Препарат антитела

Препарат антитела

Иллюстрации

Показать все

Реферат

1. Введение

Настоящее изобретение относится к высококонцентрированным жидким препаратам антител или их фрагментов, которые специфично связываются с α-интерфероном человека, причем указанные препараты стабильны, характеризуются низким (от низкого до недетектируемого) уровнем фрагментации антител, низким (от низкого до недетектируемого) уровнем агрегации и минимальном (или отсутствием) снижением биологической активности антител даже при длительном хранении. Настоящее изобретение также относится к способам профилактики, лечения, контроля или ослабления интенсивности симптомов, ассоциированных с заболеванием или нарушением, опосредуемым α-интерфероном (например, но не ограничиваясь только ими, с системной красной волчанкой, рассеянным склерозом, воспалительным заболеванием кишечника, инсулинозависимым сахарным диабетом, псориазом, аутоиммунным тиреоидитом, ревматоидным артритом и гломерулонефритом, отторжением трансплантата, заболеванием трансплантат-против-хозяина), с использованием высококонцентрированных жидких препаратов антител или их фрагментов, которые специфично связываются с α-интерфероном человека.

2. Предпосылки создания изобретения

Интерфероны типа I (ИФ) (α-ИФ, β-ИФ, ω-ИФ, τ-ИФ) представляют собой семейство близких в структурном отношении цитокинов, обладающих противовирусным, противоопухолевым и иммуномодулирующим действием (Hardy и др., Blood, 97, 473 (2001), Cutrone и Langer, J. Biol. Chem, 276, 17140 (2001)). Локус α-ИФ человека содержит два подсемейства. Первое подсемейство состоит по меньшей мере из 14 неаллельных генов и 4 псевдогенов, гомология которых составляет по меньшей мере 75%. Второе подсемейство, αII или омега (ω), содержит 5 псевдогенов и 1 функциональный ген, гомология которого с генами α-ИФ составляет 70%. Подвиды α-ИФ обладают различными специфичными активностями, но одинаковым биологическим спектром (Streuli и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78, 2848 (1986)) и специфичностью к одному и тому же клеточному рецептору (Agnet М. и др., "Interferon, 5-е изд., ред. I. Gresser, Academic Press, London, с.1-22 (1983)).

Результаты исследований в ряде научных центров свидетельствуют о том, что α-ИФ ускоряет созревание или активацию дендритных клеток (ДК) (Santini и др., J. Exp. Med., 191, 1777 (2000), Luft и др., J. Immunol., 161, 1947 (1998), Luft и др.. Int. Immunol. 14, 367 (2002), Radvanyi и др., Scand. J. Immunol., 50, 99 (1999), Paquette и др., J. Leukoc. Biol., 64, 358 (1998)). Кроме того, в литературе описана повышенная экспрессия интерферонов типа I при многих аутоиммунных заболеваниях (Foulis и др., Lancet, 2, 1423 (1987), Hooks и др., Arthritis Rheum., 25, 396 (1982), Hertzog и др., Clin. Immunol. Immunopathol., 48, 192 (1988), Hopkins и Meager, Clin. Exp. Immunol., 73, 88 (1988), Arvin и Miller, Arthritis Rheum., 27, 582 (1984)). Наиболее изученными примерами таких заболеваний являются инсулинозависимый сахарный диабет (ИЗСД) (Foulis (1987) см. выше), системная красная волчанка (СКВ) (Hooks (1982) см. выше, Blanco и др., Science, 294, 1540 (2001), Ytterberg и Schnitzer, Arthritis Rheum., 25, 401 (1982), Batteux и др., Eur. Cytokine Netw., 509 (1999)) и аутоиммунный тиреоидит (Prummel и Laurberg, Thyroid, 13, 547 (2003), Mazziotti и др., J. Endocrinol. Invest., 25, 624 (2002), You и др., Chin. Med. J., 112, 61 (1999), Koh и др., Thyroid, 7, 891 (1997)), которые ассоциируются с повышенным уровнем α-ИФ, и ревматоидный артрит (PA) (Hertzog (1988), Hopkins и Meager (1988), Arvin и Miller (1984), см. выше), при котором α-ИФ играет более существенную роль.

Более того, сообщается, что введение α-интерферона приводит к обострению заболевания у пациентов, страдающих от псориаза, аутоиммунного тиреоидита и рассеянного склероза, и индуцирует - синдром СКВ у пациентов без анамнеза аутоиммунного заболевания. Установлено также, что α-интерферон индуцирует гломерулонефрит у нормальных мышей и ускоряет ответную реакцию в виде спонтанного аутоиммунного заболевания у мышей NZB/W. Кроме того, установлено, что при лечении α-ИФ в некоторых случаях наблюдается нежелательное побочное действие, включая лихорадку и неврологические нарушения. Следовательно существуют патологические состояния, при которых ингибирование активности α-ИФ может оказаться благоприятным для пациента, и существует необходимость в терапевтических агентах (например, препаратах антител, специфичных к α-интерферону), эффективно ингибирующих α-ИФ.

До настоящего времени многие антитела получают в форме лиофильно высушенных препаратов. Лиофилизованные препараты антител характеризуются рядом недостатков, включающих длительный процесс лиофилизации, что сильно удорожает технологию. Кроме того, перед введением пациентам лиофилизированный препарат следует растворять в асептических условиях по определенной методике, что требует участия опытного персонала. Растворение проводят по следующей последовательности операций, например, (1) в флакон, содержащий лиофильно высушенные антитела, в асептических условиях медленно добавляют стерильный растворитель (т.е. воду для внутривенного введения и 5% раствор декстрозы в воде для внутримышечного введения) и флакон очень медленно вращают в течение 30 с, избегая вспенивания, (2) затем суспензию выдерживают при комнатной температуре в течение минимум 20 мин до образования прозрачного раствора, и (3) полученный препарат необходимо вводить в течение ближайших шести (6) ч после растворения. Такая процедура является достаточно сложной, а ограниченное время хранения после приготовления препарата может вызвать значительные неудобства при введении пациентам, например, приводит к большим потерям материала, если препарат приготовлен неправильно или растворенную дозу не использовали в течение ближайших шести (6) ч и ее следует отбросить.

Таким образом, существует необходимость в разработке жидких препаратов антител, прежде всего, антител к α-интерферону человека, с равной или более высокой концентрацией, которую получают при использовании лиофильно высушенных препаратов, позволяющих исключить растворение препаратов непосредственно перед введением пациенту. Это позволит квалифицированному персоналу вводить антитела пациенту гораздо быстрее и простым способом.

Получаемые в настоящее время жидкие препараты антител характеризуются низким периодом полураспада и теряют биологическую активность из-за химической и физической нестабильности антител при хранении. Химическая нестабильность обусловлена дезамидированием, рацемизацией, гидролизом, окислением, β-элиминированием или перераспределением дисульфидных связей, а физическая нестабильность обусловлена денатурацией, агрегацией, осаждением или адсорбцией антител. Установлено, что наиболее распространенными причинами деградации антител являются наряду с прочими агрегация, дезамидирование и окисление (Wang и др., J. of Parenteral Science & Technology, 42 (Suppl), S4-S26 (1988), Cleland и др., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 10(4), 307-377 (1993)). Таким образом, существует необходимость в разработке стабильных жидких препаратов антител, прежде всего, стабильных препаратов антитела к α-интерферону человека.

Краткое изложение сущности изобретения

Настоящее изобретение относится к стерильным, стабильным, водным препаратам, включающим антитела или их фрагменты, которые специфично связываются с α-интерфероном человека.

В настоящем изобретении предлагаются способы стабилизации антител к α-интерферону человека или их фрагментов.

Настоящее изобретение также относится к способам получения стерильного, стабильного, водного препарата, включающего антитела или их фрагменты, которые специфично связываются с α-интерфероном человека.

Настоящее изобретение также включает способы профилактики, контроля, лечения или ослабления интенсивности симптомов воспалительного заболевания или нарушения, аутоиммунного заболевания или нарушения, пролиферативного заболевания, инфекционного заболевания, заболевания или нарушения, характеризующегося или ассоциированного с аномальной экспрессией и/или активностью α-интерферона, заболевания или нарушения, характеризующегося или ассоциированного с аномальной экспрессией и/или активностью рецептора α-интерферона или его одной или более субъединиц, или одного или более симптомов указанных заболеваний, причем указанные способы заключаются в том, что субъекту, который нуждается в лечении, вводят профилактически или терапевтически эффективное количество препарата антител к α-интерферону человека.

3.1. Определение терминов

Все препараты антител и/или их фрагментов, которые специфично связываются с исследуемым антигеном (например, α-интерфероном) обозначаются в описании заявки как "препараты по изобретению", "жидкие препараты по изобретению", "высококонцентрированные стабильные жидкие препараты по изобретению", "жидкие препараты антител по изобретению" или "препараты антител по изобретению".

Термины "α-интерферон" и "α-ИФ" используются взаимозаменяемым образом и относятся к белкам α-ИФ, кодируемым функциональным геном локуса α-интерферона, гомология которых на с α1-ИФ составляет 75% или более (Банк генов, peг. номер NP 076918, или белок с peг. номером НМ 024013). Примеры подтипов α-ИФ включают α1-ИФ, α2а, α2b, α4, α5, α6, α7, α8, α10, α13, α14, α16, α17 и α21. Подразумевается, что термин "α-интерферон" включает рекомбинантные формы различных подтипов α-ИФ, а также природные препараты, которые включают белки α-ИФ, такие как лейкоцитарный ИФ и лимфобластоидный ИФ. Подразумевается, что термин α-ИФ не включает, например, ω-ИФ в отдельности, хотя термин α-ИФ включает композицию, содержащую α-ИФ и ω-ИФ.

Подразумевается, что термин "рецептор α-ИФ", используемый в описании изобретения, относится к членам семейства рецептора α-ИФ, т.е. к соединениям, которые являются рецепторами такого лиганда как α-ИФ. Примерами рецепторов α-ИФ являются рецептор 1 α-ИФ (Банк генов, peг. номер НМ 000629 и NP 000620) и рецептор 2 α-ИФ (Банк генов, peг. номер НМ 207585 и NP 997468).

Термин "субъект", используемый в описании изобретения, включает любого человека и любое нечеловекообразное животное. Термин "нечеловекообразное животное" включает всех позвоночных, например, но, не ограничиваясь только ими, млекопитающих и немлекопитающих, таких как нечеловекообразные приматы, овцы, собаки, кошки, лошади, крупный рогатый скот, цыплята, амфибии, рептилии и т.п.

Термин "антитела", используемый в описании изобретения, включает полноразмерные антитела и любой их фрагмент, способный связываться с антигеном (т.е., "антигенсвязывающий участок"), или их отдельные цепи. Термин "антитела" обозначает гликопротеин, включающий по меньшей мере две тяжелых (Н) цепи и две легких (L) цепи, связанные дисульфидными связями, или их антигенсвязывающий участок. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно V_H) и консервативную область тяжелой цепи. Консервативная область тяжелой цепи содержит три домена C_H1, C_H2 и C_H3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область (сокращенно V_L) и консервативную область легкой цепи. Консервативная область легкой цепи содержит один домен C_L. Кроме того, области V_H и V_L подразделяются на гипервариабельные области, т.е. участки комплементарности (CDR), которые чередуются с более консервативными областями, т.е. каркасными участками (FR). Каждая V_H и V_L состоит из трех CDR и четырех FR, которые располагаются от N-концевого фрагмента до С-концевого фрагмента в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелых и легких цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Консервативные области антител опосредуют связывание иммуноглобулина с тканями или факторами организма-хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, но, не ограничиваясь только ими, эффекторные клетки) и с первым компонентом (Clq) классической системы комплемента. Антитела образуются в организме любого млекопитающего, включая, но, не ограничиваясь только ими, человека, обезьян, свиней, лошадей, кроликов, собак, кошек, мышей и т.п. Термин "антитела" относится к моноклональным антителам, поликлональным антителам, антителам человека, гуманизированным антителам, антителам верблюда, гибридным антителам, одноцепочечным Fvs (scFv), одноцепочечным антителам, однодоменным антителам, Fab-фрагментам, F(ab')-фрагментам, Fvs (sdFv), связанным дисульфидной связью, и анти-идиотипическим (анти-Id) антителам (включая, например, но, не ограничиваясь только ими, анти-Id антитела к антителам по изобретению), внутриклеточным антигенам и эпитопсвязывающим фрагментам любых из указанных выше антител. Антитела представляют собой иммуноглобулины любого типа (например, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA и IgY), класса (например, IgG₁, IgG₂, IgG₃, IgG₄, IgA₁ и IgA₂) или подкласса.

Термин "антигенсвязывающий участок" антитела (или просто "участок антитела"), используемый в описании изобретения, относится к одному или более фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфично связываться с антигеном (например, α-ИФ). Установлено, что антигенсвязывающая функция антитела может осуществляться фрагментами полноразмерного антитела. Примеры связывающих фрагментов, обозначенных термином "антигенсвязывающий участок" антитела, включают, но, не ограничиваясь только ими, (1) Fab-фрагмент, одновалентный фрагмент, состоящий из доменов V_L, V_H, C_L и C_H1, (2) F(ab')2-фрагмент, двухвалентный фрагмент, включающий два Fab-фрагмента, связанных дисульфидной связью в шарнирной области, (3) Fd-фрагмент, состоящий из доменов V_H и C_H1, (4) Fv-фрагмент, состоящий из доменов V_L и V_H одной ветви молекулы антитела, (5) dAb-фрагмент (Ward и др., Nature 341, 544-546 (1989)), включающий домен V_H, и (6) выделенные участки комплементарности (CDR). Кроме того, хотя два домена Fv-фрагмента, V_L и V_H, кодируются разными генами, их можно связать друг с другом синтетическим линкером методом рекомбинантных ДНК, при этом получают одну цепь, где V_L и V_H области образуют одновалентную молекулу (известную как одноцепочечный Fv (scFv), см. например. Bird и др., Science, 242, 423-426 (1988) и Huston и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85, 5879-5883 (1988)). Подразумевается, что такие одноцепочечные антитела также включены в объем термина "антигенсвязывающий участок" антитела. Указанные фрагменты антител получают стандартными методами, известными специалисту в данной области, и полученные фрагменты тестируют аналогично интактным антителам.

Термины "моноклональные антитела" или "композиция моноклональных антител", используемые в описании изобретения, относятся к препарату антител, содержащему моноспецифическую композицию, т.е. композицию моноклональных антител, обладающего сродством к конкретному эпитопу.

Термин "антитела человека", используемый в описании изобретения, обозначает антитела, содержащие вариабельные области, в которых каркасные участки (FR) и участки комплементарности (CDR) получены из последовательностей иммуноглобулина терминальной линии клеток человека. Кроме того, если в антителах содержится консервативная область, то такую область также получают из последовательностей иммуноглобулина терминальной линии клеток человека. Антитела человека по изобретению могут включать остатки аминокислот, не кодируемых последовательностями иммуноглобулина терминальной линии клеток человека (например, но, не ограничиваясь только ими, за счет случайных мутаций или сайт-специфического мутагенеза in vitro или соматической мутации in vivo). Однако термин "антитела человека", используемый в описании заявки, не включает антитела, в которых последовательности CDR, полученные из терминальной линии клеток млекопитающих других видов, таких как мыши, привиты на последовательности каркасных участков иммуноглобулина человека.

Термин "моноклональные антитела человека" относится к антителам, обладающим моноспецифичностью и содержащим вариабельные области, в которых FR и CDR получены из последовательностей иммуноглобулина терминальной линии клеток человека. В одном варианте моноклональные антитела человека получают с использованием гибридом, которые включают В-клетку, полученную от трансгенного нечеловекообразного животного, например, но, не ограничиваясь только ими, трансгенной мыши, содержащей геном, включающий трансген тяжелой цепи человека и трансген легкой цепи, слитую с иммортализованной клеткой.

Термин "рекомбинантные антитела человека", используемый в описании изобретения, включает все антитела человека, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены методом рекомбинантных ДНК, такие как (а) антитела, выделенные из организма животного (например, но, не ограничиваясь только ими, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомальным для генов иммуноглобулина человека, или полученной из данного животного гибридомы (как описано ниже), (б) антитела, выделенные из клетки организма хозяина для экспрессии антител человека, например, но, не ограничиваясь только ими, из трансфектомы, (в) антитела, выделенные из библиотеки рекомбинантных, комбинаторных антител человека, и (г) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими способами, которые включают сплайсинг (вырезание с последующим лигированием) последовательностей гена иммуноглобулина человека с последовательностями другой ДНК. Такие рекомбинантные антитела человека содержат вариабельные области, в которых FR и CDR получены из последовательностей иммуноглобулина терминальной линии клеток человека. Однако в других вариантах, такие рекомбинантные антитела человека можно подвергать мутагенезу in vitro (или, если используется животное, трансгенное для последовательностей Ig человека, соматическому мутагенезу in vivo) и таким образом аминокислотные последовательности областей V_H и V_L рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя они получены и относятся к последовательностям V_H и V_L терминальной линии клеток человека, не могут существовать в составе антитела терминальной линии клеток in vivo в естественных условиях.

Термин "изотип" относится к классификации консервативной области тяжелой и легкой цепи антител. Консервативные домены антител не принимают участия в связывании с антигеном, но проявляют различные эффекторные функции. В зависимости от аминокислотной последовательности консервативной области тяжелой цепи конкретное антитело человека или иммуноглобулин можно отнести к одному из пяти основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM. Некоторые из этих классов можно затем подразделить на подклассы (изотипы), например, IgG1 (гамма 1), IgG2 (гамма 2), IgG3 (гамма 3) и IgG4 (гамма 4), и IgA1 и IgA2. Консервативные области тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам иммуноглобулинов, называются α, δ, ε, γ и µ, соответственно. Структуры и трехмерные конфигурации иммуноглобулинов различных классов известны. Консервативные области легкой цепи подразделяются на два главных класса, каппа (κ) и лямбда (λ).

Термин "эпитоп" известен в данной области техники и обозначает любую группу, которая способна специфично связываться с антителами. Термин "антиген" обозначает группу или молекулу, которая содержит эпитоп, и, таким образом, также специфично связывается с антителами.

"Аффинность" антител к эпитопу, которую можно использовать при лечении по изобретению, является известным термином и обозначает степень прочности связывания антител с эпитопом. Аффинность определяют рядом известных способов, включающих, но, не ограничиваясь только ими, определение равновесной константы диссоциации (KD или K_d), кажущейся равновесной константы диссоциации (KD' или K_d') и величины IC₅₀ (количества, необходимого для подавления действия на 50% при анализе конкурентного связывания). Подразумевается, что в настоящем изобретении аффинность обозначает среднее сродство конкретной популяции антител, которые связываются с эпитопом. Величины KD', указанные в описании заявки, приводятся в виде мг IgG в мл или мг/мл, т.е. в виде количества мг Ig в мл сыворотки крови, хотя можно использовать и плазму крови. Если аффинность антител используется в качестве основы для оценки дозы при лечении способами, описанными в тексте заявки, или выбора способов лечения, описанных в тексте заявки, аффинность антител можно определять предварительно и/или во время лечения, а полученные значения могут использоваться лечащим врачом при оценке пригодности препаратов для лечения человека.

Термин "авидность", используемый в описании изобретения, обозначает меру суммарной прочности связывания (т.е. обеих ветвей антител) антител с антигеном. Авидность антител определяют, измеряя диссоциацию связи антиген/антитело при избытке антигена с использованием любых известных способов, таких как, но, не ограничиваясь только ими, модификация непрямой реакции флуоресцентных антител, как описано в статье Gray и др., J. Virol. Meth., 44, 11-24. (1993)

Термин "специфичное связывание", используемый в описании изобретения, обозначает связывание антител с предварительно определенным антигеном. Обычно константа диссоциации (K_D) антитела составляет 10^-8 М или менее, а константа связывания с предварительно определенным антигеном по меньшей мере в 2 раза ниже по сравнению с K_D неспецифичного антигена (например, но, не ограничиваясь только ими, БСА, казеином), который отличается от с предварительно определенного или родственного ему антигена. Термины "антитела, распознающие антиген" и "антитела, специфичные к антигену" используются взаимозаменяемым образом с термином "антитела, которое специфично связывается с антигеном".

Термин "ответная иммунная реакция" относится к реакции, например, лимфоцитов, антигенпрезентирующих клеток, фагоцитов, гранулоцитов и растворимых макромолекул, продуцированных вышеуказанным клетками или печенью (включая антитела, цитокины и комплемент), которая приводит к избирательному повреждению, деструкции или элиминированию из организма человека присутствующих в организме патогенов, клеток или тканей, инфицированных патогенами, раковых клеток или, в случае аутоиммунной реакции или патологического воспаления, нормальных клеток или тканей человека.

Термин антитела, которые "ингибируют биологическую активность" α-ИФ, относится к антителам, которые ингибируют активность указанного подтипа интерферона по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 70% или по меньшей мере приблизительно на 80%, по сравнению с уровнем активности в отсутствии антител, например, при использовании функционального анализа, описанного в опубликованной заявке US 2007/0014724А1, такого как анализ пролиферации клеток Дауди. В другом варианте антитела, которые "ингибируют биологическую активность" α-ИФ, может относиться к антителам, которые ингибируют активность указанного подтипа интерферона и характеризуются величиной ЕС₅₀ менее 200 нМ или менее 100 нМ или менее 50 нМ или менее 10 нМ.

Термин "период полураспада антител", используемый в описании изобретения, относится к фармакокинетическому свойству антител, которое является мерой существования молекул антител после их введения. Период полураспада антител определяю как время, необходимое для элиминирования 50% известного количества иммуноглобулина из организма пациента или конкретного отдела организма, например, определенного в сыворотке или плазме крови, т.е. полупериода в кровотоке или других тканях. Период полураспада может изменяться для разных иммуноглобулинов или разных классов иммуноглобулинов. В общем случае, увеличение периода полураспада антител приводит к увеличению среднего времени пребывания (СВП) введенных антител в кровотоке.

Термин "эксципиент", используемый в описании изобретения, обозначает инертное соединение, которое обычно используется в качестве разбавителя, носителя, консерванта, связующего или стабилизирующего агента в отношении лекарственного средства, который придает препаратам благоприятные физические свойства, такие как повышенная стабильность белка, повышенная растворимость белка и пониженная вязкость раствора. Примерами эксципиентов являются, но, не ограничиваясь только ими, белки (например, но, не ограничиваясь только им, сывороточный альбумин), аминокислоты (например, но, не ограничиваясь только ими, аспарагиновая кислота, глутаминовая кислота, лизин, аргинин, глицин), ПАВ (например, но, не ограничиваясь только ими, ДСН, твин 20, твин 80, полисорбат и неионные ПАВ), сахариды (например, но, не ограничиваясь только ими, глюкоза, сахароза, мальтоза и трегалоза), полиолы (например, но, не ограничиваясь только ими, маннит и сорбит), жирные кислоты и фосфолипиды (например, но, не ограничиваясь только ими, алкилсульфонаты и каприлат). Дополнительная информация по эксципиентам приводится в литературе, см., например, монографию Remington Pharmaceutical Sciences (Joseph P. Remington, 18-е изд. Mack Publishing Co., Easton, PA, которая включена в описании заявки в полном объеме в качестве ссылки.

Определение "фармацевтически приемлемый", используемый в описании изобретения, обозначает препарат, утвержденный контрольным федеральным или государственным органом, или указанный в Фармакопее США, Европейской или других известных фармакопеях для введения животным и прежде всего человеку.

Термины "стабильность" и "стабильный", используемые в описании изобретения в контексте жидких препаратов, содержащих антитела (или их фрагменты), которые специфично связываются с исследуемым антигеном (например, α-интерфероном человека), обозначает устойчивость антител (или их фрагментов), содержащихся в препарате, к агрегации, деградации или фрагментации в конкретных условиях переработки, получения, транспортировки и хранения. "Стабильные" препараты по изобретению сохраняют биологическую активность в конкретных условиях переработки, получения, транспортировки и хранения. Стабильность указанных антител (или их фрагментов) оценивают по степени агрегации, деградации или фрагментации, которые определяют методами высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (ЭХВР), статического светопреломления (ССП), ИК-спектроскопии с Фурье преобразованием (FTIR), кругового дихроизма (КД), денатурации мочевиной, измерения флуоресценции триптофана, дифференциальной сканирующей калориметрии и/или методом связывания антитела с АНС при сравнении с контрольным препаратом. Например, в качестве контрольного препарата можно использовать стандартный препарат, охлажденный до -70°С и содержащий 10 мг/мл антител (или их фрагментов), например, но, не ограничиваясь только ими, 13Н5, 13Н7 или 7Н9, гистидин, 8% трегалозы и 0,02% полисорбата 80 (рН 6,0-6,5), который по данным анализа методом ЭХВР характеризуется стабильным пиком мономера (по площади пика ≥97%). Общую стабильность препарата, содержащего антитела (или их фрагменты) можно оценить различными иммунологическими методами, включающими, например, ИФА и радиоиммуноанализ с использованием выделенного антигена.

Термин "агрегация низкого (от низкого до недетектируемого) уровня", используемый в описании заявки, относится к образцам, содержащим не более приблизительно 5 мас.%, не более приблизительно 4 мас.%, не более приблизительно 3 мас.%, не более приблизительно 2 мас.%, не более приблизительно 1 мас.% и не более приблизительно 0,5 мас.% агрегированного белка по данным ЭХВР или ССП.

Термин "фрагментация низкого (от низкого до недетектируемого) уровня", используемый в описании изобретения, относится к образцам, содержащим равное приблизительно 80%, приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 98% или приблизительно 99% или более общего белка, например, в составе одной фракции по данным ЭХВР, или в составе двух фракций (например, тяжелой и легкой цепей), или в составе нескольких фракций (т.е. нескольких субъединиц) по данным капиллярного электрофореза в геле в восстанавливающих условиях (вКЭ), представляющих собой недеградированные антитела или их недеградированные фрагменты, и не содержащих никаких других фракций, составляющих более приблизительно 5 мас.%, более приблизительно 4 мас.%, более приблизительно 3 мас.%, более приблизительно 2 мас.%, более приблизительно 1 мас.% или более приблизительно 0,5 мас.% общего белка в каждом случае. Термин "капиллярный электрофорез в геле восстанавливающих условиях", используемый в описании заявки, обозначает капиллярный электрофорез в геле в восстанавливающих условиях, обеспечивающих восстановление дисульфидных связей в молекуле антитела.

Термины "нарушение" и "заболевание" используются в описании изобретения взаимозаменяемым образом и обозначают состояние субъекта, которое отличает его от здорового, не пораженного заболеванием субъекта. Термин "аутоиммунное заболевание", используемый взаимозаменяемым образом с термином "аутоиммунное нарушение", относится к состоянию субъекта, которое характеризуется повреждением клеток, тканей и/или органов, вызванным иммунологической реакцией организма субъекта на собственные клетки, ткани и/или органы. Термин "воспалительное заболевание", используемый взаимозаменяемым образом с термином "воспалительное нарушение", относится к состоянию субъекта, которое характеризуется воспалением, например, но, не ограничиваясь только им, хроническим воспалением. Аутоиммунные нарушения могут ассоциироваться или не ассоциироваться с воспалением. Более того, воспаление может быть связано или не связано с аутоиммунным нарушением. Некоторые состояния могут характеризоваться несколькими нарушениями. Например, некоторые состояния могут характеризоваться как аутоиммунными, так и воспалительными нарушениями.

Термин "терапия" может относиться к любому курсу (курсам) лечения, способу (способам) лечения и/или агенту (агентам), которые могут использоваться для профилактики, лечения и/или контроля заболевания или нарушения.

Термины "лечить" или "лечение" (или грамматические эквиваленты) обозначают, что тяжесть состояния субъекта снижается или по меньшей мере частично улучшается или уменьшается интенсивность симптомов заболевания и/или достигается уменьшение, ослабление заболевания или снижение интенсивности по меньшей мере одного клинического симптома заболевания и/или наблюдается подавление или замедление развития патологического состояния и/или предотвращение или замедление развития заболевания или болезни. Таким образом, термины "лечить" или "лечение" (или грамматические эквиваленты) относятся к курсам профилактического и терапевтического лечения.

Термин "контроль заболевания", используемый в описании изобретения, относится к благоприятному воздействию на субъекта в ходе лечения (например, профилактическим или терапевтическим агентом), которое не приводит к излечению заболевания. В некоторых вариантах субъект проходит один или более курсов лечения (например, одним или более профилактическими или терапевтическими агентами) для "контроля" заболевания таким образом, чтобы предотвратить развитие или ухудшение симптомов заболевания.

Термины "предотвратить", "профилактический" и "профилактика", используемые в описании изобретения, обозначают подавление развития или приступа заболевания или нарушения, или профилактики рецидива, приступа или развития одного или более симптомов заболевания или нарушения у субъекта, которые наблюдаются в результате введения лекарственного средства (например, профилактического или терапевтического агента), или после введения комбинации лекарственных средств (например, комбинации профилактических или терапевтических агентов).

Термины "профилактический агент" и "профилактические агенты", используемые в описании изобретения, относятся к любому агенту (агентам), который можно использовать для предотвращения приступа, рецидива или развития заболевания или нарушения. В некоторых вариантах термин "профилактический агент" относится к антителам, которые специфично связывается с α-интерфероном. В некоторых других вариантах термин "профилактический агент" относится к другому агенту, который отличается от антител, которые специфично связываются с α-интерфероном. В некоторых вариантах профилактический агент обозначает известный агент, который уже использовался или используется в настоящее время для профилактики или замедления развития приступа или прогрессии заболевания и/или снижения тяжести заболевания или нарушения.

Термин "иммуномодулирующий агент" и его варианты, используемые в описании изобретения, обозначают, но, не ограничиваясь только ими, иммуномодулирующие агенты, иммуномодуляторы или иммуномодулирующие лекарственные средства, и относятся к агенту, который модулирует иммунную систему организма хозяина. В конкретном варианте иммуномодулирующим агентом является агент, который смещает один из аспектов иммунной реакции субъекта. В некоторых вариантах, иммуномодулирующим агентом является агент, который ингибирует или подавляет иммунную систему субъекта (т.е. является иммунодепрессантом). В некоторых других вариантах иммуномодулирующим агентом является агент, который активирует или стимулирует иммунную систему субъекта (т.е., является иммуностимулятором). Иммуномодулирующий агент по настоящему изобретению, используемый в комбинированной терапии по изобретению, не содержит антитела по изобретению. Иммуномодулирующими агентами являются, но, не ограничиваясь только ими, низкомолекулярные соединения, пептиды, полипептиды, белки, нуклеиновые кислоты (например, но, не ограничиваясь только ими, ДНК и РНК, включающие, но, не ограничиваясь только ими, антисмысловые полинуклеотиды, тройные спирали, иРНК и полинуклеотиды, кодирующие биологически активные белки, полипептиды или пептиды), антитела, синтетические или природные неорганические соединения, миметики и синтетические или природные органические соединения.

Термины "достаточное количество" или "количество, достаточное для" достижения конкретного результата, используемые в описании изобретения, относятся к количеству антител или композиции по изобретению, которое оказывает эффективное требуемое воздействие, которое необязательно связывает терапевтическое (лечебное) действие (т.е. которое достигается при введения терапевтически эффективного количества).

Термин "терапевтически эффективное" количество, используемый в описании изобретения, обозначает количество, которое обеспечивает определенное улучшение состояния или оказывает благоприятное действие на субъекта. Иными словами "терапевтически эффективное" количество обозначает количество, которое обеспечивает некоторое снижение, облегчение заболевания или снижение интенсивности по меньшей мере одного клинического симптома заболевания. Клинические симптомы, ассоциированные с нарушениями, которые можно лечить способами по изобретению, известны специалисту в данной области. Кроме того, для специалиста представляется очевидным, что лечебное действие не обязательно является полным или излечивающим, хотя оно и оказывает определенное благоприятное воздействие на субъекта.

"Терапевтически эффективная доза" антител к α-ИФ по изобретению приводит к снижению интенсивности по меньшей мере одного симптома заболевания, увеличению продолжительности периодов, в которых не наблюдаются рецидивы и симптомы заболевания, или к предотвращению ухудшения физического состояния или трудоспособности в результате заболевания. Например, в случае системной красной волчанки (СКВ) после введения терапевтически эффективной дозы предотвращается дальнейшее ухудшение по меньшей мере одного физического симптома, ассоциированного с СКВ, такого, например, как боль или утомляемость. После введения терапевтически эффективной дозы также предотвращается или замедляется развитие СКВ, что является существенным при наличии ранних или предварительных признаков заболевания. Аналогичным образом после введения терапевтически эффективной дозы замедляется хроническое развитие состояния, ассоциированного с СКВ. Лабораторные анализы, используемые при диагностике СКВ, включают химические методы анализа (включая оценку уровня α-ИФ), анализ крови, серологию и радиологию. Соответственно, для оценки эффективности терапевтической дозы для лечения СКВ можно использовать любой клинический или биохимический анализ, который позволяет регистрировать любой из вышеуказанных признаков. Специалист в данной области может определить необходимое количество лекарственного средства с уч