Способ оценки состояния цитоскелета эритроцитов

Способ оценки состояния цитоскелета эритроцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследований.

Известен способ исследования состояния цитоскелета эритроцитов, взятый за прототип (Mohandas et al., Blood. 1982. V.59. P.768-774), включающий выделение эритроцитов из крови, получение из них замкнутых теней и определение механической стабильности при высокой скорости сдвига. Однако способ трудоемок (получение замкнутых теней) и требует дорогого специального оборудования (эктацитометра).

Известен также способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов (см. патент №2413945) путем их выделения из крови и регистрации агрегации, индуцированной лантаном.

Задача создания нового, несложного, высокочувствительного, не требующего специального оборудования, способа исследования состояния цитоскелета эритроцитов является актуальной.

Задача достигается способом, который заключается в том, что эритроциты выделяют из крови, помещают на водяную баню и прогревают при 49.2°C в течение 15 мин. О состоянии цитоскелета эритроцитов судят по изменению морфологии эритроцитов.

Способ упрощает процедуру исследования состояния цитоскелета эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологическом растворе (10 мМ трис - HCl, 150 мМ NaCl, pH 7.4), после чего суспензию клеток помещают на водяную баню и прогревают при 49.2°C в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксируют в 0.25% растворе глутарового альдегида, приготовленного на фосфатном буфере и изучают морфологию клеток.

Принцип способа исследования состояния цитоскелета эритроцитов основан на том, что в диапазоне температур от 49°C до 49.5°C происходит денатурация главного белка цитоскелета спектрина (Brandts et al., Biochemistry. 1977. Vol.16. P.3450-3454).

Известно, что эритроциты больных сахарным диабетом 2-го типа имеют нестабильное состояние цитоскелета (Стародубцева и др., Бюл. эксперим. биол. мед. 2008. №1. С. 106-111).

Пример 1. Суспензию нормальных эритроцитов помещали на водяную баню и прогревали при 49.2°C в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксировали глутаровым альдегидом и с помощью светового микроскопа изучали морфологию эритроцитов. На рис. 1 видно образование сфероцитов. Нормальные эритроциты после прогревания образуют 5-15% сфероцитов.

Пример 2. Суспензию эритроцитов больного сахарным диабетом 2-го типа помещали на водяную баню и прогревали при 49.2°C в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксировали глутаровым альдегидом и с помощью светового микроскопа изучали морфологию эритроцитов. На рис. 2 видно, что прогревание эритроцитов больных сахарным диабетом 2-го типа приводит к образованию 100% сфероцитов. Состояние цитоскелета эритроцитов нарушено в сторону снижения его стабильности.

Пример 3. Эритроциты обрабатывали нитритом натрия и прогревали при 49.2°C в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксировали глутаровым альдегидом и с помощью светового микроскопа изучали морфологию эритроцитов. На рис. 3 видно, что прогревание эритроцитов, обработанных нитритом натрия, приводит к образованию 100% сфероцитов. Состояние цитоскелета эритроцитов нарушено в сторону его снижения.

Способ исследования состояния цитоскелета эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и их прогревание, отличающийся тем, что суспензию эритроцитов помещают на водяную баню, прогревают при 49,2°C в течение 15 мин и фиксируют с помощью глутарового альдегида, а об изменении состояния цитоскелета эритроцитов судят по морфологической картине.