Антитела к erbb3

Антитела к erbb3

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Данная заявка заявляет право и приоритет предварительной заявки на патент с серийным номером 61/322712, поданной 9 апреля 2010 г., полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0002] Областью настоящего изобретения является молекулярная биология, иммунология и онкология. Более конкретно, областью являются гуманизированные антитела, которые связывают ErbB3/HER3 человека.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] HER3/c-ErbB3 (называемый в данном документе ErbB3) является членом семейства рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR). ErbB3 связывает нейрегулин/херегулин (NRG/HRG). Рецепторы в семействе EGFR представляют собой одиночные трансмембранные рецепторы с внутриклеточным тирозинкиназным доменом. Тогда как другие члены семейства EGFR, т.е. EGFR/HER1/ErbB1, Her2/ErbB2 и HER4/ErbB4, обладают тирозинкиназной активностью, ErbB3 обладает слабой или не имеет тирозинкиназной активности, и таким образом является "киназно-мертвым".

[0004] Внеклеточный домен (ECD) в семействе EGFR состоит из четырех доменов. Домены 1 и 3 (также известные как домены L1 и L2) ответственны за связывание лигандов. Богатые цистеином домены 2 и 4 (также известные как домены С1 и С2) вовлекаются в димеризацию с рецепторами-партнерами. После связывания лиганда ECD претерпевает конформационные изменения. Взаимодействие доменов 2 и 4, поддерживающее ограниченную (неактивную) конформацию рецептора, ослабляется, и устанавливается растянутая (активная) конформация. Растянутая конформация способствует димеризации с другими рецепторами-партнерами. Her2/ErbB2 является единственным исключением из этого общего правила, т.е. Her2-ECD конститутивно находится в растянутой конформации. На сегодняшний день не определен лиганд для Неr2.

[0005] Поскольку ErbB3 не обладает собственной киназной активностью, он должен димеризоваться с другим рецептором с активной тирозинкиназой, чтобы активироваться путем фосфорилирования тирозина. Димеризация может произойти между двумя различными рецепторами (гетеродимеризация), например ErbB3 и EGFR/HER1/ErbB1, Her2/ErbB2 или HER4/ErbB4. Недавно было также показано, что ErbB3 димеризуется с MET. После ассоциации с другим тирозинкиназным рецептором, ErbB3 активируется путем фосфорилирования по меньшей мере девяти остатков тирозина во внутриклеточном домене ErbB3, а затем быстро ассоциируется с адаптерами или молекулами нисходящего сигнального пути. Шесть фосфорилированных остатков тирозина ErbB3 ассоциируют непосредственно с р85-субъединицей фосфатидилинозитол-3-киназы (PIK3), что приводит к активации пути выживания клеток, который контролируется осью PI3K/Akt. Конститутивная активация ErbB3 путем нерегулируемой димеризации и/или нерегулируемого фосфорилирования ErbB3 может приводить к некоторым злокачественным опухолям.

[0006] Сверхэкспрессия ErbB3 связывается с плохим прогнозом при различных карциномах (например, раке молочной железы, яичника, предстательной железы, толстой кишки, поджелудочной железы, желудка, а также головы и шеи). Сверхэкспрессия ErbB3 также коррелирует с метастазами, от местных до удаленных, при раке легких, желудка и толстой кишки, а также костной инвазией при раке предстательной железы (Sithanandam et al., 2008, CANCER GENE THERAPY 15: 413). Сверхэкспрессию ErbB3 связали с устойчивостью к нескольким видам лечения рака, в том числе лечению ингибиторами тирозинкиназы EGFR при немелкоклеточном раке легких (NSCLC) и раке головы и шеи, лечению ингибитором Her2 злокачественных опухолей молочной желез и лечению лучевой терапией при злокачественных опухолях поджелудочной железы. Кроме того, сверхэкспрессию NRG, лиганда для ErbB3, также связали с устойчивостью к лечению ингибиторами тирозинкиназы EGFR. Chen et al. описывают применение моноклональных антител к ErbB3, которые ингибируют действие NRG, и демонстрируют активность ингибирвания роста в отношении клеток рака молочной железы и яичников (Chen et al., 1996, J. BIOL. CHEM. 271: 7620).

[0007] Существует потребность в улучшенных антителах к ErbB3, которые можно применять в качестве терапевтических средств.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

[0008] Настоящее изобретение основано на открытии семейства антител, которые специфически связывают ErbB3 человека. Антитела содержат сайты связывания ErbB3, основанные на CDR, которые специфически связывают ErbB3 человека. При использовании в качестве терапевтических средств, антитела разрабатывают, например, гуманизируют, для того, чтобы уменьшить или исключить иммунный ответ при введении пациенту-человеку.

[0009] Антитела, раскрытые в данном документе, предотвращают или ингибируют активацию ErbB3 человека. В некоторых вариантах осуществления антитела предотвращают связывание ErbB3 с лигандом, например, NRG/HRG, тем самым нейтрализуют биологическую активность ErbB3. В других вариантах осуществления антитела к ErbB3 ингибируют димеризацию ErbB3, тем самым нейтрализуют биологическую активность ErbB3. Антитела, раскрытые в данном документе, можно применять для ингибирования пролиферации опухолевых клеток in vitro или in vivo. При введении пациенту-человеку с раком (или животной модели, такой как мышиной модели) антитела ингибируют или уменьшают рост опухоли у пациента-человека (или животной модели).

[0010] Эти и другие аспекты и преимущества изобретения иллюстрируются следующими фигурами, подробным описанием и формулой изобретения. Используемое в данном документе "включая" означает без ограничения, а приведенные примеры не являются неограничивающими.

ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0011] Настоящее изобретение может быть более полно понято со ссылкой на следующие графические материалы.

[0012] ФИГ.1 (известный уровень техники) представляет собой схематическое изображение типичного антитела.

[0013] ФИГ.2 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую аминокислотную последовательность полной вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антител, обозначенных как 04D01, 09D03, 11G01, 12А07, 18Н02, 22А02 и 24С05. Аминокислотные последовательности для каждого антитела выравнены друг относительно друга, и гипервариабельные участки (CDR) (определение по Kabat), CDR₁, CDR₂ и CDR₃, обозначены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой каркасные (FR) последовательности.

[0014] ФИГ.3 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую последовательности CDR₁, CDR₂ и CDR₃ (определение по Kabat) для каждой из последовательностей вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина на фиг.2.

[0015] ФИГ.4 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую аминокислотную последовательность полной вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антител 04D01, 09D03, 11G01, 12А07, 18Н02, 22А02 и 24С05. Аминокислотные последовательности для каждого антитела выравнены друг относительно друга, и последовательности CDR₁, CDR₂ и CDR₃ (определение по Kabat) обозначены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой каркасные (FR) последовательности.

[0016] ФИГ.5 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую последовательности CDR₁, CDR₂ и CDR₃ (определение по Kabat) для каждой из последовательностей вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина на фиг.4.

[0017] ФИГ.6А и 6В представляют собой графики, обобщающие результаты эксперимента по измерению активности нейтрализации для антител отрицательного контроля (мышиный IgG (Δ)) и моноклональных антител к ErbB3: 04D01 (■), 12А07 (○), 18Н02 (◊), 22А02 (●) и 24С05 (□) в отношении ингибирования связывания NRG1-β1 с hErbB3 (ФИГ.6А) и по измерению усиленного связывания NRG1-β1 с rhErbB3 с помощью антитела mAb 09D03 к ErbB3 (▲) и 11G01 (*) (ФИГ.6В).

[0018] ФИГ.7 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности нейтрализации для антител отрицательного контроля (мышиный IgG) и моноклональных антител к ErbB3: 04D01, 09D03, 11G01, 12А07, 18Н02, 22А02 и 24С05 в отношении ингибирования связывания NRG1-α1 с rhErbB3.

[0019] ФИГ.8 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению распознавания на клеточной поверхности антителами к ErbB3 химерного белка Her2/3d2, экспрессированного на поверхности клеток СНО.

[0020] ФИГ.9 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению анти-пролиферативной активности для антител отрицательного контроля IgG (мышиный IgG (Δ)) и моноклональных антител к ErbB3: 04D01 (■), 09D03 (▼), 11G01 (♦), 12А07 (○), 18Н02 (◊), 22А02 (●) и 24С05 (□) в клетках BaF/3, экспрессирующих Her2 и ErbB3, в присутствии NRG1-β1.

[0021] ФИГ.10 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению анти-пролиферативной активности для моноклональных антител к ErbB3: 04D01 (■), 09D03 (▼), 11G01 (♦), 12А07 (○), 18Н02 (◊), 22А02 (●) и 24С05 (□) в клетках MCF7 в присутствии NRG1-β1.

[0022] ФИГ.11 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению анти-пролиферативной активности для антител отрицательного контроля (мышиный IgG) и моноклональных антител к ErbB3: 04D01, 09D03, 11G01, 12А07, 18Н02, 22А02 и 24С05 в клетках SKBR-3, обработанных 5 г/мл антител, в присутствии сыворотки.

[0023] ФИГ.12 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования для антител отрицательного контроля IgG и моноклональных антител к ErbB3: 04D01, 09D03,11G01, 12А07,18Н02, 22А02 и 24С05 при фосфорилировании ErbB3, индуцированном NRG, в клетках SKBR-3. Также показаны контроли в отсутствие антитела/отсутствие лиганда и отсутствие антитела.

[0024] ФИГ.13А и 13В представляют собой графики, представляющие результаты эксперимента по измерению активности ингибирования для моноклональных антител к ErbB3: 04D01, 09D03, 11G01, 12А07, 18Н02, 22А02 и 24С05 при фосфорилировании Akt в ответ на NRG1-β1 в клетках MCF7 (ФИГ.13А) и в клетках DU145 (ФИГ.13В), определяемой с помощью ELISA. Также показаны контроли в отсутствие антитела/отсутствие лиганда и отсутствие антитела.

[0025] ФИГ.14 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению ингибирующей активности в отношении опухоли для моноклональных антител к ErbB3: 04D01 (Δ), 09D03 (*), 11G01 (□), 12А07 (▲), 18Н02 (●), 22А02 (■), 24С05 (○) и IgG-контроля человека (--■--), при дозе 20 мг/кг на ксенотрансплантатной модели опухоли поджелудочной железы ВхРС3 у SCID-мышей СВ17 (растворитель (контроль), PBS (♦)).

[0026] ФИГ.15 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую аминокислотные последовательности полной вариабельной области тяжелой цепи 24С05 и полных вариабельных областей гуманизированных тяжелых цепей, обозначенных как Sh24C05 Hv3-7, Sh24C05 Hv3-11, Sh24C05 Hv3-11 N62S, Sh24C05 Hv3-21, Sh24C05 Hv3-23, Sh24C05 Hv3-30 и Hu24C05 HvA. Аминокислотные последовательности для каждой вариабельной области тяжелой цепи выравнены друг относительно друга, и гипервариабельные участки (CDR) (определение по Kabat), CDR₁, CDR₂ и CDR₃, обозначены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой каркасные (FR) последовательности.

[0027] ФИГ.16 представляет собой схематическую диаграмму, показывающую аминокислотные последовательности полной вариабельной области легкой цепи 24С05 и полных вариабельных областей гуманизированных легких цепей, обозначенных как Sh24C05 Kv1-9, Sh24C05 Kv1-16, Sh24C05 Kv1-17, Sh24C05 Kv1-33, Sh24C05 Kv1-39 и Hu24C05 KvA. Аминокислотные последовательности для каждого вариабельной области легкой цепи выравнены друг относительно друга, и последовательности CDR₁, CDR₂ и CDR₃ (определение по Kabat) обозначены в рамках. Последовательности за пределами рамок представляют собой каркасные (FR) последовательности.

[0028] ФИГ.17 представляет собой сенсограммы Biacore, представляющие результаты эксперимента по измерению кинетических значений для моноклональных антител к ErbB3: Sh24C05-31 N62S-IgG1, Ab#6, U1-53 и U1-59.

[0029] ФИГ.18А представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности нейтрализации для антител отрицательного контроля (IgG человека (□)) и моноклональных антител к ErbB3: Sh24C05-25 N62S-IgG1 (▲), Sh24C05-25 N62S-IgG2 (Δ), Sh24C05-31 N62S-IgG1 (●) и Sh24C05-31 N62S-IgG2 (○). ФИГ.18В представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности нейтрализации для IgG человека (□) и моноклональных антител к ErbB3 Ab#6 IgG2 (▼), U1-53 (◊) и U1-59 (■).

[0030] ФИГ.19А представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования для антител отрицательного контроля (IgG человека (□)) и моноклональных антител к ErbB3: Sh24C05-25 N62S-IgG1 (▲), Sh24C05-25 N62S-IgG2 (Δ), Sh24C05-31 N62S-IgG1 (●) и Sh24C05-31 N62S-IgG2 (○) в клетках BaF/3, экспрессирующих Her2 и ErbB3, в присутствии NRG1-β1. ФИГ.19В представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению ингибирующей активности для IgG человека (○) и моноклональных антител к ErbB3: Sh24C05-31 N62S-IgG1 (●), Ab#6 IgG2 (▼), U1-53 (◊) и U1-59 (■) в клетках BaF/3, экспрессирующих Her2 и ErbB3, в присутствии NRG1-β1.

[0031] ФИГ.20 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования для антител отрицательного контроля (IgG человека) и моноклональных антител к ErbB3: Sh24C05-25 N62S-IgG1, Sh24C05-25 N62S-IgG2, Sh24C05-31 N62S-IgG1 и Sh24C05-31 N62S-IgG2 при устойчивом фосфорилировании ErbB3 в растущих клетках SKBR-3.

[0032] ФИГ. 21 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению разрушения рецептора ErbB3 с помощью антител отрицательного контроля (IgG человека) и моноклональных антител к ErbB3: Sh24C05-25 N62S-IgG1, Sh24C05-25 N62S-IgG2, Sh24C05-31 N62S-IgG1 и Sh24C05-31 N62S-IgG2 в растущих клетках SKBR-3.

[0033] ФИГ.22 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования в отношении опухоли для IgG человека, IgG мыши или моноклональных антител к ErbB3 при дозе 2 мг/кг на ксенотрансплантатной модели опухоли поджелудочной железы ВхРС3 у SCID-мышей СВ17 (мышиные 24С05 (Δ), Sh24C05-31 N62S IgG1 (●), Sh24C05-31 N62S IgG2 (♦), Sh24C05-25 N62S IgG1 (▲), Sh24C05-25 N62S IgG2 (■), растворитель (контроль) (a), IgG мыши (х) и IgG человека (◊)).

[0034] ФИГ.23А представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования в отношении опухоли для IgG мыши или моноклональных антител к ErbB3 при дозе 5 мг/кг на ксенотрансплантатной модели немелкоклеточного рака легкого Calu-3 у голых мышей NCR (растворитель (контроль) (□), IgG мыши (х), Sh24C05-31 N62S IgG1 (▲), Ab#6 IgG2 (●) и U1-59 (■)).

[0035] ФИГ.23В представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования в отношении опухоли для IgG мыши или моноклональных антител к ErbB3 при дозе 10 мг/кг на ксенотрансплантатной модели немелкоклеточного рака легкого Calu-3 у голых мышей NCR (растворитель (контроль) (□), IgG мыши (х), Sh24C05-31 N62S IgG1 (▲), Ab#6 IgG2 (●) и U1-59 (■)).

[0036] ФИГ.23С представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования в отношении опухоли для IgG мыши или моноклональных антител к ErbB3 при дозе 20 мг/кг на ксенотрансплантатной модели немелкоклеточного рака легкого Calu-3 у голых мышей NCR (растворитель (контроль) (□), IgG мыши (х), Sh24C05-31 N62S IgG1 (▲), Ab#6 IgG2 (●) и U1-59 (■)).

[0037] ФИГ.24 представляет собой график, обобщающий результаты эксперимента по измерению активности ингибирования в отношении опухоли для IgG человека, мыши или моноклональных антител к ErbB3 в MDA-MB-453 на ксенотрансплантатной модели рака молочной железы у SCID-мышей NOD (растворитель (контроль) (□), IgG человека (х), Sh24C05-31 N62S IgG1 при дозе 5 мг/кг (◊), Sh24C05-31 N62S IgG1 при дозе 10 мг/кг (Δ), Sh24C05-31 N62S IgG1 при дозе 20 мг/кг (▲), Ab#6 IgG2 при дозе 10 мг/кг (●) и U1-59 при дозе 10 мг/кг (■)).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0038] Антитела к ErbB3, раскрытые в данном документе, основаны на антиген-связывающих сайтах определенных моноклональных антител, отобранных за их способность нейтрализовать биологическую активность полипептидов ErbB3 человека. Антитела содержат последовательности CDR вариабельных областей иммуноглобулина, которые определяют связывающий сайт для ErbB3. В некоторых вариантах осуществления антитела предотвращают связывание ErbB3 с лигандом, например, NRG/HRG, тем самым нейтрализуя биологическую активность ErbB3. В других вариантах осуществления антитела к ErbB3 ингибируют димеризацию ErbB3, тем самым нейтрализуя биологическую активность ErbB3. В других вариантах осуществления антитела к ErbB3 ингибируют фосфорилирование ErbB3 и нисходящий сигнальный путь.

[0039] В связи с нейтрализующей активностью этих антител они пригодны для ингибирования роста и/или пролиферации определенных раковых клеток и опухолей. Антитела можно разрабатывать так, чтобы минимизировать или устранить иммунный ответ при введении пациенту-человеку. В некоторых вариантах осуществления антитела сливают или конъюгируют с другими фрагментами, такими как детектирумые метки или эффекторные молекулы, такие как низкомолекулярных токсинов.

I. Антитела, которые связывают ErbB3

[0040] В некоторых вариантах осуществления антитело включает: (а) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую структуру CDR_H1-CDR_H2-CDR_H3 и (b) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, где вариабельная область тяжелой цепи и вариабельная область легкой цепи вместе определяют единый связывающий сайт для связывания ErbB3 человека. CDRm включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 5 (04D01), SEQ ID NO: 15 (09D03), SEQ ID NO: 25 (11G01), SEQ ID NO: 34 (12A07), SEQ ID NO: 41 (18H02), SEQ ID NO: 51 (22A02), SEQ ID NO: 57 (24C05) и SEQ ID NO: 75 (24C05); CDRH2 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 (04D01), SEQ ID NO: 16 (09D03), SEQ ID NO: 26 (11G01), SEQ ID NO: 35 (12A07), SEQ ID NO: 42 (18H02), SEQ ID NO: 52 (22A02), SEQ ID NO: 58 (24C05) и SEQ ID NO: 148 (Sh24C05 Hv3-11 N62S), и CDR_H3 включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 (04D01), SEQ ID NO: 17 (09D03), SEQ ID NO: 27 (11G01), SEQ ID NO: 36 (12A07, 22A02), SEQ ID NO: 43 (18H02) и SEQ ID NO: 59 (24C05). Всюду в описании за конкретным SEQ ID NO. следует в скобках антитело, которое дало начало этой последовательности. Например, "SEQ ID NO: 5 (04D01)" означает, что SEQ ID NO: 5 происходит от антитела 04D01.

[0041] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5 (04D01), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6 (04D01), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 (04D01).

[0042] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15 (09D03), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 (09D03), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17 (09D03).

[0043] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25 (11G01), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 (11G01), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27 (11G01).

[0044] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 34 (12А07), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 35 (12А07), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 (12А07, 22А02).

[0045] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 41 (18Н02), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 42 (18Н02), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 43 (18Н02).

[0046] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 51 (22А02), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 52 (22А02), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 (12А07, 22А02).

[0047] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57 (24С05) или SEQ ID NO: 75 (24C05), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (24С05), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59 (24С05).

[0048] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57 (24С05), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (24C05), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59 (24C05).

[0049] В других вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 75 (24C05), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 58 (24C05), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59 (24C05).

[0050] В определенных вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую CDR_H1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57 (24C05) или SEQ ID NO: 75 (24C05), CDR_H2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 148 (Sh24C05 Hv3-11 N62S), и CDR_H3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 59 (24C05).

[0051] Предпочтительно, последовательности CDR_H1, CDR_H2 и CDR_H3 помещаются между FR иммуноглобулина человека или гуманизированными FR иммуноглобулина. Антитело может представлять собой интактное антитело или антиген-связывающий фрагмент антитела.

[0052] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит (а) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, включающую структуру CDR_L1-CDR_L2-CDR_L3, и (b) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, где вариабельная область легкой цепи IgG и вариабельная область тяжелой цепи IgG совместно определяют единый связывающий сайт для связывания ErbB3 человека. CDR_L1 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8 (04D01, 12А07, 22А02), SEQ ID NO: 18 (09D03), SEQ ID NO: 28 (11G01), SEQ ID NO: 44 (18H02) и SEQ ID NO: 60 (24C05); CDR_L2 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9 (04D01, 11G01, 12А07, 22А02), SEQ ID NO: 19 (09D03), SEQ ID NO: 45 (18H02) и SEQ ID NO: 61 (24C05); и CDR_L3 содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10 (04D01, 12А07, 22А02), SEQ ID NO: 20 (09D03), SEQ ID NO: 29 (11G01), SEQ ID NO: 46 (18H02) и SEQ ID NO: 62 (24C05).

[0053] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, включающую: CDR_L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8 (04D01, 12А07, 22А02); CDR_L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 (04D01, 11G01, 12А07, 22А02); и CDR_L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 (04D01, 12А07, 22А02).

[0054] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую: CDR_L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18 (09D03); CDR_L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19 (09D03); и CDR_L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20 (09D03).

[0055] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую: CDR_L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28 (11G01); CDR_L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9 (04D01, 11G01, 12А07, 22А02); и CDR_L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29 (11G01).

[0056] В некоторых вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую: CDR_L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 44 (18Н02); CDR_L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 45 (18Н02); и CDR_L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46 (18Н02).

[0057] В одном варианте осуществления антитело содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую: CDR_L1, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 60 (24С05); CDR_L2, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 61 (24С05); и CDR_L3, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 62 (24С05).

[0058] Предпочтительно, последовательности CDR_L1, CDR_L2, и CDR_L3 помещаются между FR иммуноглобулина человека или гуманизированными FR иммуноглобулина. Антитело может представлять собой интактное антитело или антиген-связывающий фрагмент антитела.

[0059] В некоторых вариантах осуществления антитело включает: (а) вариабельную область тяжелой цепи IgG, содержащую структуру CDR_H1-CDR_H2-CDR_H3 и (b) вариабельную область легкой цепи IgG, содержащую структуру CDR_L1-CDR_L2-CDR_L3, где вариабельная область тяжелой цепи IgG и вариабельная область легкой цепи IgG совместно определяют единый связывающий сайт для связывания ErbB3 человека. CDR_H1 является аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ IDNO: 5 (04D01), SEQ ID NO: 15 (09D03), SEQ ID NO: 25 (11G01), SEQ ID NO: 34 (12A07), SEQ ID NO: 41 (18H02), SEQ ID NO: 51 (22A02), SEQ ID NO: 57 (24C05) и SEQ ID NO: 75 (24C05); CDR_H2 является аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 6 (04D01), SEQ ID NO: 16 (09D03), SEQ ID NO: 26 (11G01), SEQ ID NO: 35 (12A07), SEQ ID NO: 42 (18H02), SEQ ID NO: 52 (22A02), SEQ ID NO: 58 (24C05) и SEQ ID NO: 148 (Sh24C05 Hv3-11 N62S); и CDR_H3 является аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 7 (04D01), SEQ ID NO: 17 (09D03), SEQ ID NO: 27 (11G01), SEQ ID NO: 36 (12A07, 22A02), SEQ ID NO: 43 (18H02) и SEQ ID NO: 59 (24C05). CDR_L1 является аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 8 (04D01, 12A07, 22A02), SEQ ID NO: 18 (09D03), SEQ ID NO: 28 (11G01), SEQ ID NO: 44 (18H02) и SEQ ID NO: 60 (24C05); CDRb2 является аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 9 (04D01, 11G01, 12A07, 22A02), SEQ ID NO: 19 (09D03), SEQ ID NO: 45 (18H02) и SEQ ID NO: 61 (24C05); и CDR_L2 является аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 10 (04D01, 12A07, 22A02), SEQ ID NO: 20 (09D03), SEQ ID NO: 29 (11G01), SEQ ID NO: 46 (18H02) и SEQ ID NO: 62 (24C05).

[0060] В других вариантах осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2 (04D01), SEQ ID NO: 12 (09D03), SEQ ID NO: 22 (11G01), SEQ ID NO: 31 (12A07), SEQ ID NO: 38 (18H02), SEQ ID NO: 48 (22A02), SEQ ID NO: 54 (24C05) и SEQ ID NO: 154 (Sh24C05 Hv3-11 N62S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4 (04D01), SEQ ID NO: 14 (09D03), SEQ ID NO: 24 (11G01), SEQ ID NO: 33 (12A07), SEQ ID NO: 40 (18H02), SEQ ID NO: 50 (22A02), SEQ ID NO: 56 (24C05), SEQ ID NO: 166 (Sh24C05 Kv1-16) и SEQ ID NO: 168 (Sh24C05 Kv1-17).

[0061] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 (04D01), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 (04D01).

[0062] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12 (09D03), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14 (09D03).

[0063] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22 (11G01), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24 (11G01).

[0064] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 31 (12А07), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33 (12А07).

[0065] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38 (18Н02), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 40 (18Н02).

[0066] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 48 (22А02), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 50 (22А02).

[0067] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 54 (24С05), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56 (24С05).

[0068] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 154 (Sh24C05 Hv3-11 N62S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166 (Sh24C05 Kv1-16).

[0069] В другом варианте осуществления антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 154 (Sh24C05 Hv3-11 N62S), и вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 168 (Sh24C05 Kv1-17).

[0070] В других вариантах осуществления антитело содержит (i) тяжелую цепь иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 109 (04D01), SEQ ID NO: 113 (09D03), SEQ ID NO: 117 (11G01), SEQ ID NO: 121 (12А07), SEQ ID NO: 125 (18Н02), SEQ ID NO: 129 (22A07), SEQ ID NO: 133 (24C05), SEQ ID NO: 190 (Sh24C05 Hv3-11 N62S IgG1) и SEQ ID NO: 192 (Sh24C05 Hv3-11 N62S IgG2), и (ii) легкую цепь иммуноглобулина, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 111 (04D01), SEQ ID NO: 115 (09D03), SEQ ID NO: 119 (11G01), SEQ ID NO: 123 (12A07), SEQ ID NO: 127 (18Н02), SEQ ID NO: 131 (22A07), SEQ ID NO: 135 (24C05), SEQ ID NO: 204 (Sh24C05 Kv1-16 kappa) и SEQ ID NO: 206 (Sh24C05 Kv1-17 kappa).

[0071] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 (04D01), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111 (04D01).

[0072] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113 (09D03), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115 (09D03).

[0073] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117 (11G01), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119 (11G01).

[0074] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121 (12A07), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ IDNO: 123 (12A07).

[0075] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 125 (18Н02), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127 (18Н02).

[0076] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 129 (22А02), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 131 (22А02).

[0077] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 133 (24С05), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 135 (24С05).

[0078] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190 (Sh24C05 Hv3-11 N62S IgG1), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204 (Sh24C05 Kv1-16 kappa).

[0079] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192 (Sh24C05 Hv3-11 N62S IgG2), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 204 (Sh24C05 Kv1-16 kappa).

[0080] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 190 (Sh24C05 Hv3-11 N62S IgG1), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206 (Sh24C05 Kv1-17 kappa).

[0081] В другом варианте осуществления антитело содержит тяжелую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 192 (Sh24C05 Hv3-11 N62S IgG2), и легкую цепь иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206 (Sh24C05 Kv1-17 kappa).

[0082] Как употребляется в данном документе, если не указано иное, выражение "антитело" означает интактное антитело (например, интактное моноклональное антитело), или антиген-связывающий фрагмент антитела (например, антиген-связывающий фрагмент моноклонального антитела), в том числе интактное антитело или антиген-связывающий фрагмент, который был изменен, разработан или химически конъюгирован. Примеры антител, которые были изменены или разработаны, включают химерные антитела, гуманизированные антитела и мультиспецифичные антитела (например, биспецифичные антитела). Примеры антиген-связывающих фрагментов включают Fab, Fab', (Fab')₂, Fv, одноцепочечные антитела (например, ScFv), минитела и диатела. Примером химически конъюгированного антитела является антитело, конъюгированное с фрагментом-токсином.

[0083] На фигуре 1 показано схематическое изображение интактного моноклонального антитела, которое содержит четыре полипептидные цепи. Две из полипептидных цепей называются тяжелыми цепями иммуноглобулина (Н-цепи), и две из полипептидных цепей называются легкими цепями иммуноглобулина (L-цепи). Тяжелые и легкие цепи иммуноглобулина соединяются межцепочечными дисульфидными связями. Тяжелые цепи иммуноглобулина связаны межцепочечными дисульфидными связями. Легкая цепь состоит из одной вариабельной области (V_L на ФИГ.1) и одной константной области (C_L на ФИГ.1). Тяжелая цепь состоит из одной вариабельной области (V_H на ФИГ.1) и по меньшей мере трех константных областей (CH₁, CH₂ и СН₃ на ФИГ.1). Вариабельные области определяют специфичность антитела.

[0084] Каждая вариабельная область содержит три гипервариабельных участка, известные как определяющие комплементарность участки (CDR), фланкированные четырьмя относительно консервативными областями, известными как каркасные области (FR). Три CDR, называемые CDR₁, CDR₂ и CDR₃, способствуют связывающей специфичности антитела.

[0085] В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ErbB3 человека, содержит вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или на 99% идентична последовательности всей вариабельной области или каркасной области SEQ ID NO: 2 (04D01), SEQ ID NO: 12 (09D03), SEQ ID NO: 22 (11G01), SEQ ID NO: 31 (12A07), SEQ ID NO: 38 (18H02), SEQ ID NO: 48 (22A02), SEQ ID NO: 54 (24C05) и SEQ ID NO: 154 (Sh24C05 Hv3-11 N62S).

[0086] В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело, которое связывает ErbB3 человека, содержит вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% или на 99% идентична последовательности всей вариабельной области или каркасной области SEQ ID NO: 4 (04D01), SEQ ID NO: 14 (09D03), SEQ ID NO: 24 (11G01), SEQ ID NO: 33 (12A07), SEQ ID NO: 40 (18H02), SEQ ID NO: 50 (22A02), SEQ ID NO: 56 (24C05), SEQ ID NO: 166 (Sh24C05 Kv1-16) и SEQ ID NO: 168 (Sh24C05 Kv1-17).

[0087] В каждом из вышеизложенных вариантов осуществления в данном документе предполагается, что последовательности вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина и/или последовательности вариабельной области легкой цепи, которые вместе связывают ErbB3 человека, могут содержать аминокислотные изменения (например, по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5 или 10 аминокислотных замен, делеций или добавлений) в каркасных областях вариабельных областей тяжелой и/или легкой цепи.

[0088] В некоторых вариантах осуществления выделенное антитело связывает hErbB3 с K_D из 350 пМ, 300 пМ, 250 пМ, 200 пМ, 150 пМ, 100 пМ, 75 пМ, 50 пМ, 20 пМ, 10 пМ или ниже. Если не указано иное, значения K_D определяются способами поверхностного плазмонного резонанса. Способы поверхностного плазмонного резонанса можно осуществлять с использованием условий, описанных, например, в примерах 3 и 12, где измерения осуществляли при температуре 25°С и 37°С, соответственно.

[0089] В некоторых вариантах осуществления антитела ингибируют связывание hErbB3 с NRG1-β1. Например, антитела могут иметь IC₅₀ (концентрация из расчета 50% максимального ингибирования) около 5 нМ, 2 нМ или меньше, при анализе с использованием протоколов, описанных в примерах 4 и 13.