Способ моделирования острого деструктивного инфицированного панкреонекроза

Способ моделирования острого деструктивного инфицированного панкреонекроза

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относиться к медицине, в частности к экспериментальной хирургии.

Наиболее близким к заявленному решению является способ моделирования деструктивного панкреатита, описанный Шалимовым С.А. и соавт., 1989 г., с применением аппарата «Криоэлектроника»: после извлечения через лапаротомное отверстие поджелудочной железы на ее поверхности устанавливают аппликатор установки «Криоэлектроника», замораживают нужных размеров участок до температуры от -25°С до -100°С и ниже, поддерживают эту температуру в течение 3-5 мин, а затем размораживают. На участке, подвергшемся криовоздействию, возникает острый геморрагический панкреатит с исходом в очаговый некроз и склероз. Прилегающие участки железы остаются интактными. Если площадь криодеструкции превышает 30% площади всей железы, животное погибает. Деструкции подвергается как эндо-, так и экзокринная ткань. После чего поджелудочная железа погружалась в брюшную полость животного.

Недостатками данного способа являются: отсутствие ограниченности воспалительного процесса от органов брюшной полости, с развитием панкреатита и ферментативного перитонита.

Технический результат изобретения: создание управляемого способа моделирования острого деструктивного инфицированного панкреонекроза, близкого к таковому, развивающемуся в клинических условиях.

Технический результат достигается тем, что после моделирования деструктивного панкреонекроза путем криодеструкции поджелудочной железы крысы аппликатором площадью 0,6 см² в течение 5 сек, охлажденным в жидком азоте в течение 40 сек, производится погружение комплекса поджелудочной железы и селезенки крысы в заранее сформированную искусственным путем из наружной и внутренней косых мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость, с последующим в нее введением 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка. Перед ушиванием операционной раны к листкам наружной косой мышцы закреплялась фистула для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов.

Изобретение поясняется чертежами.

Фиг.1 - формирование полости из мышц передней брюшной стенки.

Фиг.2 - выведение из брюшной полости комплекса поджелудочной железы и селезенки.

Фиг.3 - нанесение криодеструкции на поджелудочную железу.

Фиг.4 - погружение комплекса поджелудочной железы и селезенки крысы в сформированную искусственным путем из мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость.

Фиг.5 - введение в сформированную искусственным путем из мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка.

Фиг.6 - закрепление фистулы к листкам наружной косой мышцы передней брюшной стенки животного для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов.

Способ осуществляется следующим образом.

Моделирование острого деструктивного инфицированного панкреонекроза проводят на половозрелых крысах линии «Wistar», средней массой тела 250-300 г, без признаков заболеваний, прошедших карантин и содержащихся на стандартном пищевом и питьевом режиме в условиях вивария.

Под общим наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг, внутрибрюшинно), с соблюдением правил асептики и антисептики проводят лапаротомию параректальным разрезом слева, длинной до 2 см. Выполняют моделирование острого деструктивного инфицированного панкреонекроза путем криодеструкции поджелудочной железы крысы аппликатором площадью 0,6 см² в течение 5 сек, охлажденным в жидком азоте в течение 40 сек, производится погружение комплекса поджелудочной железы и селезенки крысы в заранее сформированную искусственным путем из наружной и внутренней косых мышц передней брюшной стенки животного ограниченную полость, с последующим в нее введением 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка. Перед ушиванием операционной раны к листкам наружной косой мышцы закреплялась фистула для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов.

Пример конкретного выполнения

Исследование проводилось в условиях операционного блока НИИ Экологической медицины на базе Курского государственного медицинского университета. Использовались половозрелые крысы самцы линии «Wistar» без признаков заболеваний, прошедшие карантин и содержащиеся на стандартном пищевом и питьевом режиме в условиях вивария. Все манипуляции выполнялись с соблюдением требований к гуманному обращению с животными (г.Страсбург, Франция, 1986).

С соблюдением правил асептики и антисептики под общим наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг, внутрибрюшинно) проводилась лапаротомия параректальным разрезом слева, длинной до 2 см. В рану выводился комплекс селезенка с желудочно-селезеночной связкой. Поджелудочная железа изолировалась от органов брюшной полости путем наложения 1-2 швов на листки внутренней косой мышцы, а от окружающих тканей - стерильной салфеткой.

Перед моделированием острого деструктивного инфицированного панкреонекроза производили измерение микроциркуляции в желудочно-селезеночной связке методом лазерной доплеровской флоуметрии (ЛДФ). Исследование осуществляли при помощи аппарата - лазер-доплеровского флоуметра «Biopac-systems MP-100» и датчика «TSD-144». Запись и обработка данных производилась при помощи программы AcqKnowledge 3.8.1. Уровень микроциркуляции регистрировали в 24 точках желудочно-селезеночной связки по ходу сегментарных селезеночных артерий. Запись кривой уровня микроциркуляции проводили в течение 30 сек в каждой точке. Из полученных 24 значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за уровень микроциркуляции у данного животного.

В сосуд Дюара, содержащий жидкий азот, на 40 сек погружался аппликатор с площадью рабочей поверхности 0,6 см², при погружении аппликатор держали за шелковую нить. После извлечения из жидкого азота аппликатор захватывался пинцетом и на 5 сек прижимался к левой доле поджелудочной железы так, чтобы избежать контакта с селезеночными сосудами. После замораживания поджелудочной железы дожидались ее оттаивания. Затем комплекс поджелудочной железы и селезенки погружался в полость, образованную наружной и внутренней косой мышцами передней брюшной стенки крысы. В полость вводилась микробная взвесь золотистого стафилококка в объеме 0,3 мл. Перед ушиванием полости к листкам наружной косой мышцы закреплялась фистула для последующего введения в сформированную полость лекарственных препаратов. Установленная фистула частично укрывалась кожей.

В эксперименте производилось 4 серии исследований:

1 серия - крысы без лечения, 2 серия - крысы, которым проводилось лечение введением в сформированную оперативным путем полость мази «Левомеколь», 3 серия - крысы, которым проводилось лечение введением в сформированную полость гипохлорита натрия в геле гидроксиметилцеллюлозы, 4 серия - крысы, которым проводилось лечение введением в сформированную полость геля гидроксиметилцеллюлозы.

Во всех сериях крысы выводились из эксперимента на 3, 5, 7, 10 сутки.

При выведении крыс из эксперимента проводилось измерение микроциркуляции в желудочно-селезеночной связке методом лазерной доплеровской флоуметрии (ЛДФ). После замера микроциркуляции проводился забор крови из левого желудочка сердца для проведения биохимического исследования, исследования OAK (плазматические клетки), забор тканей и органов для подсчета КОЕ, гистологического исследования комплекса поджелудочной железы и селезенки, печени, почек, сердца, тонкой кишки.

Результаты проведенных исследований

Таблица 1
Распределение экспериментальных животных по группам опытов
№ п\п	Название группы	Характер эксперимента	Количество животных
1	интактная	Без лечения	96
2	сравнения	Введение в брюшную полость мази «Левомеколь»	96
3	контрольная	Введение в брюшную полость иммобилизированным гипохлоритом натрия в геле полимеров	96

Таблица 2
Уровень летальности в исследуемых группах
Название группы	3 сутки	5 сутки	7 сутки	10 сутки
итактаная	97,5%	83,3%	83,3%	79,1%
сравнения	79,3%	70,8%	66,6%	62,5%
контрольная	62,5%	54,2%	42%	30%
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с показателями первой группы

При исследовании уровня летальности: смертность в 3 контрольной в 1,4 раза (46,8%) меньше, чем во 2 сравнения (69,7%), и в 1,8 раза ниже, чем в итактной (83,3%).

Таблица 3
Динамика показателей эндогенной интоксикации у животных с экспериментальным панкреонекрозом
показатели	Сроки после операции	Группы животных
1	2	3
ЛИИ, усл. ед. (здоровые животные - 1,1±0,3)	3	7,6±0,5	6,3±0,4	4,5±0,5*
5	6,3±0,4	4,9±0,4	1,9±0,4*
7	6,1±0,4	3,3±0,3*	1,3±0,3*
10	4,9±0,3	2,1±0,3*	1,2±0,3*
Лейкоциты*103\мл (здоровые животные - 8,8±0,4)	3	19,1±0,8	17,4±0,7	14,9±0,5*
5	17,2±0,6	13,5±0,4	9,5±0,4*
7	12,7±0,4	10,7±0,3*	8,0±0,3*
10	11,1±0,4	8,9±0,2*	8,1±0,3*
Примечание: * - р<0,05 в сравнении с показателями первой группы

При исследовании общего анализа крови установлено, что нормализация лейкоцитоза и лейкоцитарного индекса интоксикации (ЛИИ) в контрольной группе наступала к 5-м суткам, а в группе сравнения - на 7 сутки.

Таблица 4
Результаты бактериологического исследования ткани из очага инфицирования у крыс с экспериментальным панкреонекрозом
№	Название группы	Количество микроорганизмов, КОЕ*103/мл
3 сутки	5 сутки	7 сутки	10 сутки
1	интактные	89,5±7,2	84,2±5,8	81,1±4,8	78,1±1,8
2	сравнения	61,3±6,2	58,4±5,0	53,6±3,2	47,2±2,1
3	контрольная	37,8±6,7	32,2±4,6	29,4±2,2	26,7±1,2
Примечание: достоверность различий средних, р<0,05.

При бактериологическом исследовании количество микроорганизмов в 1 г ткани очага инфицирования на 3 сутки в контрольной группе в 1,6 раза ниже, чем в группе сравнения и почти в 2 раза ниже к 10-м суткам.

Таким образом, предложенная модель позволяет экспериментально изучать действие лекарственных препаратов на течение инфицированного панкреонекроза.

Способ моделирования острого деструктивного инфицированного панкреонекроза, включающий лапаротомию, выведение поджелудочной железы из брюшной полости и последующую криодеструкцию участка железы, отличающийся тем, что у крыс линии Вистар предварительно формируют ограниченную полость из наружной и внутренней косых мышц передней брюшной стенки, из брюшной полости выводят комплекс поджелудочной железы и селезенки, затем в течение 5 секунд осуществляют криодеструкцию участка железы аппликатором площадью 0,6 см, охлажденным в жидком азоте в течение 40 секунд, затем погружают комплекс в заранее сформированную ограниченную полость и вводят в нее 0,3 мл 1 млрд микробной взвеси золотистого стафилококка, перед ушиванием операционной раны к листкам наружной косой мышцы вшивают фистулу для последующего введения в полость лекарственных веществ.