Ветеринарный противовирусный препарат

Ветеринарный противовирусный препарат

Реферат

Изобретение относится к медицине, ветеринарии, фармакологии и химико-фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтическим препаратам, которые используются при лечении вирусных инфекций разной этиологии.

Известен противовирусный препарат, содержащий в качестве активного вещества морфолиний 2-(5-метил-1,2,4-триазол-3-илтио)ацетат (см. п. Украины №1988 от 22.12.86 г., опубл. 20.12.94 г., М. Кл.⁴ C07D 413/12, А61К 31/41, А61К 31/535). Торговое наименование морфолиния 2-(5-метил-1,2,4-триазол-3-илтио)ацетата - тиотриазолин.

Известный препарат хотя и проявляет противовирусную активность, однако ее величина недостаточно высока. Кроме того, увеличение дозы тиотриазолина приводит к снижению функций иммунной системы организма и снижению его резистентности.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к заявляемому препарату является ветеринарный противовирусный препарат (см. п. Украины №36330 от 22.04.2008 г., опубл. 27.10.2008 г., М. Кл. C07D 249/00, A61K 31/41), содержащий в качестве активного вещества пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат.

Известный препарат проявляет противовирусную активность и характеризуется низкой токсичностью. Использование известного препарата снижает биологическую активность вируса инфекционного бронхита птицы (ВИБП), штамм H-120, и вируса энцефаломиелита птицы (ВЭМ), штамм Calnek 1143.

Пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат проявляет также и иммунностимулирующую активность (см. п. Украины №87184 от 02.08.2007 г., опубл. 25.06.2009 г., М. Кл. C07D 249/12).

Известный препарат хотя и проявляет противовирусную и иммунностимулирующую активности, однако их величина недостаточно высока.

В основу изобретения поставлена задача усовершенствования ветеринарного противовирусного препарата, в котором за счет введения новых ингредиентов и новых соотношений ингредиентов обеспечивается повышение противовирусной и иммунностимулирующей активности препарата, за счет чего достигается повышение стойкости организма к заболеваниям, вызванным герпесвирусами, коронавирусами, ортомиксовирусами, парамиксовирусами, поксивирусами, тогавирусами, и облегчается течение заболеваний, вызванных аденовирусами, калицивирусами и парвовирусами.

Поставленная задача решается тем, что в известном ветеринарном противовирусном препарате, содержащем в качестве активного вещества пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, новым, в соответствии с заявляемым изобретением, является то, что препарат дополнительно содержит сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты в массовом соотношении 1:(0,03-0,05).

Новым также является то, что в качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты препарат содержит метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.

Новым также является то, что препарат изготавливается в лекарственной форме порошка, или стерильного раствора, или мази.

Новым также является то, что при изготовлении препарата в лекарственной форме стерильного раствора препарат содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и воду очищенную при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Вода очищенная	Остальное

Новым также является то, что при изготовлении препарата в лекарственной форме мази препарат содержит пиперединий 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и липофильную, или жировую, или гидрофильную основу мази при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Основа мази	79,0-98,07

Между совокупностью существенных признаков заявляемого изобретения и достигаемым результатом существует следующая причинно-следственная связь.

Дополнительное введение в состав противовирусного препарата сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты в заявляемом массовом соотношении обеспечивает повышение противовирусной и иммунностимулирующей активности заявляемого препарата, за счет чего достигается повышение стойкости организма к заболеваниям, вызванным герпесвирусами, коронавирусами, ортомиксовирусами, парамиксовирусами, поксивирусами, тогавирусами, и облегчается течение заболеваний, вызванных аденовирусами, калицивирусами и парвовирусами.

Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты не проявляют противовирусной и иммунностимулирующей активности, а обычно используются как консерванты в растворах лекарственных препаратов. Однако установлено, что они активируют противовирусное и иммунностимулирующее действие пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата. Поэтому заявляемый препарат, содержащий указанные ингредиенты в заявляемом соотношении, характеризуется противовирусной и иммунностимулирующей активностями, более высокими по сравнению с только пиперидинием 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетатом (прототипом).

Заявляемое соотношение ингредиентов в препарате является оптимальным и установлено экспериментально.

При снижении доли сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты ниже заявляемой снижается противовирусная и иммунностимулирующая активности препарата.

Повышение доли сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты выше заявляемой нецелесообразно, поскольку не приводит к дальнейшему повышению противовирусной и иммунностимулирующей активности препарата.

В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты препарат может содержать метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.

Препарат может быть изготовлен в лекарственной форме порошка, или стерильного раствора, или мази.

При изготовлении препарата в лекарственной форме стерильного раствора он содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и воду очищенную при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойно1 кислоты	0,03-1,0
Вода очищенная	Остальное

Заявляемое соотношение ингредиентов в составе стерильного раствора обеспечивает оптимальное соотношение пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата и сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты - 1:(0,03-0,05), а также оптимальное их содержание в растворе, что обеспечивает достижение заявляемого терапевтического эффекта. Причем при изготовлении заявляемого стерильного раствора не требуется дополнительное использование консервантов, поскольку сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты обладают указанными свойствами.

При изготовления препарата в лекарственной форме мази он содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и липофильную, или жировую, или гидрофильную основу мази при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Основа мази	79,0-98,07

В качестве основы мази могут быть использованы, например, составы, содержащие масло растительное, глицерол, эмульгатор №1, моноглицериды дистиллированные, или ланолин, или вазелин.

Заявляемое соотношение ингредиентов в составе мази обеспечивает оптимальное соотношение пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата и сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты - 1:(0,03-0,05), а также оптимальное их содержание в составе мази, что обеспечивает достижение заявляемого терапевтического эффекта при одновременном обеспечении легкости нанесения и равномерности распределения мази на коже и слизистой оболочке.

Сущность изобретения поясняется нижеприведенными примерами практического апробирования и промышленной реализации изобретения.

Пример 1. При использовании заявляемого препарата в форме порошка активные ингредиенты - пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат и сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты смешивают в заявляемом соотношении 1:(0,03-0,05). В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты могут быть использованы метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.

Полученный порошок фасуют по 5, 10, 30, 100 г и используют, добавляя в корм животным, исходя из соотношения 30 г на 1 тонну корма.

Порошок эффективен для лечения и профилактики вирусных заболеваний (классическая чума, африканская чума, цирковирусная инфекция, парвовирусная инфекция, грипп, везикулярная болезнь, вирусный гастроэнтерит + эшерихиоз), в условиях угрозы вспышки инфекций птицы, вызываемых РНК- и ДНК-содержащими вирусами (болезнь Марека, инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, оспа, грипп, энтеровирусами водоплавающей птицы), а также эффективен для активации общей резистентности, повышения сохранности, роста и развития поголовья молодняка животных, усиления иммунного ответа на вакцины и предотвращения послеоперационных осложнений.

Пример 2. При использовании заявляемого препарата в форме стерильного раствора растворяют в очищенной воде активные ингредиенты - пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат и сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты при следующем соотношении ингредиентов, масс.%

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Вода очищенная	Остальное

В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты могут быть использованы метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.

Полученный раствор разливают в ампулы по 1-10 мл, запаивают их и стерилизуют. Получают 1-20% (по содержанию пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата) стерильный раствор, предназначенный для перорального использования. Растворы стабильны к влиянию разных факторов окружающей среды. Полученные растворы используют, добавляя в воду для питья животным из расчета 1 мл 1%-го раствора на 2 литра воды для питья. Лекарственная форма предназначена для лечения и профилактики вирусных заболеваний (классическая чума, африканская чума, цирковирусная инфекция, парвовирусная инфекция, грипп, везикулярная болезнь, вирусный гастроэнтерит + эшерихиоз), в условиях угрозы вспышки инфекций птицы, вызываемых РНК- и ДНК-содержащими вирусами (болезнь Марека, инфекционный ларинготрахеит, инфекционный бронхит, оспа, грипп, энтеровирусами водоплавающей птицы), а также эффективна для активации общей резистентности, повышения сохранности, роста и развития поголовья молодняка животных, усиления иммунного ответа на вакцины и предотвращения послеоперационных осложнений.

Пример 3. При использовании заявляемого препарата в форме мази активные ингредиенты - пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат и сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты смешивают с липофильной, или жировой, или гидрофильной основой мази при следующем соотношении ингредиентов, масс.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Основа мази	79,0-98,07

В качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты могут быть использованы метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.

В качестве основы мази могут быть использованы, например, составы, содержащие масло растительное, глицерол, эмульгатор №1, моноглицериды дистиллированные, или ланолин, или вазелин.

Полученную гомогенную 1-20% (по содержанию пиперидиния 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетата) мазь расфасовывают в тубы и бушоны. Мазь эффективна для лечения инфекционных осложнений в послеоперационном периоде и для сопутствующей терапии раневых поражений кожных покровов животных.

Оценка противовирусной активности заявленного препарата.

Противовирусную активность заявляемого препарата определяли в отношении эталонных штаммов: штаммов вирусов вазекулярного стоматита, чумы собак и инфекционного энцефаломиелита кур. Проявление активности препарата в отношении эталонных штаммов означает и проявление активности в отношении других штаммов.

В таблице 1 приведены результаты определения противовирусной активности заявляемого препарата при его использовании одновременно с инфицированном клеточной культуры HEP-2 вирусом вазекулярного стоматита (ВВС) и действием в течение всего периода репродукции вируса (в часах) в сравнении с аналогичными испытаниями препарата по прототипу и тиотриазолина.

Таблица 1
Часы	ВВС, lg	BBC + препарат по прототипу, lg	Δ lg	BBC + тиотриазолин, lg	Δ lg	BBC + заявляемый препарат, lg	Δ lg
24	2,5	1,5	1,0	1,0	1,5	1,7	0,8
31	3,5	2,0	1,5	1,0	2,5	2,2	1,3
48	5,0	3,5	1,5	4,0	1,0	3,3	1,7
72	>10	3,5	6,5	6,5	3,5	3,2	6,8
120	>10	>10	0	>10	0	0	>10

Из таблицы 1 видно, что заявляемый препарат снижает инфекционную активность вируса вазекулярного стоматита во всех временных диапазонах по сравнению с препаратом по прототипу и тиотриазолином при аналогичном режиме их использования, что подтверждает более высокую противовирусную активность заявляемого препарата.

Оценка иммуностимулирующей активности заявленного препарата.

Оценку иммуностимулирующей активности заявляемого препарата осуществляли в сравнении с препаратом по прототипу (пиперидинием 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетатом) и аналогом (тиотриазолином) путем исследования влияния препаратов на показатели крови в разные временные режимы отбора крови (через каждые три часа после введения исследуемых препаратов). Результаты исследований приведены в таблице 2.

Таблица 2
Показатели крови	Период отбора крови	Исследуемый препарат
Заявляемый препарат	Пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат (прототип)	Тиотриазолин (аналог)
1	2	3	4	5
Альбумин, г/л	I	27,7	26,7	26,0
II	28,3	26,3	27,6
III	29,3	28,3	29,0
Общий белок, г/л	I	53,0	49,0	53,6
II	60,7	56,7	59,3
III	54,7	54,0	54,3
Щелочн. фосф-за, д/мл	I	707,3	551,0	705,0
II	640,5	650,7	289,3
III	704,6	680,3	703,67
АлАТ, ед/л	I	74,5	71,6	53,6
II	80,3	79,7	41,3
III	62,6	73,67	51,7
ЛДГ, ед/л	I	1215,5	1050,3	1212,3
II	898,4	895,3	822,3
III	693,7	534,0	690,3
АсАТ, ед/л	I	52,3	51,6	44,6
II	55,4	51,7	42,0
III	57,2	56,3	45,3
ГГТП, ед/л	I	84,4	83,6	73,3
II	102,2	101,3	56,6
III	46,7	45,3	53,7

Продолжение таблицы 2
1	2	3	4	5
Креатинин, мкмоль/л	I	82,5	77,3	80,7
II	84,6	83,4	82,3
III	81,7	80,3	78,3
Мочевина, ммоль/л	I	4,25	4,13	2,76
II	3,87	3,67	2,67
III	3,56	3,43	3,23
Глюкоза, ммоль/л	I	4,88	4,6	5,26
II	6,23	6,03	6,67
III	5,4	4,7	5,27
Холестерин, ммоль/л	I	3,54	3,43	2,86
II	4,15	4,0	3,56
III	4,05	3,90	3,8
Триглицериды, ммоль/л	I	1,12	1,0	1,0
II	0,87	0,8	0,87
III	0,75	0,67	0,73
Амилаза, ед/л	I	4620,7	4617,6	3779,3
II	4887,4	4880,0	2623,6
III	4956,4	4954,0	3610,0
Билирубин общ., мкмоль/л	I	12,8	12,0	11,3
II	8,45	8,3	9,37
III	7,25	7,0	9,0
- прямой, мкмоль/л	I	3,71	3,6	3,3
II	3,45	3,0	3,3
III	3,52	3,3	3,0
- непрямой, мкмоль/л	I	8,36	8,3	8,0
II	5,54	5,3	5,3
III	4,85	3,7	5,0
Тимоловая проба, ед.	I	2,73	2,56	2,76
II	3,05	2,9	2,13
III	2,35	2,1	2,4
Фосфор, ммоль/л	I	1,32	1,19	1,31
II	1,12	1,02	0,97
III	2,03	1,90	1,94
Кальций, ммоль/л	I	2,44	2,36	2,52
II	1,56	1,45	1,21
III	1,41	1,36	1,27
Альб./глобул.	I	1,22	1,20	0,94
II	0,91	0,87	0,88
III	1,17	1,1	1,15
АсАТ/АлАТ	I	0,85	0,71	0,86
II	1,11	1,06	1,01
III	0,91	0,88	0,92

Из таблицы 2 видно, что биохимические показатели крови при введении заявляемого препарата превышают биохимические показатели крови при введении препарата по прототипу и тиотриазолина, что свидетельствует о более высокой иммуностимулирующей активности заявляемого препарата по сравнению и с прототипом, и с аналогом.

Кроме того, экспериментально установлено, что заявляемый лекарственный препарат имеет не только высокую противовирусную и иммуностимулирующую активности, но и не проявляет раздражающего и сенсибилизирующего действия, не токсичен в рекомендованных дозах. LD₅₀ при внутрижелудочном введении лабораторным животным (белым мышам, крысам) и цыплятам составляет 12000 мг/кг.

Тесты in vitro и in vivo не обнаруживают мутагенной активности.

Представленные экспериментальные результаты показали:

заявляемый препарат обладает более высокими противовирусной и иммуностимулирующей активностями по сравнению с прототипом, что убедительно подтверждает достижение поставленной задачи.

Высокая активность заявляемого препарата является совершенно не очевидной для специалиста. Действительно, используемые для получения активной части препарата ингредиенты:

- пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат имеет значительно меньшую противовирусную и иммуностимулирующую активности;

- сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты проявляют только консервирующие свойства и не обладают противовирусным и иммуностимулирующим действием.

Заявляемый же препарат, содержащий указанные ингредиенты в заявляемом соотношении, показал активность, гораздо большую по сравнению с прототипом. Кроме того, заявляемый препарат хорошо растворяется практически во всех типах основ, используемых для изготовления лекарственных форм - стерильных растворов, мазей. Экспериментально установлено, что явно выраженное лечебное действие заявляемый препарат проявляет во всех заявленных лекарственных формах и во всех пределах заявленных значений содержания отдельных ингредиентов.

Таким образом, введение новых ингредиентов и новые соотношения ингредиентов обеспечивают повышение противовирусной и иммунностимулирующей активности препарата, за счет чего достигается повышение стойкости организма к заболеваниям, вызванным герпесвирусами, коронавирусами, ортомиксовирусами, парамиксовирусами, поксивирусами, тогавирусами, и облегчается течение заболеваний, вызванных аденовирусами, калицивирусами и парвовирусами.

1. Ветеринарный противовирусный препарат, содержащий в качестве активного вещества пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, отличающийся тем, что препарат дополнительно содержит сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты в массовом соотношении 1:(0,03-0,05).

2. Ветеринарный противовирусный препарат по п.1, отличающийся тем, что в качестве сложных эфиров 4-гидроксибензойной кислоты он содержит метил-4-гидроксибензоат и/или пропил-4-гидроксибензоат, и/или бутил-4-гидроксибензоат.

3. Ветеринарный противовирусный препарат по пп.1, 2, отличающийся тем, что препарат изготавливается в лекарственной форме порошка, или стерильного раствора, или мази.

4. Ветеринарный противовирусный препарат по п.3, отличающийся тем, что в лекарственной форме стерильного раствора он содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и воду очищенную при следующих соотношениях ингредиентов, мас.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Вода очищенная	Остальное

5. Ветеринарный противовирусный препарат по п.3, отличающийся тем, что в лекарственной форме мази он содержит пиперидиний 2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат, сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты и липофильную, или жировую, или гидрофильную основу мази при следующих соотношениях ингредиентов, мас.%:

Пиперидиний
2-[5-(фуран-2-ил)-4-фенил-1,2,4-триазол-3-илтио]ацетат	1,0-20,0
Сложные эфиры 4-гидроксибензойной кислоты	0,03-1,0
Основа мази	79,0-98,07