Способ ферримагнито-термохимиотерапии злокачественных опухолей комбинациями магнитоуправляемых нанопрепаратов с визуализацией онкогенеза, определением терапии, предпочтительной в режиме реального времени, и мониторингом результатов лечения в эксперименте

Способ ферримагнито-термохимиотерапии злокачественных опухолей комбинациями магнитоуправляемых нанопрепаратов с визуализацией онкогенеза, определением терапии, предпочтительной в режиме реального времени, и мониторингом результатов лечения в эксперименте

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Способ ферримагнитно-термохимиотерапии (ФТ) злокачественных опухолей комбинациями магнитоуправляемых нанопрепаратов (КМН) с визуализацией онкогенеза, определением терапии, предпочтительной в режиме реального времени (ТП), и мониторингом результатов лечения в эксперименте включает

- получение контрастных магнитно-резонансных томографических изображений онкогенеза (КМ-РТИ);

- определение ТП;

- подавление пролиферации опухолевых клеток в процессе ФТ;

- долечивание инфильтративных опухолей комбинациями цитостатических препаратов (КЦП).

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при диагностике онкологических заболеваний контрастной магнитно-резонансной томографией (МРТ) с применением комбинаций МРТ негативных контрастных нанопрепаратов (МРТ-НКН) с контрастными МРТ позитивными препаратами и ФТ опухолей различной локализации активированными КМН с долечиванием инфильтративных опухолей КЦП.

Одним из способов ранней диагностики опухолей является получение КМ-РТИ системным введением комбинаций декстранферрита (ДФ) или цитратферрита (ЦТФ) с магневистом [1] (аналог).

Недостатки аналога:

- наночастицы ДФ и ЦТФ, введенные системно, концентрируются в органах сердечнососудистой системы (ССС) и ретикуло-эндотелиальной системы (РЭС);

- в процессе ФТ из-за высокой удельной абсорбции энергии (УАЭ) наночастицы ДФ и ЦТФ нагреваются переменным магнитным полем (ПеМП) и разрушают органы ССС и РЭС, это приводит к уменьшению противоопухолевого эффекта [2-8].

Известны способы терапии опухолей с применением цитостатических препаратов: аденокса (АО), метокса (МО), мелфалана (МФ), сарколизина (СЛ), цисплатина (ЦП), митоксантрона (МК), дакарбазина (ДК), доцетаксела (ДТ) и циклофосфана (ЦФ) [9-12] (аналог).

Недостатки аналога:

- отсутствие контроля распределения КЦП в организме животного в реальном времени (выжидательная тактика), приводящее к накоплению КЦП в ССС и РЭС, к уменьшению противоопухолевого эффекта [9-12];

- неполный клиренс организма от опухолевых клеток, приводящий к метастазированию и рецидивам;

- МФ и СЛ гидролизуются в водных средах [9];

- слабо действуют на солидные формы опухолей; карциномы, меланомы, гепатомы, лейкозы [10-12];

- неконцентрированные и нефиксированные в опухоли (рассеянные в организме) АО, МО, МФ, СЛ, ЦП, МК, ДК, ДТ и ЦФ концентрируются в ССС и органах РЭС от 20 до 40%, вызывают токсикоз, миелодепрессию и понижают терапевтический эффект [11, 12].

Известен способ индукционной гипертермии злокачественных опухолей [5-7] (аналог).

Недостатки аналога:

- неконтролируемое распределение КМН в организме животных, невозможность объективного определения ТП понижают терапевтический эффект.

Известен способ термохимиотерапии злокачественных опухолей [4, 8] (аналог).

Недостатки аналога:

- неконтролируемое распределение КМН в организме животных и невозможность объективного определения ТП понижают терапевтический эффект.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ магнитогидродинамической термохимиотерапии злокачественных опухолей нанопрепаратами с магнитно-резонансным мониторингом, при котором температура внутри опухоли повышается от +47 - до +70°C. После завершения нагрева содержимое опухоли удаляют. Через 6 сеансов магнито-гидродинамической термохимиотерапии опухоли не пальпируются. Применение прототипа приводит к полной регрессии опухолей у 40% животных с увеличением продолжительности жизни до 310% [2, 3] (прототип).

Недостатки прототипа:

- неконтролируемое распределение КМН в организме животных и невозможность объективного определения ТП, понижают терапевтический эффект;

- в опухолевых тканях наблюдается неуправляемое распределение КМН, приводящее к перегреву одних и недостаточному нагреву других участков опухоли и лишь к частичному некрозу опухолевых клеток, проникших глубоко в здоровые ткани, это понижает терапевтический эффект;

- на поздних стадиях онкогенеза, после 2-3 месячной ремиссии, у большинства мышей наблюдают рецидивы лимфолейкоза Р388, карциномы Эрлиха, карциномы легких Льюис, аденокарциномы молочной железы Ca 755 и меланомы В 16, как результат инвазии и метастазирования инфильтративных опухолей [2, 3];

- цитостатические средства, сарколизин и мелфалан, гидролизуются при нагревании в заявленных условиях, поэтому не во всех опухолевых клетках происходит алкилирование ДНК [11];

- некротические массы и остатки препаратов, отсасывают не полностью, этим вызывают токсикоз, нарушают гомеостаз, снижают иммунитет, повышают острую и хроническую токсичность, это приводит к понижению терапевтического эффекта, после 3-6 месячной ремиссии наступает смерть, как результат нарушения гомеостаза, снижения иммунитета, инвазии, метастазирования и рецидивов опухолей [2, 3].

Задачей изобретения является устранение указанных недостатков: оптимизация диагностики, повышение терапевтического эффекта и обеспечение безопасности при лечении млекопитающих.

Указанная задача решается следующим образом:

- на 3-8 день после имплантации опухолевых клеток в хвостовую вену мышам вводят от 30 до 350 мкл 0,5% золя МРТ-НКН общей формулы,

где 0<y<1, 0<x<1, 0<z<1, L³⁺ - лантаноид [13, 14], (диаметр частиц 6-600 нм, в качестве покрытия используют цитрат ионы), удельная намагниченность (M_s) до 0,2 А·м²/кг при температуре +45°C в поле 28,3 мТл, с УАЭ 0,1-20 Вт/г Fe при температуре +45°C в поле (частота 0,01-1,0 МГц, напряженность 7,2 кА/м-12,0 кА/м, мощность 0,15-1,5 кВт) для раннего выявления опухолей, метастазов и границ инвазии опухолевых клеток;

- место введения препарата промывают теплой водой, протирают досуха, животное содержат при температуре +25-+28°C в стандартных условиях от 30 минут до 30 часов, внутривенно вводят 10-20 мкл магневиста, через 6 минут животное размещают в биоспектротомографе BIOSPEC ВС 70/30 USR (Bruker) и проводят КМ-РТ сканирование тела в режимах Т₁-взвешенных {500/15 [время повторения, мсек/время эхо, мсек] и Т₂ взвешенных (1900/80) спин-эхо и Т₂ взвешенных градиент-эхо (500/15)} последовательностей. Измеряют интенсивность сигнала и проводят визуальный анализ структуры опухоли и внутренних органов (лимфатические сосуды, дренирующие опухоль, лимфатические узлы, позвоночник, кости, легкие, почки, мочевой пузырь, селезенка и печень), которые обычно поражаются метастазами лимфолейкоза Р388; карциномы Эрлиха, карциномы легких Льюис, аденокарциномы лочной железы Са 755 и меланомы В 16. Получают КМ-РТИ, отражающие развитие опухоли, (Фиг. 1_{1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10}) и Фиг. 1′ (а, b, с, d, е, f); 4 (а, б, в); 5 (а, б); 11 (а, б); 12 (а, б); 13 (а, б); 14 (а, б, в).

Перемещают животное в ПеМП электронно-сенсорного устройства (ЭССУ) [17, 18]. Проводят электронно-сенсорное сканирование тела животного (ЭСС), перемещают сенсор по поверхности опухоли, и всего тела, от органа к органу, в режимах последовательного взаимного проецирования сенсора с тканями опухоли и с тканями исследуемых органов (Фиг. 2, 3). В процессе сканирования тела животного сенсор излучает ПеМП и принимает на комбинаторных частотах электромагнитные отклики в непрерывном режиме. Операторы контролируют время приема каждого отклика от опухоли, органов, биологических жидкостей и тканей. По величинам откликов, регистрируемых компьютером от 2 секунд до 120 секунд, определяют содержание КМН в опухоли, органах, биологических жидкостях и тканях в условных единицах (уе). Полученные результаты используют в формуле (3) при определении ТП [19].

где - КМН_{опухоли} - отклик КМН уе опухоли;

- _суммаКМН_{органов} - суммарный отклик КМН уе _{органов};

- ТП - терапия предпочтительная для данного животного в режиме реального времени;

- при ТП≥10 - ферримагнитно-термохимиотерапия. Например, по результатам ЭСС тела животного электромагнитные отклики опухоли ~9540 уе, печени ~42 уе, селезенки ~45, почек ~23, мочевого пузыря ~30, суммарный отклик КМН_{органов} 140 уе, по формуле (3) получают величину ТП=~647, которая указывает на предпочтительное применение ФТ для данного животного в режиме реального времени, поскольку в опухоли содержится КМН в 647 раз больше, чем в печени (Фиг. 2, 3, 9).

Для уточнения объема предстоящего сеанса ФТ проводят КМ-РТ сканирование в режимах: T₁ - взвешенное (TR/ТЕ=500/15 мс), Т₂ - взвешенное (TR/ТЕ=6000/63 мс) на основе спинового эха и Т₂ - взвешенного градиентного эха (TR/ТЕ=500/15 мс, угол поворота 15°).

Отсасывают содержимое опухоли, вводят от 30 до 350 мкл 40% золя КМН общей формулы,

где 0<y<1, 0<х<1, 0<z<1, L³⁺-Gd³⁺, La³⁺, Ce³⁺, Eu³⁺, Dy³⁺, Er³⁺, Yb³⁺ [15, 16], (диаметр частиц от 5 до 900 нм, в качестве покрытия используют декстран молекулярной массы от 10 до 70 кД, содержание феррита 130 мг, M_s 8,5 кА/м, рН 6,4, ζ +15 мВт, УАЭ 270-330 Вт/г Fe), которые получают непосредственно перед введением в опухоль смешиванием комбинантов ДФ, АО, МО, СЛ, МФ, ЦП, МК, (феррит от 2,6 до 150 мг; АО от 0,2 до 2,0 мг, МО от 0,05 до 0,2 мг, СЛ или МФ от 0,001 до 0,002 мг, ЦП от 0,01 до 0,04 мг, МК от 0,005 до 0,02 мг, M_s 40% золя КМН 8,5 кА/м, рН 7,0, ζ +13 мВт, УАЭ 300 Вт/г Fe). Место введения препарата промывают теплой водой и протирают досуха. Ориентируют животное так, чтобы опухоль была коаксильна силовым линиям неоднородного постоянного магнитного поля (НПМП) индукцией 0,15-4,0 Тл, и выдерживают 3-6 минут для концентрации и фиксации КМН в опухоли. Опухоль ориентируют в ПеМП (частота 0,01-1,0 МГц, напряженность 7,2 кА/м - 12,0 кА/м, мощность 0,15-1,5 кВт), прошедшем через слой воды толщиной 0,01-2,0 мм с постоянной температурой, по мере магнитного нагрева КМН активируются цитостатические препараты. Одновременно с нагревом непрерывно измеряют температуру опухоли и тела животного. Через 3-15 минут температура внутри опухоли повышается до +44 - +48°С, выдерживают 30 мин. Сразу после нагрева содержимое опухоли удаляют, полость, образовавшуюся на месте опухоли, промывают раствором антисептического средства, животное размещают в ПеМП ЭССУ, определяют величину электромагнитных откликов образовавшейся полости и вводят КЦП.. КМ-РТ изображения тканей, имеющих недостаточно быстрый кровоток, длительное время остаются светлыми из-за медленной диффузии феррита (Фиг. 4 а, б, в; Фиг. 5 а, б). Измеряют интенсивность сигнала и проводят компьютерный и визуальный анализ остатков опухоли изменений в макро- и микро-метастазах лимфолейкоза Р388; карциномы Эрлиха, карциномы легких Льюис, аденокарциномы молочной железы Са 755 и меланомы В 16. Результаты ФТ (Фиг. 4 б, в) сравнивают с КМ-РТИ, полученными до ФТ (Фиг. 4а). Через каждые 3-48 часов, в зависимости от соматического состояния животного (ФСЖ) процедуры ЭСС, контрастного магнитно-резонансного томографического сканирования (КМ-РТС) и ФТ повторяют от 2 до 8 сеансов в зависимости от ФСЖ.

Опухоль на этой стадии ФТ обычно не прощупывается (Фиг. 6). В полость и подкожные метастазы вводят КЦП. При выявлении асцита и метастазов внутренних органов КЦП вводят внутрибрюшинно. Параллельно делают биопсию и микропрепараты (Фиг. 7 а, б, в, г) (Фиг. 8).

Оценку противоопухолевой активности и качества долечивания проводят в соответствии с результатами ЭСС и КМ-РТ сканирования, заключение делают с учетом рекомендаций по химиотерапии злокачественных опухолей [12]. Все полученные данные обрабатывают статистически, за достоверные принимают различия при ρ<0,05 [20].

Заявленный способ иллюстрируется примерами 1-7

Пример 1. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфолейкоза Р388, в зависимости от вида и числа терапевтических процедур, выраженный в полной регрессии опухолей и увеличении средней продолжительности жизни (УПЖ) мышей.

70 самцам мышей BDF₁ под кожу правой лопатки вводят суспензию 10⁶ клеток лимфолейкоза Р388, отбирают 60 мышей и делят на 5 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4 и 5 по 10 мышей. ЭСС, КМ-РТ сканирование и ФТ начинают, когда средний объем опухоли достигает 30-145 мм³. Мышам 1 группы под наркозом по периметру опухоли вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl и проводят ЭСС. Электромагнитные отклики тканей у мышей первой (контрольной) группы соответствуют фоновому уровню содержания КМН (~11 уе), по которым на калибровочном графике (Фиг. 9) количество КМН не определяется. На КМ-РТИ, при T₁ взвешенных изображениях (ВИ) (TR/ТЕ=500/15 мс), Т₂ ВИ (TR/ТЕ=6000/63 мс) на основе спинового эха и Т₂-взвешенного градиентного эха (TR/ТЕ=500/15 мс, угол поворота 15°). В местах введения 0,9% раствора NaCl изображения не выявляют.

Мышам 2 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КЦП: МК 0,01 мг, СЛ 0,002 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят золь: ДФ 150 мг, вода до 350 мкл. При ЭСС отклики тканей у мышей третьей группы соответствуют содержанию КМН 15260 уе, сумма откликов печени и других органов при этом 150 уе, по которым на калибровочном графике определяют содержание КМН в мг (Фиг. 9). По формуле 3 получают величину ТП=102, подтверждающую предпочтительность ФТ для данного животного в режиме реального времени. На КМ-РТИ тела мыши, выявляют темные пятна КМН. Мышам 4 группы отсасывают содержимое опухоли. По периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150,0 мг, МК 0,01 мг, СЛ 0,002 мг, вода до 350 мкл. При ЭСС мышей четвертой группы получают электромагнитные отклики: опухоли 10890, сумма откликов печени и других органов соответствует 210. По формуле 3 получают величину, ТП=52, подтверждающую предпочтительность ФТ для данного животного в режиме реального времени. На КМ-РТИ тела мыши, при тех же параметрах сканирования, выявляют изображения темных пятен, соответствующие местам нахождения КМН.

Мышам 5 группы отсасывают содержимое опухоли. По периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МК 0,01 мг, СЛ 0,002 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА/м, рН 6,6, ζ +15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe). Электромагнитные отклики тканей у мышей пятой группы: опухоли 15630, суммы откликов печени и других органов 50 (Фиг. 9). По формуле 3 получают величину ТП=313.

Мышей 1, 2, 3, 4 и 5 групп помещают в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см и выдерживают 5 минут. Опухоль каждой мыши 1, 2, 3, 4 и 5 групп ориентируют в ПеМП (частота 0,01-1,0 МГц, напряженность 12,0 кА/м, мощность 0,15 кВт), прошедшем через слой воды толщиной 2,0 мм с постоянной температурой (магнито-термостатирование), введенный КМН нагревают в ПеМП. Температура опухоли у мышей 1 и 2 групп под действием ПеМП в течение 5 мин не поднимается выше +38°С. Температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 и 2 групп в течение 30 минут находится между +37 - +38°С. При ЭСС и КМ-РТ сканировании КМН не выявляют.

У мышей 3 и 4 групп температура опухоли в ПеМП за 5 мин поднимается выше +43°С (температуру измеряют спиртовым термометром). Далее температура внутри опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +47°С, температура прямой кишки +38°С. На КМ-РТИ выявляют изображения темных пятен, соответствующие местам введения КМН. После окончания нагрева опухоли удаляют ее содержимое.

Под действием ПеМП температура опухоли у мышей 5 группы, в течение 5 мин поднимается выше +43°С. Температура внутри опухоли продолжает повышаться и через 15 мин достигает +47°С, прямой кишки +38°С. После окончания нагрева опухоли удаляют ее содержимое. Для удаления продуктов некроза опухолевых тканей и остатков КМН полость, образовавшуюся на месте опухоли, промывают 0,05% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaC, в полость вводят КЦП. В 1, 2, 3, 4 и 5 группах проводят до 6 процедур ЭСС, до 8 процедур КМ-РТ сканирования и до 8 процедур ФТ (Табл. 1).

В результате КМ-РТ сканирования выявляют:

- в 1 группе мышей объем опухоли и метастазов у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии, в течение 6 процедур ФТ все мыши гибнут от прогрессирования опухолей;

- во второй группе рост опухолей тормозится, в подмышечный и паховый областях 4 мышей выявляют метастазы. В метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг с целью их подавления. Полная регрессия опухоли 15%, увеличение продолжительности жизни 150%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, в паховой области 3 мышей выявляют метастазы, в метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полная регрессия опухоли 15%, увеличение продолжительности жизни 160%;

- в четвертой группе средний объем опухолей с первого дня лечения резко уменьшается, в паховой области 2 мышей выявляют метастазы, в метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05

- ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полная регрессия опухоли 30%, увеличение продолжительности жизни 180%;

- в пятой группе средний объем опухолей с первого дня лечения уменьшается, но в паховой области 1 мыши выявляют метастазы, в метастазы и опухоли вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полная регрессия опухоли 40%, увеличение продолжительности жизни 250%, (Таблица 1).

Таким образом, КМ-РТ сканирование животных обеспечивает раннее выявление опухолей и метастазов при контрастировании опухолей и метастазов комбинацией ДФ-магневист.

При ЭСС электромагнитные отклики тканей у мышей пятой группы соответствуют повышенным уровням содержания КМН, по которым определяют содержания КМН в опухоли, печени и других органах РЭС в реальном времени: в опухоли 45000, сумма откликов печени и органов 150, по формуле 3 получают величину ТП=300, подтверждающую предпочтительность ФТ для данного животного в режиме реального времени, на калибровочном графике (Фиг. 9) получают содержание КМН в мг.

Магнитное нагревание тела животных в условиях превосходящего по скорости и величине нагрева тканей опухоли, содержащих КМН, удаление содержимого опухоли, последующее промывание образовавшейся полости, введение цитостатических средств в метастазы по мере их выявления, приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни млекопитающих.

КМ-РТ сканирование полости образовавшейся после нагрева и отсасывания содержимого опухоли с последующим промыванием антисептиком, способствует выявлению остатков опухолей и метастазов, прицельному контролируемому введению КМН в оставшуюся часть опухоли и метастазы в процессе долечивания животных.

Предпочтительны:

- отсасывание содержимого опухоли для понижения давления перед введением КМН и антисептика;

- предварительные, промежуточные и заключительные магнитно-резонансные сканирования тела животного для визуального анализа опухолей и метастазов с индивидуальным заключением по результатам ФТ;

- ферримагнитная концентрация, фиксация и нагрев препаратов в опухоли;

- ФТ опухоли в зависимости от ФСЖ при +45-48°C 4×30 мин с интервалом 3 часа, с промыванием полости, образовавшейся на месте опухоли, от продуктов некроза и остатков КМН с введением в полость и метастазы КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 1).

Пример 2. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму лимфолейкоза Р388 в зависимости от вида и числа процедур.

80 самцам мышей BDF₁ под кожу правой лопатки вводят суспензию 10⁶ клеток лимфолейкоза Р388, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. На 3-4 сутки после имплантации, когда средний объем опухоли достигает 50-150 мм³ для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. Мышам 1 группы по периметру опухоли вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl.

Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят АО 1,2 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят КЦП: АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг, вода до 350 мкл. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, АО 1,2 мг, МО 0,2 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА/м, pH 6,6, ζ+15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe).

Процедуру ФТ мышей 1, 2, 3, 4, 5 и 6 групп проводят аналогично Примеру 1: ФТ 1 и 2 групп проводят по 6 раз, 3 и 4 групп проводят 8 раз, 5 группы - 6 раз, 6 группы - 8 раз с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 2).

Результаты ФТ мышей 1, 2, 3, 4, 5 и 6 групп представлены в Табл. 2.

Таким образом, в соответствии с таблицей 2 максимальный терапевтический эффект дает ФТ опухоли при +48°C 8×30 мин с последующим промыванием опухоли от продуктов некроза и остатков КМН при введении КЦП в обнаруживаемые по ходу лечения метастазы.

Пример 3. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы Эрлиха, в зависимости от числа процедур.

80 самцам мышей BDF1 под кожу правой лопатки вводят суспензию 10⁶ клеток карциномы Эрлиха, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм³ (от 3 до 5 суток), для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. У мышей измеряют температуру в прямой кишке. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят КЦП: МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг в 350 мкл воды. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002 мг, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА/м, pH 6,6, ζ+15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe). Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, и 5 групп помещают в ПеМП, как в 1 примере. В метастазы, по мере их выявления, вводят КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг.

Процедуру ФТ проводят:

- мышам 1 и 3 групп 4 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3);

- мышам 4 группы 3 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3);

- мышам 2 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3);

- мышам 5 группы 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 3).

В результате получают:

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, внутрибрюшинно вводят КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни 180%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 -ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей увеличение продолжительности жизни мышей 200%;

- от начала лечения в четвертой группе мышей наблюдают уменьшение среднего объема опухолей и у части мышей наблюдают полную регрессию опухолей;

- после завершения лечения признаки опухолей не проявляются в течение 3 месяцев, у 3 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают мышей внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 320%;

- в пятой группе у 1 мыши выявляют метастазы, долечивание проводят внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 320%;

- в шестой группе проводят 8 процедур ФТ, у 2 мышей выявляют метастазы, долечивание проводят внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 50% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 350%;

Таким образом, в соответствии с примером 3, предпочтительна ФТ опухоли при +48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с последующим промыванием образовавшейся полости 0,05% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl, и введением КЦП, при которой получают максимальный терапевтический эффект.

Экспериментальные результаты (примеры 1-3, таблицы 1-3) подтверждают высокий противоопухолевый эффект заявленного способа, включающего регионарное введение КМН при одновременном нагреве тела до 38°C с преимущественным по скорости и величине нагревом опухоли до +45-+48°C и последующим удалением содержимого опухоли, промыванием образовавшейся полости, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг.

Таким образом, ЭС определение ТП и КМ-РТ мониторинг результатов ФТ опухолей и метастазов при одновременном магнитном нагреве тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, с последующим промыванием полости на месте опухоли от продуктов некроза и остатков КМН, с дополнительным внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни млекопитающих.

Предпочтительна ФТ опухоли при +45-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 3).

Пример 4. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму карциномы легких Льюис, в зависимости от вида и числа процедур.

80 самцам мышей C57Bl/6j в мышцу правого бедра вводят суспензию 10⁶ клеток карциномы легких Льюис, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм (около 8 суток) для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. У мышей измеряют температуру в прямой кишке. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят КЦП: ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, 0,9% NaCl до 350 мкл. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг в 350 мкл воды. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, ЦП 0,03 мг, МК 0,01 мг, вода до 350 мкл (M_s 7,5 кА /м, pH 6,6, ζ+15 мВт, УАЭ 330 Вт/г Fe). Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, 5 и 6 групп помещают в ПеМП, как в 1 примере. Долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг.

Процедуру ФТ проводят

- мышам 1, 2, 3 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 4);

- мышам 4 группы 4 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 4);

- мышам 5 группы 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 4).

В результате получают

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни 180%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, у 2 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей увеличение продолжительности жизни мышей 160%;

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается и их признаки не проявляются в течение 3 месяцев, у 3 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,1 - ЦФ 1,0 мг. Полную регрессию опухоли наблюдают у 10% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 220%;

- в пятой группе у 1 мыши выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 20% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 240%;

- в шестой группе проводят 8 процедур ФТ, у 2 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 25% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 260%;

Таким образом, в соответствии с примером 4, предпочтительна ФТ опухоли при +48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с последующим промыванием образовавшейся полости 0,05% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl, и введением КЦП, при которой получают максимальный терапевтический эффект.

Экспериментальные результаты (примеры 1-4, таблицы 1-4) подтверждают высокий противоопухолевый эффект заявленного способа, включающего регионарное введение КМН при одновременном нагреве тела до 38°C с преимущественным по скорости и величине нагревом опухоли до +45-+48°C и последующим удалением содержимого опухоли, промыванием образовавшейся полости, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП: ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг.

Таким образом, ЭС определение ТП и КМ-РТ мониторинг результатов ФТ опухолей и метастазов при одновременном магнитном нагреве тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, с последующим промыванием полости на месте опухоли от продуктов некроза и остатков КМН, с дополнительным внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП приводит к быстрому уменьшению объема опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни млекопитающих.

Предпочтительна ФТ опухоли при +45-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с долечиванием внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 4).

Пример 5. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму аденокарциномы молочной железы Ca 755, в зависимости от вида и числа процедур.

80 самкам мышей C57Bl/6j под кожу правой подмышечной области вводят суспензию 10⁶ клеток аденокарциномы молочной железы Ca 755, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм³ (около 4 суток) у мышей измеряют температуру в прямой кишке. Для понижения давления в опухоли отсасывают ее содержимое. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. Мышам 2 группы по периметру опухоли вводят мелфалан (МФ) 0,002 мг и митоксантрон (МК) 0,02 в 350 мкл 0,9% NaCl. Мышам 3 группы по периметру опухоли вводят декстранферрит (ДФ) 150 мг, вода до 350 мкл. Мышам 4 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 5 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышам 6 группы по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, МФ 0,002, МК 0,02 мг, вода до 350 мкл. Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, и 5 групп помещают в ПеМП, как в примере 1. Температура опухоли у мышей 2, 3, 4, и 5 групп, под действием ПеМП в течение 5 мин поднимается выше +42°C, через 15 мин температура опухоли достигает +48°C, через 30 минут нагрев прекращают. В тоже время, температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 группы остается между +37-+38°C. После окончания нагрева удаляют ее содержимое. Образовавшуюся на месте опухоли полость промывают 0,3% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl.

Процедуру ФТ проводят

- мышам 1 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5);

- мышам 2, 3 и 4 групп 4 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5);

- мышам 5 группы 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5).

- мышам 6 группы 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 5).

В результате получают

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни 160%;

- в третьей группе средний объем опухолей значительно уменьшается, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, увеличение продолжительности жизни мышей 200%;

- в четвертой группе средний объем опухолей, с первого дня лечения уменьшается, их признаки не проявляются в течение 3 месяцев, у 2 мышей выявляют метастазы в подмышечных лимфатических узлах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 220%;

- в пятой группе у одной мыши выявляют метастазирование опухоли в правый пах, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 30% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 280%;

- в шестой группе у одной мыши выявляют метастазы в правом паху, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную регрессию опухоли наблюдают у 50% мышей, увеличение продолжительности жизни мышей 350%.

Таким образом, в соответствии с примером 5 определение вида терапии предпочтительной в реальном времени, предварительное, промежуточное и заключительное магнитно-резонансные сканирования опухолей и метастазов с индивидуальным заключением по результатам ФТ, одновременное магнитное нагревание тела с преимущественным по скорости и величине нагревом тканей опухоли, содержащих КМН, удаление некротических масс и промывание полости, образовавшейся на месте опухоли, введение комбинации цитостатических средств в метастазы приводит к быстрому уменьшению объема инфильтративных опухолей, их полной регрессии и увеличению продолжительности жизни мышей. При аденокарциноме молочной железы Ca 755 предпочтительна ФТ при +47-+48°C 8×30 мин с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ, с введением в метастазы и полость КЦП при которой получают максимальный терапевтический эффект (Таблица 5).

Пример 6. Противоопухолевый эффект заявленного способа на подкожную форму меланомы В 16 в зависимости от вида и числа процедур.

80 самкам мышей C57Bl/6j в правую подмышечную область вводят суспензию 10⁶ клеток меланомы В 16, отбирают 70 мышей и делят на 6 групп: в 1 группе 20 мышей, во 2, 3, 4, 5 и 6 по 10 мышей. Когда средний объем опухоли достигает 30-130 мм³ (около 6 суток) у мышей измеряют температуру в прямой кишке и отсасывают содержимое опухоли. Мышам 1 (контрольной) группы в опухоль вводят 350 мкл 0,9% раствора NaCl. У мышей 2 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят бис (L-малато) IV оксованадий (БМОВ) 6,0 мг в 350 мкл воды. У мышей 3 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КЦП: БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды. У мышей 4 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят ДФ 150 мг в 350 мкл воды. У мышей 5 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды. У мышей 6 группы отсасывают содержимое опухоли, по периметру опухоли вводят КМН: ДФ 150 мг, БМОВ 6,0 мг и МК 0,02 мг в 350 мкл воды.

Мышей помещают на 5 минут в постоянное магнитное поле индукцией 0,2 Тл, градиент 0,015 Тл/см. Каждую мышь 2, 3, 4, 5 и 6 групп помещают в ПеМП, как в примере 1. Температура опухоли у мышей 2, 3, 4, и 5 групп, под действием ПеМП в течение 5 мин поднимается выше +42°C, через 15 мин температура опухоли достигает +48°C, через 30 минут нагрев прекращают. В тоже время, температура в прямой кишке и опухоли мышей 1 группы остается между +37-+38°C. После окончания нагрева содержимое опухоли удаляю. Образовавшуюся на месте опухоли полость промывают 0,3% раствором формальдегида в 0,9% растворе NaCl.

Процедуру ФТ проводят

- мышам 1 и 5 групп 6 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 6);

- мышам 2, 3, 4 и 8 групп 8 раза с интервалом от 3 часов до 3 суток в зависимости от ФСЖ (табл. 6);

В результате получают

- в 1 (контрольной) группе мышей объем опухоли у каждой мыши устойчиво увеличивается без признаков регрессии;

- во второй группе средний объем опухолей уменьшается медленно, у 3 мышей выявляют метастазы, долечивают внутриполостным и внутрибрюшинным введением КЦП, ДТ 0,05 - ДК 0,05 - ЦФ 1,0 мг, полную р