Способ моделирования зубчатой аденомы толстой кишки

Способ моделирования зубчатой аденомы толстой кишки

Реферат

Изобретение относится к медицине, к экспериментальной онкологии, и может быть использовано в качестве модели зубчатой аденомы толстой кишки для разработки новых схем хирургического лечения и эффективных способов профилактики рецидива колоректальных аденом.

Известен способ моделирования базальноклеточного и плоскоклеточного рака кожи путем воздействия 5 доз метилхолантрена на выбритую кожу животного, наносимого в интервалах от 3 до 14 дней (1 - Iversen U. и др. «А comparison of the tumorigenic effect of five graded doses of 3-methylcholanthrene applied to the scin of hairless mice at intervals of three or fourteen days», Acta. Path. Microbiol. Scand. 1968,73,502-520). Данный способ принят за аналог.

Известен способ моделирования экспериментального рака желудка, в котором экспериментальным животным каждые две недели, в 1 и 3 день вводят по 1,0 мл смеси на протяжении 6 месяцев. Смесь состоит из 0,4% раствора формальдегида и 0,4% раствора перекиси водорода в отношении 1:1 (2 - Патент РФ №2401463, МКИ 6 G09B 23/28, 2009).

Известен способ моделирования аденокарциномы кишки у крыс путем внутрибрюшинного введения химического канцерогена 1.2- диметилгидразина, который вводили из расчета 20 мг/кг веса животного, 1 раз в неделю, в течение четырех недель (Морфофункциональное состояние тимуса в условиях развития опухоли толстой кишки / Стручко Г.Ю., Л.М. Меркулова, Е.В. Москвичев и др. // Здравоохранение Чувашии. - №3. 2009. - С. 47-52). Данный способ принят за прототип.

К недостаткам данного способа следует отнести то, что получаемая модель аденокарциномы кишки воспроизводима в 65% случаев.

Целью предлагаемого изобретения является повышение воспроизводимости моделирования зубчатой аденомы толстой кишки.

Технический результат достигается тем, что пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,03-0.05 мл вводят в просвет общего желчного протока крысы 2-кратно в течение 5-10 дней.

Известно, что структуры желчевыводящих путей и толстой кишки имеют общие антигенные детерминанты (Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. М. Анахарсис, 2005. - 176 с.).

Способ реализуется следующим образом.

Крысам линии Вистар весом 220-250 г осуществляют верхнюю срединную лапаротомию. Продольный разрез обеспечивает достаточное операционное поле, делает возможной мобилизацию желудка, двенадцатиперстной кишки, печеночного угла толстой кишки, связки Treitz. Осуществляют оперативный доступ к дистальному отделу общего желчного протока и проводят введение пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,03-0,05 мл в просвет общего желчного протока. При повторных манипуляциях на желчных путях обычно обнаруживают поперечную ободочную кишку, печеночный угол и большой сальник фиксированными к нижней поверхности правой доли печени. Хирургическое вмешательство начинают с освобождения петель тонкого кишечника от брюшины, рассечения спаек, соединяющих их с париетальной брюшиной. Осторожно разделяют сращения, чтобы не вскрыть просвет кишки. После отделения от париетальной брюшины тонкого кишечника освобождают также толстую кишку и большой сальник, а также разделяют спаянные между собой кишечные петли. После разделения спаек и париетальной брюшины отделяют большой сальник, сращенный с нижней поверхностью правой доли печени. Далее освобождают печеночный угол толстой кишки и правую сторону поперечной ободочной кишки. Для мобилизации печеночного изгиба толстой кишки рассекают диафрагмально-поперечно-ободочную связку. Пилорический отдел желудка и двенадцатиперстную кишку мобилизуют, начиная с нижней горизонтальной части двенадцатиперстной кишки, затем мобилизуют нисходящую часть кишки вместе с головкой поджелудочной железы. Подобная мобилизация дает возможность идентифицировать дистальный сегмент общего желчного протока. При этом лимфатический узел общего желчного протока в большинстве случаев расположен справа и позади нижнего конца общего желчного протока. После идентификации дистального сегмента общего желчного протока выделяют проксимальную часть ворот печени. Общий печеночный проток идентифицируют, рассекая ворота печени снаружи и впереди видимой или пальпируемой пульсации печеночной артерии. В большинстве случаев идентификация печеночного протока затруднена из-за наличия выраженного склероза в области ворот печени.

После пункции общего печеночного протока вводят рентгеноконтрастное вещество для получения интраоперационных холангиограмм, что облегчает его выделение. В случае, когда пункция не способствует нахождению протока, его можно обнаружить только путем препарирования.

Лапаратомную рану ушивают, в течение 5-10 дней проводят релапаротомию и осуществляют повторное введение в просвет общего желчного протока ретроградно пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,03-0,05 мл. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 3-4 мес. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет. Далее в щадящих условиях проводят забор ткани толстой кишки (купола слепой кишки, поперечно-ободочной и сигмовидной кишки) на морфологическое исследование.

Ткань фиксируют в растворе 9% формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заключают в парафин, изготавливают гистологические срезы, окрашивают гематоксилином и эозином. При микроскопическом исследовании на препаратах слепой кишки обнаруживают гиперпластический полип с участками измененных колоноцитов: они имеют резко удлиненную форму (в 2-3 раза превышающую нормальную длину колоноцита), в отдельных клетках - фигура митоза, ядра всех измененных колоноцитов имеют резко удлиненную форму. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - зубчатая аденома.

Пример 1

Крысе линии Вистар весом 220 г осуществляют верхнюю срединную лапаротомию. Продольный разрез обеспечивает достаточное операционное поле, делает возможной мобилизацию желудка, двенадцатиперстной кишки, печеночного угла толстой кишки, связки Treitz. Осуществляют оперативный доступ к дистальному отделу общего желчного протока и проводят введение пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,03 мл в просвет общего желчного протока. Лапаратомную рану ушивают, спустя 5 дней проводят релапаротомию.

При повторных манипуляциях на желчных путях обычно обнаруживают поперечную ободочную кишку, печеночный угол и большой сальник фиксированными к нижней поверхности правой доли печени. Хирургическое вмешательство начинают с освобождения петель тонкого кишечника от брюшины, рассечения спаек, соединяющих их с париетальной брюшиной. Осторожно разделяют сращения, чтобы не вскрыть просвет кишки. После отделения от париетальной брюшины тонкого кишечника освобождают также толстую кишку и большой сальник, а также разделяют спаянные между собой кишечные петли. После разделения спаек и париетальной брюшины отделяют большой сальник, сращенный с нижней поверхностью правой доли печени. Далее освобождают печеночный угол толстой кишки и правую сторону поперечной ободочной кишки. Для мобилизации печеночного изгиба толстой кишки рассекают диафрагмально-поперечно-ободочную связку. Пилорический отдел желудка и двенадцатиперстную кишку мобилизуют, начиная с нижней горизонтальной части двенадцатиперстной кишки, затем мобилизуют нисходящую часть кишки вместе с головкой поджелудочной железы. Подобная мобилизация дает возможность идентифицировать дистальный сегмент общего желчного протока. При этом лимфатический узел общего желчного протока в большинстве случаев расположен справа и позади нижнего конца общего желчного протока. После идентификации дистального сегмента общего желчного протока выделяют проксимальную часть ворот печени. Общий печеночный проток идентифицируют, рассекая ворота печени снаружи и впереди видимой или пальпируемой пульсации печеночной артерии. В большинстве случаев идентификация печеночного протока затруднена из-за наличия выраженного склероза в области ворот печени.

После пункции общего печеночного протока вводят рентгеноконтрастное вещество для получения интраоперационных холангиограмм, что облегчает его выделение. В случае, когда пункция не способствует нахождению протока, его можно обнаружить только путем препарирования.

Спустя 5 дней осуществляют повторное введение в просвет общего желчного протока ретроградно пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,03 мл. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 3 мес. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет. Далее в щадящих условиях проводят забор ткани купола слепой кишки на морфологическое исследование.

Ткань фиксируют в растворе 9% формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заключают в парафин, изготавливают гистологические срезы, окрашивают гематоксилином и эозином. При микроскопическом исследовании на препаратах слепой кишки обнаруживают гиперпластический полип с участками измененных колоноцитов: они имеют резко удлиненную форму (в 2 раза превышающую нормальную длину колоноцита), в отдельных клетках - фигура митоза, ядра всех измененных колоноцитов имеют резко удлиненную форму. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - зубчатая аденома.

Пример 2

Крысе линии Вистар весом 240 г проводят верхнюю срединную лапаротомию. Осуществляют оперативный доступ к дистальному отделу общего желчного протока и проводят введение пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,04 мл в просвет общего желчного протока.

Лапаратомную рану ушивают, спустя 7 дней проводят релапаротомию и осуществляют повторное введение в просвет общего желчного протока ретроградно пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,04 мл. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 3,5 мес. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет. Далее в щадящих условиях проводят забор ткани купола слепой кишки на морфологическое исследование.

Ткань фиксируют в растворе 9% формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заключают в парафин, изготавливают гистологические срезы, окрашивают гематоксилином и эозином. При микроскопическом исследовании на препаратах слепой кишки обнаруживают гиперпластический полип с участками измененных колоноцитов: они имеют резко удлиненную форму (в 2,5 раза превышающую нормальную длину колоноцита), в отдельных клетках - фигура митоза, ядра всех измененных колоноцитов имеют резко удлиненную форму. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - зубчатая аденома.

Пример 3

Крысе линии Вистар весом 250 г проводят верхнюю срединную лапаротомию. Продольный разрез обеспечивает достаточное операционное поле, делает возможной мобилизацию желудка, двенадцатиперстной кишки, печеночного угла толстой кишки, связки Treitz. Осуществляют оперативный доступ к дистальному отделу общего желчного протока и проводят введение пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,05 мл в просвет общего желчного протока.

Лапаратомную рану ушивают, спустя 10 дней проводят релапаротомию и осуществляют повторное введение в просвет общего желчного протока ретроградно пикрилсульфоновой кислоты в дозе 0,05 мл. Рану послойно ушивают. Животное выкармливают на протяжении 4 мес. В течение данного периода подвижность животного постепенно снижается, шерсть теряет блеск, животное худеет. Далее в щадящих условиях проводят забор ткани купола слепой кишки на морфологическое исследование.

Ткань фиксируют в растворе 9% формалина, обезвоживают в спиртах возрастающей концентрации, заключают в парафин, изготавливают гистологические срезы, окрашивают гематоксилином и эозином. При микроскопическом исследовании на препаратах слепой кишки обнаруживают гиперпластический полип с участками измененных колоноцитов: они имеют резко удлиненную форму (в 3 раза превышающую нормальную длину колоноцита), в отдельных клетках - фигура митоза, ядра всех измененных колоноцитов имеют резко удлиненную форму. По совокупности морфологических изменений поставлен диагноз - зубчатая аденома.

Осуществлено моделирование зубчатой аденомы у 15 крыс. Заявленная совокупность признаков позволяет обеспечить возможность моделирования зубчатой аденомы толстой кишки у 14 животных.

Способ моделирования зубчатой аденомы толстой кишки крысы введением химического препарата, отличающийся тем, что в качестве препарата используют пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,03-0,05 мл, которую вводят в просвет общего желчного протока 2-кратно в течение 5-10 дней.