Лекарственное средство и способ лечения головокружений

Лекарственное средство и способ лечения головокружений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения головокружений различного генеза.

Из уровня техники известно нейротропное лекарственное средство на основе антисыворотки к мозгоспецифическому белку S-100 (RU 2156621 C1, A61K 39/395, 27.09.2000).

Изобретение направлено на расширение арсенала лекарственных средств для лечения головокружений различного генеза.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство, содержащее активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретению выполнено в виде фармацевтической композиции и содержит в качестве дополнительного усиливающего компонента активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе и активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

Фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество частиц нейтрального носителя, насыщенного смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной - потенцированной формы антител к эндотелиальной NO-синтазе и активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, и фармацевтически приемлемые добавки, которые включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

При этом водные или водно-спиртовые растворы активированных - потенцированных форм антител к эндотелиальной NO-синтазе и к мозгоспецифическому белку S-100 получены путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия - вертикального встряхивания каждого разведения из матричных растворов соответственно аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе и к мозгоспецифическому белку S-100 с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Причем каждый из компонентов сверхмалых доз аффинно очищенных антител используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, приготовленных по гомеопатической технологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что в способе лечения путем введения в организм активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100, согласно изобретению дополнительно (одновременно и сочетано) вводят активированную - потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

При этом активированную - потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе и активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют в виде активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора каждого компонента, активность которого обусловлена процессом последовательного многократного разведения в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, используют приготовленные в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы смесь различных разведений по гомеопатической технологии антител к эндотелиальной NO-синтазе в сочетании со смесью различных разведений к мозгоспецифическому белку S-100, приготовленных по гомеопатической технологии антител.

Кроме того, лекарственный препарат содержит действующие компоненты в объемном соотношении 1:1, при этом каждый компонент используют в виде смеси трех матричных растворов, разведенных соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30, С200, приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать предпочтительно по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.

При лечении патологических состояний различного генеза возможно раздельное, но сочетанное и одновременное применение (введение в организм) заявленной фармацевтической композиции в виде двух отдельно приготовленных препаратов как в виде растворов, так и в твердых лекарственных формах (таблеток), каждый из которых содержит активированную - потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и соответственно активированную - потенцированную форму сверхмалых доз аффинно очищенных антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Предложенное сочетание активированных - потенцированных форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе в фармацевтической композиции, т.е. форм антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, приготовленных по гомеопатической технологии потенцирования путем многократного последовательного разведения и внешнего воздействия - неоднократного встряхивания каждого разведения (Швабе В. Гомеопатические лекарственные средства. - М., 1967, с.14-29), которые обладают активностью, обусловленной технологией потенцирования, в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, подтвержденного на адекватных (валидных) экспериментальных моделях и клинических исследованиях, который заключается в повышении эффективности лечения. Указанный технический результат обусловлен усилением нейропротекторной активности антител к белку S-100, усилением вегето-стабилизирующего эффекта, нормализацией вегетативного статуса, синергическим влиянием обоих компонентов на нейрональную пластичность и вследствие этого повышением устойчивости мозга к токсическим воздействиям, что улучшает интегративную деятельность и восстанавливает межполушарные связи головного мозга, способствует устранению когнитивных нарушений, стимулирует репаративные процессы и ускоряет восстановление функций ЦНС, повышает умственную работоспособность, восстанавливает процессы обучения и памяти, нормализует соматовегетативные проявления, увеличивает мозговой кровоток и соответственно обеспечивает расширение терапевтического диапазона лекарственного средства и повышение эффективности лечения. При этом заявленное лекарственное средство, как и составляющие ее компоненты, не обладают седативным и миорелаксантным действием, не вызывают пристрастия и привыкания. В том числе заявленное лекарственное средство может быть использовано в составе комплексной терапии.

Кроме того, заявленное лекарственное средство расширяет арсенал препаратов.

Лекарственное средство приготовляют преимущественно следующим образом.

Для приготовления активированной - потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или преимущественно поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам (Иммунологические методы./ Под ред. Г. Фримеля. - М.: Медицина, 1987, с.9-33; или Laffly E., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55).

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемыми в соответствии с изобретением веществами - антигенами: мозгоспецифическим белком S-100 и эндотелиальной NO-синтазой. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифические антисыворотки с высоким содержанием антител, которые используют для получения активированных - потенцированных форм компонентов. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленной фармацевтической композиции является использование поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 и к эндотелиальной NO-синтазе, которые в качестве матричного (первичного) раствора с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, используют для последующего приготовления активированной потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, что соответствует сотенным разведениям С12, С30 и С200, приготовленным по гомеопатической технологии. При выполнении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель - лактозу может наноситься смесь указанных компонентов в объемном соотношении 1:1.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного препарата является использование поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе и к мозгоспецифическому белку S-100, которые могут быть получены иммунизацией кроликов следующим образом.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Поликлональные антитела к эндотелиальной NO-синтазе получают, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) цельной молекулы эндотелиальной NO-синтазы следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к эндотелиальной NO-синтазе использование в качестве иммуногена (антигена) синтетического пептида эндотелиальной NO-синтазы, выбранного, например, из следующих аминокислотных последовательностей:

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°С) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (над осадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Добавляют к антисыворотке 20% (весовая концентрация) NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -20°С. Для выделения из антисыворотки антител к эндотелиальной NO-синтазе производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl, добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°С;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к эндотелиальной NO-синтазе, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированной - потенцированной формы по гомеопатической технологии.

Для получения поликлональных антител к мозгоспецифическому белку S-100 используют мозгоспецифический белок S-100, физико-химические свойства которого описаны в статье (Старостина М.В., Свиридов С.М. Нейроспецифический белок S-100, Успехи современной биологии, 1977, т.5, с.170-178); книге (Штарк М.Б. Мозгоспецифические белки /антигены/ и функции нейрона. - М.: Медицина, 1985; с.12-14), выделенный из ткани головного мозга быка по следующей методике:

- замороженную в жидком азоте ткань растирают в порошок на специальной мельнице;

- экстракцию белков проводят в соотношении 1:3 (вес/объем) в экстрагирующем буфере при гомогенизации;

- гомогенат прогревают в течение 10 мин при 60°С и охлаждают до 4°С на ледяной бане;

- термолабильные белки удаляют центрифугированием;

- проводят ступенчатое фракционирование сульфатом аммония с последующим удалением выпадающих в осадок примесных белков;

- содержащую белок S-100 фракцию осаждают 100% насыщенным сульфатом аммония при снижении рН до 4,0 и собирают центрифугированием;

- осадок растворяют в минимальном объеме буфера, содержащего ЭДТА и меркаптоэтанол, диализируют против деионизованной воды и лиофильно высушивают;

- фракционирование кислых белков продолжают хроматографией на ионообменных носителях - ДЭАЭ целлюлозе ДЕ-52 и затем ДЭАЭ-сефадексе А-50;

- собранные и отдиализованные фракции, содержащие белок S-100, разделяют по молекулярному весу гель-фильтрацией на сефадексе G-100;

- очищенный белок S-100 диализируют и лиофильно высушивают.

Молекулярный вес очищенного мозгоспецифического белка S-100 составляет - 21000 Да.

Благодаря высокому содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот мозгоспецифический белок S-100 является сильнокислым и занимает крайнее анодное положение при электрофорезе в прерывистой буферной системе в полиакриламидном геле, что облегчает его идентификацию.

Для получения мозгоспецифической антисыворотки к выделенному мозгоспецифическому белку S-100 готовят смесь очищенного белка S-100 (антигена) в комплексе с метилированным бычьим сывороточным альбумином в качестве носителя с полным адъювантом Фрейнда, которую вводят подкожно лабораторному животному - кролику в область спины в количестве 1-2 мл. На 8-й, 15-й день проводят повторную иммунизацию. Забор крови производят (например, из вены уха) на 26-й и 28-й день.

Полученная антисыворотка имеет титр 1:500 - 1:1000, образует единственную полосу преципитации с экстрактом из нервной ткани, но не реагирует с экстрактами гетерологичных органов и формирует единственный пик преципитации как с чистым белком S-100, так и с экстрактом нервной ткани, что свидетельствует о моноспецифичности полученной антисыворотки.

Активированную - потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения С) или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя в сочетании с многократным (не менее 10 раз) вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатической технологии (Швабе В. Гомеопатические лекарственные средства. - М., 1967, с.14-29).

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к NO-синтазе (или к мозгоспецифическому белку S-100) с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 15% этилового спирта) и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное С1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к NO-синтазе с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, приготовленный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений С30 и С200.

При использовании в качестве компонента (например, активированной - потенцированной формы антител к мозгоспецифическому белку S-100) смеси различных, преимущественно сотенных, разведений, каждое разведение компонента (например, С12, С30, С200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно до получения С11, С29, С199) и затем вносят в одну емкость по одной части каждого полученного предпоследнего разведения и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную - потенцированную форму антител к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе, приготовленную сверхразведением матричного раствора соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведений С12, С30 и С200, по гомеопатической технологии.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных разведений по гомеопатической технологии, например, десятичных и/или сотенных, (С12, С30, С100; D20, С30, С100 или D20, С30, М100 и т.д.), эффективность которых определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Для получения заявленной фармацевтической композиции водные или водно-спиртовые растворы действующих компонентов смешивают преимущественно в объемном соотношении 1:1 и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленная фармацевтическая композиция может быть использована и в твердой лекарственной форме, которая содержит эффективное количество частиц нейтрального носителя - лактозы, насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью водных или водно-спиртовых растворов активированной - потенцированной формой антител к эндотелиальной NO-синтазе и активированной - потенцированной формой антител мозгоспецифическому белку S-100, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие преимущественно лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Huttlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой частиц нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 150÷300 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированных - потенцированных форм антител к эндотелиальной синтазе оксида азота (NO-синтазе) и к мозгоспецифическому белку S-100 преимущественно в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5 - 1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°С. Расчетное количество 0,17÷0,34 от массы твердой оральной формы высушенных частиц, насыщенных активированной - потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с микрокристаллической целлюлозой, вводимой в количестве 3-8 мас.ч. от общей массы загрузки - от массы твердой оральной формы. Затем в эту смесь добавляют 25÷45 мас.ч. от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия) и стеарат магния в количестве 0,1÷0,3 мас.ч. от общей массы загрузки. Полученную таблеточную массу равномерно перемешивают и таблетируют прямым сухим прессованием (например, в таблет-прессе Korsch-XL 400) с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг. После таблетирования получают таблетки, пропитанные водно-спиртовым раствором активированной - потенцированной формы антител к NO-синтазе и к мозгоспецифическому белку S-100 в сверхмалой дозе каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного соответственно в 100¹², в 100³⁰ в 100²⁰⁰, что эквивалентно смеси сотенных разведений С12, С30 и С200, приготовленных по гомеопатической технологии.

Предпочтительно заявленную фармацевтическую композицию рекомендуется принимать по 1-2 таблетке 2-4 раза в день.

Пример 1

Исследование влияния комплексного препарата, в состав которого входят активированные - потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200, в соотношении 1:1 (СМД анти-S10+анти-eNOS), а также компонентов, входящих в его состав - активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 и активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-eNOS), полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200, проводили in vitro на связывание стандартного лиганда [³Н]пентазоцина с рекомбинантным сигма-1 рецептором человека оценивали радиолигандным методом.

Сигма-1 рецептор - внутриклеточный рецептор, локализованный в клетках центральной нервной системе, клетках большинства периферических тканей и иммунокомпетентных клетках. Рецепторы демонстрируют уникальную способность транслоцироваться, которая вызывается множеством психотропных препаратов. Динамика сигма-1 рецепторов непосредственно связана с различными влияниями, осуществляемыми препаратами при действии на сигма-1 рецепторы. Эти влияния включают регуляцию каналов активности, экоцитоз, передачу сигналов, ремоделирование плазменной мембраны (формирование рафтов) и транспортировку липидов/метаболизм. Все это может способствовать развитию пластичности нейронов в мозге. Имеются доказательные данные, что сигма-1 рецепторы оказывают модулирующее влияние на все основные нейромедиаторные системы: норадренергическую, серотонинергическую, дофаминергическую, холинергическую системы и NMDA-регулируемые глутаматные эффекты. Сигма-1 рецептор играет важную роль в патофизиологии нейроденегенративных заболеваний, психических и аффективных расстройств, участвует в процессах обучения и памяти. В связи с этим способность лекарственных средств оказывать влияние на эффективность взаимодействия лигандов с сигма-1 рецептором указывает на наличие нейропротекторного, противоишемического, анксиолитического, антидепрессивного, антиастенического компонентов в спектре их фармакологической активности, что позволяет рассматривать данные препараты в качестве эффективных лекарственных средств, в том числе для лечения цереброваскулярных заболеваний.

В качестве контроля тестируемых препаратов была протестирована потенцированная дистиллированная вода (смесь гомеопатических разведений С12+С30+С200).

В опыте (для измерения общего связывания) в инкубационную среду вносили 20 мкл комплексного препарата СМД анти-S100+анти-eNOS или по 10 мкл СМД AT к S100 или 10 мкл СМД AT к NOS. Таким образом, количество СМД анти-S100+анти-eNOS, вносимых в экспериментальную лунку при тестировании комплексного препарата, было идентично количеству СМД AT к S100 и СМД AT к NOS, тестируемых в качестве монопрепаратов, что позволяет провести сравнение эффективности комплексного препарата с его отдельными компонентами, входящими в его состав. Потенцированную дистиллированную воду вносили в инкубационную среду в объеме 20 мкл и 10 мкл.

Затем вносили 160 мкл (~200 µg белка) гомогената мембран клеток линии Jurkat (линия лейкемических Т-лимфоцитов человека) и в последнюю очередь 20 мкл радиолиганда меченого тритием [³H]пентазоцин (15 нМ).

Для измерения неспецифического связывания вместо препаратов или потенцированной воды в инкубационную среду вносили 20 мкл немеченого лиганда - галоперидол (10 мкМ).

Радиоактивность измеряли на сцинтилляционном счетчике (Topcount, Packard) с использованием сцинтилляционной смеси (Microscint 0, Packard) после инкубации в течение 120 мин при температуре 22°С в 50 мМ Tris-HCl буфере (рН 7,4) и фильтрации на стекловолоконных фильтрах (GF/B, Packard). Специфическое связывание (в опыте или контроле) рассчитывали как разницу между общим (в опыте или контроле) и неспецифическим связыванием.

Результаты представлены в виде процента ингибирования специфического связывания в контроле (в качестве контроля использовали дистиллированную воду) (Таблица 1).

Таблица 1
Влияние препаратов и потенцированной воды на связывание стандартного радиолиганда [3H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека
Экспериментальная группа	Количество, вносимое в экспериментальную лунку	% от специфического связывания радиолиганда в контроле	% ингибирования связывания радиолиганда в контроле
1-е измерение	2-е измерение	Среднее значение
СМД анти-S100+анти-eNOS	20 мкл	48,4	35,5	42,0	58,0
СМД анти-S100	10 мкл	67,3	63,1	65,2	34,8
СМД анти-eNOS	10 мкл	147,5	161,1	154,3	-54,3
Потенцированная вода	20 мкл	98,1	75,8	86,9	13,1
Потенцированная вода	10 мкл	14 0,1	10 6,2	123,2	-23,2
Примечание:
% специфического связывания в контроле = (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%;
% ингибирования специфического связывания в контроле = 100% - (специфическое связывание в опыте / специфическое связывание в контроле) * 100%).

Результаты, отражающие ингибирование выше 50%, представляют собой значительные эффекты исследуемых соединений; ингибирование от 25% до 50%, свидетельствуют об эффектах от слабого до умеренного; ингибирование менее 25% считаются незначительными эффектами исследуемого соединения и находятся в пределах уровня фона.

Таким образом, в условиях данной экспериментальной модели показано, что: комплексный препарат СМД анти-S100+анти-eNOS более эффективно, чем отдельные его компоненты (СМД анти-S100 и СМД анти-eNOS) ингибирует связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека; СМД анти-S100, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, ингибируют связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека, но выраженность эффекта уступает выраженности эффекта комплексного препарата СМД анти-S100+анти-eNOS; СМД анти-eNOS, внесенные в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл, не оказывали влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека; потенцированная вода, внесенная в экспериментальную лунку в объеме 10 мкл или 20 мкл, не оказывала влияния на связывание стандартного радиолиганда [³H]пентазоцина с рекомбинантным сигма 1 рецептором человека.

Пример 2

Были исследованы лекарственные средства в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-S100), полученной сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200; лекарственное средство в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к мозгоспецифическому белку S-100 (анти-S100) и к эндотелиальной NO-синтазе (анти-eNOS) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200 (СМД анти-S100+анти-eNOS); лекарственное средство в виде таблеток массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к эндотелиальной NO-синтазе, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе (СМД анти-eNOS), полученной сверхразведением исходного матричного раствора (с концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, С200. В качестве плацебо были использованы таблетки массой 300 мг, содержащие вспомогательные вещества: лактозу (моногидрат лактозы) - 267 мг, целлюлозу микрокристаллическую - 30 мг, магний стеарат - 3 мг.

Эффективность изучаемых лекарственных средств в терапии головокружения (vertigo) и других симптомов укачивания оценивали на модели кинетоза или болезни движения/укачивания, которая проявляется различными вестибуло-вегетативными нарушениями. Головокружение - это типичный признак поражения вестибулярного анализатора различного генеза, включая нарушения функции вестибулярного нерва и вестибулярной кохлеарной системы, нарушения кровообращения в вертебрально-базилярной системе, патологию центральной нервной системы (ЦНС) и др. Головокружение как проявление кинетоза сопровождается другими вестибуло-вегетативными расстройствами, включающими три типа реакций: вестибуло-моторные (нистагм и реакции отклонения), вестибуло-сенсорные (помимо головокружения, это нистагм (или реакция поствращения), защитные движения) и вегетативные (тошнота, рвота, потливость, сердцебиение, чувство жара, колебание пульса и артериального давления).

Двойное слепое плацебоконтролируемое сравнительное клиническое исследование в параллельных группах эффективности противоукачивающих свойств композиции СМД анти-S100+анти-eNOS, препарата СМД анти-S100 и препарата анти-eNOS, проводили с участием 15 соматически здоровых добровольцев - мужчин и женщин в возрасте от 15 до 60 лет (средний возраст 33,3±0,75 лет) с низкой (n=5; 33%) или средней (n=10; 67%) степенью устойчивости к укачиванию.

Для моделирования состояния укачивания и оценки эффективности исследуемых препаратов использовали наиболее адекватную и общепризнанную модель кинетозов - пробу с непрерывным кумулятивным воздействием ускорений Кориолиса (НКУК). Исходная переносимость пробы НКУК у всех участников исследования была не более 5 мин. Вестибуло-вегетативные расстройства, вызываемые кинетическим воздействием (НКУК), регистрировали с использованием комплекса диагностических методов, включающих осмотр пациента, количественную оценку расстройств вестибуло-вегетативной чувствительности (Шкала Галле), анализ вариабельности сердечного ритма (ВСР), самооценку функционального состояния (САН - самочувствие, активность, настроение). В качестве критериев эффективности проводимой терапии оценивали динамику переносимости и длительности периода восстановления при кинетическом воздействии, изменение выраженности сенсорно-моторных реакций (нистагм), показателей ВСР (с использованием системы Biocom Wellness Scan, разработанной AWS, LLC в соответствие с Международным стандартом Европейской ассоциации кардиологов и Северо-Американской ассоциацией Электрофизиологии) и данных САН. Критериями безопасности были характер, выраженность и сроки появления возможных нежелательных явлений (НЯ) в период терапии, связанных с приемом препарата; влияние изучаемых лекарственных средств на показатели, характеризующие функцию ЦНС (реакцию на движущийся объект [РДО], время простой двигательной реакции [ВПДР]); динамика физикальных и функциональных показателей (частоты сердечных сокращений [ЧСС], систолического [САД] и диастолического [ДАД] артериального давления, пробы Штанге, пробы Генча); переносимость физической нагрузки (индекс Гарвардского степ-теста). Безопасность оценивалась как при приеме тестовой дозы препаратов, так и при курсовом приеме в течение 7 дней.

Все участники в течение 1 месяца до включения в исследование не принимали каких-либо лекарственных средств. После визита скрининга участники рандомизировались в 4 группы в зависимости от принимаемого препарата (1 - СМД анти-S100+анти-eNOS, 2 - СМД анти-S100; 3 - СМД анти-eNOS; 4 - плацебо).

В первый день исследования (Визит 1) регистрировалось исходное функциональное и психофизиологическое состояние добровольцев, затем осуществлялся 5-кратный тестовый прием препарата, после чего выполнялась проба НКУК, фиксировалась длительность выполнения теста, с помощью комплексного диагностического обследования выявлялись связанные с укачиванием вегетативно-вестибулярные расстройства и НЯ. В последующие 2-6 дни доброволец получал назначенный препарат по 1 таблетке 3 раза в день. В 7 день (Визит 2) пациент принимал препарат по схеме первого дня, проводили повторный комплекс диагностических исследований до и после пробы НКУК. Исследование было организовано таким образом, чтобы исследовательская бригада работала только с одним испытуемым. Исследование было параллельным и проводилось в первой половине дня с участием, как правило, 4 человек в день, по одному человеку на препарат или плацебо. Следующие 3 недели был отмывочный период, к исходу которых пациентам каждой подгруппы назначали новый препарат/плацебо, цикл исследования повторялся (Визит 1, курсовой прием препарата; Визит 2). Таким образом, в ходе исследования каждый доброволец участвовал в четырех циклах исследования. При этом отслеживали, чтобы все испытуемые приняли участие в оценке каждого из трех препаратов и плацебо, что позволило нивелировать влияние индивидуальных особенностей испытуемого на эффект терапии. Анализ эффективности лекарственного средства проводился по данным всех испытуемых, завершивших полный курс приема исследуемых препаратов в соответствии с протоколом исследования (n=15).

Показатели выраженности симптомов укачивания (головокружения, тошноты, вялости, бледности кожи, потливости и др.) после кинетического воздействия (НКУК) на фоне однодневного приема исследуемых препаратов свидетельствовали о том, что все участники исследования достигали примерно одинакового состояния укачивания, поскольку выраженность оцениваемых врачом-исследователем по шк