Антитело против csf-1r

Антитело против csf-1r

Иллюстрации

Показать все

Реферат

CSF-1 (колониестимулирующий фактор-1) представляет собой цитокин, который, в частности, экспрессируется различными типами клеток. Он является фактором дифференциации, роста и выживания для клеток ретикулогистиоцитарной генеалогии, которые экспрессируют рецептор для CSF-1 (CSF-1R) (SHERR. Рецептор колониестимулирующего фактора-1 Blood. 1990, том 75, №1, стр.1-12). CSF-1R представляет собой рецептор тирозинкиназы, который кодируется c-fms протонкогеном, содержащим внутриклеточный домен киназы и связывающий лиганд внеклеточный участок, организованный в виде пяти подобных иммуноглобулину субдоменов. Ответ на CSF-1 приводит к повышенному выживанию, росту, дифференциации и обратимым изменениям функции. c-fms ген, как таковой, представляет собой маркер дифференциации макрофагов. Степень экспрессии c-fms является более сильной, чем других специфических для макрофагов генов, включая лизоцим и специфический для макрофагов белок тирозинфосфатазу (HUME, и др. Регуляция экспрессии рецептора CSF-1. Molecular reproduction and development. 1997, том 46, №1, стр.46-52).

В дополнение к клеткам ретикулогистиоцитарной клеточной линии CSF-1R экспрессируется многими типами опухолей человека. При раке молочной железы экспрессия CSF-1R ассоциируется с большими размерами опухоли и сниженным выживанием (KLUGER, и др. Экспрессия рецептора колониестимулирующего фактора-1 макрофагов ассоциируется с неблагоприятным прогнозом рака молочной железы на основе микроанализа с использованием большой группы тканей. Clinical cancer research. 2004, том 10, №1, стр.173-7; SCHOLL и др. Окрашивание с помощью антитела к колониестимулирующему фактору-1 в первичных аденокарциномах молочной железы коррелирует с выделенными инфильтратами воспалительных клеток и прогнозом. Journal of the National Cancer Institute. 1994, том 86, №2, стр.120-6). При эпителиальном раке яичников большинство первичных опухолей и метастазов в высокой степени экспрессируют CSF-1R, а метастазы часто коэкспрессируют CSF-1 и CSF-1R. CSF-1R также экспрессируется инфильтрующими опухоль макрофагами (CHAMBERS, и др. Сверхэкспрессия эпителиального колониестимулирующего фактора макрофагов и CSF-1 рецептора: фактор неблагоприятного исхода при эпителиальном раке яичника контрастирует с протективным эффектом стромального CSF-1. Clinical Cancer Research. 1997, том 3, №6, стр.999-1007). При раке яичника и эндометрия, Нозерн-блоттинг анализ показывает, что подавляющее большинство опухолей коэкспрессирует CSF-1 и CSF-1R, в то время как экспрессия CSF-1R только слабо определяется в образцах нормальной ткани эндометрия (BAÏOCCHI, и др. Экспрессия колониестимулирующего фактора макрофагов и его рецептора при гинекологических злокачественных образованиях. Cancer. 1991, том 67, №4, стр.990-6). При цервикальной карциноме экспрессия CSF-1R подвергается понижающей регуляции как в опухолевой строме, так и в опухолевом эпителии по сравнению с нормальным эндометрием (KIRMA, и др. Повышенная экспрессия онкогена c-fms и его лиганда, колониестимулирующего фактора-1 макрофагов, при цервикальном раке и роль трансформирующего фактора роста бета 1 в индукции экспрессии с-fms. Cancer res. 2007, том 67, №5, стр.1918-26). При почечной карциноме инфильтрация ассоциированных с опухолью макрофагов, экспрессирующих высокие уровни CSF-1R, ассоциируется с развитием опухоли (HEMMERLEIN, и др. Экспрессия воспалительных антигенов острой и поздней стадии, c-fms, CSF-1 и человеческой моноцитарной серинэстеразы 1 в ассоциированных с опухолью макрофагах карциномы почечных клеток. Cancer immunology, immunotherapy. 2000, том 49, №9, стр.485-92). CSF-1R экспрессируется на уровне около 100% образцами простатической неоплазии или рака (IDE, и др. Экспрессия рецептора колониестимулирующего фактора 1 в процессе развития предстательной железы и развития рака предстательной железы. Proc.Natl. Acad. Sci. U.S.A. 2002, том 99, №22, стр.14404-9). Экспрессия CSF-1R также определяется при острых миелобластных лейкемиях и при В-клеточных хронических лимфоцитарных лейкемиях (RAMBALDI, и др. Экспрессия колониестимулирующего фактора макрофагов и c-fms генов в клетках острой миелобластной лейкемии человека. Journal of Clinical Investigation. 1988, том 81, №4, стр.1030-5).

Работа, проведенная с помощью иммуногистохимии и in situ гибидизации, продемонстрировала специфичность экспрессии CSF-1 в клетках инвазивного рака молочных желез, в то время как такой продукции не наблюдали в интраканальных или неинвазивных опухолевых клетках (SCHOLL, и др. Окрашивание с помощью антитела к колониестимулирующему фактору-1 в первичных аденокарциномах молочной железы коррелирует с выделенными инфильтратами воспалительных клеток и прогнозом. Journal of the National Cancer Institute. 1994, том 86, №2, стр.120-6; TANG, и др. Экспрессия M-CSF (колониестимулирующего фактора моноцитов) и M-CSF рецептора опухолевыми клетками молочной железы; опосредованный M-CSF рекрутинг инфильтрующих опухоль моноцитов. Journal of cellular biochemistry. 1992, том 50, №4, стр.350-6). Продукция CSF-1 инвазивными опухолевыми клетками коррелирует с повышением их концентрации в плазме крови пациентов, где эта концентрация может превышать 1000 пг/мл по сравнению с менее чем 300 пг/мл у нормальных индивидуумов. Высокая концентрация в сыворотке коррелирует с поздними стадиями заболевания и неблагоприятным краткосрочным прогнозом (SCHOLL, и др. Циркулирующие уровни колониестимулирующего фактора 1 в качестве прогностического индикатора у 82 пациентов с эпителиальным раком яичника. British journal of cancer. 1994, том 69, №2, стр.342-6; SCHOLL. Циркулирующие уровни колониестимулирующего фактора макрофагов CSF-1 у пациентов с первичным и метастатическим раком молочной железы. Пилотное исследование. Breast cancer research and treatment. 1996, том 39, №3, стр.275-83). Кроме того, было продемонстрировано, что CSF-1 стимулирует мобильность и инвазивность опухолевых клеток (DORSCH, и др. Перенос гена колониестимулирующего фактора макрофагов в опухоли индуцирует инфильтрацию макрофагами, но не супрессию опухоли. European journal of immunology. 1993, том 23, №1, стр.186-90; WANG, и др. Индукция миграции моноцитов с помощью рекомбинантного колониестимулирующего фактора макрофагов. Journal of immunology. 1988, том 141, №2, стр.575-9; FILDERMAN, и др. Колониестимулирующий фактор макрофагов (CSF-1) повышает инвазивность в позитивной по рецептору CSF-1 линии клеток карциномы. Cancer res. 1992. том 52, №13, стр.3661-6).

CSF-1 также обладает хемотаксическим влиянием на предшественников миелоидной линии, которые способствуют инфильтрации моноцитов в опухоли. Однако присутствие этих моноцитов не является достаточным для того, чтобы наблюдать разрушение опухоли иммунной системой (DORSCH, и др. Перенос гена колониестимулирующего фактора макрофагов в опухоли индуцирует инфильтрацию макрофагами, но не супрессию опухоли. European journal of immunology. 1993, том 23, №1, стр.186-90). Оказывается, что при высоких концентрациях в сыворотке, что обычно наблюдается у пациентов, страдающих от опухолей молочных желез, яичников или поджелудочной железы, CSF-1 ориентирует дифференциацию этих моноцитов в макрофаги, а не в дендритные клетки, способные к презентации опухолевых антигенов и, таким образом, инициируя эффективный цитотоксический иммунный ответ, направленный против опухолевых клеток (SCHOLL. Циркулирующие уровни колониестимулирующего фактора макрофагов CSF-1 у пациентов с первичным и метастатическим раком молочной железы. Пилотное исследование. Breast cancer research и treatment. 1996, том 39, №3, стр.275-83; BARON, и др. Модуляция транспорта МНС класса II и лизосомального распределения с помощью колониестимулирующего фактора макрофагов в дендритных клетках человека, имеющих происхождение от моноцитов. Journal of cell science. 2001, том 114, №pt5, стр.999-1010).

CSF-1 является также существенным для пролиферации и дифференциации остеокластов (CECCHINI, и др. Роль CSF-1 в развитии костей и костного мозга. Molecular reproduction and development. 1997, том 46, №1, стр.75-83). Остеокласты представляют собой многоядерные клетки, которые экспрессируют CSF-1R и имеют происхождение от гематопоэтических предшественников, которые, главным образом, являются ответственными за разрушение минерализованных костей в процессе развития костей, гомеостаза и репарации. При различных расстройствах скелета, таких, как остеопороз, злокачественная гиперкальцемия, ревматоидный артрит, опухолевые метастазы и рак соска молочной железы Педжета, резорбция кости остеокластами превалирует над образованием костной ткани остеобластами, что приводит к уменьшению костной массы, хрупкости скелета и переломам костей (BRUZZANITI, и др. Молекулярная регуляция активности остеокластов. Reviews in endocrine. 2006, том 7, №1-2, стр.123-39). Например, пациенты в поздней стадии рака молочной железы часто развивают метастазы в кости. Костные метастазы приводят к неустранимой боли и высокому риску переломов по причине задаваемой опухолью потери костной массы (остеолизис), который вызывается повышенной активностью остеокластов (CICEK, и др. Костные метастазы рака молочной железы и современные малые терапевтические молекулы. Cancer metastasis reviews. 2006, том 25, №4, стр.635-44). Было показано, что остеолизис является связанным с высоким уровнем циркулирующего CSF-1 (KITAURA, и др. Журнал клинического исследования. M-CSF опосредует индуцированный TNF воспалительный остеолизис. 2005, том 115, №12, стр.3418-27).

Путь CSF-1 является также вовлеченным в опосредование воспаление желудочно-кишечного тракта при заболеваниях, таких как воспалительное заболевание кишечника (MARSHALL, и др. Блокирование колониестимулирующего фактора-1 (CSF-I) приводит к ингибированию индуцированного DSS колита. Inflammatory bowel diseases. 2007, том 13, №2, стр.219-24), в опосредование пролиферация макрофагов при остром отторжении аллотрансплантата (JOSE, и др. Блокирование колониестимулирующего фактора макрофагов снижает пролиферацию макрофагов и их акумуляцию при отторжении почечного аллотрансплантата. American journal of transplantation. 2003, том 3, №3, стр.294-300) и при репликации ВИЧ-1 в инфицированных макрофагах (KUTZA, и др. Антагонист колониестимулирующего фактора макрофагов ингибирует репликацию ВИЧ-1 в человеческих макрофагах. Journal of immunology. 2000, №164, стр.4955-4960).

По этим причинам ингибирование CSF-1 активности различными соединениями было предложено для лечения рака и разрушения костей.

Предпосылки создания изобретения

WO 01/30381 относится к применению ингибиторов активности CSF-1 в производстве лекарственных средств для лечения опухолевых заболеваний. Два предложенных подхода для ингибирования активности CSF-1 представляют собой супрессию активности CSF-1 как таковой и супрессию активности CSF-1R. Нейтрализующие антитела против CSF-1 или его рецептора являются предпочтительными в качестве ингибиторов активности CSF-1.

WO 03/059395 описывает комбинационные продукты, включающие вещество, способное к ингибированию активности CSF-1, и вещество, обладающее цитотоксической активностью, для лечения рака.

WO 2005/068503 раскрывает способ для предотвращения и лечения остеолизиса, раковых метастазов и потери костной массы, ассоциированной с раковыми метастазами путем введения антитела против CSF-1 субъекту.

ЕР 1488792 А относится к применению моно- и/или бициклического арила или соединений гетероарилхинозолина, которые демонстрируют селективное ингибирование дифференциации, пролиферации или высвобождения медиатора путем эффективного ингибирования активности CSF-1R тирозинкиназы. Эта заявка также относится к применению таких соединений для производства лекарственного средства для ингибирования патологической клеточной пролиферации.

US 2005059113 относится к антителам и их связывающим антиген частям, которые специфически связываются с CSF-1. Изобретение также относится к человеческому анти-CSF-1 антителу и его связывающим антиген частям. Эта заявка на изобретение также обеспечивает способы генной терапии при использовании нуклеиновой кислоты молекул, кодирующих тяжелые и/или легкие молекулы иммуноглобулина, которые включают человеческие анти-CSF-1 антитела.

Раскрытие сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к антителу, которое специфически связывается с CSF-1R.

Как используется в данной заявке, термин "любой" используется в том смысле, что он означает "по крайней мере, один", "по крайней мере, первый", "один или более" или "множество" упомянутых компонентов или этапов, если в контексте ясно не указано иное. Например, термин "любая клетка" включает множество клеток, включая их смеси.

Термин "и/или", используемый где-либо в данной заявке, включает значения "и", "или" и "все" или любую другую комбинацию элементов, связанных данных термином.

Термин "около" или "приблизительно", как используется в данной заявке, означает в пределах 20%, предпочтительно в пределах 10% и более предпочтительно в пределах 5% данного значения или интервала.

Как используется в данной заявке, термины "включающий" и "включает" предназначены для понимания наборов частей, продуктов, композиций и способов, включающих указанные компоненты или этапы, но не исключающих других. "Существенно состоящий из", когда используется для определения продуктов, композиций и способов, будет означать исключающий другие компоненты или этапы любой существенной значимости. Таким образом, композиция, существенно состоящая из указанных компонентов, не будет исключать следовых веществ и фармацевтически приемлемых носителей. "Состоящий из" будет означать большее исключение, чем следовых элементов, из других компонентов или этапов.

Как используется в данной заявке, термин "специфически связывается с" относится к реакции связывания, которая является определяющей присутствие гетерогенной популяции белков и других биологических компонентов. Таким образом, при названных условиях анализа антитело в соответствии с изобретением предпочтительно связывается с, по крайней мере, частью CSF-1R и не связывается в значительном количестве с другими компонентами, присутствующими в исследуемом образце. Специфическое связывание между антителом в соответствии с изобретением и CSF-1R мишенью означает, что связывающая аффинность составляет, по крайней мере, 10³ М^-1, и предпочтительно 10⁵ М^-1, 10⁶ M^-1, 10⁷ М^-1, 10⁸ М^-1, 10⁹ М^-1 или 10¹⁰ М^-1.

Как используется в данной заявке, термин "CSF-1R" относится к человеческому рецептору CSF1. Человеческий рецептор CSF-1 был секвенирован, и его аминокислотная последовательность является представленной в SEQ ID NO:29.

Как используется в данной заявке, "антитело" или "Аb" используется в самом широком смысле. Таким образом, "антитело" или "Аb" может быть таким, которое существует в природе, или созданным человеком, таким как моноклональные антитела (mAb), полученные с помощью традиционной гибридомной технологии, рекомбинантной технологии, и/или его функциональным фрагментом. Антитела в соответствии с настоящим изобретением являются предназначенными для включения как молекул интактного иммуноглобулина, например, поликлонального антитела, моноклонального антитела (mAb), моноспецифического антитела, биспецифического антитела, полиспецифического антитела, антитела человека, антитела животного (например, антитела верблюда), химерного антитела, а также их частей, фрагментов, участков, пептидов и производных (которые обеспечиваются с помощью любой известной методики, такой как, но без ограничения, методики ферментативного расщепления, пептидного синтеза или рекомбинантные методики), таких как, например, иммуноглобулин, лишенный легких цепей (смотри, например, US 6,005,079), Fab, Fab′, F(ab′)₂, Fv, scFv, фрагмент антитела, диатело, Fd, CDR участки, или любую часть или пептидную последовательность антитела, которая является способной к связыванию антигена или эпитопа. Антитело считается "способной к связыванию" молекулой, если оно является способным к специфической реакции с молекулой, посредством чего молекула связывается с антителом. Фрагменты или части антитела могут не содержать Fc фрагмента интактного антитела, которые более быстро выводятся из циркуляции и могут обладать меньшим неспецифическим связыванием с тканями, чем интактное антитело. Примеры антитела могут быть получены из интактного антитела при использовании способов, хорошо известных в области техники, например, путем протеолитического расщепления с помощью ферментов, таких как папаин (для получения Fab фрагментов) или пепсин (для получения F(ab′)₂ фрагментов). Смотри, например, Wahl и др., 24 J. Nucl. Med. 316-25 (1983). Части антитела могут быть получены с помощью любого из описанных выше способов, или могут быть получены путем экспрессии части рекомбинантной молекулы. Например, CDR участок(участки) рекомбинантного антитела может(могут) быть изолирован(ы) и субклонирован(ы) в приемлемый экспрессионный вектор. Как используется в данной заявке, термин "вариабельный участок" относится к вариабельному участку или домену легкой цепи (VL) или тяжелой цепи (VH), который содержит детерминанты для связывания специфичности узнавания. Вариабельные домены являются вовлеченными в узнавание антигена и образуют сайт связывания антигена. Как используется в данной заявке, термин "каркасный участок" относится к частям легкой и тяжелой цепи вариабельных участков, которые являются, по крайней мере, на 85% гомологичными (то есть отличными от CDR) среди различных антител у одинаковых видов. Как используется в данной заявке, термин "гомологичный" относится к сравнению аминокислот двух полипептидов, которые при выравнивании с помощью алгоритма Смита-Вотермена (SMITH, и др. Идентификация общих молекулярных субпоследовательностей. Journal of Molecular Biology. 1981, №147 стр.195-7) имеют приблизительно означенный процент одинаковых аминокислот. Например, "на 85% гомологичный" относится к сравнению аминокислот двух полипептидов, которые при оптимальном выравнивании имеют 85% аминокислотной идентичности. Вариабельный участок как тяжелой, так и легкой цепи, делится на сегменты, включающие четыре каркасных субучастка (FR1, FR2, FR3, и FR4), которые прерываются тремя участками гипервариабельных последовательностей, или участками, определяющими комплементарность (CDR), как определяется в базе данных Кабат (Kabat и др., в цитируемой работе), с CDR1, который размещается между FR1 и FR2, CDR2 между FR2 и FR3, и CDR3 между FR3 и FR4. Без указания определенных субучастков как FR1, FR2, FR3 или FR4, каркасный участок, как упоминается другими, представляет собой объединенные FR в рамках вариабельного участка одиночной цепи существующего в природе иммуноглобулина. Как используется в данной заявке, один FR представляет собой один из четырех субучастков, а множество FR представляет собой два или более из четырех субучастков, которые составляют каркасный участок. Последовательности каркасных участков различных легкой или тяжелой цепей являются относительно консервативными в пределах видов. Каркасный участок антитела представляет собой объединенные каркасные участки составляющих его легкой и тяжелой цепей и служит для позиционирования и выравнивания CDR. CDR являются, главным образом, ответственными за формирование сайта связывания антитела, придающего связывающую специфичность и аффинность эпитопу антигена. В пределах вариабельных участков Н или L цепей, которые обеспечивают участки, связывающие антиген, существуют меньшие последовательности, которые называются "гипервариабельными" по причине своей крайней вариабельности между антителами различной специфичности. Такие гипервариабельные участки также называются "участками, определяющими комплементарность" или " участками. Эти CDR участки отвечают за основную специфичность антитела для определенной структуры антигенной детерминантны. CDR представляют собой несмежные участки аминокислот в рамках вариабельных участков, но независимо от видов позиционное расположение этих важных аминокислотных последовательностей в рамках вариабельного участка тяжелой и легкой цепи было продемонстрировано как такое, которое обладает подобным расположением в рамках аминокислотных последовательностей вариабельных цепей. Вариабельные участки тяжелых и легких цепей всех антител содержат 3 CDR участка, каждый из которых не сообщается с остальными (называются L1, L2, L3, Н1, Н2, Н3) для соответствующей легкой (L) и тяжелой (Н) цепей. Признанные CDR участки были описаны Kabat и др., 252 J. Biol. Chem. 6609-16 (1977), и CDR петли могут быть идентифицированы путем применения этих правил при исследовании линейной аминокислотной последовательности. Правила идентификации CDR-H3 петли могут изменяться, однако (смотри Глава 4, Конструирование антител: Методы и Прописи, (Lo, ред. Humana Press, Totowa, NJ, 2004)) и фактические границы некоторых CDR-H3 петель могут не быть идентифицированы без применения экспериментальных методик, таких как циркулярный дихроизм, ядерный магнитный резонанс или кристаллография в рентгеновских лучах. Во всех видах животных пептиды антитела содержат константный (то есть высококонсервативный) и вариабельный участки, в пределах последнего находятся CDR и так называемые "каркасные участки", состоящие из аминокислотных последовательностей в пределах вариабельного участка тяжелой или легкой цепи, но за пределами CDR. CDR участки могут также быть определены при использовании номенклатуры Chothia (CHOTHIA и LESK. Канонические структуры для гипервариабельных участков иммуноглобулинов (1987) J Mol Biol. 1987 Aug 20; 196 (4): 901-17). Таким образом, в некоторых воплощениях CDR представляют собой определенные по Kabat CDR, а в других воплощениях CDR представляют собой определенные по Chothia CDR. Что касается антигенной детерминанты, которая узнается CDR участками антитела, то ее также называют "эпитопом." Другими словами, эпитоп относится к той части любой молекулы, которая является способной к узнаванию и связыванию с антителом (соответствующий связывающий участок антитела может называться паратопом). В общем случае, эпитопы состоят их химически активных группировок молекул, например, боковых цепей аминокислот или сахара, и обладают специфическими пространственными структурными характеристиками, а также специфическими зарядными характеристиками.

Термин "моноклональное антитело" или "mAb", как используется в данной заявке, относится к антителу, которое имеет происхождение из одного клона. Моноклональные антитела могут быть получены при использовании гибридомных технологий, таких как те, что раскрыты у HARLOW. Антитела: Лабораторное руководство. 2-е изд. Cold Spring Harbor: Laboratory press, 1988. и HAMMERLING, и др. Моноклональные антитела и Т-клеточные гибридомы. New York: Elsevier, 1981, стр.563-681.

Как используется в данной заявке, термин "человеческое антитело" относится к антителу, имеющему вариабельный и константный участки, имеющие происхождение от или имеющих близкое соответствие с последовательностями зародышевого иммуноглобулина человека. Человеческое антитело в соответствии с изобретением может включать аминокислотные остатки, которые не кодируются последовательностями зародышевого иммуноглобулина человека (например, случайным образом введенные мутации или сайт-специфический мутагенез in vitro или путем соматической мутации in vivo). Таким образом, как используется в данной заявке, термин "человеческое антитело" относится к антителу, в котором существенно каждая часть белка является существенно подобной человеческому зародышевому антителу. "Существенно подобный" относится к антителу, имеющему последовательность нуклеиновой кислоты, которая является, по крайней мере, на 80, предпочтительно 85, более предпочтительно 90, и даже более предпочтительно 95% гомологичной последовательности нуклеиновой кислоты человеческого зародышевого антитела.

Как используется в данной заявке, термин "Fab" относится к участкам молекул антитела, которые включают вариабельный участок тяжелой цепи и легкой цепи и которые демонстрируют связывающую активность. "Fab" включает агрегаты одной тяжелой и одной легкой цепи (которые обычно являются известными как «Fab»), где любой из указанных выше является ковалентно или нековалентно агрегированным при условии, что такая агрегация является способной к селективной реакции с частным антигеном или антигенным семейством. «Fab» фрагмент представляет собой гетеродимер, включающий VL и второй полипептид, включающий VH и СН1 домены. В предпочтительном воплощении антитело представляет собой Fab′ фрагмент. Fab′ фрагменты отличаются от «Fab» фрагментов тем, что Fab′ фрагмент содержит несколько остатков на карбоксильном конце тяжелой цепи СН1 домена, включая один или более цистеинов из "шарнирного участка" антитела.

"F(ab′)₂" относится к фрагменту антитела, полученному с помощью обработки пепсином антитела, или к эквивалентному белку, полученному с помощью других методик, таких как рекомбинантные технологии. F(ab′)₂ фрагмент имеет два антигенобъединяющих сайта и все еще является способным к перекрестному связыванию с антигеном.

"Fv" представляет собой минимальный фрагмент антитела, который содержит полный сайт узнавания и связывания антигена. Этот участок состоит из димера одного вариабельного домена тяжелой и одного вариабельного домена легкой цепи в тесной нековалентной ассоциации. В этой конфигурации три CDR каждого вариабельного домена взаимодействуют для определения сайта связывания антигена на поверхности VH VL димера. Совместно шесть CDR придают антителу антигенсвязывающую специфичность. Однако даже единственный вариабельный домен (или половина Fv, включающая только три CDR, специфические для антигена) обладает способностью узнавать и связывать антиген, хотя при более низкой аффинности, чем цельный сайт связывания.

"Одноцепочечные Fv" или "scFv" включают VH и VL домены антитела, при этом эти домены являются присутствующими в одной полипептидной цепи. Предпочтительно, когда scFv дополнительно включает полипептидный линкер между VH и VL доменами, что позволяет scFv образовывать желаемую структуру для связывания антигена (LENNARD. Стандартные прописи для конструирования scFv библиотек. Methods in molecular biology. 2002, №178, стр.59-71).

Как используется в данной заявке, термин "фрагмент антитела" относится к одному или более фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с CSF-1R.

Термин "диатела" относится к малым фрагментам антитела с двумя сайтами связывания антигена, фрагменты которого включают вариабельный домен тяжелой цепи (VH), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) в той же полипептидной цепи (VH VL). При использовании линкера, который является настолько коротким, чтобы позволить осуществлять спаривание между двумя доменами на той же цепи, домены принуждают к спариванию с комплементарными доменами другой цепи и создают два сайта связывания антигена. Диатела могут связываться с одним или более чем одним эпитопом. Диатела являются более подробно описанными у POLJAK. Получение и структура диател. Structure. 1994, том 2, №12, стр.1121-3. HUDSON, и др. Мультимеры scFv с высокой авидностью; диатела и триатела. Journal of immunological methods. 1999, том 231, №1-2, стр.177-89, и KIPRIYANOV. Получение биспецифических тандемных диател. Methods in molecular biology. 2002, №178, стр.317-31.

Были разработаны различные методики для получения фрагментов антитела. Традиционно, эти фрагменты получают путем протеолитического переваривания интактного антитела. Однако эти фрагменты сейчас могут быть получены непосредственно при использовании рекомбинантных хозяйских клеток. Fab, Fv и scFv фрагменты антитела могут все экспрессироваться и секретироваться из Е. соli, позволяя, таким образом, осуществлять продукцию больших количеств этих фрагментов. Методики для продукции фрагментов антитела будут понятными специалисту в данной области техники. В других воплощениях выбранное антитело представляет собой одиночные цепи Fv фрагмента (scFv).

Как используется в данной заявке, "домен антитела" (dAb) состоит из самых мелких функциональных связывающих единиц антител, соответствующих вариабельным участкам либо тяжелой (VH), либо легкой (VL) цепей антитела. Домен антитела имеет молекулярный вес приблизительно 13 кДа или менее чем одна десятая размера полного антитела.

Как используется в данной заявке, "Fd" относится к фрагменту антитела, который состоит из VH и СН1 доменов.

Термин "антитело" или "Ab" также относится к другим фрагментам антитела, хорошо известным специалисту в данной области техники, например, таким, как описано у HOLLIGER, и др. Сконструированные фрагменты антитела и добавление одиночных доменов. Nature biotechnology. 2005, том 23, №9, стр.1126-36, и HOOGENBOOM, и др. Природные и сконструированные сайты связывания, полученные с помощью технологии фагового дисплея. Immunology today. 2000, том 21, №8, стр.371-8.

В соответствии с одним воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает:

(i) по крайней мере, один CDR, где указанный CDR включает, по крайней мере, пять последовательных аминокислот последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2, последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2, или последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2;

или

(ii) по крайней мере, один CDR, где указанный CDR включает, по крайней мере, пять последовательных аминокислот последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4, последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4 или последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с другим воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает, по крайней мере, один CDR, где указанный CDR является независимо от другого, выбранным из группы CDR, включающих, по крайней мере, пять последовательных аминокислот:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4

или

- последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с предпочтительным воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает 2, 3, 4 или 5 и даже более предпочтительно 6 CDR, где указанные CDR являются независимо друг от друга выбранными из группы CDR, включающей, по крайней мере, пять последовательных аминокислот:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4

- или последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с другим предпочтительным воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает:

(iii) 2 и даже более предпочтительно 3 CDR, где указанные CDR являются независимо друг от друга выбранными из группы CDR, включающей, по крайней мере, пять последовательных аминокислот:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2,

или

(iv) 2 и даже более предпочтительно 3 CDR, где указанные CDR являются независимо друг от друга выбранными из группы CDR, включающей, по крайней мере, пять последовательных аминокислот:

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4

или последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с другим воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает:

(i) по крайней мере, один CDR, выбранный, независимо от другого, из группы CDR, как отражено в:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2 и

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2;

или

(ii) по крайней мере, один CDR, выбранный, независимо от другого, из группы CDR, как отражено в:

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4 и

- последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с другим воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает, по крайней мере, один CDR, выбранный, независимо от другого, из группы CDR, как отражено в:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4 и

- последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с другим воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает 2, 3, 4 или 5 и даже более предпочтительно 6 CDR, выбранных, независимо от другого, из группы CDR, как отражено в:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4 и

- последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с другим предпочтительным воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает:

(iv) 2 и даже более предпочтительно 3 CDR, где указанные CDR являются независимо друг от друга выбранными из группы CDR, как отражено в:

- последовательности, начинающейся в положении 45 и заканчивающейся в положении 54 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, начинающейся в положении 117 и заканчивающейся в положении 126 SEQ ID NO:2,

или

(iv) 2 и даже более предпочтительно 3 CDR, где указанные CDR являются независимо друг от друга выбранными из группы CDR, как отражено в:

- последовательности, начинающейся в положении 44 и заканчивающейся в положении 56 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 66 и заканчивающейся в положении 76 SEQ ID NO:4,

- последовательности, начинающейся в положении 109 и заканчивающейся в положении 117 SEQ ID NO:4.

В соответствии с одним воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает (i) по крайней мере, один CDR, включающий аминокислотную последовательность, как отражено в какой-либо одной из SEQ ID NO 11, 12 или 13; или (ii) no крайней мере, один CDR, включающий аминокислотную последовательность, как отражено в какой-либо одной из SEQ ID NO:14, 15 или 16.

В соответствии с другим воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает, по крайней мере, один CDR, включающий аминокислотную последовательность, как отражено в какой-либо одной из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16.

В соответствии с предпочтительным воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с CSF-1R и включает 2, 3, 4, 5 и даже более предпочтительно 6 CDR, включающих аминокислотную последовательность, как отражено в какой-либо одной из SEQ ID NO:11, 12, 13, 14, 15 или 16.

В соответствии с другим воплощением антитело в соответствии с изобретением специфически связывается с C