых взрослых в течение нескольких часов, несмотря на применение антибиотиков. Поэтому остается потребность в подходящих иммуногенных композициях менингококковой серогруппы В.

Краткое описание изобретения

Для удовлетворения этой и других потребностей в менингококковой вакцине, чтобы обеспечить весь диапазон применения нелипидизированных вариантов полипептидов N. meningitidis ORF2086, были исследованы дополнительные композиции. Первый аспект представленного изобретения предусматривает иммуногенную композицию, содержащую нелипидизированный протеин ORF2086, где протеин ORF2086 является В44, В02, В03, В22, В24, В09, А05, А04, А12 или А22 вариантом. В некоторых вариантах осуществления изобретения протеин ORF2086 является В44, В22, В09, А05, А12 или А22 вариантом.

Другой аспект представленного изобретения предусматривает иммуногенную композицию, содержащую нелипидизированный вариант протеина ORF2086 подсемейства В (полипептид P2086 подсемейства В). В некоторых вариантах осуществления, полипептид P2086 подсемейства В является В44, В02, В03, В22, В24 или В09 вариантом. В некоторых вариантах осуществления, иммуногенная композиция дополнительно содержит нелипидизированный вариант протеина ORF2086 подсемейства А (полипептид Р2086 подсемейство А). В некоторых вариантах осуществления полипептид Р2086 подсемейства А является А05, А04, А12 или А22 вариантом.

В некоторых вариантах осуществления иммуногенная композиция дополнительно содержит вспомогательное вещество. В некоторых вариантах осуществления вспомогательным веществом является алюминиевое вспомогательное вещество, сапонин, CpG нуклеотидная последовательность или какая-либо их комбинация. В некоторых вариантах осуществления алюминиевым вспомогательным веществом является AlPO₄, Al(OH)₃, Al₂(SO₄)₃ или квасцы. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в иммуногенных композициях составляет между 0,125 мкг/мл и 0,5 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в иммуногенных композициях составляет 0,25 мкг/мл. В предпочтительном варианте осуществления концентрация алюминия в иммуногенной композиции составляет между 0,125 мг/мл и 0,5 мг/мл. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления концентрация алюминия в иммуногенной композиции составляет 0,25 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет между 1 мкг/мл и 250 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет между 10 мкг/мл и 100 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет 10 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет 100 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления сапонин представляет собой QS-21 Stimulon® (Agenus, Lexington, MA) или ISCOMATRIX® (CSL Limited, Parkville, Australia).

В некоторых вариантах осуществления иммуногенная композиция предоставляет возможность увеличить иммуногенный ответ на Neisseria meningitidis после введения многократных доз иммуногенной композиции субъекту. В некоторых вариантах осуществления иммуногенный ответ дается после введения субъекту двух доз. В некоторых вариантах осуществления иммуногенный ответ дается после введения субъекту трех доз.

Другой аспект изобретения предусматривает композицию, дающую повышенную иммуногенность нелипидизированного антигена Р2086, где композиция содержит сапонин и, по меньшей мере, один нелипидизированный антиген Р2086. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет между 1 мкг/мл и 250 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет между 10 мкг/мл и 100 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет 10 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет 100 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления сапонин представляет собой QS-21 или ISCOMATRIX.

В некоторых вариантах осуществления композиция дополнительно содержит алюминий. В некоторых вариантах осуществления алюминий присутствует в виде AlPO₄, Al(OH)₃, Al₂(SO₄)₃ или квасцов. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в композиции составляет между 0,125 мкг/мл и 0,5 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в композиции составляет 0,25 мкг/мл. В предпочтительном варианте осуществления концентрация алюминия в композиции составляет между 0,125 мг/мл и 0,5 мг/мл. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления концентрация алюминия в композиции составляет 0,25 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления иммуногенная композиция предоставляет возможность увеличить иммуногенный ответ на Neisseria meningitidis после введения многократных доз иммуногенной композиции субъекту. В некоторых вариантах осуществления иммуногенный ответ дается после введения субъекту двух доз. В некоторых вариантах осуществления иммуногенный ответ дается после введения субъекту трех доз.

В некоторых вариантах осуществления нелипидизированный антиген Р2086 представляет собой полипептид Р2086 подсемейства В. В некоторых вариантах осуществления полипептид Р2086 подсемейства В является В44, В02, В03, В22, В24 или В09 вариантом. В некоторых вариантах осуществления нелипидизированный антиген Р2086 представляет собой полипептид Р2086 подсемейства А. В каком-нибудь варианте осуществления полипептид Р2086 подсемейства А является А05, А04, А12 или А22 вариантом.

В некоторых вариантах осуществления композиция содержит, по меньшей мере, два нелипидизированных антигена Р2086, где два нелипидизированных антигена Р2086 представляют собой, по меньшей мере, один нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства А и, по меньшей мере, один нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства В. В некоторых вариантах осуществления нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства А представляет собой вариант А05 и нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства В представляет собой вариант В44. В некоторых вариантах осуществления нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства А представляет собой вариант А05 и нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства В представляет собой вариант В22. В некоторых вариантах осуществления нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства А представляет собой вариант А05 и нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства В представляет собой вариант В09.

Другой аспект изобретения предусматривает способ приобретения иммунитета у субъекта к бактериям Neisseria meningitidis, в котором способ включает стадию введения субъекту иммуногенной композиции, содержащей нелипидизированный полипептид Р2086 подсемейства В. В некоторых вариантах осуществления полипептид Р2086 подсемейства В является В44, В02, В03, В22, В24 или В09 вариантом. В некоторых вариантах осуществления иммуногенная композиция дополнительно содержит полипептид Р2086 подсемейства А. В некоторых вариантах осуществления полипептид Р2086 подсемейства А является А05, А04, А12 или А22 вариантом.

В некоторых вариантах осуществления иммуногенная композиция дополнительно содержит вспомогательное вещество. В некоторых вариантах осуществления вспомогательное вещество является алюминиевым вспомогательным веществом, сапонином, CpG нуклеотидной последовательностью или какой-либо их комбинацией. В некоторых вариантах осуществления алюминиевым вспомогательным веществом является AlPO₄, Al(OH)₃, Al₂(SO₄)₃ или квасцы. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в иммуногенной композиции составляет между 0,125 мкг/мл и 0,5 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в иммуногенной композиции составляет 0,25 мкг/мл. В предпочтительном варианте осуществления концентрация алюминия в иммуногенной композиции составляет между 0,125 мг/мл и 0,5 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация алюминия в иммуногенной композиции составляет 0,25 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет между 1 мкг/мл и 250 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет между 10 мкг/мл и 100 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет 10 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления концентрация сапонина в иммуногенной композиции составляет 100 мкг/мл. В некоторых вариантах осуществления сапонин представляет собой QS-21 или ISCOMATRIX.

В некоторых вариантах осуществления иммуногенную композицию вводят субъекту в многократных дозах по схеме дозирования. В некоторых вариантах осуществления иммуногенную композицию вводят субъекту двумя дозами по схеме дозирования. В некоторых вариантах осуществления иммуногенную композицию вводят субъекту тремя дозами по схеме дозирования.

Другой аспект изобретения предусматривает способ продуцирования нелипидизированного варианта Р2086, который включает стадии (а) клонирования варианта ORF2086 нуклеиновой кислоты в векторе экспрессии, чтобы произвести вектор экспрессии ORF2086; (b) трансформирования бактерий с вектором экспрессии OFR2086; (с) индуктирования экспрессии варианта P2086 из вектора экспрессии ORF2086; и (d) выделения экспрессированного варианта протеина Р2086; где вектор экспрессии ORF2086 не включает контрольной последовательности липидизации. В некоторых вариантах осуществления бактерией является. В некоторых вариантах осуществления экспрессию индуцируют путем добавления IPTG.

В некоторых вариантах осуществления кодон, кодирующий N-терминальный Cys варианта Р2086, делетирован. В некоторых вариантах осуществления кодон, кодирующий N-терминальный Cys варианта Р2086, мутирован с образованием Ala, Gly или Val кодона. В некоторых вариантах осуществления, вариант Р2086 представляет собой А05, В01 или В44 вариант.В некоторых вариантах осуществления вариант Р2086 представляет собой В09 вариант.

В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост является мутированным, чтобы присоединить Ser и Gly остатки для удлинения Gly/Ser стебля непосредственно ниже N-терминального Cys. В некоторых вариантах осуществления общее количество Gly и Ser остатков в Gly/Ser стебле составляет, по меньшей мере, 7, по меньшей мере, 8, по меньшей мере, 9, по меньшей мере, 10, по меньшей мере, 11 или, по меньшей мере, 12.

В некоторых вариантах осуществления кодоны N-терминального хвоста варианта Р2086 оптимизируют путем точечного мутагенеза. В некоторых вариантах осуществления кодоны N-терминального хвоста варианта ORF2086 оптимизируют путем точечного мутагенеза таким образом, что кодон, кодирующий пятую аминокислоту варианта ORF2086, является 100% идентичным нуклеотидам 13-15 SEQ ID NO: 8 и кодон, кодирующий тринадцатую аминокислоту варианта ORF2086, является 100% идентичным нуклеотидам 37-39 SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта ORF2086 оптимизируют таким образом, что 5' 45 нуклеиновые кислоты являются 100% идентичными нуклеиновым кислотам 1-45 SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта ORF2086 оптимизируют таким образом, что 5' 42 нуклеиновые кислоты являются 100% идентичными нуклеиновым кислотам 4-45 SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта ORF2086 оптимизируют таким образом, что 5' 39 нуклеиновые кислоты являются 100% идентичными нуклеиновым кислотам 4-42 из SEQ ID NO: 8. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта Р2086 содержит, по меньшей мере, одно аминокислотное замещение по сравнению с аминокислотами 1-15 SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта Р2086 содержит два аминокислотных замещения по сравнению с аминокислотами 1-15 SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта Р2086 содержит, по меньшей мере, одно аминокислотное замещение по сравнению с аминокислотами 2-15 SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления N-терминальный хвост нелипидизированного варианта Р2086 содержит два аминокислотных замещения по сравнению с аминокислотами 2-15 SEQ ID NO: 18. В некоторых вариантах осуществления аминокислотные замещения являются консервативными аминокислотными замещениями.

В одном варианте осуществления представленное изобретение касается стабильных составов антигенов Neisseria meningitis ORF2086 подсемейства В в иммуногенных композициях. Представленное изобретение, кроме того, касается способов сохранения конформации антигенов Neisseria meningitis ORF2086 Антигены и способов определения эффективности антигенов Neisseria meningitis rLP2086.

В одном аспекте изобретение касается композиции, которая включает выделенный нефункционализированный пировиноградной кислотой нелипидизированный полипептид ORF2086. В одном варианте осуществления композиция является иммуногенной. В другом варианте осуществления полипептид включает делецию N-терминального Cys по сравнению с соответствующим нелипидизированным полипептидом ORF2086 дикого типа. В одном варианте осуществления полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, которая состоит из SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 21, где цистеин в положении 1 делетирован. В другом варианте осуществления полипептид включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, которая состоит из SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50 и SEQ ID NO: 55.

В еще другом варианте осуществления полипептид кодируется нуклеотидной последовательностью, которая является функционально связанной с экспрессирующей системой, где упомянутая экспрессирующая система является способной быть экспрессированной в бактериальной клетке. В одном варианте осуществления экспрессирующая система является экспрессирующей системой плазмиды. В одном варианте осуществления бактериальная клетка является Е. coli cell. В другом варианте осуществления нуклеотидная последовательность связана с регуляторной последовательностью, которая контролирует экспрессию упомянутой нуклеотидной последовательности.

В другом аспекте, изобретение касается композиции, которая включает нефункционализированный пировиноградной кислотой, нелипидизированный полипептид ORF2086, который может быть получен по способу. Способ включает экспрессирование нуклеотидной последовательности, кодирующей полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, выбранную с группы, состоящей из SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO: 20 и SEQ ID NO: 21, где цистеин в положении 1 делетирован, где нуклеотидная последовательность функционально связана с экспрессирующей системой, которая способна быть экспрессированной в бактериальной клетке. В одном варианте осуществления бактериальная клетка является Е. coli.

В одном аспекте изобретение касается композиции, которая включает выделенный полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 49, и выделенный полипептид, который содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 44. В одном варианте осуществления композиции, описанные в данном документе, являются иммуногенными. В другом варианте осуществления композиции, описанные в данном документе, дополнительно включают полипептид ORF2086 подсемейства А из серогруппы В N. meningitidis. В другом варианте осуществления композиции, описанные в данном документе, вызывают бактерицидный иммунный ответ у млекопитающих к полипептиду ORF2086 подсемейства В из серогруппы В N. meningitidis.

В одном аспекте изобретение касается выделенного полипептида, который включает аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 49. В другом аспекте изобретение касается выделенной нуклеотидной последовательности, которая включает SEQ ID NO: 46. В одном аспекте изобретение касается выделенной нуклеотидной последовательности, которая включает SEQ ID NO: 47. В одном аспекте изобретение касается выделенной нуклеотидной последовательности, которая включает SEQ ID NO: 48. В одном аспекте изобретение касается выделенного полипептида, который включает аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 50. В одном аспекте изобретение касается выделенной нуклеотидной последовательности, которая включает SEQ ID NO: 45. В одном аспекте изобретение касается выделенного полипептида, который включает аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 44.

В одном аспекте изобретение касается плазмиды, которая включает нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящую из SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48 и SEQ ID NO: 45, где плазмида способна быть экспрессированной в бактериальной клетке. В одном варианте осуществления бактериальная клетка является Е. coli.

В одном аспекте изобретение касается способа индуцирования бактерицидных антител, специфических к ORF2086 подсемейства В серогруппы В N. meningitidis у млекопитающих. Способ включает введение млекопитающим эффективного количества выделенного полипептида, который включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44 и SEQ ID NO: 49, или их комбинации.

В одном аспекте изобретение касается способа продуцирования полипептида. Способ включает экспрессирование в бактериальной клетке полипептида, который включает последовательность, имеющую большую, чем 90% идентичность к SEQ ID NO:21, упомянутую последовательность, содержащую, по меньшей мере, один домен, выбранный из группы, состоящей из аминокислот 13-18 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 21-34 из SEQ ID NO: 21 и аминокислот 70-80 из SEQ ID NO: 21, или их комбинации, где в последовательности отсутствует N-терминальный цистеин. Способ дополнительно включает очистку полипептида. В одном варианте осуществления последовательность включает, по меньшей мере, один домен, выбранный из группы, состоящей из аминокислот 96-116 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 158-170 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 172-185 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 187-199 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 213-224 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 226-237 из SEQ ID NO: 21, аминокислот 239-248 из SEQ ID NO: 21, или их комбинации. В одном варианте осуществления бактериальной клеткой является Е. coli.

В одном аспекте изобретение касается выделенного полипептида, продуцированного по способу, который включает способ, описанный в данном документе. В другом аспекте изобретение касается иммуногенной композиции, полученной по способу, который включает способ, описанный в данном документе.

В одном аспекте, изобретение касается иммуногенной композиции, которая включает полипептид ORF2086 подсемейства В из серогруппы В N. meningitidis, где полипептид представляет собой нефункционализированный пировиноградной кислотой нелипидизированный В44. В одном варианте осуществления композиция дополнительно включает второй полипептид ORF2086 подсемейства В из серогруппы В N. meningitidis, где второй полипептид представляет собой нефункционализированный пировиноградной кислотой нелипидизированный В09. В одном варианте осуществления композиция включает не более, чем 3 полипептида ORF2086 подсемейства В. В другом варианте осуществления композиция включает не более, чем 2 полипептида ORF2086 подсемейства В. В одном варианте осуществления композиция дополнительно включает полипептид ORF2086 подсемейства А. В другом варианте осуществления композиция включает полипептид А05 подсемейства А.

Короткое описание рисунков

Фигура 1: Вариантные Р2086 последовательности нуклеиновой кислоты.

Фигура 2: Вариантные Р2086 аминокислотные последовательности. Gly/Ser стебель в N-терминальном хвосте каждого варианта является подчеркнутым.

Фигура 3: Структура протеина ORF2086.

Фигура 4: Перемещения N-терминального Cys приводящие в результате к потере экспрессии в Е. coli.

Фигура 5: Влияние длины Gly/Ser стебля на экспрессию нелипидизированного варианта ORF2086. Последовательность связанного с вариантом протеина, обозначенного В01, изложена в SEQ ID NO: 35. Последовательность связанного с вариантом протеина, обозначенного В44, изложена в SEQ ID NO: 36. Последовательность связанного с вариантом протеина, обозначенного А05, изложена в SEQ ID NO: 37. Последовательность связанного с вариантом протеина, обозначенного А22, изложена в SEQ ID NO: 38. Последовательность связанного с вариантом протеина, обозначенного В22, изложена в SEQ ID NO: 39. Последовательность связанного с вариантом протеина, обозначенного А19, изложена в SEQ ID NO: 40.

Фигура 6: Высокие уровни экспрессии нелипидизированного В09 несмотря на А короткий Gly/Ser стебель. Левые две полосы демонстрировали экспрессию N-терминального Cys - делетированного варианта В09 до и после индукции. Третья и четвертая полосы демонстрируют экспрессию N-терминального Cys реального варианта В09 до и после индукции. Правая наибольшая полоса представляет собой стандарт молекулярной массы. Аминокислотная последовательность, показанная под изображением, изложена в SEQ ID NO: 41. Нуклеотидная последовательность, отображающая N-терминальный Cys-делетированный вариант А22, названный на фигуре как "А22_001", изложена в SEQ ID NO: 42, которая показана под SEQ ID NO: 41 на фигуре. Нуклеотидная последовательность, отображающая N-терминальный Cys-делетированный вариант В22, названный на фигуре как "В22_001", изложен в SEQ ID NO: 52. Нуклеотидная последовательность, отображающая N-терминальный Cys-делетированный вариант В09, названный на фигуре как "В09_004", изложен в SEQ ID NO: 53.

Фигура 7: Оптимизация кодона повышает экспрессию нелипидизированных вариантов В22 и А22. Левая панель демонстрирует экспрессию N-терминального Cys-делетированного варианта В22 до (полосы 1 и 3) и после (полосы 2 и 4) IPTG индукции. Правая панель демонстрирует экспрессию N-терминального Cys-делетированного варианта А22 до (полоса 7) и после (полоса 8) IPTG индукции.

Полосы 5 и 6 представляют собой стандарты молекулярной массы.

Фигура 8: Варианты Р2086 нуклеиновой и аминокислотной последовательностей.

Идентификаторы последовательности

SEQ ID NO: 1 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена А04, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 2 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена А05, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 3 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена А12, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 4 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена А12-2, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 5 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена А22, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 6 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В02, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 7 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена ВОЗ, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 8 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В09, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 9 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В22, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 10 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В24, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 11 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В44, которая включает кодон, кодирующий N-терминальный Cys.

SEQ ID NO: 12 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А04, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 13 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А05, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 14 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А12, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 15 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А22, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 16 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В02, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 17 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 ВОЗ, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 18 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В09, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 19 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В22, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 20 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В24, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 21 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В44, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 22 представляет собой ДНК последовательность прямого праймера, показанную в примере 2.

SEQ ID NO: 23 представляет собой ДНК последовательность обратного праймера, показанную в примере 2.

SEQ ID NO: 24 представляет собой ДНК последовательность прямого праймера, показанную в примере 2, таблице 1.

SEQ ID NO: 25 представляет собой ДНК последовательность обратного праймера, показанную в примере 2, таблице 1.

SEQ ID NO: 26 представляет собой ДНК последовательность прямого праймера, показанную в примере 2, таблице 1.

SEQ ID NO: 27 представляет собой ДНК последовательность обратного праймера, показанную в примере 2, таблице 1.

SEQ ID NO: 28 представляет собой ДНК последовательность Gly/Ser стебля, показанную в примере 4.

SEQ ID NO: 29 представляет собой аминокислотную последовательность Gly/Ser стебля, показанную в примере 4, которая кодируется, например, SEQ IDNO: 28.

SEQ ID NO: 30 представляет собой ДНК последовательность Gly/Ser стебля, показанную в примере 4.

SEQ ID NO: 31 представляет собой аминокислотную последовательность Gly/Ser стебля, показанную в примере 4, которая кодируется, например, SEQ ID NO: 30.

SEQ ID NO: 32 представляет собой ДНК последовательность Gly/Ser стебля, показанную в примере 4.

SEQ ID NO: 33 представляет собой аминокислотную последовательность Gly/Ser стебля, которая кодируется, например, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 34.

SEQ ID NO: 34 представляет собой ДНК последовательность Gly/Ser стебля, показанную в примере 4.

SEQ ID NO: 35 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В01, показанную на фигуре 5.

SEQ ID NO: 36 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В44, показанную на фигуре 5.

SEQ ID NO: 37 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А05, показанную на фигуре 5.

SEQ ID NO: 38 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А22, показанную на фигуре 5.

SEQ ID NO: 39 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В22, показанную на фигуре 5.

SEQ ID NO: 40 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А19, показанную на фигуре 5.

SEQ ID NO: 41 представляет собой аминокислотную последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086, показанную на фигуре 6.

SEQ ID NO: 42 представляет собой ДНК последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А22, показанную на фигуре 6.

SEQ ID NO: 43 представляет собой кодон оптимизированную ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В44, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, по сравнению с SEQ ID NO: 11. Плазмида pDK087 включает SEQ ID NO: 43.

SEQ ID NO: 44 представляет собой аминокислотную последовательность нелипидизированного варианта N. meningitidis, серогруппы В, 2086 В44. SEQ ID NO: 44 является идентичной SEQ ID NO: 21, где N-терминальный цистеин в положении 1 SEQ ID NO: 21 делетирован. SEQ ID 44 кодируется, например, SEQ ID NO: 43.

SEQ ID NO: 45 представляет собой кодон оптимизированную ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В09, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, и где последовательность включает кодоны, кодирующие дополнительный Gly/Ser участок, по сравнению с SEQ ID NO: 8. Плазмида рЕВОбЗ включает SEQ ID NO: 45.

SEQ ID NO: 46 представляет собой кодон оптимизированную ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В09, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, по сравнению с SEQ ID NO: 8. Плазмида рЕВ064 включает SEQ ID NO: 46.

SEQ ID NO: 47 представляет собой кодон оптимизированную ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В09, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, по сравнению с SEQ ID NO: 8. Плазмида pEB 065 включает SEQ ID NO: 47.

SEQ ID NO: 48 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В09, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, по сравнению с SEQ ID NO: 8. Плазмида pLA134 включает SEQ ID NO: 48.

SEQ ID NO: 49 представляет собой аминокислотную последовательность нелипидизированного варианта N. meningitidis, серогруппы В, 2086 В09. SEQ ID NO: 49 является идентичной SEQ ID NO: 18, где N-терминальный цистеин в положении 1 SEQ ID NO: 18 делетирован. SEQ ID 49 кодируется, например, ДНК последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47 и SEQ ID NO: 48.

SEQ ID NO: 50 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В09, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, и где последовательность включает кодоны, кодирующие дополнительный Gly/Ser участок, по сравнению с SEQ ID NO: 18. SEQ ID NO: 50 кодируется, например, SEQ ID NO: 45.

SEQ ID NO: 51 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена В44, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, по сравнению с SEQ ID NO: 11. Плазмида pLN056 включает SEQ ID NO: 51.

SEQ ID NO: 52 представляет собой ДНК последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В22, показанную на фигуре 6.

SEQ ID NO: 53 представляет собой ДНК последовательность для N-конца N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В09, показанную на фигуре 6.

SEQ ID NO: 54 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 гена А05, где кодон, кодирующий N-терминальный цистеин, делетирован, по сравнению с SEQ ID NO: 2.

SEQ ID NO: 55 представляет собой аминокислотную последовательность нелипидизированного варианта N. meningitidis, серогруппы В, 2086 А05. SEQ ID NO: 55 является идентичной SEQ ID NO: 13, где N-терминальный цистеин в положении 1 SEQ ID NO: 13 делетирован. SEQ ID NO: 55 кодируется, например, SEQ ID NO: 54.

SEQ ID NO: 56 представляет собой аминокислотную последовательность серин-глициновой повторяющейся последовательности, показанную в примере 7.

SEQ ID NO: 57 представляет собой аминокислотнаяую последовательность нелипидизированныйого варианта N. meningitidis, серогруппы В, 2086 В01. SEQ ID NO: 57 является идентичной SEQ ID NO: 58, где N-терминальный цистеин в положении 1 SEQ ID NO: 58 делетирован.

SEQ ID NO: 58 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В01, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 59 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В15, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 60 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 B16, которая включает N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1.

SEQ ID NO: 61 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В22, в которой кодон N-терминального Cys в аминокислотном положении 1 из SEQ ID NO: 19 замещен на кодон глицина.

SEQ ID NO: 62 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 В22, в которой N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1 из SEQ ID NO: 19 замещен на глицин.

SEQ ID NO: 63 представляет собой ДНК последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А22, в которой кодон N-терминального Cys в аминокислотном положении 1 из SEQ ID NO: 15 замещен на кодон глицина.

SEQ ID NO: 64 представляет собой аминокислотную последовательность N. meningitidis, серогруппы В, варианта 2086 А22, в которой N-терминальный Cys в аминокислотном положении 1 из SEQ ID NO: 15 замещен на глицин.

Подробное описание изобретения

Если не оговорено другое, все технические и научные термины, использованные в данном документе, имеют те же значения, что и, обычно, понимаются квалифицированным специалистом в данной области с уровня техники, к которому данное изобретение принадлежит. Несмотря на то, что способы и вещества подобные или эквивалентные тем, что описаны в данном документе, могут быть использованы на практике или при апробировании представленного изобретения, подходящие способы и материалы описываются ниже. Материалы, способы и примеры являются только иллюстративными, и не предназначены быть ограничивающими. Все публикации, патенты и другие документы, упомянутые в данном документе, включены как ссылки в полном объеме.

Известно, что в данном раскрытии, термины, такие как "заключает", "заключенный", "заключающий", "содержит", "содержащий" и аналогичные могут иметь значение, приписываемые им патентным законом США; например, они могут означать "включает", "включенный", "включающий" и тому подобные. Такие термины относятся к включению отдельных ингредиентов или набора ингредиентов без исключения каких-либо других ингредиентов. Термины, такие как "состоящий по существу из" и "состоит по существу из" имеют значение, приписываемое им патентным законом США, например, они позволяют включение дополнительных ингредиентов или стадий, которые не приуменьшают новые или основные характеристики изобретения, то есть, они исключают дополнительные не перечисленные ингредиенты или стадии, которые приуменьшают новые или основные характеристики изобретения, и они исключают ингредиенты или стадии с уровня техники, такие как документы с уровня техники, которые цитируются в данном документе или включены в виде ссылок в данный документ, в особе