Способ выявления риска расстройства щитовидной железы

Способ выявления риска расстройства щитовидной железы

Реферат

Родственная заявка

По настоящей заявке испрашивается приоритет на основе предварительной заявки на патент США US 60/901732, поданной 16 февраля 2007 г. Сущность указанной заявки полностью включена в настоящее изобретение в виде ссылки.

Уровень техники

Главная функция щитовидной железы заключается в секреции гормонов L-тироксина (Т4) и L-трийодтиронина (Т3). Эти гормоны щитовидной железы регулируют важные свойства метаболизма. Гипотиреоидизм проявляется при ненормально низких уровнях Т3 и Т4 в крови, а гипертиреоидизм проявляется при их ненормально повышенных уровнях. Без лечения тяжелая форма гипотиреоидизма характеризуется увеличением массы тела, вялостью и депрессией, подверженностью к простудам, нарушением состояния кожи и волос. Без лечения тяжелая форма гипертиреоидизма проявляется в виде состояния, называемого тиротоксикозом, и характеризуется потерей массы тела, повышенной возбудимостью или эмоциональной нестабильностью, непереносимостью жары, тремором и учащенным сердцебиением и может вызвать мерцательную аритмию. В некоторых случаях гипотиреоидизм или гипертиреоидизм может протекать без видимых симптомов или признаков, несмотря на отклонения от нормы показателей лабораторных тестов функционального состояния щитовидной железы (например, предклинического расстройства щитовидной железы).

Гормоны Т3 и Т4 вырабатываются под непосредственным контролем гликопротеинового гормона передней доли гипофиза тиреотропина (тиреотропного гормона - ТТГ), который сам регулируется гормоном гипоталамуса - тиреотропин-рилизинг фактором (ТРФ). ТТГ действует через мембраносвязанный G-белок спаренный рецептор (ТТГ-Р) для активации основных функций щитовидной железы. Синтез Т3 и Т4 требует внедрения йода в молекулу предшественника. Пероксидаза щитовидной железы (ПЩЖ) является связанным с мембраной гликозилированным гем-содержащим ферментом, который катализирует и йодирование остатков тирозила, и спаривание остатков йодтирозила в тироглобулине для формирования Т3 и Т4. После синтеза Т3 и Т4 хранятся в коллоидной форме на тироглобулине (Tg) перед высвобождением гормонов.

При патологических условиях белки ПЩЖ, ТТГ-Р и Tg могут стать аутоантигенами, т.е. мишенями для аутоиммунных ответов, наиболее легко идентифицируемых аутоантителами, связывающими эти белки. Исторически антитела, реагирующие с микросомальной фракцией ткани щитовидной железы, также были выявлены и исследованы. Позднее было установлено, что пероксидаза щитовидной железы является главной мишенью таких антимикросомальных антител щитовидной железы. Основываясь на этой информации, микросомальные антитела щитовидной железы и антитела пероксидазы щитовидной железы рассматривают в качестве практически равноценных понятий.

Сигнальная функция белка ТТГ-Р в норме становится активированной только при связывании тиреотропина. Однако некоторые антитела, направленные против ТТГ-Р (в настоящем описании они обозначаются «ТТГРА»), могут связываться по сайту присоединения тиреотропина, причем такой класс ТТГРА аутоантител может действовать в качестве непосредственного агониста (стимулирующего антитела) или антагониста (блокирующего антитела) ТТГ-Р. Таким образом, аутоиммунная функция щитовидной железы может быть связана с нарушенной регуляцией секреции гормонов щитовидной железы и вызывает гипо- или гипертиреоидизм.

Общим диагностическим признаком у пациентов с расстройством, называемым по-разному (болезнь Грейвса, диффузный тиреотоксический зоб, базедова болезнь или болезнь Пари), является наличие ТТГРА в крови. Антитела, направленные против ПЩЖ (обозначаемые в настоящем изобретении «ПЩЖА»), могут присутствовать или отсутствовать у пациента с болезнью Грейвса. Выше было указано, что пациенты с указанным расстройством могут клинически быть в состоянии гипо- или гипертиреоидизма, причем у одного и того же пациента в разное время могут проявляться оба состояния. Помимо дисфункции щитовидной железы указанное расстройство может затрагивать другие ткани. Офтальмопатия при болезни Грейвса (формально - патология глазницы, поскольку изменения ограничиваются структурами глазницы и не касаются внутренней структуры глаза), гипертрофия мышечных пучков вне глаза и гипертрофия жировой ткани вызывают выбухание глазного яблока (пучеглазие или проптоз) приводят к двоению в глазах (диплопии) и, в тяжелых случаях, к потере зрения. У некоторых пациентов развивается дерматопатия, отличающаяся отеком и утолщением кожи или утолщением костей пальцев. Гипертиреоидная болезнь Грейвса может часто быть изменена пероральным введением лекарственных средств, подавляющих щитовидную железу, например, метимазол или пропилтиоурацил. Не поддающиеся лечению случаи могут потребовать иссечения щитовидной железы, используя радиоактивный йод или хирургическое иссечение щитовидной железы. В связи с подавлением щитовидной железы пациент может нуждаться в замещении гормонов щитовидной железы. Тяжелая Офтальмопатия может потребовать применения радиотерапии введением препарата в глазную впадину или хирургической декомпрессией глазницы.

Аутоиммунный тиреоидит широко известен среди эндокринологов под названиями «тихий тиреоидит» и «тиреоидит Хашимото». ПЩЖА обычно присутствуют у пациентов с указанным расстройством; высокие уровни ПЩЖА в контексте клинической картины гипотиреоидизма часто рассматривают в качестве подтверждения диагноза болезни Хашимото. ТТГРА обычно отсутствует. При таком расстройстве, связанном с иммунным нарушением щитовидной железы, может произойти истечение накопленного гормона с ассоциированным временным тиреотоксикозом, но обычно происходит в низкоактивной щитовидной железе с ассоциированным гипотиреоидизмом. Лечение обычно включает замещение гормона щитовидной железы.

Определенные болезненные состояния или лечебные воздействия связаны с повышенным риском аутоиммунных расстройств щитовидной железы. Например, расстройства щитовидной железы часто встречаются у пациентов, у которых лечат вирусный гепатит С интерфероном-альфа (Preziati D. и др., Eur J Endocrinol, 132(5), 1995, сс.587-593). Среди пациентов с вирусной инфекцией гепатитом С предварительная обработка антителами к ПЩЖ или к микросомальной фракции щитовидной железы (известно, что ее часть распознает ПЩЖ) предположительно является маркером повышенного риска гипер- и гипорасстройств щитовидной железы среди пациентов, которых позднее лечили интерфероном-альфа (Marazuela M. и др., Clin Endocrinol 44, 1996, сс.635-642; Watanabe U. и др., Am J Gastroenterol, 89(3), 1994. сс.399-403; Fernandez-Soto L. и др., Arch Intern Med, 158, 1998, сс.1445-1448). Сходным образом ПЩЖА, выявленные во время беременности, предположительно указывают на риск развития послеродовых расстройств щитовидной железы (Vargas М.Т. и др., J. Clin. Endocrinol. Metab., 67(2), 1988, сс.327-333).

Аутоиммунные расстройства щитовидной железы также встречаются с повышенной частотой у пациентов, которые ранее проходили лечение, приводящее к лимфопении. Одним из таких лечений является применение алемтузумаба. Алемтузумаб (продукты Campath^®, MabCampath^®, Campath-1H^®) является гуманизированным моноклональным антителом, которое избирательно связывает белок-антиген, называемый «CD52». Молекула CD52 присутствует в большом количестве копий (примерно 5×10⁵ сайтов связывания антитела на клетку) по меньшей мере у 95% от общего числа лимфоцитов и моноцитов/макрофагов в периферической крови человека (Hale G, и др., Tissue Antigens 35, 1990, сс.178-327), но отсутствует у кроветворных стволовых клеток. Лечение субъекта алемтузумабом, используя соответствующую дозу и режим, наряду с другими эффектами приводит к быстрому и относительно устойчивому истощению в тканевых жидкостях и крови нормальных и неопластических лимфоцитов, несмотря на уменьшение кроветворных стволовых клеток, необходимых для нового формирования клеток иммунной системы. Алемтузумаб описан в US 5846534.

Алемтузумаб одобрен для лечения пациентов с В-клеточным хроническим лимфоцитарным лейкозом (B-cell chronic lymphocytic leukemia - B-CLL), которых лечили алкилирующими агентами и лечение которых флударабином было неудачным. Клинические исследования показали, что алемтузумаб также активен в лечении других злокачественных кроветворных клеток, например, не-ходжкинской лимфомы или лейкозов, а также различных расстройств, связанных с иммунитетом, включая болезнь трансплантат-против-хозяина, отторжение трансплантированных органов, ревматоидный артрит и особенно рассеянный склероз (Hale G., Waldmann H., в кн.: «Methods in Molecular Medicine: Diagnostic and Therapeutic Antibodies», 2000, под ред. George A.J.T., Urch C.E., 40: 243-266).

Hale и Waldmann впервые описали применение продукта Campath-1H для лечения рассеянного склероза (PC) (см. US 6120766). С тех пор безопасность и эффективность Campath-1H была сосредоточением нескольких клинических исследований пациентов с PC (см., например, Т.Moreau и др., Lancet, 344, 1994, сс.298-301; Т.Moreau и др., Brain 119, 1996, сс.225-237; A.Coles и др., Ann. Neurol. 46, 1999, сс.296-304; A.Coles и др. (Neurology, 60, 2-003, приложение 1; A.Coles и др., Clinical Neurology and Neurosurgery 106, 2004, сс.270-274).

Согласно последним сведениям, во второй фазе клинического исследования, обозначаемого CAMMS223, алемтузумаб вводили дозами двух уровней (курс длительностью 5 суток, доза 12 мг или 24 мг/сутки для кумулятивных доз 60 или 120 мг в первый год, с последующим трехсуточным курсом 12 мг или 24 мг/сутки для кумулятивных доз 24 мг/сутки для кумулятивных доз 36 или 72 мг во второй год, с возможным повторным лечением, применяя сходным образом 36 или 72 мг в третий год). При проведении активного сравнения пациенты в контрольной группе получали интерферон бета-la (продукт Rebif^®, фирма EMD Serono, Inc.) 44 мкг подкожно трижды в неделю согласно указанию во вкладыше (O'Donnell L. и др., Consortium of Multiple Sclerosis Centers Annual Meeting, Торонто, Канада, июнь 2-6, 2004; Compston А. и др., 22^nd meeting of the European Committee for Treatment and Research in Multiple Sclerosis (ECTRIMS), Мадрид, Испания. Сентябрь 27-30, 2006; Fox E. и др. ECTRIMS, Мадрид, Испания, 2006).

Предварительные результаты получены по предварительным данным об эффективности и безопасности промежуточных анализов, выполненных после 1-2 лет лечения всех пациентов в исследовании, запланированном на 3 года. Они показали, что алемтузумаб более эффективен по сравнению с интерфероном бета-1a (продукт Rebif^®; фирма EMD Serono, Inc.), признанным средством для лечения PC, для снижения риска рецидива PC и замедления формирования устойчивой неработоспособности. Конкретно пациенты после курса лечения алемтузумабом проявляют по меньшей мере на 75% снижение риска рецидива после по меньшей мере 1 и 2 лет последующего врачебного наблюдения при сравнении с пациентами, которых лечили интерфероном бета-1а. После лечения алемтузумабом пациенты дополнительно испытывали по меньшей мере 60% снижение (относительно пациентов, которых лечили продуктом Rebif^®) риска устойчивого накопления нетрудоспособности через 1 год, и по меньшей мере снижение риска на 65% через 2 года.

Во время предварительных исследований алемтузумаба для лечения PC было установлено, что у большого процента индивидуумов сформировались заболевания, затрагивающие щитовидную железу. Первое сообщение об этом феномене (Coles и др. Lancet, 354, 1999, сс.1691-1695) описывало клиническое и лабораторное подтверждение аутоиммунного заболевания щитовидной железы, проявляющегося примерно у трети пациентов (9 из 27), которые раньше получали алемтузумаб для лечения PC. Конкретно указанные пациенты имеют сформированные антитела против рецептора тиреотропина и карбимазол-чувствительного аутоиммунного гипертиреоидизма, и у некоторых из них также бывают приступы, соответствующие аутоиммунному тиреоидиту. Последующие исследования той же группы (Coles и др., Neurology, 60, 2003, приложение 1) и других (Compston А. и др., 22^nd meeting of the European Committee for Treatment and Research in Multiple Sclerosis (ECTRIMS), Мадрид, Испания, 27-30 сентября 2006) подтвердили, что расстройства щитовидной железы возникают с повышенной частотой после лечения больных с PC алемтузумабом. Начало проявления расстройств щитовидной железы обычно проявляется через несколько месяцев или лет после первоначального лечения алемтузумабом.

Отсроченное начало расстройств щитовидной железы также может происходить при других обстоятельствах, отличающихся лимфопенией и формированием новых клеток, особенно отсроченное начало расстройств щитовидной железы может происходить после трансплантации костного мозга, или аутогенного, или аллогенного, а также или для лечения первичного иммунодефицита, или для восстановления после ятрогенной супрессии костного мозга (Ishiguro Н. и др., J Clin Endocrinol Metab, 89(12), 2004, сс.5981-5986; Slatter M.A. и др., Bone Marrow Transplant., 33(9), 2004, сс.949-953; Carlson K. и др., Bone Marrow Transplant., 10(2), 1992, сс.123-127; Lee W.Y. и др., Bone Marrow Transplant., 28(1), 2001, сс.63-66). Химиотерапевтические режимы в данных случаях сильно отличаются. Их главным сходством с больными PC, склонными к заболеваниям щитовидной железы после лечения алемтузумабом, является регенерация популяций лимфоцитов относительно первоначального состояния природного или ятрогенного истощения.

Научное понимание патогенеза аутоиммунных расстройств щитовидной железы, которые осложняют методы лечения, истощающие лимфоциты, и причины задержки начала проявления указанных расстройств, в настоящее время является неполным.

Вкратце, предположительно алемтузумаб эффективен в лечении пациентов с различными расстройствами, но его применение при PC было связано с аутоиммунными осложнениями, включая расстройства щитовидной железы. Сходные осложнения бывают с другими терапиями, приводящими к лимфопении. У некоторых индивидуумов польза от терапевтических режимов, связанных с истощением лимфоцитов, может быть компенсирована побочными эффектами. Например, для максимизации соотношения пользы к риску, связанного с применением терапии, приводящей к лимфопении, например с лечением алемтузумабом (например, пациентов с PC), может быть желательным иметь средства идентификации (например, перед инициацией лечения алемтузумабом) тех индивидуумов, у которых повышен риск аутоиммунных расстройств щитовидной железы. Такой прогноз риска может быть полезен для поддержки выбранного обоснованного медицинского решения, например, следует ли начинать лечение, приводящее к лимфопении у данного индивидуума, основанного на прогнозе риска такого побочного эффекта.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение относится к способу прогнозирования риска расстройств щитовидной железы, которые могут быть у пациента в виде осложнения терапевтических режимов, истощающих лимфоциты (режимов, приводящих к лимфопении). Этот способ основан на выяснении наличия или отсутствия аутоантител у пациента до получения первого или последующих курсов, приводящих к лимфопении (например, перед оценкой аутоантител в крови). Например, анализ крови до лечения алемтузумабом позволяет прогнозировать риск расстройств щитовидной железы, появляющихся после лечения алемтузумабом.

Точнее настоящее изобретение частично основано на открытии, заключающемся в том, что пациенты с PC, обладающие антителами против фермента пероксидазы щитовидной железы (ПЩЖ), перед началом лечения алемтузумабом или во время такого лечения, обладают повышенным риском развития расстройств щитовидной железы в результате такого лечения.

Таким образом, один из вариантов осуществления настоящего изобретения включает способ определения пациентов с относительно высоким риском развития расстройства щитовидной железы после лечения, приводящего к лимфопении (а также, возможно, к истощению клеток других типов), включающего стадию оценки биологического образца, взятого у пациента, на наличие антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы (ПЩЖА). Пациенты, у которых в результате анализа обнаружены прогнозирующие аутоантитела, обладают относительно повышенным риском развития расстройства щитовидной железы в случае лечения указанным способом. Пациенты, у которых в результате анализа не обнаружены прогнозирующие аутоантитела, обладают относительно пониженным риском развития расстройства щитовидной железы в случае лечения указанным способом.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения предусмотрен способ выявления пациентов с относительно повышенным риском развития расстройства щитовидной железы после лечения в режиме, в результате применения которого истощаются клетки, несущие на поверхности маркер CD52 (т.е. СD52-положительные клетки), включающий стадию оценки биологического образца от пациента на наличие антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы (ПЩЖА). Пациенты, у которых в результате анализа обнаружены прогнозирующие аутоантитела, обладают относительно повышенным риском развития расстройства щитовидной железы в случае лечения указанным способом, в результате которого истощаются CD52-положительные клетки. Пациенты, у которых в результате анализа обнаружены прогнозирующие аутоантитела, обладают относительно пониженным риском развития расстройства щитовидной железы в случае лечения указанным способом.

В контексте настоящего изобретения понятие «режим, при котором истощаются СD52-положительные клетки» включает какую-либо молекулу, которая истощает, частично или полностью, клетки человека, несущие маркер CD52. Например, агент, который истощает СD52-положительные клетки, являющийся, без ограничения, антителом, малой интерферирующей РНК или низкомолекулярным соединением, которое снижает число СD52-несущих клеток в кровеносном русле и/или в тканевых жидкостях. Терапевтический режим, который истощает СD52-положительные клетки, в определенных вариантах осуществления настоящего изобретения, включает введение антитела, специфически связывающегося с CD52. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения таким анти-СD52 антителом является антитело человека или гуманизированное антитело, например алемтузумаб (продукты Campath^®, MabCampath^®, Campath-1H^®) или близкое ему антитело.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу выявления пациента с рассеянным склерозом, подверженного риску развития расстройства щитовидной железы после лечения, приводящего к лимфопении (например, лечению агентом, который истощает CD52-положительные клетки, например, алемтузумабом), включающему определение наличия у пациента антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы у пациента, причем, если эти антитела имеются у пациента, существует риск развития расстройства щитовидной железы после указанного лечения. Способы, описанные в настоящем изобретении, применимы для пациентов с рецидивирующим временно ослабевающим рассеянным склерозом, а также с первичным и вторичным прогрессирующим множественным склерозом.

В другом варианте осуществления настоящего изобретения описан способ определения пациентов с относительно повышенным риском развития расстройства щитовидной железы после лечения, если указанное лечение представляет терапевтический режим, который вырабатывает ятрогенную лимфопению в качестве сопутствующего фактора при достижении лечебного эффекта. К примерам такого режима относятся, но ими перечень не ограничивается, введение одного или нескольких химиотерапевтических агентов для лечения неоплазии, аутоиммунности или подготовки к трансплантации костного мозга или плотных органов; и введение антитимоцитарного глобулина (например, продукт Thymoglobulin^®), приводящего к истощению Т-лимфоцитов для подавления отторжения трансплантированного органа.

Предполагают, что способы настоящего изобретения могут быть применимы для прогноза риска возникновения расстройства щитовидной железы у пациента после лечения каким-либо терапевтическим режимом, приводящим к истощению лимфоцитов (лимфопении), хотя другие типы клеток в результате такого лечения могут истощаться или не истощаться. Общая популяция лимфоцитов включает подгруппы, преимущественно Т-клеток, В-клеток и клеток NK. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения терапевтический режим, приводящий к лимфопении, является режимом, направленным против Т-лимфоцитов. В другом варианте осуществления настоящего изобретения режим направлен против В-лимфоцитов. В еще одном из вариантов осуществления настоящего изобретения режим направлен против клеток NK. В других вариантах осуществления настоящего изобретения режим направлен против различных комбинаций Т- и В-лимфоцитов и клеток NK (например. Т, В и NK; Т и В, но не NK; и т.д.).

Предвидение риска развития расстройств щитовидной железы, связанных с лимфопенией, применимо для поддержки принятия обоснованного медицинского решения, например, начинать ли лечение, в результате которого возможна лимфопения у данного пациента, основанного на прогнозе риска развития расстройства щитовидной железы.

Анализ определения наличия у пациента антител против пероксидазы щитовидной железы может быть выполнен до или после лечения, в результате которого формируется лимфопения. В идеале анализ на наличие ПЩЖА проводят до указанного курса лечения таким образом, что информация о скрытом риске, связанном с лечением, может быть оценена врачом и пациентом при принятии решения. Однако информация о наличии ПЩЖА также применима для последующего лечения в качестве раннего индикатора возрастающего риска,

Аутоиммунные расстройства, которые могут возникнуть в результате лечения пациента, при котором возникает лифопения, могут проявляться в виде или гипотиреоидизма, или гипертиреоидизма. К распространенным болезням относятся болезнь Грейвса (также называемая диффузным тиреотоксическим зобом, базедовой болезнью или болезнью Пари) и аутоиммунный тиреоидит (также называемый «тихий тиреоидит» или «тиреоидит Хашимото»), а также их комбинации.

Антитела, направленные против пероксидазы щитовидной железы, обычно находят в образцах крови (обычно сыворотке или плазме), полученных от пациента, но могут быть обнаружены в каком-либо биологическом образце, полученном от пациента, включая лимфу, мочу и/или ткань.

Специалисту в данной области очевидно, что определенный способ, используемый для выявления наличия антител против ПЩЖ, не является ограничительным признаком настоящего изобретения. Различные способы выявления антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы, известны специалистам в данной области. Некоторые способы включают применение фермент-связанного иммуносорбентного анализа (ELISA), ридиоиммуноанализа (РИА), методов гемагглютинации и различных других методов, которые используют разновидность или фрагмент белка пероксидазы щитовидной железы в качестве мишени, предназначенной для присоединения и связывания с измеряемыми антителами, и применение какого-либо метода, пригодного для выявления и, возможно, количественной оценки связанных антител. Различные способы, описанные выше, и другие сходные способы, могут также применяться для выявления антител, взаимодействующих с микросомами щитовидной железы, тканевой фракцией, обогащенной белком - ферментом пероксидазой щитовидной железы, для получения равного диагностического результата. Антимикросомальные антитела в значительной степени эквивалентны ПЩЖА. Другие способы включают измерение ферментного действия ПЩЖ, а также наличие и концентрацию ПЩЖА, определяемого по подавлению ферментной активности ПЩЖ.

Подробное описание изобретения

CAMMS223 - название второй фазы клинического исследования, анализирующей безопасность и эффективность двух дозовых уровней алемтузумаба в сравнении с интерфероном бета-1а (продукт Rebif^®) при лечении пациентов с ранним, активным, рецидивирующим временно стихающим PC. Пациентов, участвовавших в CAMMS223, исследовали на наличие антител против рецептора тиреостимулирующего гормона (обозначаемых в настоящем изобретении «ТТГРА») перед началом и в положительном случае исключают. Пациенты также были исследованы на наличие антител против пероксидазы щитовидной железы (обозначаемые в настоящем изобретении «ПЩЖА»), но это не влияло на их приемлемость или лечение. В целом, 334 пациента были рандомизированы по ИФН-бета-1a (44 мкг SC трижды в неделю) или алемтузумабу в высокой дозе (24 мг/сутки внутривенно) или низкой дозе (12 мг/сутки внутривенно). Алемтузумаб вводили ежедневно в течение 5 суток в «нулевой» месяц и в 12-й месяц, а для некоторых пациентов также на 24-й месяц.

За последующие 3 года побочные эффекты, связанные со щитовидной железой, были подсчитаны, и все пациенты, обладающие гормонами, родственными гормонам щитовидной железы, и тиреоидными аутоантителами, анализировали с регулярными интервалами: ТТГ, L-тироксин (Т3), L-трийодтиронин (Т4) и ТТГРА определяли раз в квартал, антитело против пероксидазы щитовидной железы определяли дважды в год. ПЩЖА тестировали, используя коммерческий набор антител ПЩЖ Varelisa, которые производятся фирмой Sweden Diagnostics и распространяются фирмой Somagen, номер в каталоге 12396 (протокол анализа описан в примере 1).

Одним из сосредоточений исследований является установление корреляции среди нарушений нескольких лабораторных параметров, связанных со щитовидной железой. Промежуточный анализ проводили при среднем последующем врачебном контроле 2,2 года (1^й квартиль = 2,0; 3^й = 2,5). Побочные эффекты, связанные со щитовидной железой, и лабораторные нарушения присутствуют во всех трех группах лечения (см. Compston и др., 2006, ор cit.).

Согласно указанному выше промежуточному анализу, после лечения алемтузумабом доля пациентов с клиническими побочными эффектами в щитовидной железе составляет 11,1% против 1,9% у пациентов, получавших ИФН-бета-1a. Больше побочных эффектов в щитовидной железе возникало в группе с низкими дозами, но это различие в зависимости от доз алемтузумаба несущественно. Болезнь Грейвса или гипертиреоидизм установлен у 14 из 216 пациентов, которых лечили алемтузумабом (6,5%), и у 0 из 106 пациентов, которых лечили ИФН-бета-1a (р<0,0001). ТТГРА были обнаружены у 47 из 216 (21,8%) пациентов после алемтузумаба и у 2 из 103 (1,9%) после ИФН-бета-1a. Лабораторные маркеры аутоиммунности щитовидной железы (ТТГРА и/или ПЩЖА) присутствуют без клинического проявления побочных эффектов в щитовидной железе у 16,7% пациентов после лечения алемтузумабом против 11,3% пациентов, которых лечили ИФН-бета-1a.

В настоящем изобретении указанные изменения, связанные со щитовидной железой, были исследованы в контексте базового уровня (до обработки) лабораторных оценок (см. пример 1). Установлено проявление побочных клинических эффектов в щитовидной железе у 17 из 176 пациентов после лечения алемтузумабом (9,7%), которые были анализированы в качестве отрицательных по ПЩЖА по исходному уровню против 5/16 пациентов (31,1%), которые первоначально были анализированы в качестве положительных (относительный риск = 3,2, р=0,029), и для 2/87 пациентов, которых лечили ИФН-бета-1a (2,3%), которые были анализированы в качестве отрицательных по ПЩЖА по исходному уровню против 0/3 пациентов (0%), которые первоначально были определены в качестве положительных. Следует отметить, что ТТГРА развивается только у 24 из 176 пациентов, которых лечили алемтузумабом (13,6%), которые первоначально были анализированы в качестве отрицательных по ПЩЖА по исходному уровню против 9/16 пациентов (56,3%), которые первоначально были анализированы в качестве положительных (относительный риск = 4,1, р<0,0001), и у 2/87 пациентов, которых лечили ИФН-бета-1a (2,3%), которые первоначально были анализированы в качестве отрицательных по ПЩЖА по исходному уровню против 0/3 пациентов (0%), которые первоначально были анализированы в качестве положительных.

Таким образом, в ретроспективном анализе среди пациентов с PC, обработанных алемтузумабом, индивидуумы, обладавшие антителами, направленными против ПЩЖ на момент, предшествующий началу обработки алемтузумабом, имели 3- или 4-кратное повышение риска последующих расстройств щитовидной железы при сравнении с индивидуумами, которые на исходном уровне были выявлены в качестве отрицательных по анти-ПЩЖ антителам.

Следует отметить, что большинство пациентов, у которых действительно развились нарушения щитовидной железы, вначале были определены в качестве отрицательных по ПЩЖА. Таким образом, исследование показывает отчетливую высокую специфичность, но низкую чувствительность ПЩЖА. Это может быть следствием низкой чувствительности метода исследования ПЩЖА или может означать, что некоторые пациенты подвержены риску расстройств щитовидной железы, связанной с алемтузумабом, несмотря на отсутствие ПЩЖА на исходном уровне.

Таким образом, настоящее изобретение охватывает способы выявления пациента с риском развития расстройства щитовидной железы в результате лечения в режиме, который истощает лимфоциты, включающие определение того, находятся ли антитела против пероксидазы щитовидной железы у пациента, причем, если антитела имеются у пациента, этот пациент обладает риском развития расстройства щитовидной железы в результате лечения.

Лимфоциты являются лейкоцитами, формируемыми независимо в лимфатической ткани индивидуума, и делятся на три основные группы: Т-клетки, В-клетки и клетки NK. Так, в одном объекте режим истощает Т-клетки. В другом объекте режим истощает В-клетки. В другом объекте режим истощает клетки NK. В еще одном объекте режим истощает различные комбинации клеток Т, В и NK. Режим включает какой-либо план лечения, который приводит к частичному или полному истощению лимфоцитов у пациента во время или после лечения. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения режим представляет введение одного или нескольких цитотоксических агентов (например, лекарственных средств). В другом варианте осуществления настоящего изобретения режим представляет введение агента, который истощает клетки, экспрессирующие CD52 в качестве маркера на поверхности клеток (т.е., это СD52-положительные клетки).

Таким образом, в один из вариантов осуществления настоящего изобретения включены способы выявления пациента с риском развития расстройства щитовидной железы в результате лечения агентом, который истощает СD52-положительные клетки, включающие определение того, имеются ли антитела, направленные против пероксидазы щитовидной железы, у пациента, причем, если антитела у пациента имеются, пациент подвержен риску развития расстройства щитовидной железы в результате лечения.

В одном из объектов настоящее изобретение относится к способу выявления пациента с PC, подверженного риску развития расстройства щитовидной железы в результате лечения агентом, истощающим CD52-положительные клетки, включающему определение того, имеются ли у пациента антитела, направленные против пероксидазы щитовидной железы, и если антитела у пациента имеются, этот пациент обладает риском развития расстройства щитовидной железы.

В контексте настоящего изобретения «режим, истощающий CD52-положительные клетки» относится к какому-либо режиму, который истощает, частично или полностью, клетки человека, несущие маркер CD52. Например, режим, который истощает СВ52-положительные клетки, включает, без ограничений, введение антитела, малой интерферирующей РНК, или низкомолекулярного соединения, которое редуцирует число СD52-несущих клеток в кровяном русле и/или тканях.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения агент, который истощает СD52-положительные клетки, является антителом, которое специфично в отношении CD52. Антитело, специфичное в отношении CD52, является молекулой, которая селективно связывается с CD52, но существенным образом не связывается с другими молекулами в образце, например, в биологическом образце, который содержит CD52. В контексте настоящего изобретения понятие «антитело» относится к иммуноглобулину или его части и охватывает какой-либо полипептид, включающий антигенсвязывающий сайт независимо от источника, способа получения и других характеристик. Понятие включает, но ими не ограничивается, поликлональные, моноклональные, моноспецифические, полиспецифические, гуманизированные, вырабатываемые человеком, одноцепочечные, химерные, синтетические, рекомбинантные, гибридные, мутантные, конъюгированные и CDR-пересаженные антитела. Понятие «антиген-связывающий сайт» относится к части молекулы антитела, которая включает область, специфично или комплементарно связанную с частью антигена или с целым антигеном. Антиген-связывающий сайт может включать вариабельную область легкой цепи антитела (V_L) и вариабельную область тяжелой цепи антитела (V_H). Антиген-связывающий сайт может быть представлен одним или несколькими вариабельными доменами антитела (например, Fd фрагментом антитела, состоящим из V_H домена, Fv фрагмента антитела, состоящего из V_H домена и V_L домена, или scFv фрагмента антитела, состоящего из V_H домена и V_L домена, соединенных линкером). Понятие «анти-СD52 антитело» или «антитело против CD52» относится к антителу, которое специфически связывает по меньшей мере один эпитоп CD52.

Различные антитела и их части могут быть получены, используя какие-либо различные методы (см., например, Kohler, Milstein, Nature 256, 1975, сс.495-497; кн.: «Current Protocols in Immunology», 1994, под ред. Coligan и др., изд-во John Wiley & Sons, Inc., Нью-Йорк; Cabilly и др., US 4816567, EP 0125023, US 4816397, EP 0120694, WO 86/01533, EP 0194276, US 5225539, EP 0239400, EP 0451216, EP 0519596, Newman R. и др., BioTechnology, 10, 1992, сс.1455-1460; US 4946778; Bird R.E. и др., Science, 242, 1988, сс.423-426).

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения антитело против CD52 является алемтузумабом, рекомбинантным ДНК-производным гуманизированным моноклональным антителом, которое направлено против CD52. Последовательность алемтузумаба (продукт Campath-1H^®), включающая последовательность трех областей CDR, содержащихся в нем, описана в патенте US 5846534, в котором гуманизированное антитело, которое эффективно связывается с антигеном CD52, а также способ лечения человека со злокачественным лимфатическим заболеванием указанным антителом. Методика приготовления и тестирования такого антитела также описывается.

Помимо рассеянного склероза (рецидивирующего временно стихающего, первичного и вторичного прогрессирующего), к состояниям, которые лечат алемтузумабом, относятся злокачественные заболевания крови, например, В-клеточный хронический лимфолейкоз (B-cell chronic lymphocytic leukaemia - В-CLL), не-ходжкинская лимфома и лейкозы, а также различные расстройства, связанные с иммунной системой, включая болезнь трансплантат-против-хозяина, отторжение пересаженных органов, васкулит, увеит, склеродермит, аутоиммунные цитопении и ревматоидный артрит. Однако способ по настоящему изобретению не ограничивается применением для пациентов с такими указанными заболеваниями. Предпочтительнее он применим для пациентов с каким-либо заболеванием в течение времени, на протяжении которого такое заболевание поддается лечению агентом, который истощает лимфоциты, и такое лечение коррелирует с развитием, по меньшей мере, у некоторых пациентов, расстройство щитовидной железы.

Аутоиммунные расстройства щитовидной железы, которые могут сформироваться в результате лечения пациента терапией, вызывающей истощение лимфоцитов, могут проявлять или гипотиреоидизм, или гипертиреоидизм. К распространенным болезням относятся болезнь Грейвса (также называемая диффузным тиреотоксическим зобом, базедовой болезнью или болезнью Пари) и аутоиммунный тиреоидит (также называемый «тихий тиреоидит» или «тиреоидит Хашимото», а также их комбинации.

Анализы по выявлению наличия у пациента антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы, могут быть выполнены перед или после лечения в режиме, приводящем к истощению лимфоцитов. В идеале наличие антител определяют до инициации курса лечения таким образом, что сведения о возможном риске лечения могут быть учтены врачами и пациентом и взвешены доводы против применения указанного лечения. Однако также может быть полезно осуществить способы настоящего изобретения после начального лечения пациента, например, чтобы определить риск/пользу последующего курса лечения для мониторинга какого-либо повышенного риска развития расстройства щитовидной железы в какое-либо время после лечения.

Различные способы выявления антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы, известны специалистам в данной области. В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения может быть применен метод ELISA - фермент-