Фармацевтическая композиция

Фармацевтическая композиция

Реферат

Настоящее изобретение относится к способам и композициям, предназначенным для терапевтического и диагностического применения при лечении заболеваний и нарушений, которые вызываются или ассоциированы с нейрофибриллярными сплетениями. В частности, изобретение относится к способам и композициям, предназначенным для терапевтического и диагностического применения при лечении таупатий, включая болезнь Альцгеймера (AD).

Нейрофибриллярные сплетения являются основным нейропатологическим отличительным признаком AD. Они образуются в результате агрегации гиперфосфорилированного тау-белка и его конформеров. Для AD характерна эта патология, отличающаяся целым рядом нейрогенеративных таупатий, в частности специфическими типами фронтотемпоральной деменции (деменция лобно-височного типа) (FTD).

Тау-белок представляет собой легко растворимый «не уложенный естественным образом» белок, обладающий авидностью к связыванию с микротрубочками (МТ), усиливая их скрепление и стабильность. МТ имеют решающее значение для целостности цитоскелета нейронов и, следовательно, для правильного формирования и функционирования нейронных цепей, т.е. для обеспечения способности к познаванию и памяти. Связывание тау-белка с МТ контролируется процессом динамического фосфорилирования и дефосфорилирования, что было продемонстрировано главным образом in vitro и на клетках, не относящихся к нейронам. Вследствие наличия большого количества возможных сайтов фосфорилирования (>80), точная роль каждого из них и идентификация ответственных за их фосфорилирование киназ остаются в основном не выясненными in vivo.

При AD в головном мозге таупатология развивается позднее, чем амилоидная патология и, поэтому, по-видимому, в ответ на амилоидную патологию, что представляет собой сущность гипотезы об амилоидном каскаде. Это основано и подтверждено исследованиями на страдающих AD и синдромом Дауна пациентах и подтверждается опытами, проведенными на трансгенных мышах с комбинированной амилоидной и таупатологией (Lewis и др., 2001; Oddo и др., 2004; Ribe и др., 2005; Muyllaert и др., 2006; 2008; Terwel и др., 2008).

Точное время возникновения обеих патологий у страдающих AD людей, а также механизмы, связывающие амилоидную и таупатологию, остаются в значительной степени не изученными, но существует предположение о том, что в них участвует активация нейронных путей передачи сигналов, которые действуют на или посредством GSK3 и cdk5, представляющие собой основные «тау-киназы» (см. обзор Muyllaert и др., 2006, 2008).

Гипотезы о том, что таупатия представляет собой не безобидное побочное действие, а является основным патологическим «орудием» при AD, основано на надежных генетических, патологических и экспериментальных данных, которые полностью согласуются друг с другом:

- в случаях ранней семейной AD, являющейся следствием мутаций амилоидного белка-предшественника (АРР) или пресенилина, облигатной причиной патогенеза является накопление амилоида, но неизменно патология включает параллельную таупатию, идентичную той, которая имеет место в случаях начинающейся в старшем возрасте спорадической AD,

-серьезность когнитивной дисфункции и деменции коррелирует с таупатией, но не с амилоидной патологией, что было подтверждено в последнее время результатами, полученными на фазе 1 и 2 нескольких клинических исследований, включающих PIB-PET-визуализацию амилоида (визуализация методом PET (эмиссионная позитронная томография) с использованием трейсера PIB (Pittsburg Compound-B)) и идентификацию целого ряда «ошибочных позитивов», а именно, обладающих нормальной когнитивной способностью индивидуумов с высокой загрузкой амилоидом головного мозга,

- при семейной FTD таупатия провоцируется мутантным тау-белком и вызывает нейродегенерацию непосредственно, без амилоидной патологии,

- на экспериментальных созданных на мышах моделях установлено, что когнитивные дефекты, обусловленные амилоидной патологией, практически полностью устранятся при отсутствии тау-белка (Roberson и др., 2007).

Взятые в совокупности сведения подтверждают гипотезу о том, что тау-белок играет решающую роль в снижении когнитивной функции при AD и родственных нейродегенеративных таупатиях.

Наиболее широко применяемым лечением AD является пассивная иммунотерапия с использованием специфических МАт для устранения амилоидных пепетидов и их агрегатов, которые, как предполагается, являются нейротоксическими или синаптотоксическими.

Предполагается, что иммунотерапия, направленная на таупатологию, основана на противодействии патологическим конформерам тау-белка, которые, как известно или как предполагается, вызывают нейродегенерацию. Вызывающая AD амилоидная патология и внутринейронные агрегаты гиперфосфорилированного тау-белка, вероятно, обладают синергетическим действием на вызывающий когнитивные нарушения и дегенерацию каскад патологических событий, что приводит при AD к состоянию от умеренного ухудшения когнитивной способности (MCI) до серьезной деменции. Таким образом, комбинация медикаментозного лечения, направленного на таупатологию и направленного на амилоидную патологию (или любую другую патологию), представляет собой предпочтительный и значительно более эффективный путь лечения AD.

Известно лишь немного других терапевтических подходов, направленных против тау-белка, они включают в основном применение:

- ингибиторов киназ, которые, вероятно, повышают фосфорилирование тау-белка до патологических уровней,

- соединений, которые блокируют агрегацию гиперфосфорилированного тау-белка в цитоплазме.

Эти подходы страдают различными недостатками с позиций специфичности и эффективности, возникает проблема, связанная с попытками модифицировать метаболизм АРР и амилоида, все это свидетельствует о важности продолжения поиска дополнительных подходов к лечению, включая иммунотерапию, направленную на тау-белок.

Практически не предпринималось попыток выявить, не говоря уже о том, чтобы оказать направленное воздействие на них, патологические тау-конформеры in vivo. На фазе II клинического испытания А(342 ни рассматривали, ни анализировали достаточно глубоко связанную со сплетением патологию (Nicoll и др., 2003; Masliah и др., 2005). С другой стороны, результаты направленной на амилоид экспериментальной иммунотерапии, полученные на доклинической мышиной модели с комбинированной AD-подобной патологией, продемонстрировали, что она оказывала также воздействие на таупатологию, хотя тау-агрегаты при этом сохранялись (Oddo и др., 2004).

Определенные сомнения вызывала возможность осуществления соответствующей внутриклеточной иммунотерапии, направленной на тау-белок. Они были сняты после экспериментального исследования таупатологии на мышиной модели, проведенного в последние годы Asuni с соавторами (Asuni и др., 2007). Эти исследователи продемонстрировали снижение связанной со сплетением патологии и функциональные улучшения при вакцинации с использованием полученным из тау-белка фосфорилированного пептида (фосфо-пептид). Эти данные согласуются с опубликованными результатами иммунотерапии, направленной на α-синуклеин, которые были получены ранее на модели болезни Паркинсона (PD) (Masliah и др., 2005), и на супероксиддисмутазу, которые были получены на модели амиотрофического бокового склероза (ALS) (Urushitiani и др., 2007). Эти два заболевания являются примерами болезней, связанных с внутриклеточными белками, которые приводят к нейродегенерации в результате действия пока не полностью изученных механизмов. С другой стороны, полноразмерный рекомбинантный тау-белок, который продуцируется бактериями, и который выделяют из них, по-видимому, не пригоден в качестве вакцины, хотя возможно, что применяемые адъюванты, т.е. полный адъювант Фрейнда и коклюшевый токсин, могли оказывать влияние на отрицательный результат, полученный в этом исследовании (Rosenmann и др., 2006).

Существует выраженная потребность в разработке пассивной и/или активной иммунотерапии, которая могла бы противостоять действию патологических белковых конформеров, которые, как известно или как предполагается, вызывают нейродегенеративные нарушения, такие как амилоидная патология при AD, вызываемая, например, внутринейронными агрегатами гиперфосфорилированного тау-белка, которая столь же типична для AD, что и амилоидная патология.

Существующую выраженную потребность можно удовлетворить согласно настоящему изобретению путем разработки методов пассивной или активной иммунизации с использованием вакцин на основе липосом (Nicolau и др., 2002; Muhs и др., 2007) и МАт на основе фосфо-пептидов, имитирующих основные патологические фосфо-эпитопа тау-белка. Эти комбинированные действия позволяют создавать новые специфические МАт к линейным и конформационным простым и сложным фосфо-эпитопам тау-белка, которые, вероятно, ответственны за синапто- и нейротоксичность при таупатологиях, включая AD.

В настоящем изобретении предложены новые способы и антигенные пептиды, предлагаемые в изобретении и представленные в настоящем описании, и их функциональные фрагменты, включая композиции, которые содержат указанные антигенные пептиды или их фрагменты, предназначенные для получения высокоспецифического, прежде всего обладающего конформационной специфичностью, иммунного ответа в организме, но, прежде всего в организме животного, в частности млекопитающего или человека, которые обладают высокой эффективностью и обладают способностью предупреждать или облегчать таупатии или симптомы, ассоциированные с таупатиями, группой заболеваний и нарушений, который ассоциированы с образованием нейрофибриллярных повреждений, основной патологии головного мозга в этой группе нейродегенеративных нарушений.

Настоящее изобретение относится также к антителам, прежде всего моноклональным антителам, включая их функциональные фрагменты, и фармацевтическим композициям, которые содержат указанные антитела, образовавшиеся в результате высокоспецифического, прежде всего обладающего конформационной специфичностью, иммунного ответа в организме при введении антигенного пептида, предлагаемого в изобретении и представленного в настоящем описании, или его функционального фрагмента и композиции, которая содержит указанный антигенный пептид или его фрагмент, для предупреждения или облегчения таупатии или симптомов, ассоциированных с таупатиями, группой заболеваний и нарушений, который ассоциированы с образованием нейрофибриллярных повреждений, основной патологии головного мозга в этой группе нейродегенеративных нарушений.

Указанную группу нейродегнеративных нарушений можно подразделять на две субкатегории. К первой категории относятся заболевания или нарушения, которые характеризуются одновременным существованием тау- и амилоидной патологии, включая (но, не ограничиваясь только ими) болезнь Альцгеймера, болезнь Крейцфельдта-Якоба, боксерскую деменцию, синдром Дауна, болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозит с тельцами включения, церебральную амилоидную ангиопатию, связанную с белком-прионом, и травматическое повреждение головного мозга.

Ко второй категории относятся заболевания или нарушения без четкой амилоидной патологии, включая (но, не ограничиваясь только ими) комплекс амиотрофический боковой склероз/паркинсонизм-деменция (синдром Гуама), деменцию, связанную с накоплением аргирофильных зерен, кортикобазальную дегенерацию, диффузные нейрофибриллярные сплетения с кальцификацией, фронтотемпоральную деменцию с паркинсонизмом, сцепленную с хромосомой 17, болезнь Галлервордена-Шпатца, множественную системную атрофию, болезнь Ниманна-Пика типа С, болезнь Пика, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий супрануклеарный панэнцефалит (прогрессирующий краснушный паралич).

В частности, настоящее изобретение относится к новым способам и фармацевтическим композициям, которые содержат антигенные пептиды, предлагаемые в изобретении и представленные в настоящем описании, или их функциональные фрагменты, и антитела, прежде всего моноклональные антитела, включая их функциональные фрагменты, которые можно получать путем введения антигенных пептидов, предлагаемых в изобретении и представленных в настоящем описании, или их функциональных фрагментов животному-хозяину для восстановления или улучшения, но, прежде всего для полного восстановления когнитивной способности к запоминанию, у млекопитающего, прежде всего у человека, который страдает заболеванием или нарушением, ассоциированным с образованием нейрофибриллярных повреждений.

Таким образом, объектом изобретения является антигенный пептид, прежде всего модифицированный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, и фармацевтические композиции, которые содержат указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где пептид можно получать из тау-белка. В частности, изобретение относится к антигенному пептиду, прежде всего антигенному фосфо-пептиду или его функциональному фрагменту, имитирующему основной патологический фосфо-эпитоп тау-белка, где пептид или его фрагмент дополнительно модифицирован путем его присоединения к носителю или реконструкции в носителе, к фармацевтической композиции, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, и к способу получения указанного пептида или его функционального фрагмента и фармацевтической композиции соответственно, для лечения заболеваний и нарушений, которые вызываются или ассоциированы с образованием нейрофибриллярных повреждений, основной патологии головного мозга при таупатии, которые представляют собой гетерогенную группу нейродегенеративных заболеваний или нарушений, включая заболевания или нарушения, которые характеризуются одновременным наличием тау- и амилоидной патологии, включая (но, не ограничиваясь только ими) болезнь Альцгеймера, болезнь Крейцфельдта-Якоба, боксерскую деменцию, синдром Дауна, болезнь Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, миозит с тельцами включения, церебральную амилоидную ангиопатию, связанную с белком-прионом, травматическое повреждение головного мозга, а также другие заболевания или нарушения без четкой амилоидной патологии, включая (но, не ограничиваясь только ими) комплекс амиотрофический боковой склероз/паркинсонизм-деменция (синдром Гуама), не-гуамовского типа болезнь моторных нейронов, связанную с нейрофибриллярными сплетениями, деменцию, связанную с накоплением аргирофильных зерен, кортикобазальную дегенерацию, диффузные нейрофибриллярные сплетения с кальцификацией, фронтотемпоральную деменцию с паркинсонизмом, сцепленную с хромосомой 17, болезнь Галлервордена-Шпатца, множественную системную атрофию, болезнь Ниманна-Пика типа С, болезнь Пика, прогрессирующий субкортикальный глиоз, прогрессирующий супрануклеарный панэнцефалит, подострый склерозирующий панэнцефалит, деменцию, связанную только со сплетениями, постэнцефалический паркинсонизм, миотоническую дистрофию.

Один из вариантов осуществления изобретения относится к антигенному пептиду или его функциональному фрагменту и фармацевтическим композициям, которые содержат указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где пептид или фрагмент содержит от 5 аминокислотных остатков до 30 аминокислотных остатков, прежде всего от 10 аминокислотных остатков до 25 аминокислотных остатков, прежде всего от 12 аминокислотных остатков до 22 аминокислотных остатков, прежде всего от 14 аминокислотных остатков до 20 аминокислотных остатков, прежде всего от 16 аминокислотных остатков до 18 аминокислотных остатков соответственно, аминокислотной последовательности, выбранной из группы последовательностей, которые представлены в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9, где характерной особенностью этих последовательностей является схема фосфорилирования, ассоциированная с патологическим состоянием или нарушением, прежде всего с состоянием или нарушением, ассоциированным с образованием нейрофибриллярных повреждений.

Одним из вариантов осуществления настоящего изобретения является молекула нуклеиновой кислоты или ее фрагменты, кодирующая(ие) антигенный пептид или его функциональный фрагмент, выбранный из группы последовательностей, которые представлены в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 2, где аминокислотный остаток, соответствующий аминокислотному остатку 18 (P-Tyr₁₈) SEQ ID NO: 2, является фосфорилированным (Т1).

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 2, в которой аминокислотный остаток 18 (P-Tyr₁₈) является фосфорилированным (Т1).

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4 соответственно, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 3, где по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2, предпочтительно по меньшей мере 3, но наиболее предпочтительно все аминокислотные остатки, соответствующие аминокислотным остаткам 202 (P-Ser₂₀₂), 205 (Р-Thr₂₀₅), 212 (P-Thr₂₁₂) и 214 (Р-Ser₂₁₄) SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно, являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4 соответственно, в которых по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2, предпочтительно по меньшей мере 3, но наиболее предпочтительно все аминокислотные остатки 202 (P-Ser₂₀₂), 205 (P-Thr₂₀₅), 212 (P-Thr₂₁₂) и 214 (Р-Ser₂₁₄) являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 4, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 4, где по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2 аминокислотных остатка, соответствующих аминокислотным остаткам 202 (P-Ser₂₀₂) и 205 (Р-Thr₂₀₅) SEQ ID NO: 4, являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 4, в которой по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2 аминокислотных остатка 202 (Р-Ser₂₀₂) и 205 (Р-Thr₂₀₅) являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 3, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 3, где по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2 аминокислотных остатка, соответствующих аминокислотным остаткам 212 (Р-Thr₂₁₂) и 214 (P-Ser₂₁₄) SEQ ID NO: 3, являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 3, в которой по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2 аминокислотных остатка 212 (Р-Thr₂₁₂) и 214 (P-Ser₂₁₄) являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 5, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 5, где по меньшей мере один, но предпочтительно все аминокислотные остатки, соответствующие аминокислотным остаткам 396 (Р-Ser₃₉₆) и 404 (P-Ser₄₀₄) SEQ ID NO: 5, являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 5, в которой по меньшей мере один, но предпочтительно все аминокислотные остатки 396 (Р-Ser₃₉₆) и 404 (P-Ser₄₀₄) являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 6, где по меньшей мере один, но предпочтительно все аминокислотные остатки, соответствующие аминокислотным остаткам 404 (P-Ser₄₀₄) и 409 (P-Ser₄₀₉) SEQ ID NO: 6, являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 6, в которой по меньшей мере один, но предпочтительно все аминокислотные остатки 404 (P-Ser₄₀₄) и 409 (P-Ser₄₀₉) являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 7, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 7, где по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2, предпочтительно по меньшей мере 3, но предпочтительно все аминокислотные остатки, соответствующие аминокислотным остаткам 202 (P-Ser₂₀₂), 205 (Р-Thr₂₀₅), 212 (P-Thr₂₁₂) и 214 (P-Ser₂₁₄) SEQ ID NO: 7, являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 7, в которой по меньшей мере один, предпочтительно по меньшей мере 2, предпочтительно по меньшей мере 3, но предпочтительно все аминокислотные остатки 202 (Р-Ser₂₀₂), 205 (Р-Thr₂₀₅), 212 (P-Thr₂₁₂) и 214 (P-Ser₂₁₄) SEQ ID NO: 7 являются фосфорилированными.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 8, где аминокислотный остаток, соответствующий аминокислотному остатку 409 (P-Ser₄₀₉) SEQ ID NO: 8, является фосфорилированным.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 8, в которой аминокислотный остаток, соответствующий аминокислотному остатку 409 (Р-Ser₄₀₉) SEQ ID NO: 8, является фосфорилированным.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента идентична по меньшей мере на 80%, предпочтительно по меньшей мере на 85%, предпочтительно по меньшей мере на 90%, предпочтительно по меньшей мере на 95%, предпочтительно по меньшей мере на 98%, предпочтительно по меньшей мере на 99%, последовательности, представленной в SEQ ID NO: 9, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанный антигенный пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 9, где аминокислотный остаток, соответствующий аминокислотному остатку 404 (P-Ser₄₀₄) SEQ ID NO: 9, является фосфорилированным.

Одним из вариантов осуществления изобретения является антигенный пептид, прежде всего антигенный пептид, модифицированный согласно настоящему изобретению, или его функциональный фрагмент и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где аминокислотная последовательность пептида или фрагмента представлена в SEQ ID NO: 9, в которой аминокислотный остаток, соответствующий аминокислотному остатку 404 (Р-Ser₄₀₄) SEQ ID NO; 9, является фосфорилированным.

Настоящее изобретение относится также к антигенному пептиду, модифицированному согласно настоящему изобретению, или его функциональному фрагменту и к фармацевтическим композициям, которые содержат указанный модифицированный антигенный пептид или его функциональный фрагмент, где пептид практически идентичен указанным выше антигенным пептидам, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 2-9, и обладает практически такой же иммуногенной активностью, что и указанные антигенные пептиды, последовательности которых представлены в SEQ ID NO: 2-9, но конкретный вариант пептидного фрагмента представляет собой консервативно модифицированный вариант одного из указанных фрагментов, при этом изменения приводят к замене одной или нескольких аминокислот, предпочтительно от 1 до 10 аминокислот, более предпочтительно от 1 до 6 аминокислот, еще более предпочтительно от 1 до 4 аминокислот, но наиболее предпочтительно от 1 до 3 аминокислот, на химически сходную аминокислоту. Таблицы консервативных замен, приводящих к получению функционально сходных аминокислот, хорошо известны в данной области и представлены ниже в настоящем описании. Консервативные замены предпочтительно следует осуществлять таким образом, чтобы общий чистый заряд пептида, а также распределение заряда по молекуле пептида, оставались практически прежними.

Под объем настоящего изобретения подпадает также вариант пептидного фрагмента, предпочтительно вариант антигенного пептида, модифицированного согласно настоящему изобретению, и фармацевтическая композиция, которая содержит указанный вариант пептидного фрагмента, где пептид практически идентичен указанным выше фрагментам, предлагаемым в изобретении, и обладает практически такой же биологической активностью, что и указанные фрагменты, при этом в нем один или несколько аминокислотных остатков удалены в результате делеции.

Следующим вариантом изобретения является пептид, предлагаемый в изобретении, или его функциональный фрагмент в форме полимера, выбранного из группы, включающей 2-мер, 3-мер, 4-мер, 5-мер, 6-мер, 7-мер, 8-мер, 9-мер, 10-мер, 11-мер, 12-мер, 13-мер, 14-мер, 15-мер, 16-мер, 20-мер, 30-мер и 50-мер, при этом мономерные единицы указанного полимера всегда идентичны или представляют собой различные мономерные единицы и выбраны из группы, включающей пептид, предлагаемый в изобретении и представленный в настоящем описании, предпочтительно пептид, последовательность которого представлена в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9, или его функциональный фрагмент и варианты пептидов.

В одном из вариантов осуществления изобретения антигенный пептид, предлагаемый в изобретении и представленный в настоящем описании, или его функциональный фрагмент модифицируют путем присоединения к носителю или реконструкции в носителе, прежде всего носителе, который также функционирует в качестве адъюванта, с получением надмолекулярной антигенной конструкции. В конкретном варианте осуществления изобретения антигенный пептид, предлагаемый в изобретении и представленный в настоящем описании, или его функциональный фрагмент модифицируют путем присоединения или реконструкции в липосоме, например, с получением «надмолекулярной антигенной конструкции», которая описана в опубликованной международной заявке на патент WO 2005/081872, описание которой полностью включено в настоящее описании в качестве ссылки. Антигенный пептид или его функциональный фрагмент дополнительно модифицируют таким образом, чтобы он обладал способностью к уникальной презентации антигенного пептида на поверхности носителя, что приводит к повышенной экспозиции антигена и, в конце концов, к созданию антител, которые отличаются высокой степенью конформационной чувствительности. В частности, антигенный пептид, предлагаемый в изобретении и представленный в настоящем описании, модифицируют посредством ассоциации с липофильным или гидрофобным фрагментом, что облегчает встраивание в липидный бислой липосомы-носителя/иммунного адъюванта, прежде всего с липофильным или гидрофобным фрагментом, который функционирует в качестве «якоря» для закрепления пептида в бислое липосомы и имеет размер, который обеспечивает расположение пептида в непосредственной близости от поверхности липосомы и стабилизирует его в таком положении.

В другом варианте осуществления изобретения липофильный или гидрофобный остаток представляет собой жирную кислоту, триглицерид или фосфолипид, прежде всего жирную кислоту, триглицерид или фосфолипид, которые содержат углеродную C₁₂-C₂₄-цепь, но наиболее предпочтительно представляет собой пальмитиновую кислоту.

В конкретном варианте осуществления изобретения антигенный пептид, предлагаемый в изобретении и представленный в настоящем описании, или его функциональный фрагмент модифицируют с помощью по меньшей мере двух молекул пальмитиновой кислоты, ковалентно связанных с N- и С-концами указанного антигенного пептида или его функционального фрагмента, или путем реконструкции в носителе, представляющем собой липосому.

В одном из вариантов осуществления изобретения каждый из пептидов или фрагментов в конъюгатах сшит с четырьмя молекулами пальмитиновой кислоты; в результате они являются тетрапальмитированными.

В одном из вариантов осуществления изобретения две молекулы пальмитиновой кислоты сшивают с N-концом и две молекулы пальмитиновой кислоты сшивают с С-концом пептида или фрагмента.

В дополнительном варианте осуществления настоящего изобретения антигенный пептид, предлагаемый в изобретении и представленный в настоящем описании, или его функциональный фрагмент модифицируют посредством ассоциации с липофильным или гидрофобным фрагментом, таким, например, как пальмитиновая кислота, и реконструируют в липосоме, при этом препарат в виде липосомы может содержать также адъюванты, такие, например, как липид А,