Способ размножения гвоздики in vitro

Способ размножения гвоздики in vitro

Реферат

Изобретение относится к области садоводства и может быть использовано для микроразмножения растений гвоздики in vitro.

Известен способ размножения гвоздики in vitro (См.: Mahdiyeh Kharrazi, Hossein Nemati, AH Tehranifar, Abdolreza Bagheri, Ahmad Sharifi In Vitro Culture of Carnation (Dianthus caryophyllus L.) Focusing on the Problem of Vitrification // J. Biol. Environ. Sci. - 2011. - 5(13). - P. 1-6), в котором в качестве первичного экспланта использовали побеги длиной 5-6 см, стерилизовали их в 2%-ном растворе гипохлорита натрия, содержащего Tween 20 (2 капли на 100 мл раствора), в течение 15 мин, затем трижды промывали стерильной дистиллированной водой, после чего отделяли пазушные почки размером 3-5 мм и высаживали их на среду Мурасиге и Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты. Культивировали в световой комнате при температуре 25±2°C и 16-часовом фотопериоде с освещением белыми люминесцентными лампами с интенсивностью 2500-3000 лк.

Недостатком данного способа является небольшой размер получаемых побегов, что усложняет процедуру микроразмножения гвоздики за счет сильной сближенности междоузлий.

Технический результат заключается в упрощении процесса микроразмножения за счет удлинения образующихся побегов при положительном влиянии оптимальной концентрации регулятора роста - Рибав-Экстра.

Технический результат достигается тем, что способ размножения гвоздики in vitro включает отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте. При микроразмножении экспланты укореняют на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л, и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%.

Способ осуществляют следующим образом. Побеги длиной 5-6 см, которые используют в качестве эксплантов, стерилизуют в 2%-ном растворе гипохлорита натрия, содержащего Tween 20 (2 капли на 100 мл раствора), в течение 15 мин, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, после чего отделяют пазушные почки размером 3-5 мм и высаживают их на среду Мурасиге и Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты. От эксплантов отделяют побеги, делят их на сегменты (часть побега, содержащая лист и пазушную почку) и высаживают в пробирки на питательную среду Мурасиге-Скуга, с добавлением Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л. Состав среды, использованный при культивировании микропобегов, является стандартным для микроразмножения растений в культуре in vitro, за исключением подобранной в предварительных опытах концентрации Рибав-Экстра (табл.1). Культивирование осуществляют при постоянном освещении люминесцентными лампами с интенсивностью около 3000 лк и при температуре 25°C (физические условия выращивания близки к оптимальным для культивирования эксплантов растений). При укоренении микропобегов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга с добавлением Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л в течение 4 недель культивирования формируются побеги максимальной длины - 8,5 см (табл.1). В дальнейшем сформировавшиеся побеги с корнями переносят для укоренения в условия ex vitro в грунт, состоящий из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%. После укоренения размноженные растения выращивают обычным способом. В результате использования данного способа клонального микроразмножения гвоздики формировались побеги высотой 8,5 см независимо от сезонности взятия растения-донора.

Таким образом, по сравнению с известным решением предлагаемое позволяет упростить микроразмножение гвоздики за счет удлинения образующихся побегов при положительном влиянии оптимальной концентрации регулятора роста.

Способ размножения гвоздики in vitro, включающий отделение эксплантов, стерилизацию, посадку на питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную сахарозой 30 г/л и регуляторами роста 1 мг/л 6-бензиламинопурина и 0,2 мг/л нафтилуксусной кислоты, микроразмножение путем отделения побегов от эксплантов, их укоренение на питательной среде Мурасиге-Скуга и дальнейшее укоренение в грунте, отличающийся тем, что при микроразмножении экспланты укореняют на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга, дополненную Рибав-Экстра 0,01-0,1 мг/л, и укореняют в условиях ex vitro в грунте, состоящем из смеси дерновой земли - 50%, торфа низинного с перегноем - 30% и песка 20%.