Новый низкополярный экстракт камеде-смолы boswellia и его синергетические композиции

Новый низкополярный экстракт камеде-смолы boswellia и его синергетические композиции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

В настоящем изобретении предлагается низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (босвелии) (BLPRE), включающий новую фитохимическую композицию(и) сесквитерпенов, дитерпенов, тритерпенов и других фитохимических соединений, полученных из камеде-смолы видов Boswellia.

В изобретении также предлагаются композиции, содержащие низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE) и по меньшей мере один компонент, выбранный из биологически активного(ых) ингредиента(ов), функционального(ых) ингредиента(ов), наполнителя(ей), растворителя(ей), носителя(ей) и добавки(ок) или их смесей.

Далее, в изобретении также предлагается синергетическая(ие) композиция(и), содержащая(ие) низкополярный экстракт смолы Boswellia (BLPRE) и по меньшей мере один компонент, выбранный из экстракта(ов), фракции(ий), фитохимического(их) соединения(ий) и их солей или смесей вышеперечисленного, полученных из видов Boswellia или Curcuma.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Существует множество фармацевтических, травяных ингредиентов и биологически активных молекул, которые являются эффективными in vitro для лечения болезней или расстройств. Тем не менее, некоторые из них не являются эффективными или биодоступными in vivo (для теплокровных животных). Таким образом, важно исследовать, идентифицировать и изобретать безопасные и эффективные соединения или композиции, которые помогут увеличить активность таких фармацевтических или травяных ингредиентов in vivo за счет синергизма. В ходе этого процесса авторы изобретения проскринировали ряд экстрактов, фракций, фитохимических соединений и соединений, полученных из растений, животных и микроорганизмов; по отдельности и в комбинациях.

Камеде-смолу Boswellia очень широко применяли с древних времен. Например, камеде-смола растения Boswellia serrata (Burseraceae) давно применяется для лечения ревматоидного артрита и подагры врачами, практикующими аюрведические методы лечения в индийской медицинской системе. Различные экстракты этой камеде-смолы продемонстрировали мощную противовоспалительную и антиатерогенную активность у лабораторных животных [Cuaz-Pérolin et al., Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., Feb. 2008]. Экстракт Boswellia оказался мощным противоартритным агентом [Kimmatkar et al.; Phytomedicine. 2003, 10 (1): 3-7]. Камеде-смола Boswellia и ее экстракты также продемонстрировали значительные терапевтические улучшения в клинических испытаниях на человеке, подтверждая противовоспалительные эффекты in vivo. [E. Ernest, BMJ 2008; 337: a2813].

Происхождение противовоспалительного действия камеде-смолы Boswellia и ее экстрактов было приписано группе тритерпеновых кислот, называемых босвеллиевыми кислотами, которые были выделены из камеде-смолы Boswellia serrata. Босвеллиевые кислоты оказывают противовоспалительное действие путем ингибирования 5-липоксигеназы (5-LOX). 5-LOX является ключевым ферментом в биосинтезе лейкотриенов из арахидоновой кислоты. Считается, что лейкотриены принимают участие в инициировании и развитии различных воспалительных заболеваний. Помимо ингибирования 5-липоксигеназы, босвеллиевые кислоты подавляют лейкоцитарную эластазу человека (HLE), фермент различных провоспалительных путей [Safayahi, H., et. al., J. Pharmacol. Exp. Ther., 1997: 281; p. 460-463]. Биологически 3-O-ацетил-11-кето-β-босвеллиевая кислота (AKBA) является наиболее активным компонентом среди представителей этой группы кислот, со значением IC₅₀ 1,5 мкΜ для ингибирования 5-LOX [Sailer, E.R., et. al., British J. Pharmacol, 1996: 117, p. 615-618].

Патент US5629351 относится к новой фракции, содержащей смесь босвеллиевых кислот и обладающей противовоспалительным и противоязвенным действием. Также раскрыта новая композиция босвеллиевых кислот, проявляющая противовоспалительное, противоартритное и противоязвенное действие. Также раскрыт способ выделения из них фракции босвеллиевых кислот и индивидуальных босвеллиевых кислот.

Патент US20080275117A1 описывает композиции, содержащие босвеллиевые кислоты, полученные путем комбинирования различных фракций, выделенных сверхкритической хроматографической экстракцией из камеде-смолы Boswellia serrata.

Патентная публикация US20060280811A1 относится к композиции, включающей комбинации обезболивающих/противовоспалительных, иммуномодулирующих агентов и агентов, реконструирующих хрящевую ткань, в частности, содержащей салигенин, босвеллиевые кислоты, процианидины, N-ацетил-глюкозамин, а также глюкуроновую кислоту либо глюкуронолактон, для лечения ревматоидного артрита и, в более общем смысле, артритов. В этом контексте в композиции применяется чистая босвеллиевая кислота, ее полусинтетическое производное или 20%-й обогащенный босвеллиевой кислотой экстракт Boswellia serrata.

Публикация PCT WO 02/15916, приоритет которой установлен по патенту Германии DE-A 10041217, раскрывает дигидропроизводные кислот Boswellia, их физиологически приемлемые соли и гидрогенизированные экстракты Boswellia. В названных публикациях предлагается применение этих соединений для профилактического и/или терапевтического лечения нежелательных физических и психических состояний, в частности, соматических, психосоматических и психических заболеваний, таких как воспалительные процессы, вызванные повышенным образованием лейкотриенов, активностью лейкоцитарной эластазы или плазмина.

Однако, в меру осведомленности авторов изобретения, в данной области техники отсутствует информация о низкополярном экстракте камеде-смолы Boswellia (BLPRE), содержащем новые фитохимические составы и их композиции для предупреждения, контроля и лечения расстройств или заболеваний теплокровных животных.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном важном аспекте в настоящем изобретении предлагается низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE), содержащий новую фитохимическую композицию сесквитерпенов, дитерпенов, тритерпенов и другое(ие) фитохимическое(ие) соединение(я), полученные из камеде-смолы видов Boswellia.

В другом аспекте изобретения предлагается композиция(и), содержащая(ие) низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE) в сочетании с по меньшей мере одним компонентом, выбранным из биологически активного(ых) ингредиента(ов), функционального(ых) ингредиента(ов), наполнителя(ей), растворителя(ей), носителя(ей) и добавки(ок) или их смесей.

В еще одном важном аспекте настоящего изобретения предлагается синергетическая(ие) композиция(и), содержащая(ие) низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE) в сочетании с по меньшей мере одним компонентом, выбранным из экстракта(ов), фракции(ий), фитохимического(их) соединения(ий) и их солей или смесей вышеперечисленного, полученных из видов Boswellia.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается синергетическая(ие) композиция(и), содержащая(ие) низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE) и по меньшей мере один компонент, выбранный из экстракта(ов), фракции(ий), фитохимического(их) соединения(ий) и их солей или смесей вышеперечисленного, полученных из видов Curcuma.

В другом аспекте изобретения предлагается синергетическая(ие) композиция(и) низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia (BLPRE) с по меньшей мере одним компонентом, выбранным без ограничения из биологически активного(ых) ингредиента(ов), функционального(ых) ингредиента(ов) или их смесей.

В другом аспекте изобретения предлагается низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE), содержащий новую фитохимическую композицию, в индивидуальной форме, а также в составе композиций, для применения нуждающимся(нуждающимися) в этом теплокровным(и) животным(и).

В другом аспекте изобретения предлагается низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE), содержащий новую фитохимическую композицию, в индивидуальной форме, а также в составе композиций, для предупреждения, контроля и лечения одного или нескольких расстройств или болезней теплокровных животных, включающих, без ограничения, нарушения обмена веществ, диабет, ожирение, метаболический синдром, избыточную массу тела, воспаление, астму, болезнь Альцгеймера, когнитивные расстройства, неврологические расстройства, разрушение хрящей, старение, заболевания кожи, гипертриглицеридемию, гиперлипидемию, гиперхолестеринемию, расстройства, связанные с холестерином, гипертонию, высокое кровяное давление, иммунные расстройства, рак, ишемическую болезнь сердца, инфекционные заболевания, остеопороз, остеоартрит, ревматоидный артрит, боли и дискомфорт в суставах, а также ряда других ассоциированных состояний.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

На Фиг.I показаны структурные формулы 1-9, представляющие основные соединения низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia (BLPRE).

На Фиг.II показаны хроматограммы ВЭЖХ, изображающие фитохимический профиль низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia (BLPRE).

На Фиг.III показана сравнительная 5-липоксигеназа-ингибиторующая активность низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia serrata (BsLPRE), низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE), экстракта Boswellia serrata, стандартизированного до общего содержания босвеллиевых кислот 85% [BSE 85%], экстракта Boswellia carterii, стандартизированного до общего содержания босвеллиевых кислот 85% [BCE 85%], экстракта Boswellia serrata, стандартизированного до общего содержания босвеллиевых кислот 65% [BSE 65%], композиции-3A, композиции-4, композиции-18 и композиции-7А. Столбики диаграммы представляют собой процент ингибирования фермента 5-липоксигеназы BsLPRE, BcLPRE, BSE 85%, BCE 85%, BSE 65%, композицией-3A, композицией-4, композицией-18 и композицией-7A в концентрации 10 мкг/мл.

На Фиг.IV показана столбчатая диаграмма, демонстрирующая процент уменьшения объема отека лапы у крыс Sprague Dawley, получавших полный адъювант Фрейнда, в ответ на низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia serrata [BsLPRE, 200 мг/кг массы тела], низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE, 200 мг/кг массы тела), экстракт Boswellia serrata, стандартизированный до общего содержания босвеллиевых кислот 85% (BSE 85%, 200 мг/кг массы тела), экстракт Boswellia carterii, стандартизированный до общего содержания босвеллиевых кислот 85% (BCE 85%, 200 мг/кг массы тела), экстракт Boswellia serrata, стандартизированный до общего содержания босвеллиевых кислот 65% (BSE 65%, 200 мг/кг массы тела), экстракт Curcuma longa, стандартизированный до общего содержания куркуминоидов 20% (CLE 20%, 200 мг/кг массы тела), экстракт Curcuma longa, стандартизированный до общего содержания куркуминоидов 95% (CLE 95%, 200 мг/кг массы тела), экстракт Curcuma aromatica, стандартизированный до общего содержания куркуминоидов 20% (CAE 20%, 200 мг/кг массы тела), экстракт Curcuma aromatica, стандартизированный до общего содержания куркуминоидов 95% (CAE 95%, 200 мг/кг массы тела), композицию-3A (200 мг/кг массы тела), композицию-4 (200 мг/кг массы тела), композицию-18 (200 мг/кг массы тела), композицию-7А (200 мг/кг массы тела), композицию-42 (200 мг/кг массы тела), композицию-26 (200 мг/кг массы тела), композицию-51 (200 мг/кг массы тела), композицию-35 (200 мг/кг массы тела) и преднизолон (10 мг/кг массы тела).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сокращения и слова, используемые в описании:

1. BLPRE (низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia, полученный из видов Boswellia)

2. BsLPRE (низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia serrata, полученный из видов Boswellia serrata)

3. BcLPRE (низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia carterii, полученный из видов Boswellia carterii)

4. BSE 85% (экстракт Boswellia serrata, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 85%)

5. BCE 85% (экстракт Boswellia carterii, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 85%)

6. BSE 65% (экстракт Boswellia serrata, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 65%)

7. BCE 65% (экстракт Boswellia carterii, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 65%)

8. CLE 20% (экстракт Curcuma longa, стандартизированный до содержания куркуминоидов 20%)

9. CLE 95% (экстракт Curcuma longa, стандартизированный до содержания куркуминоидов 95%)

10. CAE 20% (экстракт Curcuma aromatica, стандартизированный до содержания куркуминоидов 20%)

11. CAE 95% (экстракт Curcuma aromatica, стандартизированный до содержания куркуминоидов 95%)

12. Термины «камедь», или «камеде-смола», или «смола» используется(ются) в настоящей патентной заявке как взаимозаменяемые, и все они относятся к экссудату растений видов Boswellia.

13. Термины «композиция(и)» и «состав(ы)», где бы ни использовались в настоящей патентной заявке, относятся к новому низкополярному экстракту камеде-смолы Boswellia (BLPRE) как к отдельному ингредиенту, либо к смеси, содержащей BLPRE в сочетании с одним или несколькими ингредиентами, такими как биологически активный(е) ингредиент(ы), функциональный(е) ингредиент(ы), наполнитель(и), растворитель(и), носитель(и) и добавка(и) для приготовления общей(их) композиции(ий) или синергетической(их) композиции(ий).

14. Термины «низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia» или «низкополярный экстракт камеде-смолы», где бы ни использовались в настоящей патентной заявке, относятся к низкополярному экстракту камеде-смолы, полученному из любых видов Boswellia при помощи любого из описанных процессов.

15. Термины «масло Boswellia», или «масляный остаток», или «масляная фракция Boswellia», где бы ни использовались в настоящей заявке, относятся к общей масляной фракции/экстракту (содержащему эфирные масла, летучие масла и низкополярный экстракт смолы Boswellia), полученным из камеде-смолы любого из видов Boswellia при помощи любого из описанных процессов.

16. Термины «эфирное масло» или «летучая фракция», где бы ни использовались в настоящей патентной заявке, относятся к эфирным маслам, полученным путем перегонки с водяным паром или вакуумной перегонки любой камеде-смолы Boswellia или масла Boswellia.

17. Термин «фитохимическое соединение», где бы ни использовался в настоящей патентной заявке, относится к чистым или получистым соединениям или соединениям, выделенным из растений.

18. Термин «биологически активный(е) ингредиент(ы)», где бы ни использовался в настоящей патентной заявке, относится к любому(ым) фармацевтически или диетически приемлемому(ым) ингредиенту(ам); соединению(ям), экстракту(ам), фракции(ям), фитохимическому(им) соединению(ям) и их солям или смесям вышеперечисленного, полученным из растений/животных/микроорганизмов.

19. Термин «функциональный(ые) ингредиенты(ы)», где бы ни использовался в настоящей патентной заявке, относится к любому(ым) растительному(ым) экстракту(ам), пищевой(ым) добавке(ам), антиоксидантам, витаминам, минералам, аминокислотам, жирным кислотам, эфирным маслам, рыбьему жиру, ферментам, глюкозамину, хондроитину и пробиотикам или смесям вышеперечисленного, полученным из растений/животных/микроорганизмов.

20. Термины «наполнители», или «разбавители», или «носители», или «добавки», где бы ни использовались в настоящей патентной заявке, относятся к одному или более фармацевтически или диетически приемлемым активным или неактивным ингредиентам, включая, без ограничения, воду, физиологический раствор, водный раствор глюкозы, спирт (например, этанол), пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, различные животные и растительные жиры, белый мягкий парафин, парафин, воск, глюкозу, фруктозу, сахарозу, мальтозу, желтый декстрин, белый декстрин, аэрозоль, микрокристаллическую целлюлозу, стеарат кальция, стеарат магния, сорбит, стевиозид, кукурузный сироп, лактозу, лимонную кислоту, винную кислоту, яблочную кислоту, янтарную кислоту, молочную кислоту, L-аскорбиновую кислоту, dl-альфа-токоферол, глицерин, пропиленгликоль, сложный эфир глицерина и жирных кислот, сложный эфир полиглицерина и жирных кислот, сложный эфир сахарозы и жирных кислот, сложный эфир сорбитана и жирных кислот, сложный эфир пропиленгликоля и жирных кислот, гуммиарабик, каррагинан, казеин, желатин, пектин, агар, витамин группы В, никотинамид, пантотенат кальция, аминокислоты, соли кальция, пигменты, ароматизаторы и консерванты.

Низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia serrata и Boswellia carterii

Камеде-смола, полученная из Boswellia serrata/Boswellia carterii/Boswellia papyrifera или любого другого вида Boswellia, является сложной смесью, содержащей эфирные масла, летучие масла, босвеллиевые кислоты, низкополярные соединения, сахара и полисахаридную фракцию. Экстракты Boswellia serrata/Boswellia carterii/Boswellia papyrifera, широко доступные на международном рынке, являются кислотными фракциями, отделенными от камеде-смолы, стандартизированными до общего содержания босвеллиевых кислот 65% или 85% (титриметрический анализ). В ходе реализации промышленного способа в отношении обычных экстрактов Boswellia, полученных из Boswellia serrata/Boswellia carterii/Boswellia papyrifera (общее содержание босвеллиевых кислот 85%), кислая фракция, которая содержит преимущественно тритерпеновые кислоты, включая босвеллиевые кислоты, отделяется от остальных компонентов камеде-смолы. Сахара и другие полимерные компоненты отделяются в водной фазе во время процесса обогащения босвеллиевыми кислотами. Остальные не смешивающиеся с водой низкополярные соединения отделяются как масляная фракция/экстракт Boswellia. Эти низкополярные соединения либо отсутствуют, либо присутствуют в очень низкой концентрации как в коммерческих экстрактах Boswellia, стандартизированных по босвеллиевым кислотам, так и в экстрактах Boswellia, селективно обогащенных 3-O-ацетил-11-кето-β-босвеллиевой кислотой (AKBA).

Упомянутая масляная фракция/экстракт Boswellia представляет собой значительный компонент смолы Boswellia. Однако она находит очень ограниченное коммерческое применение и в основном отбрасывается как отход производства. Потенциальное применение этой фракции/экстракта уже давно является актуальным вопросом. Авторы изобретения неожиданно обнаружили, что низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE), фракция, получаемая после удаления летучих соединений из масляной фракции/экстракта Boswellia, обладает некоторыми полезными биологическими свойствами. Кроме того, BLPRE демонстрировал неожиданную синергетическую активность в сочетании с другими биологически активными ингредиентами.

В более ранней индийской патентной заявке 2229/CHE/2008, поданной 15 сентября 2008 года, и заявке PCT/IN2009/000505, поданной 14 сентября 2009 года, авторы изобретения раскрывают синергетические композиции, содержащие низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia serrata и фракцию, обогащенную AKBA; также была раскрыта композиция BLPRE композиция и способ ее идентификации.

Типичная процедура получения низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia serrata (BsLPRE) включает

а) заготовку камеде-смолы Boswellia serrata,

b) экстракцию несмешивающимся с водой органическим растворителем и отбрасывание отделенных фильтрованием нерастворимых веществ камеди,

c) неоднократную промывку органического экстракта водным раствором щелочи для удаления кислых соединений,

d) последовательную промывку органического экстракта водой и солевым раствором,

e) упаривание органического слоя в вакууме при температуре 60-70°С с получением масляного остатка,

f) последующее удаление летучих компонентов из вышеупомянутого масляного остатка в условиях высокого вакуума и высоких температур с получением вязкого масла, далее в настоящем тексте называемого низкополярным экстрактом камеде-смолы Boswellia serrata (BsLPRE).

Альтернативно, BsLPRE также может быть получен способом, включающим:

а) получение спиртового или водно-спиртового экстракта камеде-смолы Boswellia serrata,

b) распределение спиртового экстракта между водным раствором щелочи и несмешивающимся с водой органическим растворителем,

c) отделение органического слоя с последующим получением масляного остатка путем упаривания органического слоя в вакууме при температуре 60-70°С,

d) последующее удаление из вышеупомянутого масляного остатка летучих компонентов в условиях высокого вакуума и высоких температур с получением вязкого масла, далее в настоящем тексте называемого низкополярным экстрактом камеде-смолы Boswellia serrata (BsLPRE).

Типичная процедура получения низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE) включает

а) заготовку камеде-смолы Boswellia carterii,

b) экстракцию камеде-смолы несмешивающимся с водой органическим растворителем и отбрасывание отделенных фильтрованием нерастворимых веществ камеди,

c) неоднократную промывку органического экстракта водным раствором щелочи для удаления кислых соединений,

d) последовательную промывку органического слоя водой и солевым раствором,

e) упаривание органического слоя в вакууме при температуре 60-70°С с получением масляного остатка,

f) последующее удаление летучих компонентов из вышеупомянутого масляного остатка в условиях высокого вакуума и высоких температур с получением вязкого масла, далее в настоящем тексте называемого низкополярным экстрактом камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE).

Альтернативно, BcLPRE также может быть получен способом, включающим

а) получение спиртового или водно-спиртового экстракта камеде-смолы Boswellia carterii,

b) распределение спиртового экстракта между водным раствором щелочи и несмешивающимся с водой органическим растворителем,

c) отделение органического слоя с последующим получением масляного остатка путем упаривания органического слоя в вакууме при температуре 60-70°С,

d) последующее удаление из вышеупомянутого масляного остатка летучих компонентов в условиях высокого вакуума и высоких температур с получением вязкого масла, далее в настоящем описании называемого низкополярным экстрактом камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE).

Типичные процессы получения низкополярных экстрактов камеде-смол (BLPRE) Boswellia из Boswellia serrata, Boswellia carterii описаны выше. В то же время для получения низкополярного экстракта камеде-смолы, сходный(е) процесс или процессы могут быть применены к любой из камеде-смол, полученных от видов Boswellia.

Для изучения химического состава BsLPRE, авторы изобретения выполнили тщательное разделение BsLPRE с использованием многостадийной колоночной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и выделили несколько дитерпеноидных и тритерпеноидных соединений. Структуры данных соединений были подробно охарактеризованы при помощи ¹H ЯМР, ¹³С ЯМР, DEPT, HSQC и HMBC, масс-спектральных данных. Полученные таким образом и идентифицированные соединения представляли собой гвайол (1), нефтенол (2), серратол (3), дитерпен X (4), лупеол (5), олеан-12-ен-3β-ол (6), олеан-12-ен-3α-ол (7), ланоста-8,24-диен-3α-ол (8) и урс-12-ен-3α-ол (9), как показано на Фиг.I. Данная фракция, низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia serrata (BsLPRE), были далее стандартизированы по трем или более фитохимическим маркерным соединениям, выбранным из 1-9. Типичные результаты приведены в Таблице 1, типичная хроматограмма, описывающая профиль BsLPRE, представлена на фиг.II. В то же время, авторы изобретения также обнаружили, что данная композиция BsLPRE или любая другая композиция низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia (BLPRE), полученная из любых других видов, может меняться в зависимости от нескольких факторов, таких как используемый вид Boswellia, возраст растения, сезон сбора камеде-смолы, географическое положение и используемый производственный процесс.

Вышеизложенные результаты показывают, что BsLPRE является новой композицией, содержащей уникальную комбинацию сесквитерпеноидов, дитерпеноидов и тритерпеноидов, а также других фитохимических соединений. Соединение, предварительно идентифицированное как дитерпен X (4) и соединения гвиол (1), нефтенол (2) и ланоста-8,24-диен-3α-ол (8), не описаны как метаболиты камеде-смолы Boswellia serrata. Эти результаты указывают на то, что BsLPRE является новой композицией. Неожиданно оказалось, что BsLPRE также обладает мощными биологическими свойствами. BsLPRE в значительной степени ингибировал фермент 5-липоксигеназу (Таблица 2). В концентрации 10 мкг/мл он демонстрировал 15,13% ингибирование 5-липоксигеназы.

Состав низкополярного экстракта камеде-смолы, полученного из различных видов Boswellia, таких как Boswellia carterii, Boswellia papyrifera, в настоящее время находится в процессе идентификации. Предполагается, что низкополярный экстракт камеде-смолы этих, а также других видов Boswellia содержит композицию, имеющую некоторое сходство с таковой Boswellia serrata. В то же время низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE) продемонстрировал биологическую активность и синергетический эффект, очень сходный с таковым, демонстрируемым BsLPRE, в соответствии с нижеприведенными исследованиями in vitro и in vivo. Экспериментальные исследования обсуждаются в примерах.

Синергетическая(ие) композиция(и), содержащая(ие) низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE)

Авторы изобретения провели несколько клеточных и ферментативных in vitro исследований на широком спектре экстрактов Boswellia, таких как низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia serrata (BsLPRE), низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia carterii (BcLPRE), экстракты Boswellia, стардантизированные по босвеллиевым кислотам, такие как экстракт Boswellia serrata, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 85% (BSE 85%), экстракт Boswellia serrata, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 65% (BSE 65%), экстракт Boswellia carterii, стандартизированный до содержания босвеллиевых кислот 85% (BCE 85%), и некоторые другие растительные экстракты. Отдельные экстракты и различные комбинации этих экстрактов были протестированы на их эффективность в отношении ингибирования фермента 5-липоксигеназы (5-LOX).

Неожиданно было обнаружено, что композиция(и), содержащая(ие) BsLPRE или BcLPRE в комбинации с любым из нижеследующих стандартизированных экстрактов, таких как BSE 85%, BCE 85% и BSE 65%, при определенных соотношениях демонстрировала(и) синергетическое ингибирование фермента 5-липоксигеназы.

Композиция-3A (BsLPRE и BSE 85% в соотношении 1:2) продемонстрировала 27,12% ингибирование в концентрации 10 мкг/мл по сравнению с 15,13% и 21,04% ингибированием, продемонстрированным при тех же концентрациях BsLPRE и BSE 85%, соответственно.

Сравнительные показатели ингибирования 5-липоксигеназы, продемонстрированные композицией-3A (BsLPRE и BSE 85% в соотношении 1:2), композицией-4 (BcLPRE и BCE 85% в соотношении 1:2), композицией-18 (BcLPRE и BSE 85% в соотношении 1:2), композицией-7A (BsLPRE и BSE 65% в соотношении 1:2), вместе с таковыми, продемонстрированными отдельными компонентами/экстрактами, представлены на Фиг.III.

Синергетические эффекты, продемонстрированные композицией-3A, композицией-4, композицией-18, композицией-7A in vitro вместе с несколькими другими композициями, были далее протестированы в in vivo исследовании в модели индуцированного полным адъювантом Фрейнда артрита у крыс Sprague Dawley. Противовоспалительную эффективность композиции-3A, композиции-4, композиции-18, композиции-7A, композиции-42 (BsLPRE и CLE 20% в соотношении 1:2), композиции-26 (BsLPRE и CLE 95% в соотношении 1:2), композиции-51 (BcLPRE и CAE 20% в соотношении 1:2) и композиции-35 (BcLPRE и CAE 95% в соотношении 1:2) оценивали в in vivo исследовании на модели индуцированного полным адъювантом Фрейнда артрита у крыс Sprague Dawley и сравнивали с эффективностью, продемонстрированной отдельными ингредиентами/экстрактами, такими как BsLPRE, BcLPRE, BSE 85%, BCE 85%, BSE 65%, CLE 20%, CLE 95%, CAE 20% и CAE 95%. Крыс обоих полов случайным образом выбирали и разделяли на девятнадцать групп по шесть животных в группе, и животные экспериментальных групп ежедневно получали одну из композиций BsLPRE, BcLPRE, BSE 85%, BCE 85%, BSE 65%, CLE 20%, CLE 95%, CAE 20%, CAE 95%, композицию-3A, композицию-4, композицию-18, композицию-7A, композицию-42, композицию-26, композицию-51 и композицию-35 в количестве 200 мг/кг массы тела (BW) в течение 14 дней. Животным группы положительного контроля ежедневно вводили преднизолон в дозе 10 мг/кг массы тела. На 14-й день каждому животному подкожно в подошвенную область левой задней лапы вводили полный адъювант Фрейнда (FCA). Эксперимент прекращали на 28-й день. У каждого животного с регулярными интервалами собирали образцы крови и объем лапы измеряли с использованием плетизмографического оборудования в день инъекции FCA и спустя 13 дней после инокуляции FCA. Разница в объеме отека лап рассматривалась как воспалительный ответ. In vivo противовоспалительный ответ BsLPRE, BcLPRE, BSE 85%, BCE 85%, BSE 65%, CLE 20%, CLE 95%, CAE 20%, CAE 95%, композиции-3A, композиции-4, композиции-18, композиции-7A, композиции-42, композиции-26, композиции-51, композиции-35 и преднизолона оценивали путем расчета процента уменьшения отека лапы по сравнению с CMC контролем.

Экспериментальные группы, получавшие 200 мг/кг массы тела низкополярного экстракта смолы Boswellia serrata и 200 мг/кг массы тела экстракта Boswellia serrata, стандартизированного до общего содержания босвеллиевых кислот, составляющего 85% (BSE 85%), демонстрировали 23% и 30% уменьшение отека лапы, соответственно. В то же время экспериментальная группа, получавшая композицию-3A (BsLPRE и BSE 85% в соотношении 1:2) в той же дозировке, демонстрировала более выраженное уменьшение отека лапы, которое достигало 42%. Группа положительного контроля, получавшая преднизолон в дозе 10 мг/кг, демонстрировала 46% уменьшение. Аналогично, другие композиции настоящего изобретения - композиция-4, композиция-18, композиция-7A, композиция-42, композиция-26, композиция-51 и композиция-35 также демонстрировали синергетический эффект, в соответствии с проиллюстрированным на Фиг.IV и приведенным в Таблице 3, подтверждая результаты, полученные in vitro.

Таким образом, приведенные данные показывают, что композиции, содержащие BsLPRE или BcLPRE в сочетании со стандартизированными экстрактами видов Boswellia, такими как BSE 85%, BCE 85% и BSE 65%, или стандартизированными экстрактами видов Curcuma, такими как CLE 20%, CLE 95%, CAE 20% и CAE 95% в соотношении 1:2 являются более мощными противовоспалительными агентами при сравнении с эффективностью, продемонстрированной отдельными компонентами в тех же дозах, и проявляют неожиданную синергетическую связь между этими экстрактами.

Низкополярные экстракты смолы Boswellia serrata и Boswellia carterii (BsLPRE и BcLPRE, соответственно), полученные после удаления летучих соединений, были использованы для иллюстрации настоящего изобретения. В то же время масляная фракция Boswellia, полученная из любых видов Boswellia, или летучая фракция, полученная из любых видов Boswellia, или фракции, полученные после частичного удаления летучих веществ из масла Boswellia, или смесь вышеперечисленного, также могут быть использованы для создания композиций и синергетической(их) композиции(ий) настоящего изобретения и достижения желаемых положительных терапевтических/оздоровительных эффектов у теплокровных животных.

Низкополярные экстракты смолы Boswellia, используемые для иллюстрации изобретения, были получены из Boswellia serrata и Boswellia carterii, и для них были условно выбраны названия BsLPRE и BcLPRE, соответственно. В то же время авторы изобретения обнаружили, что низкополярные экстракты камеде-смолы (BLPRE) со сходными химическими и биологическими свойствами могут быть также получены из других видов Boswellia с использованием процессов, аналогичных таковым, проиллюстрированным в Примере-1 и Примере-2.

Коммерчески доступные экстракт Boswellia serrata и экстракт Boswellia carterii, стандартизированные до содержания босвеллиевых кислот 85%, были использованы для создания композиции(ий) для иллюстрации настоящего изобретения. Тем не менее любой(ые) экстракт(ы) Boswellia или фракция(и), или экстракты Boswellia, стандартизированные по меньшей мере по одной или нескольким босвеллиевым кислотам или их солям; экстракт(ы)/фракция(и), стандартизированные по общему количеству босвеллиевых кислот 50-100% (титриметрический анализ), или экстракт(ы)/фракция(и), стандартизированные по общему количеству босвеллиевых кислот 30-100% (ВЭЖХ-анализ), или экстракт(ы)/фракция(и), содержащие 3-O-ацетил-11-кето-β-босвеллиевую кислоту (AKBA) в диапазоне концентраций 0,1-99%, также могут быть использованы для получения композиций, описанных в настоящем изобретении.

BLPRE, получаемый из Boswellia serrata или Boswellia carterii в сочетании с набором экстрактов Boswellia или Curcuma, показал синергетическую активность. В то же время можно предполагать, BLPRE, полученный из других видов Boswellia, также может быть пригоден для получения синергетической(их) композиции(ий).

Различные варианты осуществления настоящего изобретения в соответствии с указанным ниже

В одном важном аспекте в настоящем изобретении предлагается низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE), содержащий новую фитохимическую композицию сесквитерпенов, дитерпенов, тритерпенов и другое(ие) фитохимическое(ие) соединение(я), полученные из камеде-смолы видов Boswellia.

В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается низкополярный экстракт камеде-смолы Boswellia (BLPRE), при этом камеде-смола может быть получена/взята из любого из видов Boswellia, включая, без ограничения, Boswellia serrata, Boswellia carterii и Boswellia papyrifera или их смеси.

В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается низкополярный экстракт смолы Boswellia из смолы Boswellia serrata, при этом упомянутый экстракт содержит маркерные фитохимические соединения, выбранные, без ограничения, из гвайола (1), нефтенола (2), серратола (3), дитерпена X (4), лупеола (5), олеан-12-ен-3β-ола (6), олеан-12-ен-3α-ола (7), ланоста-8,24-диен-3α-ола (8) и урс-12-ен-3α-ола (9).

В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается способ получения низкополярного экстракта смолы Boswellia (BLPRE), включающий следующие этапы:

a) экстракция камеде-смолы несмешивающимся с водой органическим растворителем и тщательное фильтрование экстракта для удаления нерастворимых веществ смолы,

b) неоднократная промывка органического экстракта водным раствором щелочи, таким как водный раствор гидроксида калия,

с) промывка вышеупомянутого органического слоя после промывки щелочью водой и солевым раствором,

d) упаривание вышеупомянутого органического слоя в вакууме при высокой температуре с получением масляного остатка (масло Boswellia),

e) удаление летучих компонентов из вышеупомянутого масляного остатка в условиях высокого вакуума и высоких температур с получением низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia (BLPRE).

Несмешивающийся с водой органический растворитель, используемый для экстракции, может быть выбран из группы, включающей без ограничения 1,2-дихлорэтан, гексан, дихлорметан, хлороформ, этилацетат, н-бутанол, метилизобутилкетон (MIBK) или подходящую комбинацию вышеперечисленного.

Раствор щелочи, используемый для промывки материала, экстрагированного органическим растворителем (экстракта), может быть выбран из гидроксидов металлов I или II группы, включающих, без ограничения, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция и гидроксид магния, либо смеси вышеперечисленного.

В другом аспекте альтернативный способ получения BLPRE включает

а) получение спиртового или водно-спиртового экстракта камеде-смолы Boswellia,

b) распределение спиртового экстракта между водным раствором щелочи и несмешивающимся с водой органическим растворителем,

c) отделение органического слоя с последующим выпариванием растворителя с получением масляного остатка (масло Boswellia),

d) удаление из вышеупомянутого масляного остатка летучих соединений в условиях высоких температур и высокого вакуума с получением низкополярного экстракта камеде-смолы Boswellia (BLPRE).

В другом аспекте еще один альтернативный способ получения BLPRE включает

a) экстракцию камеде-смолы видов Boswellia спиртом или вводно-спиртовым раствором,

b) упаривание органического растворителя до оптимального уровня общего содержания твердых веществ, и затем

c) сдвиг рН в щелочную область, предпочтительно до рН 9-12,

d) неоднократную экстракцию раствора органическим растворителем,

e) упаривание органического растворителя в вакууме при высокой температуре с получением масляного остатка (масло Boswellia),

f) упаривание летучих веществ из вышеупомянутого масляного остатка в условиях высокого вакуума и высоких температур с получением BLPRE.

Спирт, используемый для экстракции, может быть выбран из группы, включающей, без ограничения, метанол, этанол и пропанол или их подходящую комбинацию.

В главном аспекте в настоящем изобретении предлагается синергетическая(ие) композиция(и), содержащая(ие) низкополярный экстракт смолы Boswellia (BLPRE) и по меньшей мере один компонент, выбранный из экстракта(ов) или фракции(ий) или фитохимического(их) соединения(ий) или их соли (ей) или смесей вышеперечисленного, полученных из видов Boswellia.

В другом главном аспекте в настоящем изобретении предлагается синергетическая(ие) композиция(ии), содержащая(ие) BLPRE и по меньшей мере один компонент, выбранный из экстракта(ов) или фракции(ий) или фитохимического(их) соединения(ий) или их соли (ей) или смесей вышеперечисленного, полученных из видов Curcuma.

В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается низкополярый экстракт камеде-смолы Boswellia, который является низкополярным, полученным после селективного удаления кислых и летучих соединений.

В другом аспекте в настоящем изобретении предлага