2570639 - Терапевтические dll4-связывающие белки

Терапевтические dll4-связывающие белки

Иллюстрации

Показать все

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, способные связываться с дельта-подобным лигандом 4 (DLL4) человека, в том числе в форме меченого антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, конструкции с константным доменом иммуноглобулина, конъюгата с терапевтическим или цитотоксическим средством и в кристаллизованной форме. Кроме того, рассмотрены: изолированная нуклеиновая кислота, кодирующая антитело или его фрагмент по изобретению, вектор экспрессии, клетка-хозяин и способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента; а также фармацевтическая композиция для модуляции заболевания или расстройства, способы снижения активности человеческого DLL4 и способ лечения пациента, страдающего расстройством, ассоциированным с негативным воздействием DLL4. Антитело по настоящему изобретению и его антигенсвязывающий фрагмент обладают способностью блокировать передачу сигнала Notch1, что может найти дальнейшее применение в терапии заболеваний, опосредованных повышенной активностью сигнального пути Notch1. 14 н. и 35 з.п. ф-лы, 31 табл., 11 пр.

Реферат

Ссылка на родственные заявки

В настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США № 61/238152, поданной 29 августа 2009 г., и предварительной заявки на патент США № 61/261728, поданной 16 ноября 2009 г.

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к получению и применению DLL4-связывающих белков с улучшенными свойствами, и к их использованию для подавления, предупреждения и/или лечения раковых заболеваний, опухолей и/или других ассоциированных с ангиогенезом заболеваний, таких как глазная неоваскуляризация, или заболеваний, не ассоциированных с ангиогенезом и характеризующихся нарушением экспрессии или активности DLL4, таких как аутоиммунные расстройства.

Предшествующий уровень техники

Межклеточные взаимодействия необходимы для осуществления множества биологических процессов, таких как дифференцировка, пролиферация и гомеостаз. Одной из систем, используемых эукариотами широкого ряда, является путь передачи сигнала Notch. Этот путь, а в частности, рецептор Notch, также играет важную роль в функциональном ангиогенезе опухоли. Таким образом, ингибирование функции рецептора Notch, блокирование рецептора Notch и/или блокирование пути передачи Notch-сигнала является стратегией, которая может быть применена для получения противораковых композиций и разработки методов лечения рака. Было установлено, что небольшие молекулы-ингибиторы рецептора Notch являются токсичными, поскольку они подавляют экспрессию рецептора Notch в тканях дикого типа (нормальных тканях) во всем организме. Таким образом, различные члены пути передачи сигнала Notch должны рассматриваться как потенциальные мишени для терапии.

Лигандом сосудистой сети для рецептора Notch является дельта 4 или дельта-подобный лиганд 4 (DLL4). DLL4, который экспрессируется, главным образом, в сосудистой сети, играет важную роль в развитии сосудов (Yan et al., Clin. Cancer Res., 13(24): 7243-7246 (2007); Shutter et al., Genes Dev., 14(11): 1313-1318 (2000); Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Krebs et al., Genes Dev., 14(11): 1343-1352 (2000)). Мыши, гетерозиготные по DLL4, погибают на стадии эмбрионального развития, что обусловлено значительными нарушениями развития сосудов (Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Duarte et al., Genes Dev., 18(20): 2474-2478 (2004); Krebs et al., Genes Dev., 18(20): 2469-2473 (2004)). Экспрессия DLL4 может быть индуцирована VEGF (Liu et al., Mol. Cell Biol, 23(1): 14-25 (2003); Lobov et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(9): 3219-3224 (2007)). В свою очередь, DLL4 может снижать передачу сигнала VEGF, частично посредством ингибирования VEGFR2 и индуцирования VEGRl (Harrington et al., Microvasc. Res., 75(2): 144-154 (2008); Suchting et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 104(9): 3225-3230 (2007)). Тонкая координация между DLL4 и VEGF играет важную роль в функциональном ангиогенезе.

Помимо своей физиологической роли DLL4 также активируется в кровеносных сосудах опухолей (Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Mailhos et al., Differentiation, 69(2-3): 135-144 (2001); Patel et al., Cancer Res., 65(19): 8690-8697 (2005); Patel et al., Clin. Cancer Res., 12(16): 4836-4844 (2006); Noguera-Troise et al., Nature, 444(7122): 1032-1037 (2006)). Блокирование DLL4 приводит к сильному ингибированию роста первичной опухоли во многих моделях (Noguera-Troise et al., Nature, 444(7122): 1032-1037 (2006); Ridgway et al., Nature, 444(7122): 1083-1087 (2006); Scehnet et al., Blood, 109(11): 4753-4760 (2007)). Такое ингибирование DLL4 является эффективным даже по отношению к опухолям, резистентным к терапии анти-VEGF антителами. Комбинированное ингибирование DLL4 и VEGF приводит к повышению противоопухолевой активности. Интересно отметить, что в отличие от ингибирования VEGF, которое снижает образование опухолевых сосудов, блокирование DLL4 приводит к повышению плотности сосудистой сети опухоли, где указанные сосуды являются аномальными, не могут обеспечивать эффективное прохождение кровотока и являются функционально неэффективными. Таким образом, DLL4 является потенциальной мишенью для лечения рака.

Поэтому необходимо получить такие терапевтические средства, которые могут быть нацелены на путь DLL4-Notch и тем самым ингибировать этот путь или даже предотвращать ангиогенез и рост опухоли.

Описание сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к белкам, которые связываются с DLL4, включая антитела, CDR-привитые антитела и их связывающие фрагменты, обладающие способностью связываться с DLL4. Описанный здесь связывающий белок, предпочтительно, связывается с DLL4 с высокой аффинностью. Более предпочтительно, связывающий белок согласно изобретению обладает способностью нейтрализовать DLL4. Настоящее изобретение также относится к способам получения и применения DLL4-связывающих белков, включая человеческие DLL4-связывающие белки. Преимущество настоящего изобретения заключается в том, что оно не требует получения гуманизированных DLL4-связывающих белков, что позволяет избежать проблем, возникающих при использовании гуманизированных DLL4-связывающих белков.

В одном из своих аспектов настоящее изобретение относится к связывающему белку, содержащему антигенсвязывающий домен, способный связываться с человеческим DLL4, где указанный антигенсвязывающий домен включает по меньшей мере одну или несколько CDR, выбранных из группы, состоящей из:

CDR-H1: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇ (SEQ ID NO: 99), где:

X₁ представляет собой S или N;

X₂ представляет собой S, G или N;

X₃ представляет собой S, N, T, G или R;

X₄ представляет собой Y;

X₅ представляет собой Y или H;

X₆ представляет собой W; и

X₇ представляет собой G;

CDR-H2: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆ (SEQ ID NO: 100), где:

X₁ представляет собой D;

X₂ представляет собой I;

X₃ представляет собой Y, N или S;

X₄ представляет собой Y;

X₅ представляет собой T, N, A, I, S или R;

X₆ представляет собой G;

X₇ представляет собой S, N, T или G;

X₈ представляет собой T;

X₉представляет собой Y;

X₁₀ представляет собой Y;

X₁₁ представляет собой N;

X₁₂ представляет собой P;

X₁₃ представляет собой S;

X₁₄ представляет собой L;

X₁₅ представляет собой K; и

X₁₆ представляет собой S, N, D или G;

CDR-H3: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁ (SEQ ID NO: 101), где:

X₁ представляет собой E, Y, F, Q, W, L или A;

X₂ представляет собой D, A, S, G, V, E или N;

X₃ представляет собой V, M, L, P или A;

X₄ представляет собой I, A, P, R, S, K, Q, V, G, M или E;

X₅ представляет собой L, Y, F или M;

X₆ представляет собой R, G, S, Q или A;

X₇ представляет собой G;

X₈ представляет собой G, A или S;

X₉ представляет собой S, A, L, V, R или G;

X₁₀ представляет собой D; и

X₁₁ представляет собой Y, D, S, N, H, E, R, L, P, C, I, M, T, Q или K;

CDR-L1: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁ (SEQ ID NO: 102), где:

X₁ представляет собой S;

X₂ представляет собой G;

X₃ представляет собой Q, E или D;

X₄ представляет собой R, S, G, M, K, L или T;

X₅ представляет собой L;

X₆ представляет собой G;

X₇ представляет собой D или E;

X₈ представляет собой K;

X₉представляет собой Y;

X₁₀представляет собой A или V; и

X₁₁ представляет собой S;

CDR-L2: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇ (SEQ ID NO: 103), где:

X₁ представляет собой E или Q;

X₂ представляет собой D;

X₃ представляет собой S, L, T, A, E или F;

X₄ представляет собой K, T, Е, N, Q, S или M;

X₅ представляет собой R;

X₆ представляет собой P; и

X₇ представляет собой S;

CDR-L3: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉ (SEQ ID NO: 104), где:

X₁ представляет собой Q;

X₂ представляет собой A;

X₃ представляет собой W;

X₄ представляет собой D;

X₅ представляет собой R, S, M, E, N, G или K;

X₆ представляет собой D или E;

X₇ представляет собой T, V, A, S или M;

X₈ представляет собой G, A или C; и

X₉ представляет собой V.

Предпочтительно, антигенсвязывающий домен DLL4-связывающего белка согласно изобретению содержит по меньшей мере одну CDR, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

остатков 31-37 SEQ ID NO: 1 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 1 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 1 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 111 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 111 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 111 (CDR-L3);

SEQ ID NO: 117 (CDR-H1); SEQ ID NO: 118 (CDR-H2); SEQ ID NO: 119 (CDR-H3); SEQ ID NO: 121 (CDR-H1); SEQ ID NO: 122 (CDR-H2); SEQ ID NO: 123 (CDR-H3); SEQ ID NO: 125 (CDR-H1); SEQ ID NO: 126 (CDR-H2); SEQ ID NO: 127 (CDR-H3); SEQ ID NO: 129 (CDR-H1); SEQ ID NO: 130 (CDR-H2); SEQ ID NO: 131 (CDR-H3); SEQ ID NO: 133 (CDR-H1); SEQ ID NO: 134 (CDR-H2); SEQ ID NO: 135 (CDR-H3); SEQ ID NO: 137 (CDR-H1); SEQ ID NO: 138 (CDR-H2); SEQ ID NO: 139 (CDR-H3); SEQ ID NO: 141 (CDR-H1); SEQ ID NO: 142 (CDR-H2); SEQ ID NO: 143 (CDR-H3); SEQ ID NO: 145 (CDR-H1); SEQ ID NO: 146 (CDR-H2); SEQ ID NO: 147 (CDR-H3); SEQ ID NO: 149 (CDR-H1); SEQ ID NO: 150 (CDR-H2); SEQ ID NO: 151 (CDR-H3); SEQ ID NO: 153 (CDR-H1); SEQ ID NO: 154 (CDR-H2); SEQ ID NO: 155 (CDR-H3); SEQ ID NO: 157 (CDR-HI); SEQ ID NO: 158 (CDR-H2); SEQ ID NO: 159 (CDR-H3); SEQ ID NO: 161 (CDR-H1); SEQ ID NO: 162 (CDR-H2); SEQ ID NO: 163 (CDR-H3); SEQ ID NO: 165 (CDR-H1); SEQ ID NO: 166 (CDR-H2); SEQ ID NO: 167 (CDR-H3); SEQ ID NO: 169 (CDR-H1); SEQ ID NO: 170 (CDR-H2); SEQ ID NO: 171 (CDR-H3); SEQ ID NO: 173 (CDR-H1); SEQ ID NO: 174 (CDR-H2); SEQ ID NO: 175 (CDR-H3); SEQ ID NO: 177 (CDR-H1); SEQ ID NO: 178 (CDR-H2); SEQ ID NO: 179 (CDR-H3); SEQ ID NO: 181 (CDR-H1); SEQ ID NO: 182 (CDR-H2); SEQ ID NO: 183 (CDR-H3); SEQ ID NO: 185 (CDR-H1); SEQ ID NO: 186 (CDR-H2); SEQ ID NO: 187 (CDR-H3); SEQ ID NO: 189 (CDR-H1); SEQ ID NO: 190 (CDR-H2); SEQ ID NO: 191 (CDR-H3); SEQ ID NO: 193 (CDR-H1); SEQ ID NO: 194 (CDR-H2); SEQ ID NO: 195 (CDR-H3); SEQ ID NO: 197 (CDR-H1); SEQ ID NO: 198 (CDR-H2); SEQ ID NO: 199 (CDR-H3); SEQ ID NO: 201 (CDR-H1); SEQ ID NO: 202 (CDR-H2); SEQ ID NO: 203 (CDR-H3); SEQ ID NO: 205 (CDR-H1); SEQ ID NO: 206 (CDR-H2); SEQ ID NO: 207 (CDR-H3); SEQ ID NO: 209 (CDR-H1); SEQ ID NO: 210 (CDR-H2); SEQ ID NO: 211 (CDR-H3); SEQ ID NO: 213 (CDR-H1); SEQ ID NO: 214 (CDR-H2); SEQ ID NO: 215 (CDR-H3); SEQ ID NO: 217 (CDR-L1); SEQ ID NO: 218 (CDR-L2); SEQ ID NO: 219 (CDR-L3); SEQ ID NO: 221 (CDR-L1); SEQ ID NO: 222 (CDR-L2); SEQ ID NO: 223 (CDR-L3); SEQ ID NO: 225 (CDR-L1); SEQ ID NO: 226 (CDR-L2); SEQ ID NO: 227 (CDR-L3); SEQ ID NO: 229 (CDR-L1); SEQ ID NO: 230 (CDR-L2); SEQ ID NO: 231 (CDR-L3); SEQ ID NO: 233 (CDR-L1); SEQ ID NO: 234 (CDR-L2); SEQ ID NO: 235 (CDR-L3); SEQ ID NO: 237 (CDR-L1); SEQ ID NO: 238 (CDR-L2); SEQ ID NO: 239 (CDR-L3); SEQ ID NO: 241 (CDR-L1); SEQ ID NO: 242 (CDR-L2); SEQ ID NO: 243 (CDR-L3); SEQ ID NO: 245 (CDR-L1); SEQ ID NO: 246 (CDR-L2); SEQ ID NO: 247 (CDR-L3); SEQ ID NO: 249 (CDR-L1); SEQ ID NO: 250 (CDR-L2); SEQ ID NO: 251 (CDR-L3); SEQ ID NO: 253 (CDR-L1); SEQ ID NO: 254 (CDR-L2); SEQ ID NO: 255 (CDR-L3); SEQ ID NO: 257 (CDR-L1); SEQ ID NO: 258 (CDR-L2); SEQ ID NO: 259 (CDR-L3); SEQ ID NO: 261 (CDR-L1); SEQ ID NO: 262 (CDR-L2); SEQ ID NO: 263 (CDR-L3); SEQ ID NO: 265 (CDR-L1); SEQ ID NO: 266 (CDR-L2); SEQ ID NO: 267 (CDR-L3); SEQ ID NO: 269 (CDR-L1); SEQ ID NO: 270 (CDR-L2); SEQ ID NO: 271 (CDR-L3); SEQ ID NO: 273 (CDR-L1); SEQ ID NO: 274 (CDR-L2); SEQ ID NO: 275 (CDR-L3); SEQ ID NO: 277 (CDR-L1); SEQ ID NO: 278 (CDR-L2); SEQ ID NO: 279 (CDR-L3); SEQ ID NO: 281 (CDR-L1); SEQ ID NO: 282 (CDR-L2); SEQ ID NO: 283 (CDR-L3); SEQ ID NO: 285 (CDR-L1); SEQ ID NO: 286 (CDR-L2); SEQ ID NO: 287 (CDR-L3); SEQ ID NO: 289 (CDR-L1); SEQ ID NO: 290 (CDR-L2); SEQ ID NO: 291 (CDR-L3); SEQ ID NO: 293 (CDR-L1); SEQ ID NO: 294 (CDR-L2); SEQ ID NO: 295 (CDR-L3); SEQ ID NO: 297 (CDR-L1); SEQ ID NO: 298 (CDR-L2); SEQ ID NO: 299 (CDR-L3); SEQ ID NO: 301 (CDR-L1); SEQ ID NO: 302 (CDR-L2); SEQ ID NO: 303 (CDR-L3); SEQ ID NO: 305 (CDR-L1); SEQ ID NO: 306 (CDR-L2); SEQ ID NO: 307 (CDR-L3); SEQ ID NO: 309 (CDR-L1); SEQ ID NO: 310 (CDR-L2); SEQ ID NO: 311 (CDR-L3); SEQ ID NO: 313 (CDR-L1); SEQ ID NO: 314 (CDR-L2); SEQ ID NO: 315 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 334 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 334 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 334 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 335 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 335 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 335 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 336 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 336 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 336 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 337 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 337 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 337 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 338 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 338 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 338 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 339 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 339 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 339 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 340 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 340 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 340 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 341 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 341 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 341 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 342 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 342 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 342 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 343 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 343 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 343 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 344 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 344 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 344 (CDR-H3);

остатков 24-34 SEQ ID NO: 345 (CDR-L1); остатков 50-56 SEQ ID NO: 345 (CDR-L2); остатков 89-97 SEQ ID NO: 345 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 346 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 346 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 346 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 347 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 347 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 347 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 348 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 348 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 348 (CDR-H3);

остатков 24-34 SEQ ID NO: 349 (CDR-L1); остатков 50-56 SEQ ID NO: 349 (CDR-L2); остатков 89-97 SEQ ID NO: 349 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 350 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 350 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 350 (CDR-H3);

остатков 24-34 SEQ ID NO: 351 (CDR-L1); остатков 50-56 SEQ ID NO: 351 (CDR-L2); остатков 89-97 SEQ ID NO: 351 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 352 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 352 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 352 (CDR-H3);

остатков 24-34 SEQ ID NO: 353 (CDR-L1); остатков 50-56 SEQ ID NO: 353 (CDR-L2); остатков 89-97 SEQ ID NO: 353 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 354 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 354 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 354 (CDR-H3);

остатков 24-34 SEQ ID NO: 355 (CDR-L1); остатков 50-56 SEQ ID NO: 355 (CDR-L2); остатков 89-97 SEQ ID NO: 355 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 356 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 356 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 356 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 357 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 357 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 357 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 358 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 358 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 358 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 359 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 359 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 359 (CDR-L3);

остатков 31-37 SEQ ID NO: 360 (CDR-H1); остатков 52-67 SEQ ID NO: 360 (CDR-H2); остатков 100-110 SEQ ID NO: 360 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 361 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 361 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 361 (CDR-L3).

В другом варианте изобретения связывающий белок содержит по меньшей мере 3 CDR, описанные выше.

Предпочтительно, DLL4-связывающий белок согласно изобретению содержит одну или несколько описанных выше CDR. Более предпочтительно, указанный связывающий белок содержит три или более CDR, описанных выше. Наиболее предпочтительно, DLL4-связывающий белок согласно изобретению содержит шесть CDR, описанных выше, то есть CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, описанные выше.

В предпочтительном варианте изобретения связывающий белок содержит по меньшей мере 3 CDR, выбранных из группы, состоящей из описанных выше последовательностей.

Более предпочтительно, связывающий белок содержит 3 CDR, выбранных из набора CDR вариабельного домена, выбранного из нижеследующей группы:

Набор VH E9 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 1

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 1

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 1

Набор VL E9 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 111

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 111

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 111

Набор VH E9.4 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 117

CDR-H2: SEQ ID NO: 118

CDR-H3: SEQ ID NO: 119

Набор VL E9.4 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 229

CDR-L2: SEQ ID NO: 230

CDR-L3: SEQ ID NO: 231

Набор VH E9.11 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 121

CDR-H2: SEQ ID NO: 122

CDR-H3: SEQ ID NO: 123

Набор VL E9.11 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 233

CDR-L2: SEQ ID NO: 234

CDR-L3: SEQ ID NO: 235

Набор VH E9.14 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 125

CDR-H2: SEQ ID NO: 126

CDR-H3: SEQ ID NO: 127

Набор VL E9.14 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 237

CDR-L2: SEQ ID NO: 238

CDR-L3: SEQ ID NO: 239

Набор VH E9.17 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 129

CDR-H2: SEQ ID NO: 130

CDR-H3: SEQ ID NO: 131

Набор VL E9.17 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 241

CDR-L2: SEQ ID NO: 242

CDR-L3: SEQ ID NO: 243

Набор VH E9.18 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 133

CDR-H2: SEQ ID NO: 134

CDR-H3: SEQ ID NO: 135

Набор VL E9.18 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 245

CDR-L2: SEQ ID NO: 246

CDR-L3: SEQ ID NO: 247

Набор VH E9.19 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 137

CDR-H2: SEQ ID NO: 138

CDR-H3: SEQ ID NO: 139

Набор VL E9.19 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 249

CDR-L2: SEQ ID NO: 250

CDR-L3: SEQ ID NO: 251

Набор VH E9.22 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 141

CDR-H2: SEQ ID NO: 142

CDR-H3: SEQ ID NO: 143

Набор VL E9.22 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 253

CDR-L2: SEQ ID NO: 254

CDR-L3: SEQ ID NO: 255

Набор VH E9.48 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 145

CDR-H2: SEQ ID NO: 146

CDR-H3: SEQ ID NO: 147

Набор VL E9.48 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 257

CDR-L2: SEQ ID NO: 258

CDR-L3: SEQ ID NO: 259

Набор VH E9.65 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 149

CDR-H2: SEQ ID NO: 150

CDR-H3: SEQ ID NO: 151

Набор VL E9.65 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 261

CDR-L2: SEQ ID NO: 262

CDR-L3: SEQ ID NO: 263

Набор VH E9.66 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 153

CDR-H2: SEQ ID NO: 154

CDR-H3: SEQ ID NO: 155

Набор VL E9.66 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 265

CDR-L2: SEQ ID NO: 266

CDR-L3: SEQ ID NO: 267

Набор VH E9.71 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 157

CDR-H2: SEQ ID NO: 158

CDR-H3: SEQ ID NO: 159

Набор VL E9.71 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 269

CDR-L2: SEQ ID NO: 270

CDR-L3: SEQ ID NO: 271

Набор VH E9.13 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 161

CDR-H2: SEQ ID NO: 162

CDR-H3: SEQ ID NO: 163

Набор VL E9.13 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 217

CDR-L2: SEQ ID NO: 218

CDR-L3: SEQ ID NO: 219

Набор VH E9.16 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 165

CDR-H2: SEQ ID NO: 166

CDR-H3: SEQ ID NO: 167

Набор VL E9.16 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 221

CDR-L2: SEQ ID NO: 222

CDR-L3: SEQ ID NO: 223

Набор VH E9.38 CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 169

CDR-H2: SEQ ID NO: 170

CDR-H3: SEQ ID NO: 171

Набор VL E9.38 CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 225

CDR-L2: SEQ ID NO: 226

CDR-L3: SEQ ID NO: 227

Набор VH E9.2В CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 173

CDR-H2: SEQ ID NO: 174

CDR-H3: SEQ ID NO: 175

Набор VL E9.2В CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 273

CDR-L2: SEQ ID NO: 274

CDR-L3: SEQ ID NO: 275

Набор VH E9.1F CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 177

CDR-H2: SEQ ID NO: 178

CDR-H3: SEQ ID NO: 179

Набор VL E9.1F CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 277

CDR-L2: SEQ ID NO: 278

CDR-L3: SEQ ID NO: 279

Набор VH E9.10H CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 181

CDR-H2: SEQ ID NO: 182

CDR-H3: SEQ ID NO: 183

Набор VL E9.10H CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 301

CDR-L2: SEQ ID NO: 302

CDR-L3: SEQ ID NO: 303

Набор VH E9.5E CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 185

CDR-H2: SEQ ID NO: 186

CDR-H3: SEQ ID NO: 187

Набор VL E9.5E CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 293

CDR-L2: SEQ ID NO: 294

CDR-L3: SEQ ID NO: 295

Набор VH E9.10C CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 189

CDR-H2: SEQ ID NO: 190

CDR-H3: SEQ ID NO: 191

Набор VL E9.10C CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 281

CDR-L2: SEQ ID NO: 282

CDR-L3: SEQ ID NO: 283

Набор VH E9.7E CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 193

CDR-H2: SEQ ID NO: 194

CDR-H3: SEQ ID NO: 195

Набор VL E9.7E CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 289

CDR-L2: SEQ ID NO: 290

CDR-L3: SEQ ID NO: 291

Набор VH E9.12B CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 197

CDR-H2: SEQ ID NO: 198

CDR-H3: SEQ ID NO: 199

Набор VL E9.12B CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 297

CDR-L2: SEQ ID NO: 298

CDR-L3: SEQ ID NO: 299

Набор VH E9.10E CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 201

CDR-H2: SEQ ID NO: 202

CDR-H3: SEQ ID NO: 203

Набор VL E9.10E CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 285

CDR-L2: SEQ ID NO: 286

CDR-L3: SEQ ID NO: 287

Набор VH E9.6A CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 205

CDR-H2: SEQ ID NO: 206

CDR-H3: SEQ ID NO: 207

Набор VL E9.6A CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 305

CDR-L2: SEQ ID NO: 306

CDR-L3: SEQ ID NO: 307

Набор VH E9.7A CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 209

CDR-H2: SEQ ID NO: 210

CDR-H3: SEQ ID NO: 211

Набор VL E9.7A CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 309

CDR-L2: SEQ ID NO: 310

CDR-L3: SEQ ID NO: 311

Набор VH E9.8H CDR

CDR-H1: SEQ ID NO: 213

CDR-H2: SEQ ID NO: 214

CDR-H3: SEQ ID NO: 215

Набор VL E9.8H CDR

CDR-L1: SEQ ID NO: 313

CDR-L2: SEQ ID NO: 314

CDR-L3: SEQ ID NO: 315

Набор VH E9.1 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 334

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 334

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 334

Набор VL E9.1 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 335

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 335

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 335

Набор VH E9-SE1 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 336

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 336

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 336

Набор VL E9-SE1 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 337

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 337

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 337

Набор VH E9-SE2 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 338

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 338

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 338

Набор VL E9-SE2 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 339

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 339

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 339

Набор VH E9-SE3 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 340

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 340

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 340

Набор VL E9-SE3 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 341

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 341

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 341

Набор VH E9-SE4 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 342

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 342

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 342

Набор VL E9-SE4 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 343

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 343

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 343

Набор VH E9-SE5 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 344

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 344

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 344

Набор VL E9-SE5 CDR

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO: 345

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO: 345

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO: 345

Набор VH E9-SE6 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 346

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 346

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 346

Набор VL E9-SE6 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 347

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 347

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 347

Набор VH E9-SE7 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 348

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 348

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 348

Набор VL E9-SE7 CDR

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO: 349

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO: 349

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO: 349

Набор VH E9-SE8 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 350

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 350

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 350

Набор VL E9-SE8 CDR

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO: 351

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO: 351

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO: 351

Набор VH E9-FR1 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 352

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 352

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 352

Набор VL E9-FR1 CDR

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO: 353

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO: 353

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO: 353

Набор VH E9-FR2 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 354

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 354

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 354

Набор VL E9-FR2 CDR

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO: 355

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO: 355

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO: 355

Набор VH E9.71 CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 356

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 356

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 356

Набор VL E9.71 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 357

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 357

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 357

Набор VH E9.71(M) CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 358

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 358

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 358

Набор VL E9.71(M) CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 359

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 359

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 359

Набор VH E9.71(L) CDR

CDR-H1: остатки 31-37 SEQ ID NO: 360

CDR-H2: остатки 52-67 SEQ ID NO: 360

CDR-H3: остатки 100-110 SEQ ID NO: 360

Набор VL E9.71(L) CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 361

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 361

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 361.

В другом варианте изобретения связывающий белок содержит набор из 3 CDR вариабельных тяжелых цепей (VH), выбранных из любого набора из 3 CDR VH в вышеуказанной группе, и набор из 3 CDR вариабельных легких цепей (VL), выбранных из любого набора из 3 CDR VL в вышеуказанной группе.

В другом варианте изобретения связывающий белок содержит набор из 3 CDR цепей, обозначенных VH, и набор из 3 CDR цепей, соответственно обозначенных VL, в вышеуказанной группе. Предпочтительно, связывающий белок согласно изобретению содержит по меньшей мере два набора CDR вариабельных доменов, выбранные из группы наборов CDR вариабельных доменов, состоящей из:

набора VH E9 CDR и набора VL E9 CDR,

набора VH E9.4 CDR и набора VL E9.4 CDR,

набора VH E9.11 CDR и набора VL E9.11 CDR,

набора VH E9.14 CDR и набора VL E9.14 CDR,

набора VH E9.17 CDR и набора VL E9.17 CDR,

набора VH E9.18 CDR и набора VL E9.18 CDR,

набора VH E9.19 CDR и набора VL E9.19 CDR,

набора VH E9.22 CDR и набора VL E9.22 CDR,

набора VH E9.48 CDR и набора VL E9.48 CDR,

набора VH E9.65 CDR и набора VL E9.65 CDR,

набора VH E9.66 CDR и набора VL E9.66 CDR,

набора VH E9.71 CDR и набора VL E9.71 CDR,

набора VH E9.13 CDR и набора VL E9.13 CDR,

набора VH E9.16 CDR и набора VL E9.16 CDR,

набора VH E9.38 CDR и набора VL E9.38 CDR,

набора VH E9.2B CDR и набора VL E9.2B CDR,

набора VH E9.1F CDR и набора VL E9.1F CDR,

набора VH E9.10H CDR и набора VL E9.10H CDR,

набора VH E9.5E CDR и набора VL E9.5E CDR,

набора VH E9.10C CDR и набора VL E9.10C CDR,

набора VH E9.7E CDR и набора VL E9.7E CDR,

набора VH E9.12B CDR и набора VL E9.12B CDR,

набора VH E9.10E CDR и набора VL E9.10E CDR,

набора VH E9.6A CDR и набора VL E9.6A CDR,

набора VH E9.7A CDR и набора VL E9.7A CDR,

набора VH E9.8H CDR и набора VL E9.8H CDR,

набора VH E9-SE1 CDR и набора VL E9-SE1 CDR,

набора VH E9-SE2 CDR и набора VL E9-SE2 CDR,

набора VH E9-SE3 CDR и набора VL E9-SE3 CDR,

набора VH E9-SE4 CDR и набора VL E9-SE4 CDR,

набора VH E9-SE5 CDR и набора VL E9-SE5 CDR,

набора VH E9-SE6 CDR и набора VL E9-SE6 CDR,

набора VH E9-SE7 CDR и набора VL E9-SE7 CDR,

набора VH E9-SE8 CDR и набора VL E9-SE8 CDR,

набора VH E9-FR1 CDR и набора VL E9-FR1 CDR,

набора VH E9-FR2 CDR и набора VL E9-FR2 CDR,

набора VH E9.71 CDR и набора VL E9.71 CDR,

набора VH E9.71(M) CDR и набора VL E9.71(M) CDR, и

набора VH E9.71(L) CDR и набора VL E9.71(L) CDR.

В другом варианте изобретения описанный выше связывающий белок также содержит человеческую акцепторную каркасную область. Предпочтительно, человеческая акцепторная каркасная область содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

последовательностей акцепторной каркасной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 6-22,

акцепторных последовательностей тяжелой цепи SEQ ID NO: 35-62,

акцепторных последовательностей легкой цепи SEQ ID NO: 23-34, и

акцепторных последовательностей легкой цепи SEQ ID NO: 63-98.

В другом варианте изобретения вышеописанный связывающий белок содержит человеческую акцепторную каркасную область, которая включает по меньшей мере одну аминокислотную замену в каркасной области, где указанная аминокислотная последовательность каркасной области по меньшей мере на 65% идентична последовательности указанной человеческой акцепторной каркасной области и содержит по меньшей мере 70 аминокислотных остатков, идентичных остаткам указанной человеческой акцепторной каркасной области.

В другом варианте изобретения описанный здесь связывающий белок содержит человеческую акцепторную каркасную область, включающую по меньшей мере одну аминокислотную замену в каркасной области в положении ключевого остатка, где указанный ключевой остаток выбран из группы, состоящей из:

остатка, смежного с CDR;

остатка сайта гликозилирования;

редкого остатка;

остатка, способного взаимодействовать с человеческим DLL4;

канонического остатка;

остатка зоны контактирования вариабельной области тяжелой цепи с вариабельной областью легкой цепи;

остатка в зоне Верньера; и

остатка в области, которая перекрывается с областью CDR1 вариабельной тяжелой цепи, определенной по Чотиа, и с первой каркасной областью тяжелой цепи, определенной по Кэбату. Предпочтительно, ключевой остаток выбран из группы, состоящей из: 2H, 4H, 24H, 26H, 27H, 29H, 34H, 35H, 37H, 39H, 44H, 45H, 47H, 48H, 49H, 50H, 51H, 58H, 59H, 60H, 63H, 67H, 69H, 71H, 73H, 76H, 78H, 91H, 93H, 94H, 2L, 4L, 25L, 29L, 27bL, 33L, 34L, 36L, 38L, 43L, 44L, 46L, 47L, 48L, 49L, 55L, 58L, 62L, 64L, 71L, 87L, 89L, 90L, 91L, 94L, 95L.

В другом варианте изобретения описанный здесь связывающий белок содержит консенсусный человеческий вариабельный домен.

В предпочтительном варианте изобретения вышеописанный связывающий белок содержит по меньшей мере один вариабельный домен, имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1, 111, 116, 228, 120, 232, 124, 236, 128, 240, 132, 244, 136, 248, 140, 252, 144, 256, 148, 260, 152, 264, 156, 268, 160, 216, 164, 220, 168, 224, 172, 272, 176, 276, 180, 300, 184, 292, 188, 280, 192, 288, 196, 296, 200, 284, 204, 304, 208, 308, 212, 312, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360 и 361.

В другом варианте изобретения связывающий белок согласно изобретению содержит два вариабельных домена, где указанные два вариабельных домена имеют аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1 и 111, SEQ ID NO: 116 и 228, SEQ ID NO: 120 и 232, SEQ ID NO: 124 и 236, SEQ ID NO: 128 и 240, SEQ ID NO: 132 и 244, SEQ ID NO: 136 и 248, SEQ ID NO: 140 и 252, SEQ ID NO: 144 и 256, SEQ ID NO: 148 и 260, SEQ ID NO: 152 и 264, SEQ ID NO: 156 и 268, SEQ ID NO: 160 и 216, SEQ ID NO: 164 и 220, SEQ ID NO: 168 и 224, SEQ ID NO: 172 и 272, SEQ ID NO: 176 и 276, SEQ ID NO: 180 и 300, SEQ ID NO: 184 и 292, SEQ ID NO: 188 и 280, SEQ ID NO: 192 и 288, SEQ ID NO: 196 и 296, SEQ ID NO: 200 и 284, SEQ ID NO: 204 и 304, SEQ ID NO: 208 и 308, SEQ ID NO: 212 и 312, SEQ ID NO: 334 и 335, SEQ ID NO: 336 и 337, SEQ ID NO: 338 и 339, SEQ ID NO: 340 и 341, SEQ ID NO: 342 и 343, SEQ ID NO: 344 и 345, SEQ ID NO: 346 и 347, SEQ ID NO: 348 и 349, SEQ ID NO: 350 и 351, SEQ ID NO: 352 и 353, SEQ ID NO: 354 и 355, SEQ ID NO: 356 и 357, SEQ ID NO: 358 и 359, SEQ ID NO: 360 и 361.

В одном из вариантов изобретения связывающий белок согласно изобретению содержит вариабельный домен тяжелой цепи (V_H), где, предпочтительно, V_H включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

SEQ ID NO: 1, 116, 120, 124, 128, 132, 136, 140, 144, 148, 152, 156, 160, 164, 168, 172, 176, 180, 184, 188, 192, 196, 200, 204, 208, 212, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358 и 360.

В другом варианте изобретения связывающий белок согласно изобретению содержит вариабельный домен легкой цепи (V_L), где, предпочтительно, V_L включает аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

SEQ ID NO: 111, 228, 232, 236, 240, 244, 248, 252, 256, 260, 264, 268, 216, 220, 224, 272, 276, 300, 292, 280, 288, 296, 284, 304, 308, 312, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359 и 361.

В предпочтительном варианте изобретения связывающий белок согласно изобретению содержит V_H и V_L, где, предпочтительно, V_H и V_L представляют собой любую из описанных выше последовательностей.

В другом варианте настоящее изобретение относится к связывающему белку, обладающему способностью связываться с человеческим DLL-4, где указанный связывающий белок содержит:

константную область тяжелой цепи Ig, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3;

константную область легкой цепи Ig, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 5;

вариабельную область тяжелой цепи Ig, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

вариабельную область легкой цепи Ig, имеющую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

В другом аспекте настоящее изобретение относится к связывающему белку, содержащему антигенсвязывающий домен, обладающий способностью связываться с человеческим DLL4, где указанный антигенсвязывающий домен содержит по меньшей мере одну или несколько CDR, выбранных из группы, состоящей из:

CDR-H1: X₁-X₂-X₃-X₄-Х₅(SEQ ID NO: 105), где

X₁ представляет собой S, N или D;

X₂ представляет собой H или Y;

X₃ представляет собой W;

X₄ представляет собой M;

X₅ представляет собой S или H;

CDR-H2: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-Х₁₇ (SEQ ID NO: 106), где:

X₁ представляет собой I, D, M или Т;

X₂ представляет собой I;

X₃ представляет собой S;

X₄ представляет собой Y, N, S, Q, V, T, H или D;

X₅ представляет собой D;

X₆ представляет собой G;

X₇ представляет собой S, R, I, T, G, K, H или N;

X₈ представляет собой N, Y, S, I или T;

X₉представляет собой K, M, N, Q, E, T, R, S, A или L;

X₁₀ представляет собой Y, D или E;

X₁₁ представляет собой S или Y;

X₁₂ представляет собой А;

X₁₃ представляет собой D;

X₁₄ представляет собой S;

X₁₅ представляет собой V;

X₁₆ представляет собой К; и

X₁₇ представляет собой G;

CDR-H3: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀ (SEQ ID NO: 107), где:

X₁ представляет собой A;

X₂ представляет собой G, А или R;

X₃ представляет собой G;

X₄ представляет собой G, S или А;

X₅ представляет собой N;

X₆ представляет собой V или М;

X₇ представляет собой G;

X₈ представляет собой F, L, Y или M;

X₉представляет собой D; и

X₁₀представляет собой I, S или L;

CDR-L1: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁ (SEQ ID NO: 108), где:

X₁ представляет собой S;

X₂ представляет собой А или G;

X₃ представляет собой D;

X₄ представляет собой K, N, L, Q, M, E, S, T, G или D;

X₅ представляет собой L;

X₆ представляет собой G;

X₇ представляет собой T, S, N, A, G или E;

X₈ представляет собой K, Q, N или R;

X₉представляет собой Y;

X₁₀представляет собой V или I; и

X₁₁ представляет собой S;

CDR-L2: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇ (SEQ ID NO: 109), где:

X₁ представляет собой Q;

X₂ представляет собой D;

X₃ представляет собой A, G, W, S или D;

X₄ представляет собой K, M, Q, N, L, T, I или E;

X₅ представляет собой R;

X₆ представляет собой P; и

X₇ представляет собой S; и

CDR-L3: X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉ (SEQ ID NO: 110), где:

X₁ представляет собой Q;

X₂ представляет собой S или A;

X₃ представляет собой W;

X₄ представляет собой D;

X₅ представляет собой R, S, Q, P, A, V, W или M;

X₆ представляет собой S, G, I, N, R или T;

X₇ представляет собой D или G;

X₈ представляет собой V, A, P или E; и

X₉ представляет собой V.

остатков 31-35 SEQ ID NO: 112 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 112 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 112 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 113 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 113 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 113 (CDR-L3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 316 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 316 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 316 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 317 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 317 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 317 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 318 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 318 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 318 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 319 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 319 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 319 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 320 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 320 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 320 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 321 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 321 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 321 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 322 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 322 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 322 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 323 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 323 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 323 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 324 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 324 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 324 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 325 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 325 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 325 (CDR-H3);

остатков 31-35 SEQ ID NO: 326 (CDR-H1); остатков 50-66 SEQ ID NO: 326 (CDR-H2); остатков 99-108 SEQ ID NO: 326 (CDR-H3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 327 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 327 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 327 (CDR-L3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 328 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 328 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 328 (CDR-L3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 329 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 329 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 329 (CDR-L3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 330 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 330 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 330 (CDR-L3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 331 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 331 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 331 (CDR-L3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 332 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 332 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 332 (CDR-L3);

остатков 23-33 SEQ ID NO: 333 (CDR-L1); остатков 49-55 SEQ ID NO: 333 (CDR-L2); остатков 88-96 SEQ ID NO: 333 (CDR-L3).

В другом варианте изобретения связывающий белок содержит по меньшей мере 3 CDR, описанных выше.

В другом предпочтительном варианте изобретения, связывающий белок содержит 3 CDR, выбранных из набора CDR вариабельного домена, выбранного из нижеследующей группы:

набор VH A10 CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 112

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 112

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 112

набор VL A10 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 113

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 113

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 113

набор VH A10.3 CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 316

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 316

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 316

набор VL A10.3 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 327

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 327

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 327

набор VH A10.К30 CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 317

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 317

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 317

набор VH A10.К42 CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 318

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 318

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 318

набор VH A10.9А CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 319

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 319

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 319

набор VH A10.8А CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 320

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 320

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 320

набор VH A10.1А CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 321

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 321

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 321

набор VH A10.5D CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 322

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 322

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 322

набор VH A10.3А CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 323

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 323

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 323

набор VL A10.3А CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 330

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 330

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 330

набор VH A10.6В CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 324

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 324

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 324

набор VL A10.6В CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 331

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 331

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 331

набор VH A10.3D CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 325

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 325

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 325

набор VL A10.3D CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 332

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 332

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 332

набор VH A10.4С CDR

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO: 326

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO: 326

CDR-H3: остатки 99-108 SEQ ID NO: 326

набор VL A10.4С CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 333

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 333

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 333

набор VL A10.L45 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 328

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 328

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 328

набор VL A10.L73 CDR

CDR-L1: остатки 23-33 SEQ ID NO: 329

CDR-L2: остатки 49-55 SEQ ID NO: 329

CDR-L3: остатки 88-96 SEQ ID NO: 329.

В другом варианте изобретения связывающий белок содержит набор из 3 CDR цепей, обозначенных VH, и набор из 3 CDR цепей, соответственно обозначенных VL в вышеуказанной группе. Предпочтительно, связывающий белок согласно изобретению содержит по меньшей мере два набора CDR вариабельных доменов, выбранные

Терапевтические dll4-связывающие белки

Патент 2570639