Способ лечения инфекционных заболеваний и комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний

Способ лечения инфекционных заболеваний и комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения и профилактики различных вирусных заболеваний, включая профилактику инфицирования ВИЧ, профилактику и лечение заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, лечение острых и хронических вирусных инфекционных заболеваний, таких как острый вирусный гепатит A, B, C и другие вирусные гепатиты, герпесвирусная инфекция, грипп различных типов и острые респираторные вирусные инфекции, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии и т.д.

Из уровня техники известно лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, в том числе вирусной этиологии, на основе активированной формы сверхмалых доз антител к интерферону (RU 2192888 C1, A61K 39/395, 20.11.2002). Однако данное лекарственное средство имеет ограниченные терапевтические возможности и малопригодно для лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ, острых и хронических вирусных инфекций, включая вирусные гепатиты различных типов и герпесвирусные инфекции, а также для лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии

Изобретение направлено на создание способа лечения и комплексного лекарственного средства для эффективного лечения и профилактики широкого спектра различных вирусных инфекционных заболеваний, в том профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, лечения острых и хронические вирусных инфекций, включая острый вирусный гепатит A, B, C и другие вирусные гепатиты, герпесвирусную инфекцию, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что в способе лечения инфекционных заболеваний, согласно изобретению, в организм вводят одновременно и сочетано активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким рецепторам.

При этом инфекционным заболеванием является вирусные инфекционные заболевания, для лечения которых используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

При этом для профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа используют активированную -потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Кроме того, для лечения различных вирусных гепатитов используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Предпочтительно для лечения хронического вирусного гепатита С используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Кроме того, для лечения герпесвирусной инфекции используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной -потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Кроме того, для лечения заболеваний, вызванных вирусом гриппа различных типов, используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольких рецепторам.

Кроме того, для лечения острых респираторных вирусных инфекций используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольких рецепторам.

Кроме того, инфекционным заболеванием могут быть бактериальные инфекционные заболевания, для лечения которых используют активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной -потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

В соответствие с изобретением активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам используют в виде активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

При этом в организм, предпочтительно, вводят фармацевтическую композицию в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащую активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к одному или нескольким рецепторам.

Причем фармацевтическую композицию, предпочтительно, используют в виде единого лекарственного препарата - одной лекарственной формы, содержащей смесь различных разведений антител к одному или нескольким цитокинам в сочетании со смесью различных разведений антител к одному или нескольким рецепторам, приготовленных по гомеопатической технологии.

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов (CD4 рецептору).

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к гистамину.

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к альфа-интерферону человека (ИФН-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов.

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к альфа -интерферону человека (ИФН-α), активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к CD8 рецептору T-лимфоцитов (CD8 рецептору).

Как вариант, для лечения и профилактики инфекционных заболеваний используют активированную-потенцированную форму антител к фактору некроза опухоли - α (ФНО-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т- лимфоцитов.

Кроме того, решение поставленной задачи обеспечивается также тем, что комплексное лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, согласно изобретению, выполнено в виде фармацевтической композиции, содержащей активированную -потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольких рецепторам.

При этом активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольких рецепторам используют в виде гомеопатически активированного-потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием - многократным встряхиванием каждого разведения.

Кроме того, фармацевтическая композиция может быть выполнена в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольким цитокинам и активированную-потенцированную форму антител к одному или нескольких рецепторам, и фармацевтически приемлемые добавки, которые могут включать лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

При этом что водные или водно-спиртовые растворы гомеопатически активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольким цитокинам и активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольких рецепторам могу быть получены путем многократного последовательного разведения и промежуточного внешнего воздействия из соответствующих матричных аффинно очищенных антител с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Причем каждый из компонентов заявленного комплексного лекарственного средства возможно использовать в виде смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений.

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) и активированную-потенцированную форму антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов (CD4 рецептору).

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов и активированной-потенцированной формой антител к гистамину.

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к альфа-интерферону человека (ИФН-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов.

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека (ИФН-γ) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к альфа-интерферону человека (ИФН-α), активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов и активированной потенцированной формой антител к CD8 рецептору T-лимфоцитов (CD8 рецептору).

Как вариант, комплексное лекарственное средство может содержать активированную-потенцированную форму антител к фактору некроза опухоли - α (ФНО-α) в сочетании с активированной-потенцированной формой антител к CD4 рецептору T-лимфоцитов.

Кроме того, заявленное комплексное лекарственное средство может содержать действующие компоненты в равном объемном соотношении, при этом каждый компонент может быть приготовлен в виде смеси из трех соответствующих матричных растворов, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰, и 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰)раз, что эквивалентно сотенным разведениям C12, C30, C50 (или C200), приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленное комплексное лекарственное средство рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-3 таблетке 2-6 раз в день (предпочтительно 2-4 раза в день).

Предложенное сочетание активированных-потенцированных форм антител активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольким цитокинам (например, к гамма-интерферону человека, к альфа-интерферону человека, к фактору некроза опухоли - α) и активированных-потенцированных форм антител к одному или нескольких рецепторам лейкоцитов (например, CD4 рецептору, CD8 рецептору) в фармацевтической композиции обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, экспериментально подтвержденного на адекватных моделях, который заключается в повышении эффективности терапевтического воздействия и снижение вирусной нагрузки как при профилактике инфицирования ВИЧ, так и при профилактике и лечении заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, а также и при лечения острых и хронических вирусных заболеваний, включая герпес, острый вирусный гепатит A, B, C и другие вирусные гепатиты, грипп различных типов и острые респираторные вирусные инфекции, а также при лечении и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например, псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии.

Возможно применение заявленного комплексного лекарственного средства в комплексной терапии в сочетании с другими противовирусными препаратами, противобактериальными препаратами и симптоматическими средствами.

Заявленное комплексное лекарственное средство готовят, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной-потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г.Фримеля, М., «Медицина», 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридомных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемым в соответствии с изобретением веществом - антигеном или конъюгированным антигеном, например, гамма-интерфероном человека, альфа-интерфероном человека, фактором некроза опухоли - α, CD4 рецептором, CD8 рецептором. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифическую антисыворотку с высоким содержанием антител, которую и используют для получения активированной-потенцированной формы. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Предпочтительным для приготовления заявленного комплексного лекарственного средства является использование поликлональных антител, которые в качестве матричного (исходного) раствора с концентрацией, предпочтительно, 0,5÷5,0 мг/мл, применяют для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водных или водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных, соответственно, в 100¹², 100³⁰ и 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно сотенным разведениям C12, C30 и C50 (или C200), приготовленным по гомеопатической технологии.

При приготовлении заявленного комплексного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель наносится смесь указанных компонентов.

Для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов используют адъювант и, например, цельную молекулу гамма-интерферона человека следующей последовательности:

1 MKYTSYILAF QLCIVLGSLG CYCQDPYVKE AENLKKYFNA GHSDVADNGT LFLGILKNWK

61 EESDRKIMQS QIVSFYFKLF KNFKDDQSIQ KSVETIKEDM NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN

121 YSVTDLNVQR KAIHELIQVM AELSPAAKTG KRKRSQMLFR GRRASQ.

Возможно для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента гамма-интерферона человека, выбранного из следующих последовательностей:

7-55:

ILAF QLCIVLGSLG CYCQDPYVKE AENLKKYFNA GHSDV;

24-166:

QDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFRGR RASQ;

24-166:

QDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQIVSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKAIHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ;

69-123:

QS QIVSFYFKLF KNFKDDQSIQ KSVETIKEDM NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN YSV;

100-145:

M NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN YSVTDLNVQR KAIHELIQVM AELSP;

92-130:

SVETIKEDM NVKFFNSNKK KRDDFEKLTN YSVTDLNVQR;

123-147:

VTDLNVQR KAIHELIQVM AELSPAA; 24-166:

MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKA IHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFQGR RASQ;

5-45:

SYILAF QLCIVLGSLG CYCQDPYVKE AENLK;

94-114:

ETIKEDM NVKFFNSNKK KRDD;

24-166:

MQDPYVKEAE NLKKYFNAGH SDVADNGTLF LGILKNWKEE SDRKIMQSQI VSFYFKLFKN FKDDQSIQKS VETIKEDMNV KFFNSNKKKR DDFEKLTNYS VTDLNVQRKAIHELIQVMAE LSPAAKTGKR KRSQMLFRGR RASQ.

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000 g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Можно добавлять к антисыворотке 20% NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранить до использования в замороженном состоянии при температуре -20°C (или без добавления NaN₃- при температуре -70°).

Выделение из антисыворотки антител к гамма-интерферону возможно следующим образом:

1. 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2. выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3. после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4. фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Очистку антител производят методом аффинной хроматографии на колонке с антигеном, путем связывания антител к гамма-интерферону с антигеном (гамма-интерферон), прикрепленным к нерастворимому матриксу колонки, с последующим элюированием антител концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (исходного) раствора для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Поликлональные антитела к альфа-интерферону человека получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу альфа-интерферону человека одной из следующих последовательностей:

Интерферон-альфа человека (подтип 2):

MALTFALLVA LLVLSCKSSC SVGCDLPQTH SLGSRRTLML

LAQMRKISLF SCLKDRHDFG

FPQEEFGNQF QKAETIPVLH EMIQQIFNLF STKDSSAAWD

ETLLDKFYTE LYQQLNDLEA

CVIQGVGVTE TPLMKEDSIL AVRKYFQRIT LYLKEKKYSP

CAWEVVRAEI MRSFSLSTNL

QESLRSKE

Интерферон-альфа человека (подтип 1/13)

MASPFALLMV LVVLSCKSSC SLGCDLPETH SLDNRRTLML

LAQMSRISPS SCLMDRHDFG

FPQEEFDGNQ FQKAPAISVL HELIQQIFNL FTTKDSSAAW

DEDLLDKFCT ELYQQLNDLE

ACVMQEERVG ETPLMNADSI LAVKKYFRRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAEIMRSLSLSTN

LQERLRRKE

Интерферон-альфа человека (подтип 17):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMGRISPF SCLKDRHDFG

LPQEEFDGNQ FQKTQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNNLE

ACVIQEVGME ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN

LQKILRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 4):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMGRISHF SCLKDRHDFG

FPEEEFDGHQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDSILAVRKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAEIMRSLSFSTN

LQKRLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 8):

MALTFYLLVA LVVLSYKSFS SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMRRISPF SCLKDRHDFE

FPQEEFDDKQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSAAL

DETLLDEFYI ELDQQLNDLE

SCVMQEVGVI ESPLMYEDSI LAVRKYFQRI TLYLTEKKYS

SCAWEVVRAEIMRSFSLSIN

LQKRLKSKE

Интерферон-альфа человека (подтип 7):

MARSFSLLMV VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLRNRRALIL

LAQMGRISPF SCLKDRHEFR

FPEEEFDGHQ FQKTQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDFI LAVRKYFQRI TLYLMEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSFSFSTN

LKKGLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 21):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LAQMGRISPF SCLKDRHDFG

FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSATW

EQSLLEKFST ELNQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNVDSILAVKKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSFSLSKI

FQERLRRKE

Интерферон-альфа человека (подтип 10):

MALSFSLLMA VLVLSYKSIC SLGCDLPQTH SLGNRRALIL

LGQMGRISPF SCLKDRHDFR

IPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTEDSSAAW

EQSLLEKFST ELYQQLNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVRKYFQRI TLYLIERKYS

PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN

LQKRLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 14):

MALPFALMMA LVVLSCKSSC SLGCNLSQTH SLNNRRTLML

MAQMRRISPF SCLKDRHDFE

FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMMQQTFNL FSTKNSSAAW

DETLLEKFYIELFQQMNDLE

ACVIQEVGVE ETPLMNEDSI LAVKKYFQRI TLYLMEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSLSFSTN

LQKRLRRKD

Интерферон-альфа человека (подтип 5):

MALPFVLLMA LVVLNCKSIC SLGCDLPQTH SLSNRRTLMI

MAQMGRISPF SCLKDRHDFG

FPQEEFDGNQ FQKAQAISVL HEMIQQTFNL FSTKDSSATW

DETLLDKFYT ELYQQLNDLE

ACMMQEVGVE DTPLMNVDSI LTVRKYFQRI TLYLTEKKYS

PCAWEVVRAE IMRSFSLSAN

LQERLRRKE

Возможно для получения поликлональных антител к альфа-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента альфа-интерферону человека.

Поликлональные антитела к CD4 рецептору получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и молекулу CD4 рецептора следующей аминокислотной последовательности:

26-458:

MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGKKVVL GKKGDTVELT CTASQKKSIQ FHWKNSNQIK ILGNQGSFLT KGPSKLNDRA DSRRSLWDQG NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQKEEVQL LVFGLTANSD THLLQGQSLT LTLESPPGSS PSVQCRSPRG KNIQGGKTLS VSQLELQDSG TWTCTVLQNQ KKVEFKIDIV VLAFQKASSI VYKKEGEQVE FSFPLAFTVE KLTGSGELWW QAERASSSKS WITFDLKNKE VSVKRVTQDP KLQMGKKLPL HLTLPQALPQ YAGSGNLTLA LEAKTGKLHQ EVNLVVMRAT QLQKNLTCEV WGPTSPKLML SLKLENKEAK VSKREKAVWV LNPEAGMWQC LLSDSGQVLL ESNIKVLPTW STPVQPMALI VLGGVAGLLL FIGLGIFFCV RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPI.

Возможно для получения поликлональных антител к CD4 рецептору в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента CD4 рецептора, выбранного из следующих последовательностей:

412-458:

IGLGIFFCV RCRHRRRQAE RMSQIKRLLS EKKTCQCPHR FQKTCSPI;

26-60:

MNRGVPFRHL LLVLQLALLP AATQGKKVVL GKKGD;

105-119:

A DSRRSLWDQG NFPL;

115-139:

G NFPLIIKNLK IEDSDTYICE VEDQ;

Поликлональные антитела к CD8 рецептору получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и цельную молекулу CD8 рецептора следующей аминокислотной последовательности:

1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP

61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GYYFCSALSN

121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA

181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV.

Возможно для получения поликлональных антител к CD8 рецептору в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента CD8 рецептора, выбранного из следующих последовательностей:

11-30:

PLALLLHAAR PSQFRVSPLD;

81-100:

AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL;

121-140:

SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT;

201-210:

VITLYCNHRN;

221-235:

VVKSGDKPSL SARYV

Получение поликлональных антител к фактору некроза опухоли - альфа (ФНО-α) может быть произведено по вышеуказанному методу получения поликлональных антител к гистамину с использованием цельной молекулы фактора некроза опухоли - альфа следующей последовательности:

1 MSTESMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGATTLFCL LHFGVIGPQR

61 EEFPRDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQWLNRRAN ALLANGVELR

121 DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE

181 TPEGAEAKPW YEPIYLGGVF QLEKGDRLSA EINRPDYLDF AESGQVYFGIIAL.

Возможно для получения поликлональных антител к фактору некроза опухоли - альфа (ФНО-α) использование полипептидного фрагмента фактора некроза опухоли, выбранного, например, из следующих последовательностей:

84-88:

PSDKP;

93-97:

VANPQ;

65-199:

RDLSLI SPLAQAVRSS SRTPSDKPVA HVVANPQAEG QLQWLNRRAN ALLANGVELR DNQLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEGAEAKPW YEPIYLGGV;

77-93:

RSS SRTPSDKPVA HVV;

32-54:

GGPQGSRRC LFLSLFSFLI VAGA;

56-73:

IGPQR EEFPRDLSLI SPL;

123-160:

QLVVPSEG LYLIYSQVLF KGQGCPSTHV LLTHTISRIA;

176-190:

PCQRE TPEGAEAKPW;

5-45:

SMIRDV ELAEEALPKK TGGPQGSRRC LFLSL;

150-184:

V LLTHTISRIA VSYQTKVNLL SAIKSPCQRE TPEG;

77-233:

VRSSSRTPSDKPVAHVVANPQAEGQLQWLNRRANALLANGVELR

DNQLVVPSEGLYLIYSQVLFKGQGCPSTHVLLTHTISRIAVSYQTKV

NLLSAIKSPCQRETPEGAEAKPWYEPIYLGGVFQLEKGDRLSAEINR

PDYLDFAESGQVYFGIIAL.

Полученные таким образом буферные растворы каждого компонента поликлональных антител к цитокинам и к рецепторам с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл используют в качестве матричных (исходных) растворов для последующего приготовления активированных-потенцированных форм антител.

Активированную-потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части каждого подвергаемого разведению раствора, начиная с упомянутого матричного раствора, в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения C) или в 999 частях (для тысячного разведения M) нейтрального растворителя в сочетании с многократным вертикальным встряхиванием (потенцированием, или "динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с.14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С12 одну часть матричного (исходного) раствора антител, например, к гамма-интерферону человека, с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают -потенцируют, получая 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного C1 разведения приготовляют 2-ое сотенное разведение C2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение C12. Таким образом, 12-е сотенное разведение C12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно 12 раз в разных емкостях 1-ой части исходного матричного раствора антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, полученный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений C30 и C50 или C200.

При использовании, например, активированной-потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений каждое разведение (например, C12, C30, C50) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до разведения на 3 разведения меньше, чем конечное (соответственно, до получения C9, C27, C47), и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). Далее полученную смесь последовательно дважды разводят в соотношении 1 к 100, потенцируя полученный раствор после каждого разведения. При этом получают активированную-потенцированную форму антител, например, к гамма-интерферону человека в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведений C12, C30, C50.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных, разведений, например, десятичных и или сотенных, (D20, C30, C100 или C12, C30, C200 и т.д.), приготовленных по гомеопатической технологии, эффективность которых определяют экспериментально.

Для получения лекарственного средства водные или водно-спиртовые растворы смешивают, преимущественно, в равном объемном соотношении и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленное лекарственное средство может быть использовано и в твердой лекарственной форме в виде фармацевтической композиции, которая содержит технологически необходимое (эффективное) количество нейтрального носителя - например, лактозы - насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью, приготовленных по вышеуказанной технологии, водных или водно-спиртовых растворов активированных-потенцированных форм антител, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Для получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Hiittlin Pilotlab» производства компании Huttlin GmbH) орошение до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой гранул нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 50÷500 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированной-потенцированной формы антител компонентов, преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°C. Расчетное количество 10÷34 масс частей высушенных гранул, насыщенных активированной-потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 25÷85 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют стеарат магния в количестве 0,1÷1 масс. частей от общей массы загрузки и микрокристаллическую целлюлозу в количестве 3÷10 масс.частей от общей массы загрузки, с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/табл.) активированной-потенцированной формы в сверхмалой дозе каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного в 100¹², в 100³⁰ в 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно смеси сотенных разведений C12, C30 и C50 (или C200), приготовленных по гомеопатической технологии.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Пример 1

Исследование эффективности применения заявленного комплексного лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к альфа-интерферону человека в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50, и активированные-потенцированные формы поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4) в соотношении компонентов 1:1, а также лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к интерферону альфа в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C50 (СМД AT к ИФН-α) и лекарственного средства, содержащего активированные-потенцированные формы водных разведений поликлональных аффинно очищенных кроличьих антител к CD4 рецептору в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора (концентрацией 2,5 мг/мл) в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, C30, C50 (СМД AT к CD4) в условиях гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c проводилось на базе ФГБУ «НИИ гриппа» Минздравсоцразвития России в два этапа. В первом этапе была исследована эффективность препарата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4, во втором этапе была исследована эффективность применения препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4. Как при тестировании препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4, так и при тестировании препарата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4, в качестве препарата сравнения использовали препарат озельтамивир, в качестве контроля мышам (n=20) вводили дистиллированную воду (контрольная группа).

Инфекционный процесс моделировали интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (доза, инфицирующая 50% клеток культуры ткани).

Препарат СМД AT к ИФН-α, препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 вводили мышам (n=20 в каждой группе) интрагастрально по 0,2 мл/мышь два раза в сутки (суточная доза 0,4 мл/мышь) в течение 5 суток до инфицирования и в течение 10 суток после инфицирования вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1). Дополнительно препарат СМД AT к ИФН-α, препарат СМД AT к CD4 и препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 были добавлены в поилки к животным соответствующих экспериментальных групп.Поилки находились в свободном доступе.

Препарат сравнения озельтамивир вводили мышам (n=20) интрагастрально два раза в сутки в дозе 10 мг/кг (суточная доза 20 мг/кг), начиная за 1 час до инфицирования вирусом гриппа A/California/07/2009swl (H1N1). Препарат озельтамивир вводили в течение 5 суток после инфицирования. В течение 4 суток до инфицирования и начиная с 6 суток после инфицирования мышам данной экспериментальной группы вместо озельтамивира интрагастрально вводили дистиллированную воду по 0,2 мл/мышь два раза в сутки (суточная доза 0,4 мл/мышь).

В контрольной группе мышам (n=20) интрагастрально вводили дистиллированную воду 2 раза в сутки по 0,2 мл/мышь (суточная доза 0,4 мл/мышь). На протяжении всего исследования в поилках животных данных двух экспериментальных групп была дистиллированная вода. Поилки находились в свободном доступе.

Эффективность препаратов оценивали по выживаемости животных. Результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ИФН- а и препарата СМД AT к CD4 (этап 1) отражены в таблице 1, результаты исследования противовирусной активности препарата СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4 (этап 2) отражены в таблице 2. Статистическую значимость различий между экспериментальными группами и контролем (дистиллированная вода) рассчитывали с использованием непараметрического критерия хи-квадрат.

Таблица 1.
Результаты исследования противовирусной активности арата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4 на модели гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c, инфицированных интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (10 сутки после инфицирования).
№ п/п	Экспериментальная группа	Выживаемость, %	Разность между % выживаемости в группе, получавшей препарат, и % выживаемости в группе, получавшей дистиллированную воду
10ЛД50
1.	СМД AT к ИФН-α	25	+5%
2.	СМД AT к CD4	30	+10%
3.	Озельтамивир (препарат сравнения)	80*	+60%
4.	Дистиллированная вода (контроль)	20	-
* - p<0,05 (достоверность отличия от контроля).

Таблица 2.
Результаты исследования противовирусной активности арата СМД AT к ИФН-α и препарата СМД AT к CD4 на модели гриппозной инфекции у мышей-самок линии Balb/c, инфицированных интраназальным введением вируса гриппа A/California/07/2009swl (H1N1) в дозе 10ЛД50 (10 сутки после инфицирования).
№ п/п	Экспериментальная группа	Выживаемость,	Разность между % выживаемости в группе, получавшей препарат, и % выживаемости в группе, получавшей дистиллированную воду
%
10ЛД50
1.	Препарат СМД AT к ИФН-α+СМД AT к CD4, соотношение 1:1	30*	+25%
2.	Озельтамивир (препарат сравнения)	70*	+65%
3.	Дистиллированная вода (контроль)	5	-
* - p<0,05 (достоверность отличия от контроля).

Показано, что выж