Средство для снижения системной патологической эндотоксинемии

Средство для снижения системной патологической эндотоксинемии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области использования средств растительного происхождения, снижающих системную патологическую эндотоксинемию при действии эндотоксинов грамотрицательных бактерий.

Настоящее изобретение относится к области лекарственных средств, в частности, к применению милиацина в качестве средства для снижения системной патологической эндотоксинемии.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии\. и может найти применение в качестве средства, снижающего тяжесть течения бактериальных инфекций, вызванных грамотрицательными микроорганизмами.

Эндотоксин грамотрицательных бактерий - бактериальный липополисахарид (ЛПС) ,является структурным компонентом наружной мембраны бактерий. ЛПС различных бактериальных групп построены по подобному структурному принципу (Дентовская С.В. с соавт., 2008; Зюзина В.П. с соавт., 2013) и состоят из гетерополисахаридной части, ковалентно связанной с липидным компонентом, обозначаемым как липид А. Эти две части детерминируют различные свойства ЛПС. Гетерополисахаридная часть (О-специфические боковые цепи и ядро) несет структуры, распознаваемые лектинами, специфическими антителами и бактериофагами. Другая функциональная часть ЛПС - липид А, представляющий собой наиболее консервативную структуру эндотоксина и обусловливающий общность биологических свойств ЛПС, ответственна за эндотоксиновый эффект. Липид А из различных грамотрицательных бактерий имеет идентичную организацию и обладает стереотипными биологическими свойствами, включающими пирогенность, митогенность, активацию систем гемокоагуляции и фибринолиза, системы мононуклеарных фагоцитов, способностью формировать полиорганную недостаточность.

Системная эндотоксинемия определяется как «присутствие в кровотоке практически здоровых людей эндотоксина кишечного происхождения… При этом под термином «системная эндотоксинемия» следует понимать не столько сам факт присутствия эндотоксина в плазме крови, сколько его присутствие в физиологических концентрациях и достаточно высокую для купирования его патогенных свойств активность эндотоксинсвязывающих и элиминирующих систем крови и выделительных органов» (Яковлев М.Ю., 2003а). Физиологический (гомеостатический) смысл системной эндотоксинемии заключается в большом многообразии полезных биологических свойств эндотоксина, которые в своей совокупности способны поддерживать все системы организма в состоянии «физиологического тонуса».

Патологическая системная эндотоксинемия формируется при избытке содержания эндотоксина в крови и характеризуется эндотоксиновой агрессией как универсального фактора патогенеза различных заболеваний инфекционной и неинфекционной природы (Лиходед В.Г. и др., 1994; Яковлев М.Ю., 20036; Петухов В.А., Магомедов М.С., 2008; Шамов Б.А., Маланичева Т.Г., 2011; Панченко Л.Ф. и др., 2012; Левицкий А.П., Левченко Е.М., 2013; Зюзина В.П. и др. 2013;). Наиболее ярким и существенным проявлением эндотоксиновой агрессии является мобилизация клеточных и гуморальных факторов воспаления, включая систему мононуклеарных фагоцитов, активацию системы комплемента и калликреинкининовой системы, продукцию провоспалительных цитокинов, активных форм кислорода (АФК) и других медиаторов воспаления. Существенно, что сами эти медиаторы обладают плейотропными, в том числе взаимопотенцирующими и взаимоингибирующими эффектами. Данное обстоятельство обусловливает полиморфизм клинических проявлений системной патологической эндотоксинемии - от эндотоксинового шока, фактически представляющего собой системное воспаление (Черешнев В.А. с соавт., 2010), до вялотекущего рецидивирующего воспалительного процесса.

Таким образом очевидно, что системная патологическая эндотоксинемия представляет собой одну из серьезных проблем патологии и в первую очередь - инфекционной патологии, формирующей возможность избыточного поступления в системную циркуляцию ЛПС из кишечника или других биотопов в условиях дисбиоза в сочетании с недостаточностью элиминирующих систем организма. Данное положение позволяет рассматривать средства, направленные на снижение содержания эндотоксина в крови и ограничение его агрессивных проявлений, т.е. в совокупности - выраженности эндотоксинемии, как чрезвычайно важные в системе профилактики и лечения инфекционных осложнений (патент №2351351(RU)). При выборе таких средств важно отсутствие у них побочных эффектов влияния на макроорганизм. Этому требованию в первую очередь отвечают вещества природного происхождения.

За последние годы в литературе опубликован ряд сообщений, посвященных влиянию различных корректоров для снижения эндотоксинемии. В частности, предложено применить β-гептилгликозид-мурамилпептид в экспериментальной терапии генерализованных бактериальных инфекций (Калюжин О.В. с соавт., 2000); использовать энтероцин S760 для профилактики и лечения экспериментальной сальмонеллезной инфекции у мышей (Светоч Э.А. с соавт., 2010); коррегировать септический и эндотоксический шок цвиттерионным экзополисахаридом Shigella Sonnei, фаза 1 (Маркина А.А. с соавт., 2013); осуществлять введение комплексного препарата квертулина, содержащего помимо пребиотика инулина и цитрата кальция биофлавоноид кварцетин (Левицкий А.П., Левченко Е.М., 2013).

Наиболее близкими патентами по теме данной заявки являются следующие работы:

1. Способ лечения септического шока и применение мурамиловых соединений - патент №2139086 (GB). Средство является непирогенным и/или уменьшает интенсивность симптомов потери веса, вызванной эндотоксинами, и/или гипофагию, и/или уменьшает выработку фактора некроза опухоли, и/или уменьшает стимуляцию макрофага к переработке эндотоксинов.

2. Способ терапии токсического шока у лабораторных животных при экспериментальной чуме - патент №2336897(RU). Хелперные фракции нейтрофилокинов предотвращают гибель биопробных животных, корректируют гемодинамику и активируют иммунную систему.

3. Способ лечения септического шока при перитоните - заявка на изобретение №96107091 (RU). Для лечения септического шока вводят пентоксифиллин дважды: внутриартериально во время операции и повторно внутрибрюшинно перед зашиванием брюшной полости.

К числу природных протекторов, обладающих противовоспалительным действием, относятся тритерпеноиды (тритерпены) - вещества, относящиеся к терпеноидным (или изопреноидным) соединениям. Последние представляют собой самый многочисленный класс низкомолекулярных соединений, молекулы которых построены из разветвленных С5 единиц (Лукнер М., 1979; Гудвин Т., Мерцер Э., 1986). Они объединяются в один класс по биогенетическому признаку, поскольку все эти соединения образуются из продукта восстановления 3-окси-3-метилглютаровой (мевалоновой) кислоты. Большая часть известных к настоящему времени терпеноидов относится к веществам специализированного обмена растений, где они участвуют в процессах сигнализации, защиты от фитопатогенов и т.д. Многие антибиотики, фитоалексины, реппеленты также имеют терпеноидную структуру (Пасешниченко В.А., 1998).

К числу тритерпеноидов, нашедших практическое применение в медицине, относится и милиацин, входящий в состав просяного масла (Олифсон Л.Е. с соавт., 1991), используемого для лечения трофических язв, инфицированных ран и некоторых других заболеваний (Нузов Б.Г. с соавт., 2001). Экспериментально показано, что обладая широким спектром биологической активности, милиацин стимулирует факторы неспецифической защиты и предотвращает их выраженную депрессию в условиях токсического поражения организма тетрахлорметаном (Павлова М.М., 1984), вызывает гиперцеллюлярность лимфоидных органов, стимулирует иммунный ответ (патент №2244548 (RU)), обладает антиоксидантной (Панфилова Т.В. с соавт., 2006), мембранопротекторной (патент №1043860 (RU)) и антиапоптотической (Панфилова Т.В. с соавт., 2003) активностью, демонстрирует способность регулировать экспрессию генов, контролирующих редокс-баланс клетки (Калинина О.В. с соавт., 2013), предотвращает структурно-функциональные нарушения органов иммуногенеза и печени при действии ксенобиотика (Железнова А.Д., 2010; Калинина О.В., 2013; Фролов Б.А. с соавт., 2013а).

Было также показано, что применение милиацина снижает бактериальную обсемененность внутренних органов при экспериментальной сальмонеллезной инфекции, повышает выживаемость зараженных животных и уменьшает выраженность гипоплазии центральных органов иммуногенеза: тимуса и красного костного мозга (Фролов Б.А. с соавт., 20136). В этой связи закономерным является интерес к исследованию способности милиацина ограничивать выраженность системной эндотоксинемии на данной экспериментальной модели инфекционного процесса.

Задачей изобретения является расширение арсенала природных лекарственных средств, снижающих системную патологическую эндотоксинемию организма при действии эндотоксинов грамотрицательных бактерий.

Новизной изобретения является свойство растительного тритерпеноида милиацина ограничивать системную патологическую эндотоксинемию при сальмонеллезной инфекции.

Существенным отличием предлагаемого изобретения является то, что применяют милиацин в качестве средства, ограничивающего системную патологическую эндотоксинемию при сальмонеллезной инфекции.

Технический результат, обеспечиваемый изобретением, заключается в создании нового средства, снижающего системную патологическую эндотоксинемию организма при действии эндотоксинов грамотрицательных бактерий.

Экспериментально установлено, что заявляемое средство снижает системную патологическую эндотоксинемию организма при действии эндотоксинов грамотрицательных бактерий.

Предложенное средство 3-β-метокси-Δ¹⁸-олеанен (милиацин) относится к группе природных циклических тритерпеноидов, содержится в просяном масле и представляет собой вещество белого цвета с температурой плавления 285-286°C. Он оптически активен, нерастворим в воде, слаборастворим в этиловом спирте, диэтиловом эфире, ацетоне, хорошо растворим в хлороформе. Милиацин обладает хорошей переносимостью в диапазоне доз от 2 до 1000 мг/кг. ЛД50 этого соединения больше 1000 мг/кг (Олифсон Л.Е. с соавт., 1991), что свидетельствует об отсутствии у него токсических свойств.

Химическая структура пентациклического тритерпеноида - милиацина (3-β-метокси-Δ¹⁸-олеанена) представлена на фиг.1.

Описание эксперимента

Исследования выполнены на 320 мышах-самцах (CBAxC₅₇B₁₆)F₁, массой 22-25 г, поставленных из питомника «Столбовая» РАМН. Животных содержали в стандартных пластмассовых клетках при комнатной температуре, двухразовом питании натуральным кормом в количестве, соответствующем суточным нормам, при неограниченном доступе к воде. Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными, отраженными в «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей» (Страсбург, 1985). Эвтаназию мышей осуществляли дислокацией шейных позвонков или декапитацией под эфирным наркозом.

Заражение животных выполняли внутрибрюшинным введением штамма Salmonella enteritidis госпитального происхождения в дозе 2×10⁶ бактерий на мышь.

Милиацин вводили трехкратно внутрибрюшинно с интервалами в 3 дня между введениями в разовой дозе 2 мг/кг. Заражение животных проводили через 24 часа после последнего введения тритерпеноида.

Всего использовано 4 группы животных: I - интактные (положительная группа сравнения); II - зараженные (отрицательная группа сравнения); III - зараженные после предварительного трехкратного введения растворителя для милиацина: твин 21 в конечной концентрации 1,6×10^-7 моль/кг (контроль); IV - зараженные после предварительного введения милиацина (опыт). Животных II-IV групп выводили из эксперимента на 10 сутки после заражения - в период, соответствующий наибольшей микробной обсемененности их внутренних органов (Фролов Б.А. с соавт., 20136). В эти же сроки осуществляли эвтаназию интактных мышей.

Определение эндотоксина в плазме крови мышей проводилось с помощью хромогенного LAL-теста по конечной точке путем измерения интенсивности окрашивания проб с помощью фотометра "Multiskan" (Labsystems, Финляндия) при длине волны 405 нм после остановки реакции. Количественное содержание эндотоксина в исследуемых пробах рассчитывали с помощью стандартной кривой, полученной при использовании серийных разведений референс-эндотоксина и выражали в ЕД/мл. Выполнение данных исследований осуществлялось с использованием наборов Hbt LAL (Hycult biotech, Нидерланды).

В качестве показателей вовлеченности миелоидных клеток и лимфоцитов в воспалительный процесс проводилось определение способности спленоцитов к митогениндуцированной (Кон А, 5 мкг/мл) продукции провоспалительных цитокинов путем определения их содержания в супернатантах культур методом ИФА (тест-системы "Bender MedSystems", Австрия). В том числе: ИЛ-6 - провоспалительного цитокина широкого спектра действия, участвующего в индукции практически всего комплекса местных проявлений воспалительной реакции и служащего основным фактором, запускающим в гепатоцитах синтез белков острой фазы воспаления; ИЛ-17, главный эффект которого состоит в активации фактора транскрипции NF-kB и экспрессии многочисленных NF-kB-зависимых генов воспаления; гамма-интерферона (γ-ИНФ) - основного медиатора клеточного воспаления, осуществляемого путем активации макрофагов в виде усиления экспрессии ими ряда ферментов, ответственных за образование оксида азота и активных форм кислорода. Наряду с этим осуществлялось определение способности спленоцитов к продукции и противовоспалительного цитокина - ИЛ-10, ингибирующего активность макрофагов, угнетающего способность к продукции провоспалительных цитокинов (ИЛ-17) и служащего антагонистом γ - ИНФ.

Маркером окислительного стресса служили продукты окисления, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой: ТБК-реагирующие продукты (ТБК-РП) (Vincent Н.K. et al., 2007). Определение последних в сыворотке крови проводили с использованием стандартных наборов реактивов ТБК-АГАТ («Агат-Мед», Россия). Интенсивность цветной реакции определяли на спектрофотометре APEL PD-303 UV при длине волн 535 и 570 нм.

В качестве показателя мобилизации нейроэндокринной регуляции на действие эндотоксина, представляющего собой разновидность биологического стрессора (Аниховская И.А. с соавт., 2006) проведено определение содержания в крови кортикостерона - эффекторного продукта одной из ведущих стресс-реализующих систем - гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной.

Интегральным критерием токсического влияния эндотоксинемии на организм служил показатель гибели животных, регистрируемой в течение 21 дня после заражения.

Статистическую обработку полученных данных проводили методами вариационной статистики из пакета прикладных программ Microsoft Excel и Statistica 10 с оценкой различий между средними величинами по t-критерию Стьюдента. Статистические результаты выражали в виде медианы (Me), нижних (Q25) и верхних (Q75) квартилей. Уровни статистической значимости различий определяли с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни. На Фиг. 2 * - обозначены достоверные различия (р<0,05) показателей I группы по сравнению с показателями II, III, IV групп; ^O - обозначены достоверные различия (р<0,05) показателей II и IV групп; ^□ - обозначены достоверные различия (р<0,05) показателей III и IV групп. В графе гибель: в числителе - количество погибших животных; в знаменателе - общее число зараженных животных.

Установлено, что сальмонеллезная инфекция обусловливает значимое возрастание содержания эндотоксина в крови зараженных животных (группа II), у которых медиана показателя его количества в циркуляции на 10 сутки после заражения превосходила медиану количества эндотоксина у интактных мышей (группа I) в 7,25 раза. Использование растворителя, предшествовавшее заражению (группа III), не оказало влияния на прирост эндотоксина. В этом случае медиана показателя его содержания в крови превышала значения интактных животных в 7,5 раз. Предварительное введение милиацина (группа IV), напротив, обеспечивало существенное снижение (на 50%) содержания эндотоксина по отношению ко II и III группам зараженных животных до уровня, превосходящего показатель интактных мышей лишь в 3,75 раза (см. фиг. 2).

Снижение содержания эндотоксина под влиянием милиацина приводило к менее выраженному проявлению общего адаптационного синдрома в виде ослабления мобилизации гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной системы у животных опытной группы. Так, если среди только зараженных мышей (группа II) и зараженных мышей, получавших предварительно растворитель (группа III), уровень кортикостерона в крови превышал значения интактных животных (группа I) в 3,46 и в 2,81 раза, то у мышей IV группы этот показатель составил 1,43 (см. фиг. 2).

В условиях снижения содержания эндотоксина у мышей опытной группы (IV) не наблюдалось повышения содержания в крови ТБК-РП по отношению к интактным животным (группа I). В то же время в группах зараженных мышей (группа II) и зараженных мышей, получавших растворитель (группа III), данный показатель интенсивности окислительного стресса был существенно повышен без значимых различий между этими группами (см. фиг. 2).

Эндотоксинемия у зараженных мышей (группа II) характеризовалась не только возрастанием уровня эндотоксина в циркуляции, но и существенным повышением продукции провоспалительных цитокинов: ИЛ-6 (в 3,57 раза), ИЛ-17 (в 10,1 раз) и γ-ИНФ (в 15,85 раза). Предварительное введение растворителя не ослабляло этого эффекта. Прирост цитокинов у данной группы животных (группа III) составил: ИЛ-6 (в 2,54 раза), ИЛ-17 (в 9,5 раз) и γ-ИНФ (в 16,9 раз). Что касается группы зараженных животных с предварительным введением милиацина (группа IV), то в ней регистрировалось ослабление продукции данных медиаторов воспаления. В частности, уровень ИЛ-6 у животных этой группы на 57,8% был ниже, чем у только зараженных мышей (группа II) и на 40,8% ниже, чем у зараженных мышей, получавших перед заражением растворитель (группа III). Снижение продукции ИЛ-17 у мышей IV группы по отношению к группам II и III составило 29% и 24,7%, а для γ-ИНФ соответственно - 19,8 и 25%. В противоположность этому, продукция провоспалительного цитокина - ИЛ-10 у мышей IV группы была выражена максимально и превышала уровень его продукции по отношению к животным II и III групп на 33,1 и 97,4% (см. фиг. 2).

Как итог ослабления системной патологической эндотоксинемии у мышей опытной группы регистрировалось снижение гибели (25%) по сравнению с только зараженными животными (37,5%) и зараженными животными, получавшими растворитель (40,6%) (см. фиг. 2).

Снижение выраженности эндотоксинемии у инфицированных животных под влиянием милиацина может отражать один из значимых механизмов его действия. Наиболее очевидным объяснением такого эффекта тритерпеноида является снижение бактериальной нагрузки в виде уменьшения микробной обсемененности внутренних органов у животных опытной группы (IV) по отношению к контролю (III) и отрицательной группе сравнения (II) (Фролов Б.А. с соавт., 20136). Вместе с тем очевидно, что выраженность эндотоксинемии обусловлена не только поступлением эндотоксина в системную циркуляцию, но и возможностью его элиминации из крови. Последняя в наибольшей степени определяется активностью макрофагальной системы печени - клеток Купфера, характеризующихся высокой экспрессией рецепторов к ЛПС - TLR4. Клиренсную функцию выполняют и клетки печеночной паренхимы, в которые эндотоксин переносится ЛПВП, после чего подвергается лизосомальному процессингу и выведению с желчью. Принимая во внимание полученные ранее данные о способности милиацина оказывать гепатопротекторный эффект, в том числе и в отношении клеток Купфера, представляется вероятным, что влияние тритерпеноида реализовывалось в отношении этих механизмов антиэндотоксиновой защиты печени.

Кроме того, можно полагать, что эффекты тритерпеноида опосредуются и его действием на клеточные мембраны. Последнее представляет особое звено в механизме действия тритерпеноида при сальмонеллезной инфекции с учетом внутриклеточного паразитирования возбудителя.

Таким образом, установленная в работе способность милиацина ослаблять системную патологическую эндотоксинемию при экспериментальной сальмонеллезной инфекции, служит обоснованием дальнейшей разработки тритерпеноида в качестве возможного средства повышения эффективности воздействия на инфекционный процесс.

Литература

1. Аниховская И.А., Опарина О.Н., Яковлева М.М. и др. Кишечный эндотоксин как универсальный фактор адаптации и патогенеза общего адаптационного синдрома // Физиология человека, 2006. - №2. - С. 87-91.

2. Гудвин Т., Мерцер Э. Введение в биохимию растений // М.: Мир, 1986. - Т. 2. - С. 42-106.

3. Дентовская С.В., Бахтеева И.В., Титарева Г.М. и др. Структурное разнообразие и эндотоксическая активность липополисахарида Yersinia резй5 // Биохимия. - 2008. - Т. 73. - Вып. 2. - С. 237-246.

4. Железнова А.Д. Экспериментальное обоснование применения милиацина для коррекции иммуносупрессии, индуцированной метотрексатом. Автореф. дисс. канд. мед. наук. Пермь, 2010. - 22 с.

5. Заявка на изобретение №96107091/14 (RU).

6. Зюзина В.П., Демидова Г.В., Соколова Е.П. и др. Эндотоксиновая толерантность мышей к действию липополисахарида и комплекса липополисахарид-мышиный токсин вирулентного штамма Yersinia pestis 231 // ЖМЭИ. - 2013. - №5. - С. 74-80.

7. Калинина О.В. Гепатопротекторная активность милиацина при мето-трексат-индуцированном повреждении печени (экспериментальное исследование). Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва, 2013. - 24 с.

8. Калинина О.В., Колотова Е.С., Панфилова Т.В., Штиль А.А., Фролов Б.А. Природный тритерпеноид милиацин предотвращает вызванный метотрексатом окислительный стресс и нормализует экспрессию генов syp2e1 и глутатионредуктазы в печени // Патол. физиол. и экспер. терапия, 2013. - №1. - С. 70-74.

9. Калюжин О.В., Мулик Е.Л., Сереев В.В., Калина Н.Г., Елкина С.И., Калюжина М.И., Кузовлев Ф.Н., Караулов А.В. Применение β-гептилгликозид-мурамилпептида в экспериментальной терапии генерализованных бактериальных инфекций // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2000. - №4. - С. 73-76.

10. Левицкий А.П. Биохимические маркеры воспаления и дисбиоза в печени крыс при экспериментальной эндотоксинемии и воздействии квертулина / А.П. Левицкий, Е.М. Левченко // Bic-ник морськоУ медицини. - 2013. - №2. - С. 64-69.

11. Лиходед В.Г., Аниховская И.А., Аполлонин А.В. Fc-зависимое связывание эндотоксинов грамотрицательных бактерий полиморфноядерными лейкоцитами крови человека. - Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1994, 2: 76-79.

12. Лукнер М. Вторичный обмен у микроорганизмов, растений и животных // М.: Мир, 1979. - С. 194-252.

13. Маркина А.А., Львов В.Л., Апарин П.Г. Коррекция септического и эндотоксического шока при иммунизации цвиттерионным экзополисахаридом Shigella Sonnei, фаза 1 // Инфекционная иммунология. - 2013. - №1. - С. 39-42.

14. Нузов Б.Г., Стадников А.А., Бородин В.И. Пути улучшения результатов лечения острого тромбофлебита поверхностных вен нижних конечностей. // Анн. травм, и ортопедии, 2001. - №2. - С. 50-51.

15. Олифсон Л.Е., Осадчая Н.Д., Нузов Б.Г., Галкович К.Г., Павлова М.М. Химическая природа и биологическая активность милиацина. // Вопросы питания. - 1991. - №2. - С. 57-59.

16. Павлова М.М. Изучение влияния активного стероида проса (3-β-метокси-Δ¹⁸-олеанена) при токсическом поражении печени CCU в эксперименте. Автореф. дисс. канд. биол. наук. Оренбург, 1984. - 21 с.

17. Панфилова Т.В., Штиль А.А., Полосухина Е.Р., Барышников А.Ю., Фролов Б.А. Влияние тритерпеноида милиацина на чувствительность лимфоцитов тимуса и селезенки к апоптозу, индуцированному дексаметазоном // Бюлл. экспер. биол. и мед., 2003. - Т. 136. - №10. - С. 382-385.

18. Панфилова Т.В., Штиль А.А., Фролов Б.А. Тритерпеноид милиацин снижает индуцированное стрессом ПОЛ // Бюлл. экспер. биол. и мед., 2006. - Т. 141. - №6. - С. 633-635.

19. Панченко Л.Ф., Пирожков С.В., Теребилина Н.Н. и др. Механизмы антиэндотоксиновой защиты печени. Пат. физиол. и эксп. терапия. 2012. 2: 62-69.

20. Патент №1043860 (RU).

21. Патент №2139086 (GB).

22. Патент №2244548 (RU).

23. Патент №2336897 (RU).

24. Патент №2351351 (RU).

25. Пасешниченко В.А. Новый альтернативный путь биосинтеза изопреноидов у эубактерий и растений // Биохимия, 1998. - Т. 63. - Вып. 2. - С. 171-182.

26. Петухов В.А., Магомедов М.С. Современный взгляд на проблему эндотоксиновой агрессии и дисфункции эндотелия в хирургии. Хирургия, реанимация и интенсивная терапия, 2008, 2: 37-46.

27. Светоч Э.А., Борзилов А.И., Ерусланов Б.В., Коробова О.В., Теймуразов М.Г., Комбарова Т.Н., Дятлов И.А. Использование энтероцина S760 для профилактики и лечения экспериментальной сальмонеллезной инфекции у мышей // Журнал микробиологии. - 2010. - №5. - С. 44-48.

28. Фролов Б.А., Калинина О.В., Кириллова А.В., Штиль А.А. Преодоление гепатотоксичности метотрексатом: роль тритерпеноидов // Клиническая онкогематология, 2013а. - Т. 6. - №1. - С. 1-10.

29. Фролов Б.А., Чайникова И.Н., Железнова А.Д., Панфилова Т.В., Медведева И.П., Филиппова Ю.В., Смолягин А.И. Защитный эффект милиацина при экспериментальной сальмонеллезной инфекции // ЖМЭИ, 2013б. - №6. - С. 3-8.

30. Черешнев В.А., Фролов Б.А., Беляева Н.М., Гусев Е.Ю., Панфилова Т.В., Черешнева М.В., Юшков Б.Г. Молекулярные механизмы воспаления. / Екатеринбург: УрО РАН, 2010. - 262 с.

31. Шамов Б.А., Маланичева Т.Г. Коррекция системной эндотоксинемии у детей / Б.А. Шамов, Т.Г. Маланичева // Лечащий Врач. - 2011. - JVL4. - C. 80-82.

32. Яковлев М.Ю. Элементы эндотоксиновой теории физиологии и патологии человека // Физиология человека, 2003а. - Т. 29. - №4. - С. 154-165.

33. Яковлев М.Ю. «Эндотоксиновая агрессия» как предболезнь или универсальный фактор патогенеза заболеваний человека и животных // Успехи современной биологии, 2003б. - Т. 123. - №1. - С. 31-40.

Применение милиацина в качестве средства для снижения системной патологической эндотоксинемии при сальмонеллезной инфекции.