Новые аналоги глюкагона

Новые аналоги глюкагона

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к новым пептидным аналогам глюкагона с улучшенными физической стабильностью и растворимостью, а также с более длительным профилем действия, к применению указанных пептидов в терапии, к способам лечения, включающим введение указанных пептидов пациентам, и к применению указанных пептидов при изготовлении лекарств.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Человеку, а также другим млекопитающим, жизненно необходима строгая регуляция уровней глюкозы в крови. Точно установлено, что для поддержания правильных уровней глюкозы в крови важны два гормона - инсулин и глюкагон. Тогда как инсулин действует в печени и периферических тканях, снижая уровни глюкозы в крови посредством увеличения поглощения глюкозы периферическими тканями и снижения выработки глюкозы печенью, глюкагон в основном оказывает действие на поджелудочную железу и печень, повышая уровни глюкозы в крови посредством активации глюконеогенеза и гликогенолиза. Также сообщалось, что глюкагон усиливает липолиз, индуцирует избыточное образование кетоновых тел и снижает уровни триглицеридов в плазме [Schade and Eaton, Acta Diabetologica, 1977, 14, 62].

Глюкагон является важной составляющей механизма защиты от гипогликемии, и введение низкой дозы глюкагона может предотвратить индуцированную инсулином гипогликемию или улучшить способность восстанавливаться после гипогликемии. Исследования также показали, что глюкагон действительно снижает потребление пищи и массу тела у крыс и людей [Schulman et al. J. Appl. Physiol. 1957, 11, 419]. Следовательно, глюкагон является приемлемой сигнальной молекулой, которая может быть полезна для ограничения потребления пищи. Кроме того, введение более низкой дозы глюкагона может индуцировать чувство насыщения, не влияя на уровень глюкозы в крови. Большое количество людей, страдающих диабетом, в частности, диабетом 2 типа, имеют избыточную массу тела или ожирение. Ожирение представляет собой фактор высокого риска возникновения серьезных или даже смертельных общих заболеваний, и для большинства больных диабетом в высокой степени желательно, чтобы их лечение не вызывало прибавки массы тела.

Однако глюкагон обладает ограниченным спектром возможных применений в лекарственных препаратах из-за быстрого клиренса из кровообращения, с периодом полувыведения, равным примерно 5 мин. Быстрый клиренс терапевтического агента неудобен в случаях, когда желательно поддерживать его высокий уровень в крови в течение продолжительного периода времени, так как при этом будут необходимы повторные введения. В некоторых случаях можно повлиять на профиль высвобождения пептидов, применяя пригодные фармацевтические композиции, но такой подход обладает различными недостатками и не является общеприменимым.

В настоящее время глюкагон доступен в рекомбинантной форме в виде лиофилизированной готовой лекарственной формы с коротким периодом действия, ограниченным несколькими часами, несмотря на то, что максимальный уровень глюкагона достигает значений, намного превышающих уровни эндогенного глюкагона. Следовательно, имеется потребность в химически модифицированных соединениях глюкагона для их доставки на постоянных уровнях таким образом, чтобы достигался более длительный биологический период полувыведения, т.е., в модифицированных пептидах глюкагона с более длительным профилем действия.

Кроме того, глюкагон не обладает стабильностью в течение очень длительного периода времени при его растворении в водном растворе, так как физическая стабильность глюкагона очень низка, и растворы глюкагона образуют гели и фибриллы в течение нескольких часов или дней (Beaven et al. European J. Biochem. 1969, 11, 37-42), в зависимости от чистоты пептида, концентрации соли, значения рН и температуры. Кроме того, у глюкагона человека очень низкая растворимость при рН 3,5-9,5.

Специалистам известны несколько заявок на патент, раскрывающих различные аналоги на основе глюкагона и GLP-1/коагонистов рецептора глюкагона, такие как, например, патенты WO 2008/086086, WO 2008/101017, WO 2007/056362, WO 2008/152403 и WO 96/29342. Некоторые GLP-1/коагонисты рецептора глюкагона, раскрытые в данных патентах, имеют отношение к специфическим мутациям, отличающим их от нативного глюкагона человека. Другими раскрытыми аналогами глюкагона являются пегилированный (см., например, WO 2007/056362) или ацилированный по специфическим положениям нативный глюкагон человека (см., например, WO 96/29342). Был описан глюкагон для профилактики гипогликемии, например, в заявке на патент US 7314859.

Пептиды по настоящему изобретению относятся к новым модифицированным пептидам глюкагона с более длительным профилем действия и, кроме того, делают возможным получение таких модифицированных пептидов глюкагона в составе стабильных фармацевтических композиций при физиологическом значении рН.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым пептидам глюкагона с улучшенными физической стабильностью и растворимостью при нейтральных значениях рН, к применению указанных пептидов в терапии, к способам лечения, включающим введение указанных пептидов пациентам, и к применению указанных пептидов при изготовлении лекарств для применения при лечении диабета, ожирения и сопутствующих им заболеваний и состояний.

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили ряд положений в составе глюкагона человека, присоединение к которым заместителей, содержащих три или более отрицательно заряженных фрагмента, таким образом, что при этом один из указанных отрицательно заряженных фрагментов расположен дистально от липофильного фрагмента, приводит к получению агонистов глюкагона с улучшенными физической стабильностью и растворимостью.

В первом варианте воплощения (в воплощении 1) настоящее изобретение относится к пептиду глюкагона, содержащему SEQ ID 1, до семи аминокислотных замен в указанном пептиде глюкагона и заместитель, включающий три или более отрицательно заряженных фрагмента, при этом один из указанных отрицательно заряженных фрагментов расположен дистально от липофильного фрагмента, и при этом указанный заместитель присоединен в положении эпсилон в составе Lys, в положении дельта в составе Orn или к атому серы в составе Cys, находящихся в одном или нескольких из следующих положений аминокислот в составе указанного пептида глюкагона: Х₁₀, X₁₂, X₁₆, X₁₇, X₁₈, X₂₀, X₂₁, X₂₄, X₂₅, X₂₇, X₂₈, X₂₉ и/или Х₃₀, или к его фармацевтически приемлемой соли, амиду, кислоте или пролекарству.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению соединений по настоящему изобретению в терапии, к фармацевтическим композициям, содержащим соединения по изобретению, и к применению соединений по изобретению при изготовлении лекарств.

ОПИСАНИЕ ФИГУР

На фиг.1 показана зависимость растворимости глюкагона (1, черная линия) и соединения из примера 3 (2, серая линия) от значения рН (тест VIII).

На фиг.2 показано суммарное потребление пищи у крыс после подкожного введения 100 нмоль/кг, 300 нмоль/кг или 1000 нмоль/кг аналога глюкагона из примера 3. Данные = среднее значение±стандартная ошибка среднего, n=5-6.

На фиг.3 показано суммарное потребление пищи у крыс после подкожного введения 300 нмоль/кг аналога глюкагона из примера 4. Данные = среднее значение±стандартная ошибка среднего, n=5-6.

На фиг.4 показано суммарное потребление пищи у крыс после подкожного введения 300 нмоль/кг аналога глюкагона из примера 5. Данные = среднее значение±стандартная ошибка среднего, n=5-6.

На фиг.5 представлена фармакокинетика аналога глюкагона из примера 3 после внутривенного и подкожного введения доз крысам. Период полувыведения (в/в) ~ 8,6±0,5 ч, период полувыведения (п/к) ~ 9,4±0,9 ч (среднее значение±стандартная ошибка среднего).

На фиг.6 показано снижение массы тела при алиментарном ожирении у крыс, которым вводили дозы аналога глюкагона из примера 3 отдельно или в сочетании с аналогом GLP-1 - соединением G3. Пунктирные линии обозначают начало введения доз и снижения доз, соответственно.

На фиг.7 показано изменение массы тела на 14 день при алиментарном ожирении у крыс, которым вводили дозы аналога глюкагона из примера 3 отдельно или в сочетании с аналогом GLP-1 - соединением G3. Отрезками показана значимость различий (однофакторный дисперсионный анализ, поправка Бонферрони).

На фиг.8 показаны профили содержания глюкозы в крови на 11 день введения доз при алиментарном ожирении у крыс, которым вводили аналог глюкагона из примера 3 отдельно или в сочетании с аналогом GLP-1 - соединением G3. Пунктирные линии обозначают введение доз.

На фиг.9 показано потребление пищи при алиментарном ожирении у крыс, которым вводили аналог глюкагона из примера 3 отдельно или в сочетании с аналогом GLP-1 - соединением G3.

На фиг.10 показаны уровни инсулина, измеренные в конце исследования, при алиментарном ожирении у крыс, которым вводили аналог глюкагона из примера 3 отдельно или в сочетании с аналогом GLP-1 - соединением G3. Сравнение групп проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Дуннета, сопоставляя группы с группой, получавшей пищу с высоким содержанием жиров, которой вводили носитель.

На фиг.11 показаны уровни холестерина, измеренные в конце исследования, при алиментарном ожирении у крыс, которым вводили аналог глюкагона из примера 3 отдельно или в сочетании с аналогом GLP-1 - соединением G3. Сравнение групп проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа и апостериорного множественного сравнения Дуннета, сопоставляя группы с группой, получавшей пищу с высоким содержанием жиров, которой вводили носитель.

На фиг.12 представлена растворимость аналогов глюкагона в буферном растворе 10 мМ HEPES (рН7,5). Буферный раствор добавляли к аналогам глюкагона до достижения номинальной концентрации 250 мкМ и измеряли концентрацию через один час, после центрифугирования. Концентрации оценивали с применением хемилюминесцентного, специфичного к азоту, детектора для ВЭЖХ.

На фиг.13 показана стабильность аналогов глюкагона. К аналогам глюкагона добавляли буферный раствор до номинальной концентрации 250 мкМ и через один час получали хроматограмму с помощью сверхэффективной жидкостной хроматографии (UPLC). Растворы хранили в течение 6 дней при 30°С, после чего пробы профильтровали и получили новую хроматограмму с помощью UPLC. Значения площадей под кривыми для пиков (214 нМ) использовали в качестве показателя концентрации пептида в растворе.

На фиг.14 показано время запаздывания (по левой оси Y) и степень извлечения (по правой оси Y), определенные при проведении теста на образование фибрилл с применением ThT (тиофлавина Т). Столбец 1: время запаздывания и степень извлечения для готовой лекарственной формы 1. Столбец 2А: время запаздывания и степень извлечения для аналога глюкагона из примера 3 в составе готовой лекарственной формы 2. Столбец 2В: степень извлечения аналога инсулина G5 в составе готовой лекарственной формы 2. Столбец 3А: время запаздывания и степень извлечения для аналога глюкагона из примера 3 в составе готовой лекарственной формы 3. Столбец 3В: степень извлечения аналога GLP-1 - соединения G5 - в составе готовой лекарственной формы 3. Столбец 4: время запаздывания и степень извлечения для аналога глюкагона из примера 3 в составе готовой лекарственной формы 4 (степень извлечения аналога GLP-1 - соединения G5 - не определяли по техническим причинам). Столбец 5: время запаздывания и степень извлечения для аналога инсулина G5 в составе готовой лекарственной формы 5. Столбец 6: время запаздывания и степень извлечения для аналога GLP-1 - соединения G1 - в составе готовой лекарственной формы 6.

На фиг.15 показаны результаты инкубирования GLP-1, глюкагона и аналога глюкагона из примера 3 с DPP-IV (2 мкг/мл) при 37°С в буферном растворе HEPES. Определенные периоды полужизни составляли 11 мин., 32 мин. и 260 мин., соответственно.

На фиг.16 показано потребление пищи у крыс после разового подкожного введения аналогов глюкагона из примеров 53 и 54 (тест V).

На фиг.17 представлен фармакокинетический профиль аналога глюкагона из примера 51 после разового подкожного или внутривенного введения крысам (тест VII).

На фиг.18 показано потребление пищи у крыс после разового подкожного введения аналогов глюкагона из примера 51 (тест V).

На фиг.19 показана зависимость растворимости нативного глюкагона (черная линия) и соединения из примера 51 (серая линия) от значения рН (тест VIII).

На фиг.20 показана динамика образования фибрилл по флуоресценции ThT.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Среди дополнительных вариантов воплощения настоящего изобретения представлены следующие:

2. Пептид глюкагона по воплощению 1, при этом указанный пептид глюкагона не содержит ни одной или содержит одну, две, три, четыре, пять, шесть или семь замен аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

3. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона не содержит ни одной замены аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

4. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит одну замену аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

5. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит две замены аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

6. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит три замены аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

7. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит четыре замены аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

8. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит пять замен аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

9. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит шесть замен аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

10. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-2, при этом указанный пептид глюкагона содержит семь замен аминокислотных остатков в составе указанного пептида глюкагона.

11. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-10, при этом указанные аминокислотные замены расположены в следующих положениях аминокислот в составе указанного пептида глюкагона: Х₂, Х₄, Х₉, Х₁₀, X₁₂, X₁₆, X₁₇, X₁₈, X₂₀, X₂₁, X₂₄, X₂₅, X₂₇, X₂₈, X₂₉ и/или X₃₀.

12. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-11, при этом указанные аминокислотные замены могут быть расположены в следующих положениях в составе указанного пептида глюкагона:

Х₂ представляет собой Aib или D-Ser;

Х₄ представляет собой D-Phe;

Х₉ представляет собой Glu;

Х₁₀ представляет собой Cys, Lys, Orn или (p)Tyr;

X₁₂ представляет собой Cys, Lys, Orn, lie, His, Gln, Tyr, Leu или Arg;

X₁₆ представляет собой Cys, Glu, Lys или Orn;

X₁₇ представляет собой Cys, Gln, Lys, His или Orn;

X₁₈ представляет собой Cys, Gln, Ala, Lys, His или Orn;

X₂₀ представляет собой Cys, Arg, Lys, Glu, His или Orn;

X₂₁ представляет собой Cys, Orn, Glu, Arg, His или Lys;

X₂₄ представляет собой Cys, Lys, Arg, His, Glu, Asp, Gly, Ser или Orn;

X₂₅ представляет собой Cys, Arg, Lys, His, Glu, Asp, Gly, Phe, Ser, Tyr, (p)Tyr или Orn;

X₂₇ представляет собой Met(O), Val, lie, Leu, Arg, His, Cys, Lys, Glu, Gln или Orn;

X₂₈ представляет собой Cys, Lys, His, Arg, Ser, Thr, Glu, Asp, Ala, Gln или Orn;

X₂₉ представляет собой Cys, Glu, Asp, Lys, His, Arg, Pro или Orn и

Х₃₀ отсутствует или представляет собой Cys, Lys, Arg, Glu, Gly, Pro или Orn.

13. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-12, при этом указанные аминокислотные замены могут быть расположены в следующих положениях в составе указанного пептида глюкагона: Х₄ представляет собой D-Phe, Х₉ представляет собой Glu, X₁₂ представляет собой Arg, X₁₆ представляет собой Lys, X₂₀ представляет собой Lys или Glu, X₂₁ представляет собой Glu, X₂₄ представляет собой Lys или His, X₂₅ представляет собой Arg или Lys, X₂₇ представляет собой Leu, Lys, Glu или Gln, X₂₈ представляет собой Lys или Ser, X₂₉ представляет собой Lys или Pro, Х₃₀ отсутствует или представляет собой Lys или Pro.

14. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-13, где X₁₇ представляет собой Lys, X₁₈ представляет собой Lys, X₂₁ представляет собой Glu, Х₂₄ представляет собой Lys или Оrn и X₂₇ представляет собой Leu.

15. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-14, где Х₁₇ представляет собой Lys, X₁₈ представляет собой Lys, X₂₁ представляет собой Glu и X₂₇ представляет собой Leu.

16. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-15, где X₁₇ представляет собой Lys, X₂₁ представляет собой Glu и Х₂₇ представляет собой Leu.

17. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-16, где X₁₇ представляет собой Lys и X₂₁ представляет собой Glu.

18. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-17, где Х₂ представляет собой Aib или D-Ser.

19. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-18, где Х₄ представляет собой D-Phe.

20. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-19, где Х₉ представляет собой Glu.

21. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-20, где Х₁₀ представляет собой Cys, Lys, Orn или (р)Tyr.

22. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-21, где Х₁₀ представляет собой Cys.

23. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-22, где Х₁₀ представляет собой Lys.

24. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-23, где Х₁₀ представляет собой Orn.

25. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-24, где X₁₂ представляет собой Cys, Lys, Orn, lie, His, Gln, Tyr, Leu или Arg.

26. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-25, где X₁₂ представляет собой Arg.

27. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-26, где X₁₂ представляет собой Cys, Lys или Orn.

28. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-27, где X₁₂ представляет собой Lys или Orn.

29. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-28, где Х₁₂ представляет собой Cys.

30. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-29, где Х₁₂ представляет собой Lys.

31. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-30, где Х₁₂ представляет собой Orn.

32. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-31, где Х₁₆ представляет собой Cys, Lys или Orn.

33. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-32, где Х₁₆ представляет собой Cys, Lys или Orn.

34. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-33, где Х₁₆ представляет собой Lys или Orn.

35. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-34, где X₁₆ представляет собой Lys.

36. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-35, где Х₁₆ представляет собой Cys.

37. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-36, где Х₁₆ представляет собой Orn.

38. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-37, где X₁₇ представляет собой Cys, Gln, Lys, His или Orn.

39. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-38, где X₁₇ представляет собой Lys.

40. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-39, где Х₁₇ представляет собой Cys.

41. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-40, где X₁₇ представляет собой Orn.

42. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-41, где X₁₈ представляет собой Gln, Ala, Lys, His или Orn.

43. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-42, где Х₂₀ представляет собой Cys, Arg, Lys, Glu, His или Orn.

44. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-43, где Х₂₀ представляет собой Lys или Glu.

45. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-44, где X₂₀ представляет собой Lys.

46. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-45, где Х₂₀ представляет собой Glu.

47. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-46, где Х₂₀ представляет собой Cys.

48. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-47, где Х₂₀ представляет собой Orn.

49. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-48, где X₂₁ представляет собой Cys, Orn, Glu, Arg, His или Lys.

50. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-49, где X₂₁ представляет собой Glu или Lys.

51. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-50, где X₂₁ представляет собой Glu.

52. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-51, где X₂₁ представляет собой Lys.

53. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-52, где Х₂₁ представляет собой Cys.

54. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-53, где X₂₁ представляет собой Orn.

55. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-54, где Х₂₄ представляет собой Cys, Lys, Arg, His, Glu, Asp, Gly, Ser или Orn.

56. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-55, где Х₂₄ представляет собой Cys, Lys или Orn.

57. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-56, где Х₂₄ представляет собой Lys или Orn.

58. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-57, где Х₂₄ представляет собой Lys или His.

59. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-58, где Х₂₄ представляет собой Lys.

60. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-59, где Х₂₄ представляет собой His.

61. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-60, где Х₂₄ представляет собой Cys.

62. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-61, где Х24 представляет собой Orn.

63. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-62, где Х₂₅ представляет собой Arg, Lys, His, Glu, Asp, Gly, Phe, Ser, Tyr, (p)Tyr или Orn.

64. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-63, где X₂₅ представляет собой His, Lys, lie, Leu, Ala, Met, Cys, Asn, Val, Ser, Gln, Asp, Glu, Thr или (p)Tyr.

65. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-64, где X₂₅ представляет собой His, Arg, Lys или (p)Tyr.

66. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-65, где Х₂₅ представляет собой Arg или Lys.

67. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-66, где Х₂₅ представляет собой Arg.

68. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-67, где Х₂₅ представляет собой Lys.

69. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-68, где Х₂₅ представляет собой Cys.

70. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-69, где Х₂₅ представляет собой От.

71. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-70, где Х₂₇ представляет собой Cys, Met(O), Val, lie, Leu, Arg, His, Lys, Glu, Gln или Orn

72. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-71, где Х₂₇ представляет собой Leu, Lys, Glu или Gln.

73. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-72, где Х₂₇ представляет собой Leu.

74. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-73, где Х₂₇ представляет собой Lys.

75. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-74, где X₂₇ представляет собой Glu.

76. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-75, где Х₂₇ представляет собой Gln.

77. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-76, где Х₂₇ представляет собой Cys, Lys или Orn.

78. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-77, где Х₂₇ представляет собой Lys или Orn.

79. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-78, где Х₂₇ представляет собой Cys.

80. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-79, где Х₂₇ представляет собой Orn.

81. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-80, где Х₂₈ представляет собой Cys, Lys, His, Arg, Ser, Thr, Glu, Asp, Ala, Gln или Orn.

82. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-81, где Х₂₈ представляет собой Lys или Ser.

83. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-82, где Х₂₈ представляет собой Cys, Lys или Orn.

84. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-83, где X₂₈ представляет собой Lys или Orn.

85. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-84, где Х₂₈ представляет собой Cys.

86. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-85, где Х₂₈ представляет собой Orn.

87. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-86, где Х₂₈ представляет собой Lys.

88. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-87, где Х₂₉ представляет собой Cys, Lys или Orn.

89. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-88, где Х₂₉ представляет собой Lys или Orn.

90. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-89, где Х₂₉ представляет собой Orn.

91. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-90, где Х₂₉ представляет собой Lys или Pro.

92. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-91, где Х₂₉ представляет собой Lys.

93. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-92, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Cys, Lys, Arg, Glu, Gly, Pro или Orn.

94. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-93, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Cys, Lys или Orn.

95. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-94, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Lys или Orn.

96. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-95, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Orn.

97. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-96, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Cys.

98. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-97, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Lys или Pro.

99. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-98, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Lys.

100. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-99, где Х₃₀ отсутствует или представляет собой Pro.

101. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-100, при этом указанный заместитель имеет формулу II:

,

где

Z₁ представляет собой структуру согласно одной из формул IIa, IIb или IIc;

где n в формуле IIa равно 6-20,

m в формуле IIc равно 5-11;

группа СООН в формуле Не может быть присоединена в положении 2, 3 или 4 в составе фенильного кольца, символ * в формулах IIa, IIb и IIc указывает место присоединения к атому азота в Z₂; если Z₂ отсутствует, Z₁ присоединен к атому азота на Z₃ в месте, указанном символом *, и если Z₂ и Z₃ отсутствуют, Z₁ присоединен к атому азота на Z₄, в месте, указанном символом *;

Z₂ отсутствует или представляет собой структуру согласно одной из формул IId, IIc, IIf, IIg, IIh, IIi, IIj или IIk:

где каждый аминокислотный фрагмент независимо обладает стереохимией L или D;

где Z₂ присоединен через атом углерода, обозначенный *, к атому азота в составе Z₃, обозначенному *;

если Z₃ отсутствует, Z₂ присоединен через атом углерода, обозначенный *, к атому азота в составе Z₄ обозначенному *;

и если Z₃ и Z₄ отсутствуют, Z₂, присоединен через атом углерода, обозначенный *, к эпсилон-атому азота в составе лизина или к дельта-атому азота в составе орнитина в пептиде глюкагона.

Z₃ отсутствует или представляет собой структуру согласно одной из формул IIm, IIn, IIo или IIp:

Z₃ присоединен через атом углерода в составе Z₃, обозначенный символом *, к атому азота в составе Z₄, обозначенному символом *, если Z₄ отсутствует, Z₃ присоединен через атом углерода, обозначенный *, к эпсилон-атому азота в составе лизина или к дельта-атому азота в составе орнитина в пептиде глюкагона;

Z₄ отсутствует или представляет собой структуру согласно одной из формул IId, IIe, IIf, IIg, IIh, Iii, IIj или IIk, где каждый аминокислотный фрагмент независимо является либо L-, либо D-формой, при этом Z₄ присоединен через атом углерода, обозначенный *, к эпсилон-атому азота в составе лизина или к дельта-атому азота в составе орнитина в пептиде глюкагона.

102. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-101, при этом указанный заместитель имеет формулу II:

,

где:

Z₁ представляет собой структуру согласно одной из формул IIa, IIb или IIc:

где n в формуле IIа равно 6-20,

Z₂ отсутствует или представляет собой структуру согласно одной из формул IId, IIc, IIf, IIg, IIh, IIi, IIj или IIk:

где каждый аминокислотный фрагмент независимо обладает стереохимией L или D.

Z₃ отсутствует или представляет собой структуру согласно одной из формул IIm, IIn, IIо или IIp:

Z₄ отсутствует или представляет собой структуру согласно одной из формул IId, IIc, IIf, IIg, IIh, Iii, IIj или IIk;

где каждый аминокислотный фрагмент независимо обладает стереохимией L или D.

103. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-102, где структуры, представленные формулами IIa-IIp, обладают стереохимией L.

104. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-103, где структуры, представленные формулами IIa-IIp, обладают стереохимией D.

105. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-104, где Z₂ в составе указанного заместителя формулы II отсутствует, если присутствует Z₄.

106. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-105, где Z₄ в составе указанного заместителя формулы II отсутствует, если присутствует Z₂.

107. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-106, где указанный заместитель представляет собой структуру в соответствии с одной из формул IIIa, IIIb, IIIc, IIId, IIIe, IIIf, IIIg, IIIh, IIIi, IIIj, IIIk, IIIl, IIIm, IIIn или IIIo:

или

108. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-107, где Z₄ в составе указанного заместителя отсутствует.

109. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-108, где Z₃ и Z₄ в составе указанного заместителя отсутствуют.

110. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-109, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены отрицательно заряженными фрагментами, такими как γGlu, Glu и/или Asp.

111. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-110, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены указанными фрагментами в количестве до десяти штук.

112. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-111, где Z₂ и Z₄, в составе указанного заместителя независимо представлены тремя указанными фрагментами.

113. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-112, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены четырьмя указанными фрагментами.

114. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-113, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены пятью указанными фрагментами.

115. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-114, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены фрагментами Glu и/или γGlu.

116. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-115, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены γGlu, γGlu-Glu, γGlu-Glu-Glu, γGlu-Glu-Glu-Glu, γGlu-Glu-Glu-Glu-Glu.

117. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-116, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены фрагментами Glu и/или Asp.

118. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-117, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены фрагментами γGlu и/или Asp.

119. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-118, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены фрагментами Asp.

120. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-119, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены Asp, Asp-Asp, Asp-Asp-Asp или Asp-Asp-Asp-Asp.

121. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-120, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены фрагментами Glu.

122. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-121, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены Glu, Glu-Glu, Glu-Glu-Glu, Glu-Glu-Glu-Glu, Glu-Glu-Glu-Glu-Glu.

123. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-122, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены фрагментами γGlu.

124. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-123, где Z₂ и Z₄ в составе указанного заместителя независимо представлены γGlu, γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu-γGlu, γGlu-γGlu-γGlu-γGlu-γGlu.

125. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-124, при этом указанный заместитель содержит липофильный остаток.

126. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-125, при этом указанный заместитель содержит алкильную группу с линейной цепочкой или разветвленную алкильную группу.

127. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-126, при этом указанный заместитель нековалентно связывается с альбумином.

128. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-127, при этом указанный заместитель отрицательно заряжен при физиологических значениях рН.

Дополнительные варианты воплощения настоящего изобретения относятся к следующему:

129. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-128, при этом указанный заместитель присоединен в положении эпсилон в составе Lys, в положении дельта в составе Orn или к атому серы в составе Cys.

130. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-129, при этом указанный заместитель присоединен в положении эпсилон в составе Lys или в положении дельта в составе Orn.

131. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-130, при этом указанный заместитель присоединен в положении эпсилон в составе Lys.

132. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-131, при этом указанный заместитель присоединен в положении дельта в составе Orn.

133. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-132, при этом указанный заместитель присоединен к атому серы в составе Cys.

134. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-133, при этом указанный заместитель присоединен к одному или нескольким из следующих положений аминокислот в составе указанного пептида глюкагона: Х₁₀, X₁₂, X₁₆, X₁₇, X₁₈, X₂₀, X₂₁, X₂₄, X₂₅, X₂₇, X₂₈, X₂₉ и/или X₃₀.

135. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-134, при этом указанный заместитель находится в одном или нескольких из следующих положений аминокислот в составе указанного пептида глюкагона: X₁₂, X₁₆, X₂₀, Х₂₄, X₂₅, X₂₈, X₂₉ и/или Х₃₀.

136. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-135, при этом указанный заместитель находится в одном или нескольких из следующих положений аминокислот в составе указанного пептида глюкагона: X₁₆, X₂₄ и/или Х₂₈.

137. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-136, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты X₁₂ в составе указанного пептида глюкагона.

138. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-137, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты X₁₆ в составе указанного пептида глюкагона.

139. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-138, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты X₂₀ в составе указанного пептида глюкагона.

140. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-139, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты X₂₄ в составе указанного пептида глюкагона.

141. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-140, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты X₂₈ в составе указанного пептида глюкагона.

142. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-141, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты Х₂₉ в составе указанного пептида глюкагона.

143. Пептид глюкагона по любому из воплощений 1-142, при этом указанный заместитель находится в положении аминокислоты Х₃₀ в составе указанного пептида глюкагона.

144. Пептид глюкагона по любо