Биологически активная добавка к пище

Биологически активная добавка к пище

Реферат

Изобретение относится к области медицины, касается биологически активной добавки к пище (БАД), а именно витаминно-минерально-пробиотического комплекса с широким спектром физиологических эффектов, обеспечивающего сбалансированное поступление в организм витаминов и минеральных веществ, а также повышение устойчивости организма к воздействию неблагоприятных факторов за счет стимулирования роста и активности лактобацилл естественной эндогенной микрофлоры кишечника, активации неферментативного звена антиоксидантной системы и уменьшения повреждающего воздействия свободных радикалов, активации факторов общей неспецифической защиты организма и укрепления иммунной системы, проявляющего адаптогенный и цитопротективный эффекты, повышающего физическую и умственную работоспособность, который может быть использован в фармацевтической и пищевой промышленности.

Как известно, особую роль в поддержании высокого уровня жизнедеятельности людей, заботящихся о своем здоровье, выполняют витамины и минеральные вещества, которые способствуют энергетическому метаболизму в организме человека, увеличивают его жизненную энергию и укрепляют иммунную систему. Постоянная поддержка защитных сил организма при помощи витаминов, минеральных солей, макро- и микроэлементов делает организм более выносливым и особенно в условиях интенсивных физических и нервно-эмоциональных нагрузок, когда их расход существенно возрастает. При достаточном их количестве происходит более быстрое и полное восстановление организма, что, как следствие, приводит к хорошему самочувствию. Проблема витаминной и минеральной недостаточности у населения России очень актуальна в настоящее время, так как повсеместно наблюдаемые ухудшения экологической обстановки и социальных условий жизни приводят к обеднению организма указанными ценными, а порой и жизненно необходимыми веществами. В то же время неконтролируемый их прием может стать причиной серьезного нарушения баланса ряда элементов, необходимых для нормальной жизнедеятельности организма.

В связи с ростом числа онкологических, соматических, инфекционных и прочих заболеваний различной этиологии, углублением тяжести их течения и увеличением длительности лечения не меньшую актуальность в настоящее время для обеспечения жизнедеятельности человека имеет и проблема нормализации дисфункциональных нарушений иммунной системы путем повышения общей неспецифической резистентности организма к различным воздействиям, что позволит предупреждать и облегчать как сами заболевания, так и их осложнения, а также ускорять реабилитацию после критических состояний.

Особую значимость проблема поддержания жизнедеятельности людей приобретает в условиях неблагоприятной экологической обстановки и в сочетании с дисбиотическими нарушениями состава симбиотической микрофлоры желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), наблюдаемыми у 90% населения России [1]. Восстановлению и поддержанию здоровой микрофлоры ЖКТ и наиболее сложного и важного ее биотопа - кишечника - в настоящее время уделяется самое пристальное внимание. Естественная физиологическая микрофлора кишечника может быть значительно нарушена вследствие неподходящего или несбалансированного питания, смены климата или воды, при стрессах, развитии хронических заболеваний ЖКТ и других органов, в ходе комплексной терапии с использованием антибиотиков или облучения и ряде других ситуаций. Нормальная микрофлора кишечника имеет чрезвычайно важное значение для макроорганизма, так как составляет основу его микроэкологии и оказывает непосредственное и существенное влияние на его состояние, выполняя ряд жизненно важных функций. К наиболее значимым из них относят обменную и синтетическую функции, функцию детоксикации, участие в процессах пищеварения и формирования естественного иммунитета человека, а также обеспечение колонизационной резистентности. Изменение качественного и/или количественного состава кишечного микробиоценоза приводит к нарушению процессов усвоения нутриентов и минорных компонентов пищи и уменьшению поступления в организм человека целого ряда биологически активных веществ (БАВ), в том числе витаминов и минералов, что проявляется ухудшением процессов его жизнедеятельности. В результате таких нарушений снижается эволюционно созданный барьер колонизационной резистентности макроорганизма, а следовательно, повышается его восприимчивость к возникновению инфекционных заболеваний бактериальной и вирусной природы.

При регулировании функций организма с целью обеспечения его нормальной жизнедеятельности обязательно должен учитываться и тот фактор, что одним из «пусковых» механизмов развития в нем различных нарушений является оксидативный стресс - состояние несоответствия уровня продукции свободных радикалов и емкости антиоксидантных систем, вследствие чего формируются предпосылки для избыточного окисления биосубстратов, модификации и необратимого изменения ферментных систем, нарушения структуры и проницаемости биологических мембран, энергетического дефицита и снижения жизнеспособности клеток [2-7]. Оксидативный стресс приводит к значительному увеличению содержания в тканях и в крови водо- и жирорастворимых прооксидантов, прежде всего активных кислородных метаболитов, продуктов перекисного окисления липидов и оксида азота. Указанные вещества чрезвычайно реактогенны, в связи с чем неконтролируемое увеличение их содержания в организме вызывает цитотоксические и генотоксические эффекты. При этом происходит как окисление полиненасыщенных жирных кислот мембран, так и изменение белков, часть из которых выполняет ферментативную функцию, а также ДНК, что проявляется в увеличении мутагенных эффектов.

В интактной клетке оксидативные процессы находятся под строгим контролем различных механизмов антиоксидантной защиты, обеспечивающих протекание свободнорадикальных реакций на стационарном уровне, необходимом для нормальной жизнедеятельности клетки. Важную роль в защите организма от активных кислородных радикалов играет система ферментативных (супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионзависимые пероксидаза и трансфераза, церулоплазмин, глутатионредуктаза) [8-12] и неферментативных антиоксидантов (тиоловые соединения - глутатион, цистеин, таурин; витамины - аскорбиновая кислота, токоферол, бета-каротин;

биогенные амины - серотонин, гистамин, катехоламины; олигопептиды - карнитин, карнозин, ансерин, эндорфины, энкефалины; полифенолы; фосфолипиды; убихинон), обладающих способностью в определенных условиях подавлять процессы свободнорадикального окисления [13-17].

Воздействие на организм человека разнообразных экстремальных факторов приводит к изменениям в состоянии антиоксидантной системы и если ресурсы данной защитной системы исчерпываются, возникает дисбаланс между антиокислительными и окислительными процессами, что имеет решающее значение в генезе различных форм патологии [18, 19]. Наступивший дисбаланс приводит к существенным нарушениям как ферментативного, так и неферментативного звеньев антиоксидантной защиты. Снижается активность каталазы, супероксиддисмутазы, содержание бета-каротина, токоферола и убихинона в митохондриях гепатоцитов.

Все более широкое использование для обеспечения нормальной жизнедеятельности людей, заботящихся о своем здоровье, находят специализированные продукты питания - БАД, содержащие разнообразные концентраты натуральных или идентичных натуральным синтетических БАВ [20]. Ежедневное длительное применение подобных БАД как самостоятельно, так и в составе пищевых продуктов и напитков обеспечивает поставку организму комплекса необходимых БАВ. Одни из таких продуктов (БАД-нутрицевтики) позволяют быстро восполнить дефицит необходимых организму веществ - витаминов, минеральных солей, макро- и микроэлементов, отдельных аминокислот, пищевых волокон и других в пределах их физиологической нормы. Другие (БАД-парафармацевтики) проявляют выраженное физиологическое действие и оказывают регулирующее и стимулирующее влияние на определенные функции организма.

Необходимость дополнительного приема специальных продуктов связана прежде всего с применением во все возрастающих масштабах при производстве основных продуктов питания высокотехнологичных процессов, вызывающих «очищение» их от многих незаменимых компонентов пищи, в результате чего человек недополучает ряд важных для его нормальной жизнедеятельности БАВ. Продолжительное несбалансированное питание с использованием таких продуктов, содержащих к тому же зачастую токсины (нитраты, нитриты), приводит к нарушению жизненно важных функций организма и может вызвать целый ряд серьезных заболеваний.

Таким образом, вышеуказанные обстоятельства определили необходимость пристального внимания при обеспечении нормальной жизнедеятельности людей как к восстановлению и поддержанию здоровой микрофлоры ЖКТ, так и к регуляции процессов свободно-радикального окисления и неспецифической защиты, а перспективы изыскания БАД с эффективным регулирующим воздействием на организм человека связали с созданием рецептур, которые наряду со своим основным предназначением в качестве дополнительных источников витаминов и минералов смогут поддерживать нормофлору кишечника, активировать неферментативное звено антиоксидантной системы и укреплять иммунную систему организма путем активации факторов общей неспецифической защиты.

Из числа таких средств большой интерес представляет специальная разработка немецких ученых - БАД БИОН 3, включающая комплекс витаминов, минералов и пробиотиков [21]. По составу, механизмам регулирующего воздействия на организм и достигаемым благоприятным эффектам БАД БИОН 3 наиболее близка к заявляемой БАД и принята в качестве БАД-прототипа.

В состав БАД-прототипа, производимого фармацевтической фирмой «Merk Selbstmedikation» (Германия) в твердой дозированной форме (таблетки), включены живые пробиотические молочнокислые бактерии: лактобактерии Lactobacillus gasseri PA 16/8, бифидобактерии Bifidobacterium bifidum MF 20/5 и Bifidobacterium longum SP 07/3 (в 1 таблетке каждой бактерии по 10⁷ КОЕ/г).

Помимо пробиотических бактерий в каждой таблетке БАД-прототипа массой 1050 мг содержатся необходимые организму витамины:

витамин С (аскорбат кальция) - 60 мг

никотинамид - 18 мг

витамин Е (α-токофорола ацетат) - 10 мг

пантотеновая кислота - 6 мг

витамин В₆ (пиридоксина гидрохлорид) - 2 мг

витамин В₂ - 1,6 мг витамин

B₁ (тиамина нитрат) - 1,4 мг

витамин А (ретинола ацетат) - 0,8 мг

витамин D₃ - 200 ME

фолиевая кислота - 200 мкг

биотин - 150 мкг

витамин В₁₂ - 1 мкг,

а также минеральные вещества:

кальций (в виде кальция фосфата) - 90 мг

магний (в виде магния оксида) - 45 мг

железо (в виде железа сульфата) - 5 мг

цинк (в виде цинка оксида) - 5 мг

марганец (в виде марганца сульфата) - 1,2 мг

йод (в виде калия йодида) - 100 мкг

селен (в виде селенита натрия) - 30 мкг

хром (в виде хрома хлорида) - 25 мкг

молибден (в виде молибдата натрия) - 25 мкг.

Благодаря комплексному составу БАД-прототип рекомендуют применять не только как дополнительный источник витаминов и минеральных веществ, но и в качестве средства регуляции кишечной флоры и укрепления иммунитета, что должно способствовать хорошему самочувствию. Однако БАД-прототипу характерен ряд существенных недостатков, ограничивающих возможности ее применения в отечественной клинической практике с целью регулирования естественного равновесия кишечной микрофлоры, улучшения за счет этого физиологического состояния кишечника и обеспечения его функционирования как защитного барьера от патогенной микрофлоры. Прежде всего это продукт зарубежной фармацевтической компании, в связи с чем нельзя утверждать, что входящие в состав БАД-прототипа бактерии близки представителям собственной эндогенной микрофлоры различных отделов кишечника и способны в нем размножаться. Одной из основных причин этого является их недостаточная биосовместимость с резидентными бактериями кишечника. Искусственно введенные в составе БАД-прототипа микроорганизмы, как правило, стойко не приживаются в организме россиян и после прекращения их приема быстро элиминируются из кишечника и замещаются случайной микрофлорой. Соответственно низка вероятность выполнения указанными бактериями, внесенными в макроорганизм извне, своей основной функции (заместительной) и тем более за короткий промежуток времени. Назначают БАД-прототип, как правило, в течение достаточно длительного промежутка времени при приеме по 1 таблетке в день (не менее 4 недель на курс при неоднократном повторении курсов в течение года). В наиболее сложных клинических ситуациях ее рекомендуют принимать в течение всего года.

Кроме того, с целью защиты пробиотических микроорганизмов от воздействия соляной кислоты, желчных кислот и ферментов верхних отделов ЖКТ и обеспечения возможности попадания их в большом количестве живыми в кишечник, где и ожидается их благоприятное воздействие, при производстве БАД-прототипа в твердой дозированной форме в виде таблеток используется особая сложная технология и применяется широкий ассортимент вспомогательных веществ. Данное определяет достаточно высокую стоимость БАД-прототипа (700-800 руб. за 30 таблеток), что при необходимости длительного приема также существенно ограничивает ее доступность для широких слоев россиян.

Как видно, отмеченные недостатки существенно ограничивают возможности использования БАД-прототипа в отечественной клинической практике для поддержания на высоком уровне процессов жизнедеятельности людей, заботящихся о своем здоровье.

Целью изобретения явилось расширение ассортимента биологически активных добавок к пище за счет создания комбинированного витаминно-минерально-пробиотического комплекса, который станет дополнительным источником сбалансированного поступления витаминов и минеральных веществ и будет оказывать эффективное регулирующее воздействие на организм здоровых людей, повышая их физическую и умственную работоспособность, а также восстанавливая жизненно важные защитные функции их организма за счет стимуляции роста и активности естественных представителей симбиотической микрофлоры кишечника, регуляции процессов свободнорадикального окисления, укрепления иммунной системы, не содержащего опасные для здоровья вещества, не обладающего сенсибилизирующим действием, способностью к кумуляции, токсическим влиянием на репродуктивную функцию, мутагенным эффектом и отдаленными негативными последствиями, хорошо переносимого и доступного для широких групп населения.

Указанная цель достигается за счет создания БАД, представляющей комбинированный витаминно-минерально-пробиотический комплекс, обеспечивающей при непосредственном употреблении в пищу рациональное сбалансированное поступление биологически активных веществ, необходимых для поддержания оптимального функционирования организма.

Для этого в состав заявляемой БАД включены: витаминно-минеральная и пробиотическая составляющие, а также носитель.

При формировании качественного и количественного состава заявляемой БАД исходили из того, что основные ее компоненты должны оказывать благоприятное регулирующее воздействие на организм:

- восполнять недостаток витаминов (А, Е, С, Д₃, К₁, B₁, В₂, В₆, B₁₂, никотинамида, фолиевой кислоты, пантотеновой кислоты, биотина, бета-каротина) и минеральных веществ (магния, железа, цинка, марганца, меди, йода, хрома, селена);

- стимулировать рост и активность естественных представителей симбиотической микрофлоры кишечника;

- регулировать процессы свободнорадикального окисления за счет активации неферментативного звена антиоксидантной системы;

- оказывать влияние на факторы неспецифической резистентности и стимулировать функциональную активность иммунокомпетентных клеток для устранения дисфункциональных изменений в иммунной системе.

Существенное отличие от БАД-прототипа заключается в том, что для эффективного нормализующего воздействия на симбиотическую микрофлору кишечника в состав заявляемой БАД включен пробиотический штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ № В-2335, который представлен своими метаболитами, продуцируемыми в процессе культивирования бацилл. Используют указанный штамм бактерий в виде стерилизованной культуральной жидкости, так как именно в ней сконцентрирован уникальный набор БАВ, продуцируемых бациллами в процессе их выращивания. Наличие в заявляемой БАД указанного лактогенного фактора проявляется в селективной стимуляции роста и активности естественной составляющей симбиотической микрофлоры кишечника - лактобацилл, что и обусловливает один из благоприятных эффектов заявляемой БАД, заключающийся в восстановлении естественной эндогенной микрофлоры кишечника.

Ценность заявляемой БАД состоит и в том, что воздействие БАВ, продуцируемых бациллами Bacillus subtilis, приводит к синтезу в организме и секреции в кровь ферментов лизоцима и миелопероксидазы. Данное свидетельствует о влиянии заявляемой БАД на факторы неспецифической резистентности организма и обусловливает ее способность стимулировать функциональную активность иммунокомпетентных клеток.

Способность бацилл Bacillus subtilis повышать фагоцитарную активность макрофагов и тем самым проявлять иммуномодулирующий эффект связана также с синтезом при их глубинном выращивании азотистых оснований и их производных (аденин, гуанин, тимин, урацил, цитозин), которые представляют отдельную группу иммуномодулирующих веществ и содержатся в СКЖ в значительных количествах (таблица 1). Для заявляемой БАД это имеет большое значение, так как указанные БАВ способствуют восстановлению функциональной активности единой макрофагальной системы организма, угнетенной вследствие воздействия различных неблагоприятных факторов, и существенному повышению эффективности неспецифической защиты. Благодаря стимуляции иммунного ответа заявляемая БАД усиливает защитные функции организма.

Витаминно-минеральная составляющая комплекса, включающая витамины, макро- и микроэлементы в дозах, не превышающих суточную потребность, вводится в организм прежде всего для восполнения их дефицита в организме. В условиях повышенных физических, умственных, а также эмоциональных нагрузок потребность организма во многих витаминах и минералах существенно возрастает. В особенности это касается витаминов группы В, необходимых для нормального функционирования центральной нервной системы, а также веществ, участвующих в неферментативном звене антиоксидантной системы защиты организма. Для этого в состав витаминно-минеральной составляющей комплекса введены комбинации витаминов группы В и антиоксидантов.

Витамины группы В (B₁, В₂, В₆, В₁₂, пантотеновая кислота, фолиевая кислота) в составе заявляемой БАД содержатся в дозах, не выходящих за пределы допустимых норм, поэтому даже длительное применение заявляемой БАД не повышает риск возникновения неблагоприятных последствий, возможных при их передозировке.

Сбалансированность состава заявляемой БАД для обеспечения антиоксидантного эффекта достигают за счет того, что:

- используют комплекс водо- и жирорастворимых антиоксидантных витаминов (витамин С и витамины Е, А) для подавления свободнорадикальных реакций в водной среде и липидном бислое клеточных мембран. Причем витамин С используют в виде аскорбиновой кислоты;

- дополнительно используют бета-каротин для восполнения его дефицита в митохондриях гепатоцитов и профилактики нарушений в неферментативном звене антиоксидантной защиты;

- используют витамин А и бета-каротин в сочетании с витамином Е для усиления их антиоксидантного воздействия (обеспечения более активного гашения свободных радикалов в липидном бислое биомембран и предотвращения развития свободнорадикальных процессов) и предохранения от разрушения;

- используют синергическую пару (витамин А с цинком) для обеспечения транспорта витамина-антиоксиданта через слизистую оболочку кишечника посредством цинксодержащего белка и более полного усвоения как витамина А, так и цинка. Скорость высвобождения цинка при этом сравнима со скоростью прохождения биохимической реакции его связывания с белком с образованием цинксодержащего белкового комплекса, без которого невозможно усвоение организмом витамина А. В процесс всасывания включается большая площадь кишечника, за счет чего возрастает биодоступность указанных биологически активных компонентов заявляемой БАД;

- для поддержания и стимуляции активности Se-содержащих антиоксидантных ферментов (глутатионпироксидаз) и ускорения рециклирования их окисленных форм используют соединение 4-валентного селена (Na₂SеO₃) в дозе, позволяющей исключить его токсическое действие и максимально проявить антиоксидантный эффект. Для обеспечения оптимального антиоксидантного эффекта используют селенит натрия в сочетании с витамином Е.

Введение в состав заявляемой БАД меди как дополнительного активного участника кроветворения приводит к тому, что совместно с фолиевой кислотой, витаминами В₁₂, В₂ и С обеспечивается способность вызывать синтез аминокислот (метионина и серина), а в совокупности с железом - стимулировать эритропоэз.

Дополнительное введение в состав заявляемой БАД витамина К₁ способствует нормализации процессов свертывания крови, а также инициации синтеза в организме специального белка (остеокальцина), который в совокупности с витамином Д₃ обеспечивает оптимальные условия для метаболизма костной ткани.

В заявляемой БАД в отличие от БАД-прототипа железо используют не в виде сульфата железа(II), а в виде фумарата железа (FeC₄H₂O₄), в котором содержание элементарного железа составляет 33%. Фумарат железа в отличие от сульфата железа(II) менее растворим в воде, однако хорошо растворяется в разбавленных растворах кислот, таких как желудочный сок. Данное обусловливает достаточную стабильность заявляемой БАД, так как железо в виде фумарата не связывается с белками в верхних отделах ЖКТ, но в то же время хорошо растворяется непосредственно в желудке и поэтому по биодоступности не уступает водорастворимой соли - сульфату железа(II).

Следует также заметить, что сульфат железа(II) во влажной среде постепенно окисляется до сульфата железа(III), что налагает определенные ограничения на процесс производства, хранение и использование БАД-прототипа.

Хром, как и цинк, считается одним из микроэлементов, способствующих долгой и активной жизни. В составе заявляемой БАД микроэлемент хром используют в виде хрома пиколината - продукта воздействия пиколиновой кислоты, представляющей естественное производное аминокислоты триптофана. В сравнении с другими формами трехвалентного хрома хрома пиколинат обеспечивает более высокое усвоение хрома в ЖКТ. Биологическая роль хрома заключается в том, что данный элемент замедляет синтез гликозированных белков, вызывающих старение, участвует в утилизации глюкозы инсулином, необходим для поддержания стабильного уровня глюкозы в крови и правильного углеводного обмена, профилактирует депрессию, способствует снижению аппетита при атипичной депрессии путем уменьшения потребности в жирной и углеводной пище, для чего требуется в крайне небольшом количестве. Введение в организм данного микроэлемента в составе заявляемой БАД вполне восполняет дефицит его получения из пищи.

Необходимо отметить, что формирование качественного и количественного состава заявляемой БАД, а именно ее витаминно-минеральной составляющей, с целью обеспечения рациональной комбинации входящих в нее компонентов выполнено с учетом норм суточной их потребности, приведенных в методических рекомендациях МР 2.3.1.2432-08 «Нормы физиологических потребностей в энергии и пищевых веществах для различных групп населения Российской Федерации».

В качестве носителя в составе заявляемой БАД используют натуральный микропористый силикатный минерал цеолит, основная функция которого связана с иммобилизацией метаболитов, продуцируемых бациллами Bacillus subtilis в процессе их культивирования и сконцентрированных в СКЖ. Целесообразность использования цеолита в качестве компонента заявляемой БАД определена уникальным химическим строением его молекул, когда возникают оптимальные условия для выполнения функций сорбента и носителя метаболитов Bacillus subtilis. Цеолит, не всасываясь в ЖКТ и проходя транзитом, выполняет транспортировку иммобилизованных на нем метаболитов по всему протяжению кишечника. Постепенное высвобождение метаболитов происходит в течение достаточно длительного промежутка времени (до 1 суток).

Немаловажно и то, что благодаря уникальному химическому строению молекул цеолит обладает выраженным свойством избирательной сорбции и обеспечивает селективное связывание и выведение из организма низкомолекулярных токсинов, супероксидных радикалов (H, OH, H₂O₂ и т.д.), тяжелых металлов и радионуклидов, проявляя свойства антиоксиданта и внося вклад в защиту тканей и клеток организма от оксидативного стресса. При этом не происходит прямого взаимодействия с полезными нутриентами (витаминами, аминокислотами, белками и др.) и даже улучшается их биодоступность.

Кроме того, цеолит обладает ионообменными свойствами, так как основной скелет его кристаллической решетки состоит прежде всего из тетраэдр и имеет полости, в которых находятся ионы (натрия, калия, кальция), легко обменивающиеся между собой и с окружающим субстратом. Цеолит, проходя транзитом по всему протяжению ЖКТ, участвует в селективном ионообмене и служит дополнительным источником ряда необходимых организму микроэлементов. Частицы используемого цеолита имеют размеры не более 500 мкм и овальную форму кристалла, что исключает образование микротравм в кишечнике и полностью безопасно.

Ингредиенты подобраны таким образом, что заявляемая БАД представляет собой сбалансированный витаминно-минерально-пробиотический комплекс, а количество их в двух капсулах общей массой 1000 мг составляет:

Ретинола ацетат (витамин А), мг - 0,7;

α-токоферола ацетат (витамин Е), мг - 13,6;

Аскорбиновая кислота (витамин С), мг - 94,5;

Бета-каротин, мг - 3,4;

Холекалициферол (витамин D₃), мкг - 14,5;

Филлохинон (витамин K₁), мкг - 174,0;

Тиамина гидрохлорид (витамин B₁), мг - 1,7;

Рибофлавин (витамин В₂), мг - 2,0;

Пантотеновая кислота (витамин В₅), мг - 6,2;

Пиридоксина гидрохлорид (витамин В₆), мг - 2,2;

Фолиевая кислота (витамин В₉), мкг - 500,1;

Цианокобаламин (витамин В₁₂), мкг - 3,9;

Никотинамид (витамин РР), мг - 21,0;

Биотин (витамин Н), мкг - 54,9;

Магний (в виде магния оксида), мг - 100,0;

Железо (в виде железа фумарата), мг - 10,0;

Цинк (в виде цинка оксида), мг - 7,0;

Марганец (в виде марганца сульфата), мг - 1,4;

Медь (в виде меди сульфата), мг - 0,9;

Йод (в виде йодида калия), мкг - 129,9;

Хром (в виде хрома пиколината), мкг - 24,9;

Селен (в виде селенита натрия), мкг - 35,1;

Цеолит, мг - 195,0.

Стерилизованная высушенная культуральная жидкость, содержащая метаболиты бактерий Bacillus subtilis ВКПМ № В-2335, мг - 5,0.

Возможность достижения цели изобретения доказывается следующими примерами.

Пример 1. Получение заявляемой БАД в капсулированной твердой дозированной форме для перорального введения.

Заявляемая БАД выполнена в капсулированной твердой дозированной форме, что не только существенно упрощает ее использование при пероральном приеме, но и обеспечивает надежную защиту входящих в ее состав компонентов от воздействия факторов, вызывающих их деградацию. Совместимость компонентов в 1 капсуле обеспечена специальной технологией производства заявляемой БАД.

Получают заявляемую БАД вначале в виде порошка, для чего выполняют следующий алгоритм действий. Выращивают микроорганизмы Bacillus subtilis ВКПМ № В-2335 методом глубинного культивирования в биологическом реакторе (ферментере). По окончании процесса культивирования КЖ с микроорганизмами подвергают центрифугированию для отделения и последующего удаления живых клеток микроорганизмов, а затем стерилизуют. Перед стерилизацией КЖ смешивают с цеолитом, предварительно измельченным до частиц размером не более 500 мкм. Полученную смесь подвергают лиофилизации, при которой происходит иммобилизация биологически активных метаболитов продуцента на частицах цеолита. Далее в массу добавляют последовательно витаминный и минеральный премиксы и помещают в резервуар установки для гранулирования с целью смешивания и досушивания. После выгрузки массу просеивают на вибросите и передают на стадию капсулирования. Наполнение твердых желатиновых капсул осуществляют на автомате для наполнения капсул, а обеспыливание - на автомате для полировки капсул.

Для введения компонентов витаминно-минеральной составляющей используют витаминный и минеральный премиксы (ООО «КРАФТ», Санкт-Петербург).

В качестве носителя используют цеолит природный - натуральный микропористый силикатный минерал Холинского месторождения (Бурятия) (ООО «КРАФТ», Санкт-Петербург) [22-25].

Как видно, процесс получения заявляемой БАД в капсулированной твердой дозированной форме для перорального введения отличается простотой, а используемые при этом ингредиенты выпускаются отечественной промышленностью, доступны и недороги.

Пример 2. Оценка безопасности заявляемой БАД.

Безопасность заявляемой БАД оценивали по результатам санитарно-химического и радиологического анализа, санитарно-микробиологических исследований, а также путем определения ряда токсикологических и других характеристик: острой токсичности, хронической токсичности и способности к кумуляции, возможного местно-раздражающего действия на слизистую пищевода, раздражающего действия на кожу и глаза, ингаляционного воздействия пылью, сенсибилизирующего действия, возможных отдаленных последствий.

Санитарно-химический и радиологический анализ.

Подготовку проб проводили по ГОСТ 26929-94 «Сырье и продукты пищевые. Подготовка проб. Минерализация для определения токсичных элементов. Межгосударственный стандарт». Свинец и кадмий определяли по ГОСТ 30178-96 «Сырье и продукты пищевые. Атомно-абсорбционный метод определения токсичных элементов. Межгосударственный стандарт». Мышьяк определяли согласно ГОСТ 26930-86 «Сырье и продукты пищевые. Метод определения мышьяка». Ртуть определяли согласно «Методическим указаниям по обнаружению и определению содержания общей ртути в пищевых продуктах методом беспламенной атомной абсорбции» (№5178-90).

Содержание хлорорганических пестицидов (токсикантов) определяли согласно «Методическим указаниям по определению остаточных количеств хлорорганических пестицидов» (№1766-77) и официальным методам анализа АОАС («Official methods of analysis of the АОАС», 1984, 14th ed., Chapter 29, pp.537-538).

Исследования проводили с использованием весов лабораторных ВЛР-500, газожидкостного хроматографа «Карло Эрба» (модель HRGC 5700), атомно-абсорбционного спектрометра «Перкин-Элмер» (модель 303), гамма-спектрометра «УСК-Гамма-плюс» (Россия), обменных клеток итальянской фирмы «Texnoplast».

Результаты проведенных измерений представлены в таблицах 2 и 3 и свидетельствуют, что в заявляемой БАД содержание токсикантов (хлорорганические пестициды ГХЦТ и ДЦТ), опасных для здоровья веществ (свинец, кадмий, ртуть, мышьяк), радионуклидов (⁹⁰Sr, ¹³⁷Cs) не превышает допустимые уровни, установленные «Едиными санитарно-эпидемиологическими и гигиеническими требованиями к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю)» Таможенного союза ЕврАзЭС (глава II, раздел I, индекс 10.6) (норматив ЕТ (глава II, раздел I, индекс 10.6)) [26]. Такие же пестициды как алдрин и гептахлор в заявляемой композиции не обнаружены.

Санитарно-микробиологические исследования.

Микробиологические исследования проводили в соответствии с требованиями методических указаний МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов» и МУК 2.3.2.721-98 «Определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище», ГОСТ Р 52814-2007 «Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella», ГОСТ Р 52815-2007 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества коагулазоположительных стафилококков и Staphylococcus aureus», ГОСТ Р 52816-2007 «Продукты пищевые. Метод выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)», ГОСТ 10444.8-88 «Продукты пищевые. Метод определения Bacillus cereus», ГОСТ 10444.12-88 «Продукты пищевые. Метод определения дрожжей и плесневых грибов», ГОСТ 30726-2001 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий вида Escherichia coli».

Результаты оценки санитарно-микробиологических показателей безопасности представлены в таблице 4 и свидетельствуют, что по санитарно-микробиологическим показателям безопасности заявляемая БАД соответствует «Единым санитарно-эпидемиологическим и гигиеническим требованиям к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю)» Таможенного союза ЕврАзЭС (глава II, раздел I, индекс 10.6, 10.10) (норматив ЕТ (глава II, раздел I, индекс 10.6, 10.10)).

Исследование острой токсичности.

Заявляемую БАД вводили здоровым беспородным белым крысам обоих полов массой 130-150 г и 180-200 г перорально через металлический атравматический зонд в виде внутрижелудочных водно-крахмальных взвесей, которые готовили ex tempore. Исследования проводили с использованием пробит-анализа по Литчфилду-Уилкоксону в модификации З. Рота [27]. В ходе эксперимента были сформированы 2 группы по 10 животных в каждой: опытная (вводили заявляемую БАД два раза в день в максимально переносимой дозе - 15 г/кг) и контрольная (вводили эквивалентные объемы 1% крахмальной взвеси).

Наблюдение за подопытными животными осуществляли в течение 14 сут с регистрацией показателей: летальность, время гибели животных, симптоматика отравления, результаты ежедневного наблюдения общего состояния и поведения, взвешивания, результаты контроля потребления корма и воды, результаты вскрытия и макроскопического описания погибших и выживших животных в конце исследования (эвтаназия осуществлялась передозировкой эфира), результаты определения массовых коэффициентов внутренних органов.

Введение заявляемой БАД в максимально переносимых дозах не вызывало гибели подопытных животных. Не отмечали и какие-либо другие признаки негативного воздействия заявляемой БАД. В частности, не отмечали какие-либо диспепсические явления. Во все дни наблюдения по общему состоянию и поведению животные опытной и контрольной групп не отличались.

Результаты изучения динамики массы тела подопытных животных, получавших заявляемую БАД, в течение 14 сут наблюдения за ними позволили установить, что динамика массы тела животных опытной и контрольной групп практически не различалась (таблица 5).

Вскрытие животных опытных групп, проведенное через день после острого введения заявляемой БАД, позволило установить, что листки плевры и органы грудной клетки не изменены. Легкие бледно-розовые, воздушные, без уплотнений на ощупь. Размеры сердца в пределах нормы. В полостях сердца содержится небольшое количество жидкой крови. Мышца сердца плотная, коричневой окраски. Желудок заполнен небольшим количеством плотной пищи. Слизистая оболочка блестящая, складчатая, слегка розоватой окраски.

Слизистая тонкого кишечника блестящая, гладкая, розоватой окраски. Размеры и форма печени не различаются у животных опытной и контрольной групп. Поверхность печени гладкая. Капсула тонкая, прозрачная. Рисунок печени на разрезе не изменен. Ткань печени умеренно полнокровна. Почки обычной величины и формы, коричневатого цвета, плотные, с отчетливым корковым и мозговым веществом на разрезе. Щитовидная железа, надпочечники и поджелудочная железа по внешнему виду не различаются. При осмотре гистологических препаратов желудка и паренхиматозных органов различий в структуре между опытной и контрольной группами животных также не обна