Кристаллические формы и сольваты авт-263 для применения в лечении заболеваний, связанных с белком bcl-2

Кристаллические формы и сольваты авт-263 для применения в лечении заболеваний, связанных с белком bcl-2

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящая заявка претендует на приоритет предварительной заявки на патент США № 61/244051, поданной 20 сентября 2009 г.

Делается перекрестная ссылка на следующие находящиеся на рассмотрении заявки на патенты США, предмет которых имеет отношение к настоящей заявке: заявка № 12/770112, озаглавленная «Липидные составы промотора апоптоза»; заявка № 12/770174, озаглавленная «Стабилизированные липидные составы промотора апоптоза»; заявка № 12/770205, озаглавленная «Твердые пероральные составы ABT-263»; и заявка № 12/770 299, озаглавленная «Составы промотора апоптоза для перорального введения», где все указанные заявки поданы 29 апреля 2010 г.

Содержание каждой из перечисленных выше заявок полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к апоптоз-активирующему агенту ABT-263, к его твердым формам, составам, содержащим эти твердые формы и/или полученным с их применением, а также к способам их применения для лечения заболеваний, характеризующихся избыточной экспрессией антиапоптотических белков семейства Bcl-2. Более конкретно, изобретение относится к кристаллическим формам ABT-263, применимым, например, в качестве действующего фармацевтического ингредиента (API) для получения фармацевтических композиций для введения ABT-263 субъекту, который нуждается в этом.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Отсутствие апоптоза является отличительным признаком рака (Hanahan & Weinberg (2000) Cell 100:57-70). Раковые клетки должны преодолевать непрерывное воздействие клеточных стрессов, таких как повреждение ДНК, активация онкогенов, аномальное развитие клеточного цикла и агрессивные воздействия микросреды, которые могли бы вынудить нормальные клетки подвергнуться апоптозу. Один из основных путей, за счет которого раковые клетки избегают апоптоза, является повышающая регуляция антиапоптотических белков семейства Bcl-2.

Соединения, которые занимают карман связывания BH3 белков Bcl-2, были описаны, например, Bruncko et al. (2007) J.Med.Chem. 50:641-662. В число этих соединений входил N-(4-(4-((4'-хлор-(1,1'-бифенил)-2-ил)метил)пиперазин-1-ил)бензоил)-4-(((1R)-3-(диметиламино)-1-((фенилсульфанил)метил)пропил)амино)-3-нитробензолсульфонамид, известный также под наименованием ABT-737 и имеющий приведенную ниже формулу:

.

ABT-737 с высоким сродством (<1 нМ) связывается с белками семейства Bcl-2 (конкретно Bcl-2, Bcl-X_L и Bcl-w). Он проявляет самостоятельную активность против мелкоклеточного рака легких (SCLC) и лимфоидных злокачественных опухолей, а также потенцирует проапоптотическое действие других химиотерапевтических агентов. ABT-737 и родственные соединения, а также способы получения этих соединений, раскрыты в опубликованной заявке на патент США № 2007/0072860, поданной Bruncko et al.

Позднее была выявлена еще одна группа соединений, имеющих высокое сродство к связыванию с белками семейства Bcl-2. Эти соединения и способы их получения раскрыты в опубликованной заявке на патент США № 2007/0027135, поданной Bruncko et al. (далее по тексту именуемой «заявкой 135»), включенной в настоящую заявку с помощью ссылки в полном объеме, и, как можно видеть из их формулы, структурно родственны ABT-737.

Одно из соединений, полученных в «заявке 135», а именно в примере 1, представляет собой N-(4-(4-((2-(4-хлорфенил)-5,5-диметил-1-циклогекс-1-ен-1-ил)метил)пиперазин-1-ил)бензоил)-4-(((1R)-3-(морфолин-4-ил)-1-((фенилсульфанил)метил)пропил)амино)-3-((трифторметил)сульфонил)бензолсульфонамид, известный так же, как ABT-263. Это соединение имеет молекулярную массу 974,6 г/моль и приведенную ниже формулу:

.

В статье Tse et al. (2008) Cancer Res. 68:3421-3428 и дополнительных данных к этой статье, доступных на Cancer Research Online (cancerres.aacrjournals.org/), сообщалось о проведенных на животных фармакокинетических исследованиях ABT-263, который был синтезирован, как описано в «заявке 135». Состав препарата готовили в виде раствора в 10% диметилсульфоксиде (ДМСО) в полиэтиленгликоле (PEG) 400 или в смеси 10% этанол/30% PEG400/60% Phosal 50-PG^TM.

Конкретным типом заболеваний, лечение которых необходимо улучшить, являются неходжкинские лимфомы (NHL). NHL является шестым из наиболее распространенных типов среди всех вновь появляющихся раковых заболеваний в США и развивается, в основном, у пациентов в возрасте 60-70 лет. NHL не является единым заболеванием, а представляет собой семейство родственных заболеваний, которые классифицируют на основе нескольких характеристик, включая клинические признаки и гистологию.

Один из способов классификации относит различные гистологические подтипы к двум основным категориям, на основе истории развития заболевания, т.е. является ли заболевание неактивным или агрессивным. Как правило, неактивные подтипы растут медленно и в основном неизлечимы, в то время как агрессивные подтипы растут быстро и являются потенциально излечимыми. Фолликулярные лимфомы чаще всего относятся к неактивному подтипу, а диффузные крупноклеточные лимфомы, как правило, относятся к агрессивному подтипу. Онкобелок Bcl-2 был первоначально описан в неходжкинских B-клеточных лимфомах.

Лечение фолликулярной лимфомы, как правило, состоит из химиотерапии на биологической основе или комбинированной химиотерапии. Обычно применяется комбинированная терапия, включающая ритуксимаб, циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизон (R-CHOP), а также комбинированная терапия, включающая ритуксимаб, циклофосфамид, винкристин и преднизон (RCVP). Кроме того, применяют монотерапию, вводя ритуксимаб (нацеленный на CD20, т.е. фосфопротеин, непрерывно экспрессируемый на поверхности B-клеток) или флударабин. Добавление ритуксимаба к химиотерапевтическим схемам лечения может привести к улучшению скорости реакции и увеличению выживаемости без прогрессирования заболевания.

Для лечения рефрактерной или рецидивирующей неходжкинской лимфомы можно применять радиоиммунотерапевтические средства, химиотерапию в высоких дозах или трансплантаты стволовых клеток. В настоящее время не существует одобренной схемы лечения, которая приводит к исцелению, и действующие директивы рекомендуют лечить пациентов в контексте клинических испытаний даже в схеме лечения первой линии.

Лечение первой линии пациентов с агрессивной лимфомой из крупных B-клеток, как правило, состоит из ритуксимаба, циклофосфамида, доксорубицина, винкристина и преднизона (R-CHOP) или комбинации подобранных дозировок этопозида, преднизона, винкристина, циклофосфамида, доксорубицина и ритуксимаба (DA-EPOCH-R).

Большинство лимфом первоначально реагируют на любой из указанных способов лечения, но, как правило, опухоли рецидивируют и постепенно становятся устойчивыми к лечению. Чем больше число схем лечения, получаемых пациентом, тем более устойчивым к химиотерапии становится заболевание. В среднем, реакция на терапию первой линии наблюдается примерно в 75% случаев, на терапию второй линии в 60% случаев, на терапию третьей линии в 50% случаев и на терапию четвертой линии примерно в 35-40% случаев. Величина реакции, приближающаяся к 20%, для индивидуального агента в случае многократно рецидивировавшей опухоли считается положительным результатом и служит основанием для дальнейших исследований.

Имеющиеся в наличии химиотерапевтические средства проявляют свое противоопухолевое действие, вызывая апоптоз, через различные механизмы. Однако многие опухоли, в конце концов, становятся устойчивыми к этим средствам. Bcl-2 и Bcl-X_L, как было показано в кратковременном исследовании выживаемости in vitro, придают опухоли устойчивость к химиотерапии, и позднее тот же результат был получен in vivo. Это позволяет предположить, что если можно разработать улучшенную терапию, направленную на подавление деятельности Bcl-2 и Bcl-X_L, то упомянутую устойчивость к химиотерапии можно было бы с успехом преодолеть.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Если получать соединение ABT-263 по методике примера 1 «заявки 135», оно выделяется в виде аморфного стеклообразного твердого вещества, которое не очень удобно применять в качестве действующего фармацевтического ингредиента (API) для последующего изготовления лекарственных составов. Более конкретно, эту аморфную форму ABT-263 трудно и, следовательно, дорого очищать, и возникают проблемы при регулировании процесса ее переработки. Один из подходов, пример которого раскрыт в находящейся в процессе одновременного рассмотрения предварительной заявке на патент США № 61/174274, поданной 30 апреля 2009 г. (включенной в настоящую заявку с помощью ссылки без признания того, что она относится к известному уровню техники по сравнению с настоящим изобретением), заключается в получении ABT-263 в форме кристаллической соли. В рамках другого подхода авторам настоящего изобретения удалось получить ряд новых кристаллических форм ABT-263 в виде свободного основания, подходящих для применения в качестве API в широком круге составов различного типа, включая такие составы, в которых API находится в форме мелких частиц совместно с эксципиентами, например таблетки или капсулы для перорального приема.

В одном из вариантов осуществления настоящее изобретение относится к N-(4-(4-((2-(4-хлорфенил)-5,5-диметил-1-циклогекс-1-ен-1-ил)метил)пиперазин-1-ил)бензоил)-4-(((1R)-3-(морфолин-4-ил)-1-((фенилсульфанил)метил)пропил)амино)-3-((трифторметил)сульфонил)бензолсульфонамиду (ABT-263) в виде свободного основания в твердой кристаллической форме.

В другом варианте осуществления изобретение относится к не содержащему растворителя кристаллическому полиморфу свободного основания ABT-263, охарактеризованному в настоящей заявке и названному формой I свободного основания ABT-263.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к не содержащему растворителя кристаллическому полиморфу свободного основания ABT-263, охарактеризованному в настоящей заявке и названному формой II свободного основания ABT-263.

В ряде других вариантов осуществления настоящее изобретение относится к сольватированным кристаллическим формам свободного основания ABT-263, включающим органические растворители.

В еще одном варианте осуществления изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей кристаллическое свободное основание ABT-263 (например, в упомянутой выше форме I или форме II), а также один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов.

В другом варианте осуществления изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции ABT-263 в форме раствора, включающему растворение кристаллического свободного основания ABT-263 (например, в упомянутой выше форме I или форме II) в фармацевтически приемлемом растворителе или смеси растворителей.

В следующем варианте осуществления изобретение относится к способу лечения заболевания, характеризующегося нарушением апоптоза и/или избыточной экспрессией антиапоптотических белков семейства Bcl-2, включающему введение субъекту, у которого имеется такое заболевание, терапевтически эффективного количества свободного основания ABT-263 в кристаллической форме (например, в упомянутой выше форме I или форме II) или фармацевтической композиции, включающей свободное основание ABT-263 в кристаллической форме (например, в упомянутой выше форме I или форме II), а также один или несколько фармацевтически приемлемых наполнителей. Примеры подобных заболеваний включают многие неопластические расстройства, в том числе раковые заболевания. Конкретным иллюстративным типом рака, который можно лечить способом по настоящему изобретению, является неходжкинская лимфома. Другим конкретным иллюстративным типом рака, который можно лечить способом по настоящему изобретению, является хронический лимфоцитарный лейкоз. Еще одним конкретным иллюстративным типом рака, который можно лечить способом по настоящему изобретению, является острый лимфоцитарный лейкоз, например, у пациентов детского возраста.

Помимо перечисленного изобретение относится к способу поддержания у пациентов из числа людей с раком, например пациентов с неходжкинской лимфомой, терапевтически эффективной концентрации в плазме ABT-263 и/или одного или нескольких его метаболитов, включающему введение субъекту фармацевтической композиции, содержащей свободное основание ABT-263 в кристаллической форме (например, в упомянутой выше форме I или форме II), а также один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, в количестве от примерно 50 до примерно 1000 мг ABT-263 в день при среднем интервале между введениями от примерно 3 часов до примерно 7 дней.

Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения, включая более конкретные аспекты изложенных выше вариантов, будут раскрыты в приведенном ниже подробном описании изобретения или будут ясны из этого описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Фиг.1 представляет собой рентгенограмму PXRD не содержащей растворителя кристаллической полиморфной формы I свободного основания ABT-263.

Фиг.2 представляет собой рентгенограмму PXRD не содержащей растворителя кристаллической полиморфной формы II свободного основания ABT-263.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Термин «свободное основание» применяется в настоящей заявке для удобства обозначения ABT-263 в форме исходного соединения, чтобы отличать данную форму от любой солевой формы этого соединения, с учетом того факта, что исходное соединение, строго говоря, является цвиттерионным и поэтому не всегда проявляет свойства истинного основания.

Термин «не содержащий растворителя» в настоящей заявке относится к кристаллической решетке полиморфа свободного основания ABT-263, например, формы I или формы II, из которой в результате десольватации был удален растворитель. Растворитель может присутствовать в небольших количествах в твердых частицах соединения, не являясь частью кристаллической решетки и не оказывая влияния на кристаллическую структуру полиморфа; такое присутствие растворителя в рамках настоящей заявки все-таки согласуется с использованием термина «не содержащий растворителя» в отношении полиморфа.

ABT-263 в форме свободного основания можно получить способом, описанным в примере 1 упомянутой выше опубликованной заявки на патент США № 2007/0027135, содержание которой полностью включено в настоящую заявку посредством ссылки. Продукт этого способа представляет собой аморфное стеклообразное твердое вещество. Из этого продукта можно получить порошок, например, с помощью лиофильной сушки или осаждения.

Сольваты свободного основания ABT-263 получали, как описано ниже. Исходным веществом могла являться любая твердая форма свободного основания ABT-263, включая аморфную форму, полученную по методике «заявки 135».

Определенное количество свободного основания ABT-263 (как указано выше, можно использовать любую твердую форму) суспендировали в каждом из набора растворителей или смесей растворителей, показанных в таблице 1. Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре, защищая от действия света. Через определенный период времени, достаточный для осуществления сольватации свободного основания ABT-263 в каждом случае, собирали кристаллы с помощью центрифугирования с фильтрованием. Полученные сольваты характеризовали дифракцией рентгеновских лучей на порошке (PXRD).

Таблица 1Получение кристаллических сольватов свободного основанияABT-263
Растворитель	Масса соединения (мг)	Объем растворителя (мл)
2-пропанол	106,2	1,0
1-пропанол	160,1	1,25
этилацетат:этанол (1:3 объем/объем)	108,7	0,5
метилацетат:гексан (1:1, объем/объем)	76,2	0,5
хлороформ	110,3	0.5
метанол	107,3	1,0
1,4-диоксан:гексан (1:2, объем/объем)	99,5	0,75
толуол	104,3	1,0
бензол	100,3	0,5
этилацетат	~250	0,25
изопропилацетат	~250	0,25
метилацетат	~250	0,25
трифтортолуол	~250	0,25

Данные PXRD регистрировали, используя дифрактометр G3000 (Inel Corp., Artenay, France), снабженный изогнутым позиционно-чувствительным детектором и оптикой параллельных пучков. В дифрактометре использовали трубчатый медный анод (1,5 кВт, с тонкой фокусировкой) при напряжении 40 кВ и токе 30 мА. Германиевый монохроматор падающего пучка обеспечивал монохромное излучение. Дифрактометр калибровали с использованием ослабленного прямого пучка с интервалами в один градус. Калибровку проверяли по положению стандартных эталонных линий порошка кремния (NIST 640c). Прибор управлялся компьютером с помощью программы Symphoix software (Inel Corp., Artenay, France) и данные анализировали с помощью программы Jade (версия 6.5, Materials Data, Inc., Livermore, CA). Образец помещали на алюминиевый держатель для образцов и выравнивали стеклянной пластиной.

Пики рентгенограмм PXRD индивидуальных сольватов, зарегистрированные в описанных выше условиях, перечислены в таблицах 2-14. Положение пиков, как правило, приведено с точностью ±0,2 градуса по углу два-тета (°2θ).

Таблица 2Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с 1-пропанолом
Положение пика (°2θ)
4,88
6,72
8,79
9,62
12,19
12,53
13,46
13,71
14,51
15,32
16,10
17,59
18,20
19,30
19,64
20,38
20,91
23,30

Таблица 3Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с 2-пропанолом
Положение пика (°2θ)
4,88
6,76
8,78
9,64
12,15
12,49
13,41
13,73
15,30
16,10
16,35
17,51
18,26
19,34
19,60
20,33
23,35

Таблица 4Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с бензолом
Положение пика (°2θ)
4,28
4,60
7,75
8,54
10,88
11,16
12,49
12,97
15,48
18,10
18,42
18,75
19,53
20,19
20,59
21,25

Таблица 5Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с хлороформом
Положение пика (°2θ)
4,99
9,61
13,39
13,85
15,85
16,05
16,68
17,60
18,51
19,25
19,67
20,10
21,37
23,39
23,78
24,48

Таблица 6Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с 1,4-диоксаном/гексаном
Положение пика (°2θ)
4,85
8,81
9,61
9,94
12,17
12,49
13,39
13,66
15,30
16,20
17,60
18,24
19,27
19,55

Таблица 7Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с метилацетатом/гексаном
Положение пика (°2θ)
5,66
7,29
9,31
9,70
10,38
11,34
12,56
12,93
14,58
14,88
15,83
17,18
17,71
17,99
18,24
18,63
19,46
20,79
21,16
21,46

Таблица 8Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с метанолом
Положение пика (°2θ)
5,03
5,25
5,66
8,88
9,66
10,05
12,53
13,67
13,89
15,52
18,54
18,93
19,36
19,96
20,33

Таблица 9Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с толуолом
Положение пика (°2θ)
4,48
7,61
8,92
10,85
12,35
12,75
13,34
14,73
15,23
16,47
18,33
18,89
19,28
19,92
20,29
21,41
22,31
23,66
24,36

Таблица 10Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с этанолом/этилацетатом
Положение пика (°2θ)
5,03
6,82
8,89
9,68
9,97
12,41
12,65
13,80
14,65
15,60
16,26
17,87
18,52
19,43
19,94

Таблица 11Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с этилацетатом
Положение пика (°2θ)
5,66
7,32
9,31
9,64
11,36
12,56
14,61
14,85
18,03
18,31
18,58
19,56
20,70
21,07

Таблица 12Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с изопропилацетатом
Положение пика (°2θ)
5,64
7,36
9,50
11,45
12,52
14,72
15,14
16,89
18,08
18,45
19,55
20,49
20,89
21,23

Таблица 13Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с метилацетатом
Положение пика (°2θ)
5,63
7,24
9,27
9,66
11,27
12,53
14,51
14,77
15,78
16,10
16,44
17,64
17,92
18,15
18,52
19,39
20,70

Таблица 14Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с трифтортолуолом
Положение пика (°2θ)
4,49
4,99
9,78
12,35
12,73
13,94
15,51
15,80
17,81
18,52
19,56
19,99
20,35
21,00
21,60

Кроме того, описанными ниже способами получали монокристаллы сольватов анизола, пиридина и 2-пропанола для рентгеноструктурного анализа. Индивидуальные кристаллы закрепляли на полиимидной подставке MiTeGen. Данные по интенсивности регистрировали на системе Bruker D8, снабженной CCD камерой APEX II. Данные регистрировали при 100К, используя излучение Mo Ka (λ=0,71073 Å), монохроматизированное графитовым монохроматором. Регистрировали четыре массива данных, используя ω-φ развертку с шагами 0,5° по ω и 90° по φ. Данные регистрировали с помощью 20-секундных экспозиций для каждого снимка. Обработку данных осуществляли с помощью программы APEX2. Применяли коррекцию на поляризационные эффекты Лоренца. Поглощением пренебрегали. Все структуры рассчитывали с использованием прямых методов, которые позволяли определить положение не водородных атомов. Положения всех имеющихся в структуре атомов водорода определяли по разностным Фурье-картам электронной плотности. Положение всех не водородных атомов уточняли в анизотропном приближении. Положение атомов водорода, связанных с атомами углерода, уточняли в геометрически ограниченных положениях «наездника». Атомы водорода, связанные с атомами кислорода, включали в структуру в локализованных положениях. Уточнение структуры осуществляли с помощью кристаллографической программы SHELXTL.

Для получения монокристаллов сольвата с анизолом аморфное свободное основание ABT-263 растворяли в 0,5 мл анизола. Образование монокристаллов наблюдалось через два дня. Кристаллографические данные сольвата с анизолом представлены в таблице 15, и сведения о пиках PXRD, вычисленных из этой кристаллической структуры, приведены в таблице 16.

Таблица 15Кристаллографические сведения о сольвате свободного основания ABT-263 с анизолом
Тип решетки	Орторомбическая
Пространственная группа	P212121
Размер ячейки a	12,112 Å
Размер ячейки b	14,120 Å
Размер ячейки c	38,710 Å
Угол ячейки α	90,0°
Угол ячейки β	90,0°
Угол ячейки γ	90,0°
Объем ячейки	6620,24 Å3
Z	4

Таблица 16Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с анизолом (вычислены на основании кристаллической структуры)
Положение пика (°2θ)
4,56
7,74
8,60
9,62
10,64
11,08
11,81
12,53
12,74
14,68
16,08
17,18
17,34
18,71
19,42
19,84
20,37
20,74

Для получения монокристаллов сольвата с пиридином кристаллическое свободное основание ABT-263 (900 мг) суспендировали в смеси пиридин/гексан (8 мл, 1:4 объем/объем). Этой суспензии давали отстояться, удаляли супернатант и нагревали до 50°C. Аморфное свободное основание ABT-263 (100 мг) растворяли в этом супернатанте при 50°C и охлаждали полученный раствор до комнатной температуры. Образование монокристаллов наблюдалось через неделю, причем было обнаружено, что они являются сольватом с пиридином. Кристаллографические данные для сольвата с пиридином представлены в таблице 17 и перечень пиков PXRD, вычисленных из кристаллической структуры, приведен в таблице 18.

Таблица 17Кристаллографические сведения о сольвате свободного основания ABT-263 с пиридином
Тип решетки	Моноклинная
Пространственная группа	P21
Размер ячейки a	13,901 Å
Размер ячейки b	11,931 Å
Размер ячейки c	38,935 Å
Угол ячейки α	90,0°
Угол ячейки β	90,154°
Угол ячейки γ	90,0°
Объем ячейки	6457,46 Å3
Z	4

Таблица 18Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с пиридином (вычислены на основании кристаллической структуры)
Положение пика (°2θ)
4,54
6,75
7,75
8,68
9,76
10,06
11,72
11,91
12,72
14,74
16,32
16,79
17,33
17,55
18,70
19,28
19,72

Для получения монокристаллов сольвата с 2-пропанолом приблизительно 100 мг свободного основания ABT-263 растворяли примерно в 1 г этилацетата. Полученный раствор добавляли к 2,7 г 2-пропанола. Добавляли кристаллические затравки формы I свободного основания ABT-263. Образование монокристаллов наблюдалось через два дня. Кристаллографические данные для сольвата с 2-пропанолом представлены в таблице 19 и перечень пиков PXRD, вычисленных из кристаллической структуры, приведен в таблице 20.

Таблица 19Кристаллографические сведения о сольвате свободного основания ABT-263 с 2-пропанолом
Тип решетки	Моноклинная
Пространственная группа	P21
Размер ячейки a	13,834 Å
Размер ячейки b	36,105 Å
Размер ячейки c	19,104 Å
Угол ячейки α	90,0°
Угол ячейки β	110,56°
Угол ячейки γ	90,0°
Объем ячейки	8934,19 Å3
Z	6

Таблица 20Перечень пиков на рентгенограмме PXRD сольвата свободного основания ABT-263 с 2-пропанолом (вычислены на основании кристаллической структуры)
Положение пика (°2θ)
4,94
6,82
8,84
9,84
12,30
12,78
13,66
13,92
15,52
16,24
16,58
17,74
18,54
19,52
19,86
20,21
23,55

Сравнение с таблицей 3 показывает близкое соответствие между положениями пиков, вычисленных из данных рентгеноструктурного анализа монокристалла, с пиками, обнаруженными на рентгенограмме PXRD. Незначительные смещения некоторых пиков могут отражать различные температурные условия, использованные при осуществлении двух указанных методик (100К для монокристаллов, комнатная температура для PXRD).

Описанная выше методика кристаллизации суспензии является лишь одним из нескольких путей достижения перенасыщенности раствора, необходимой для получения сольватированных кристаллов. Другие пути включают:

- добавление антирастворителя (ABT-263 растворяют в первом растворителе или смеси растворителей, в которых основание растворимо в высокой концентрации, и затем к полученному раствору добавляют антирастворитель, который смешивается с первым растворителем или смесью растворителей);

- варианты описанной выше методики добавления антирастворителя, в которых, например, раствор ABT-263 добавляют к антирастворителю;

- температурный градиент (ABT-263 растворяют в растворителе или смеси растворителей при повышенной температуре и охлаждают полученный раствор до более низких температур, например ниже комнатной температуры);

- выпаривание растворителя (ABT-263 растворяют в растворителе или смеси растворителей, которые затем выпаривают); и

- кристаллизацию в результате реакции (ABT-263 в форме соли с кислотой растворяют в растворителе или смеси растворителей и полученный раствор добавляют к раствору нейтрализующего агента, например гидроксида натрия, карбоната натрия или бикарбоната натрия, что приводит к выделению свободного основания и его кристаллизации; в качестве альтернативы можно использовать соль ABT-263 с основанием, и в этом случае понижают pH добавлением кислого нейтрализующего агента, вызывая выделение и кристаллизацию свободного основания).

При желании можно использовать комбинации перечисленных выше методик. Конкретные детали, например скорость генерации перенасыщения (например, скорость добавления антирастворителя или нейтрализующего агента, скорость охлаждения или скорость выпаривания растворителя), могут быть легко оптимизированы рядовым специалистом в данной области без чрезмерно большого объема экспериментальной работы.

Десольватация сольвата с этанолом/этилацетатом, например, высушиванием на воздухе приводит к получению кристаллической формы свободного основания ABT-263, не содержащей растворителя. Эта кристаллическая форма именуется формой I. Рентгенограмма PXRD формы I свободного основания ABT-263 показана на фиг.1. Пики на рентгенограмме PXRD формы I свободного основания ABT-263 перечислены в таблице 21. Рентгенограмма PXRD, на которой имеются пики, в основном соответствующие показанным на фиг.1 и перечисленным в таблице 21, может использоваться для идентификации кристаллического свободного основания ABT-263, более конкретно, кристаллической формы I свободного основания ABT-263. Фраза «в основном соответствующие показанным» в данном контексте означает: содержащая пики, которые сдвинуты от указанных положений не более чем на 0,2° по углу 2θ.

Таблица 21Перечень пиков на рентгенограмме PXRD не содержащего растворителя кристаллического полиморфа формы I свободного основания ABT-263
Положение пика (°2θ)
6,21
6,72
9,66
10,92
11,34
12,17
14,28
16,40
16,95
17,81
18,03
18,47
19,32
20,10
21,87

Десольватация большинства сольватов, включая сольваты с 1-пропанолом, 2-пропанолом, метанолом, диоксаном/гексаном, метилацетатом/гексаном, этилацетатом, метилацетатом, изопропилацетатом и хлороформом, приводит к получению не содержащей растворителя кристаллической формы свободного основания ABT-263, которая по данным PXRD идентична кристаллической форме, полученной путем десольватации сольвата с этанолом/этилацетатом.

Десольватация сольватов с пиридином, анизолом и трифтортолуолом приводит к получению не содержащей растворителя кристаллической формы свободного основания ABT-263, которая, как показывают данные PXRD, отличается от формы, образующейся при десольватации сольвата с этанолом/этилацетатом. Эта кристаллическая форма, полученная при десольватации сольватов с пиридином, анизолом или трифтортолуолом, именуется формой II. Рентгенограмма PXRD кристаллической формы II свободного основания ABT-263 показана на фиг.2. Пики на рентгенограмме PXRD формы II свободного основания ABT-263 перечислены в таблице 22. Рентгенограмма PXRD, на которой имеются пики, в основном соответствующие показанным на фиг.2 и перечисленным в таблице 22, может использоваться для идентификации кристаллического свободного основания ABT-263, более конкретно, кристаллической формы II свободного основания ABT-263.

Таблица 22Перечень пиков на рентгенограмме PXRD не содержащего растворителя кристаллического полиморфа формы II свободного основания ABT-263
Положение пика (°2θ)
5,79
8,60
9,34
10,79
11,36
11,59
12,76
13,23
13,73
14,01
14,72
15,00
16,28
17,07
17,48
18,75
19,34
19,71
20,56
21,35

Десольватация сольватов с бензолом и толуолом протекала в разных случаях по-разному с образованием кристаллов, идентифицированных как форма I или форма II. Если образуется продукт с более высокой кристалличностью, он наиболее близко соответствует форме II.

Пики рентгенограммы PXRD, которые особенно характерны для формы I свободного основания ABT-263, в том числе особенно подходят для того, чтобы отличить форму I от формы II, включают пики при значениях угла 2θ 6,21, 6,72, 12,17, 18,03 и 20,10 градусов, в каждом случае ±0,2° 2θ. В одном из вариантов осуществления форма I свободного основания ABT-263