2560978 - Протеазы, содержащие одну или несколько комбинируемых мутаций

Протеазы, содержащие одну или несколько комбинируемых мутаций

Иллюстрации

Показать все

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенный вариант субтилизина Bacillus, где указанный вариант субтилизина является зрелой формой, обладающей активностью субтилизина и содержащий замену в положениях 118 и 213, где нумерация положений соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN′ В. Amyloliquefaciens с последовательностью SEQ ID NO: 1, где указанный субтилизин Bacillus представляет собой FNA, и где указанный вариант субтилизина дополнительно содержит комбинации замен. Изобретение относится также к способу очистки ткани с использованием указанного варианта субтилизина. Изобретение позволяет получать варианты субтилизина с увеличенным уровнем экспрессии белка. 5 н.п. ф-лы, 5 ил., 4 табл. 4 пр.

Реферат

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США № 61/113545, поданной 11 ноября 2008 г., и предварительной заявки на патент США № 61/218802, поданной 19 июня 2009 г., которые включены в настоящее описание изобретения в качестве ссылки.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к сконструированным вариантам протеаз. Варианты протеаз, в частности, включают комбинируемые мутации в выбранных положениях на поверхности фермента, которые влияют на заряд и/или гидрофобность фермента, усиливая по меньшей мере одно требуемое свойство полученного вариантного фермента в выбранном применении. Настоящее изобретение относится к композициям, содержащим варианты протеаз, и к способам их применения.

Уровень техники

Сериновые протеазы представляют собой подгруппу карбонилгидролаз, содержащих разнообразный класс ферментов, обладающих широким диапазоном специфичностей и биологических функций. Было выполнено много исследований субтилизинов главным образом в связи с возможностью их применения в качестве очищающих средств и пищевых добавок. Дополнительные исследования были сфокусированы на неблагоприятных окружающих условиях (например, воздействие оксидантов, хелатообразователей, экстремальных температур и/или значений рН), которые могут снизить функциональность указанных ферментов в разных применениях. Тем не менее, в данной области по-прежнему сохраняется потребность в ферментных системах, устойчивых к воздействию неблагоприятных условий и сохраняющих или обладающих более высокой активностью по сравнению с ферментами, известными в настоящее время в данной области.

Сущность изобретения

В одном варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену в двух или более положениях, выбираемых из положений 24, 45, 101, 109, 118, 213 и 217, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену в двух или более положениях, выбираемых из положений 24, 45, 101, 109, 118, 213 и 217, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, при этом указанный вариант имеет относительный индекс продуктивности уровня экспрессии белка (ТСА PI) и/или индекс продуктивности активности по удалению пятен (BMI PI), который выше или равен 0,5.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, R45Q, R45E, R45L, S101Q, S101E, S101L, S101R, Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E, G118L, G118R, T213Q, T213L, T213R, T213E, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, A45Q, A45E, A45L, A45R, S101Q, S101E, S101L, S101R, N109Q, N109E, N109L, N109R, K213Q, K213E, K213L, K213R, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего комбинацию замен, выбираемых из положений S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S101Q-G118Q-T213Q, G118Q-T213Q, S24E-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E, S24L-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213L, S24R-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E, S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217Q и S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену T213Q, нумерация которой соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего комбинацию замен, выбираемых из положений S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, N109Q-N118Q-K213Q, N118Q-K213Q, S24E-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E, S24L-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213L, S24R-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E, S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217Q и S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217E, которые соответствуют положениям субтилизина BPN' SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения вариант протеазы является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену K213Q, нумерация которой соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

Другой вариант осуществления изобретения относится к выделенной нуклеиновой кислоте, кодирующей любые вышеуказанные варианты протеаз.

Другой вариант осуществления изобретения относится к экспрессирующему вектору, содержащему выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую любые вышеуказанные варианты протеаз.

Другой вариант осуществления изобретения относится к клетке-хозяину, содержащей экспрессирующий вектор, который в свою очередь содержит выделенную нуклеиновую кислоту, кодирующую любые вышеуказанные варианты протеаз.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего комбинацию замен, выбираемых из положений S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S101Q-G118Q-T213Q, G118Q-T213Q, S24E-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E, S24L-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213L, S24R-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E, S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217Q и S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену T213Q, нумерация которой соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

Другой вариант осуществления изобретения относится к очищающей композиции, содержащей по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего комбинацию замен, выбираемых из положений S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, N109Q-N118Q-K213Q, N118Q-K213Q, S24E-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E, S24L-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213L, S24R-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E, S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217Q и S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217E, которые соответствуют положениям субтилизина BPN' SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену K213Q, нумерация которой соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену в двух или более положениях, выбираемых из положений 24, 45, 101, 109, 118, 213 и 217, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, целлюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, пектат-лиаз, маннаназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену в двух или более положениях, выбираемых из положений 24, 45, 101, 109, 118, 213 и 217, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, при этом указанный вариант имеет относительный индекс продуктивности уровня экспрессии белка (ТСА PI) и/или индекс продуктивности активности по удалению пятен (BMI PI), который выше или равен 0,5, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, R45Q, R45E, R45L, S101Q, S101E, S101L, S101R, Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E, G118L, G118R, T213Q, T213L, T213R, T213E, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, R45Q, R45E, R45L, S101Q, S101E, S101L, S101R, Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E, G118L, G118R, T213Q, T213L, T213R, T213E, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, при этом указанный вариант имеет относительный индекс продуктивности уровня экспрессии белка (ТСА PI) и/или индекс продуктивности активности по удалению пятен (BMI PI), который выше или равен 0,5, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, A45Q, A45E, A45L, A45R, S101Q, S101E, S101L, S101R, N109Q, N109E, N109L, N109R, K213Q, K213E, K213L, K213R, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, при этом указанный вариант имеет относительный индекс продуктивности уровня экспрессии белка (ТСА PI) и/или индекс продуктивности активности по удалению пятен (BMI PI), который выше или равен 0,5, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего комбинацию замен, выбираемых из положений S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S101Q-G118Q-T213Q, G118Q-T213Q, S24E-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101Q-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118Q-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213Q, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E, S24L-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101Q-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118Q-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213Q, S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213L, S24R-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101Q-G118Q-T213Q, S24R-S101R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118Q-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213Q, S24R-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101R-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109R-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118R-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213R, S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E, S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217Q и S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену T213Q, нумерация которой соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего комбинацию замен, выбираемых из положений S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, N109Q-N118Q-K213Q, N118Q-K213Q, S24E-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109Q-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118Q-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213Q, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E, S24L-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109Q-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118Q-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213Q, S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213L, S24R-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109Q-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118Q-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213Q, S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101R-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109R-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118R-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213R, S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E, S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217Q и S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217E, которые соответствуют положениям субтилизина BPN' SEQ ID NO:1, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В других вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере один вариант протеазы, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина FNA Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену K213Q, нумерация которой соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, и очищающая композиция дополнительно содержит один или несколько дополнительных ферментов или производных ферментов. Дополнительные ферменты или производные ферментов выбирают из гемицеллюлаз, пероксидаз, протеаз, металлопротеаз, целлюлаз, ксиланаз, липаз, фосфолипаз, эстераз, пергидролаз, кутиназ, пектиназ, кератиназ, редуктаз, оксидаз, фенолоксидаз, липоксигеназ, лигниназ, пуллуланаз, танназ, пентозаназ, маланаз, β-глюканаз, арабинозидаз, гиалуронидаз, хондроитиназ, лакказ и амилаз или их смесей. В некоторых вариантах осуществления изобретения очищающая композиция является детергентом. В некоторых вариантах осуществления изобретения детергент является детергентом для мытья посуды. В других вариантах осуществления изобретения детергент является стиральным детергентом, например, сверхсильным жидким или сухим стиральным детергентом. В альтернативных вариантах осуществления изобретения очищающая композиция дополнительно содержит по меньшей мере один стабилизатор.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере 0,0001 мас.% по меньшей мере одного варианта субтилизина, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего замену в двух или более положениях, выбираемых из положений 24, 45, 101, 109, 118, 213 и 217, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, при этом указанный вариант имеет относительный индекс продуктивности уровня экспрессии белка (ТСА PI) и/или индекс продуктивности активности по удалению пятен (BMI PI), который выше или равен 0,5.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере 0,0001 мас.% по меньшей мере одного варианта субтилизина, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, R45Q, R45E, R45L, S101Q, S101E, S101L, S101R, Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E, G118L, G118R, T213Q, T213L, T213R, T213E, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1.

В другом варианте осуществления изобретения очищающая композиция содержит по меньшей мере 0,0001 мас.% по меньшей мере одного варианта субтилизина, который является зрелой формой выделенного варианта субтилизина GG36 Bacillus, обладающего протеолитической активностью и включающего две или более замены в двух или более положениях, выбираемых из S24Q, S24E, S24L, S24R, R45Q, R45E, R45L, S101Q, S101E, S101L, S101R, Q109E, Q109L, Q109R, G118Q, G118E, G118L, G118R, T213Q, T213L, T213R, T213E, L217Q и L217E, нумерация которых соответствует аминокислотной последовательности субтилизина BPN' B. amyloliquefaciens, представленной как SEQ ID NO:1, при этом указанный вариант имеет относительный индекс продуктивности уровня экспрессии белка (ТСА PI) и/или индекс продуктивности активности по удалению пятен (BMI PI), который выше или равен 0,5.

Протеазы, содержащие одну или несколько комбинируемых мутаций

Патент 2560978