Композиция для лечения рака предстательной железы

Композиция для лечения рака предстательной железы

Реферат

Настоящее изобретение относится к активной (иммуностимулирующей) композиции, включающей по крайней мере одну РНК, предпочтительно мРНК, кодирующую по крайней мере два (предпочтительно различных) антигена, способных индуцировать (приобретенный) иммунный ответ у млекопитающего, причем антигены выбирают из группы, включающей простат-специфический антиген (ПСА), простат-специфический мембранный антиген (ПСМА), антиген стволовых клеток предстательной железы (АСКП) и шестой трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы (ШТЭАП). Настоящее изобретение, кроме того, относится к вакцине, включающей указанную активную (иммуностимулирующую) композицию, а также к применению указанной активной (иммуностимулирующей) композиции (для получения вакцины) и/или вакцины для индуцирования (приобретенного) иммунного ответа для лечения рака предстательной железы (РПЖ), предпочтительно неоадъювантно- и/или гормонорезистентного рака предстательной железы, а также родственных заболеваний или нарушений. Наконец, настоящее изобретение относится к наборам, прежде всего, к наборам компонентов, включающим активную (иммуностимулирующую) композицию и/или вакцину.

В настоящее время рак предстательной железы является вторым из наиболее часто диагностированных типов рака и четвертой из наиболее распространенных причин связанного с раком летального исхода у мужчин в развитых странах всего мира. Способы терапевтического лечения недостаточно эффективны, и в настоящее время лечению поддается только локализованное заболевание. Установлено, что при гормонорезистентном раке предстательной железы существующие агенты продлевают жизнь на период не более приблизительно 1 год (см., например, Pavlenko M., Roos A.K. и др., «A phase I trial of DNA vaccination with a plasmid expressing prostate-specific antigen in patients with hormone-refractory prostate cancer», Br. J. Cancer, 91 (4), cc.688-694 (2004)). В некоторых высоко развитых западных странах, таких как Соединенные Штаты Америки, в настоящее время рак предстательной железы является даже наиболее часто диагностированной злокачественной опухолью и третьей из самых распространенных причин связанного с раком летального исхода среди мужчин в Соединенных Штатах (см., например, Jemal A., Siegel R. и др., «Cancer statistics, 2006», СА Cancer J. Clin., 56 (2), cc.106-130 (2006)) и в Европе, соответственно (см., например, Thomas-Kaskel A.K., Waller С.F. и др., «Immunotherapy with dendritic cells for prostate cancer». Int. J. Cancer, 121 (3), cc.467-473 (2007)). Большинство диагностированных опухолей представляют собой аденокарциномы, которые сначала пролиферируют гормонозависимым способом.

Рак предстательной железы развивается в предстательной железе, железе мужской репродуктивной системы. Он развивается, когда клетки предстательной железы подвергаются мутациям и начинают бесконтрольно размножаться. Было установлено, что типичные антигены, сверхэкспрессируемые клетками рака предстательной железы по сравнению с нормальными аналогами, представляют собой, в том числе антигены, такие как ПСА, ПСМА, РАР, АСКП, HER-2 и Ер-САМ. Указанные клетки рака предстательной железы распространяются (метастазируют) из предстательной железы в другие отделы организма, прежде всего, в костную ткань и лимфатические узлы. Рак предстательной железы вызывает боль, затруднение при мочеиспускании, эректильную дисфункцию и другие симптомы. Обычно рак предстательной железы развивается в большинстве случаев у мужчин старше пятидесяти лет, которые представляют собой наиболее распространенную группу пациентов. Однако наиболее часто рак предстательной железы не диагностируется, даже если его выявление возможно. Диагностику рака предстательной железы обычно проводят при физическом осмотре или по результатам анализов крови, таких как анализ на простат-специфический антиген (ПСА). При подозрении на рак предстательной железы диагноз рака обычно подтверждают при удалении кусочка предстательной железы (биопсии) и проведении его анализа под микроскопом. Для определения распространения рака предстательной железы можно проводить другие исследования, такие как рентгенография и остеосцинтиграфия.

Лечение рака предстательной железы все еще остается нерешенной проблемой. Для лечения рака предстательной железы можно использовать стандартные методы лечения, такие как хирургия, лучевая терапия, гормональная терапия, периодически проводимая химиотерапия, протонная терапия или некоторые комбинации указанных способов лечения. Однако при определении исхода заболевания важную роль играют возраст и общее состояние здоровья мужчины, а также степень распространения, внешние признаки, наблюдаемые под микроскопом, а также ответная реакция рака на начальное лечение. В связи с тем, что рак предстательной железы является заболеванием, которое обычно диагностируют у мужчин пожилого возраста, многие умирают вследствие других причин до распространения медленно прогрессирующего рака предстательной железы или проявления симптомов, что приводит к трудностям при выборе лечения. Решение о лечении локализованного рака предстательной железы (опухоли, которая присутствует в предстательной железе) с направленным на излечение вмешательством или об отказе от него принимают пациенты, выбирая между ожидаемыми пользой и отрицательными действиями, которые могут снизить продолжительность жизни и качество жизни.

Однако все указанные выше способы лечения, такие как хирургия, лучевая терапия, гормональная терапия и химиотерапия и т.п., характеризуются серьезными ограничениями. Например, хирургическое удаление предстательной железы, или простатэктомия, является распространенным способом лечения первичного рака предстательной железы, а также рака, который не поддается лечению лучевой терапией. Хирургическое удаление может вызвать повреждение нерва, что значительно ухудшает качество жизни. Наиболее распространенными серьезными осложнениями являются потеря контроля над мочеиспусканием и импотенция. Однако даже при удачном удалении опухоли предстательной железы распространение рака предстательной железы в организме остается нерешенной проблемой.

При лечении рака предстательной железы обычно применяют лучевую терапию. Ее можно использовать вместо хирургии на ранних стадиях рака, а также на более поздних стадиях прогрессирования рака предстательной железы для лечения метастазирования, вызывающего боль в костной ткани. Лучевое лечение можно также комбинировать с гормональной терапией при заболевании средней степени тяжести, когда при применении лучевой терапии в отдельности существует меньшая вероятность излечения рака. Однако лучевая терапия также характеризуется высоким риском и в большинстве случаев приводит к полной потере иммунной защиты вследствие разрушения иммунной системы пациента. Кроме того, лучевую терапию обычно применяют локально на участке роста опухоли и, таким образом, нельзя исключить вероятность распространения рака предстательной железы в организме. При систематическом применении лучевая терапия может привести к тяжелым повреждениям клеток и иммунной системы.

Химиотерапию в течение длительного времени рассматривали в качестве менее эффективного способа лечения рака предстательной железы, так как только малая часть пациентов чувствительна к такому способу лечения. Однако на некоторых пациентов (с ответной реакцией) с диагнозом метастазирующей карциномы предстательной железы химиотерапия оказывает благоприятное действие. Доля пациентов, чувствительных к такому лечению, составляет приблизительно 20%, и, в связи с этим химиотерапия целесообразна при лечении рецидива опухоли, а также в случае неудачного применения гормональной терапии. Однако химиотерапия обычно только временно ослабляет заболевание и не приводит к полному устранению рака предстательной железы у пациента. Типичные химиотерапевтические агенты включают циклофосфамид, доксорубицин, 5-фторурацил, адриамицин, сурамин и другие агенты, однако ни один из указанных агентов не обеспечивает значительного продления жизни пациентов. Недавно в 2004 г. были опубликованы данные в New England Journal of Medicine, и было установлено, что продолжительность жизни пациентов, принимающих дозы доцетаксела каждые три недели, увеличивается в среднем на 2,5 месяца.

При гормональной терапии обычно используют лекарственные средства или комбинацию гормональной терапии и хирургии для блокирования доступа дигидротестостерона (ДГТ) в опухолевые клетки предстательной железы, гормона, продуцируемого в предстательной железе, который требуется для роста и распространения большинства опухолевых клеток предстательной железы. Блокирование ДГТ в большинстве случаев вызывает остановку роста опухоли предстательной железы, и даже уменьшение размера опухоли. Однако гормональная терапия в редких случаях излечивает рак предстательной железы, так как рак, который сначала чувствителен к действию гормональных лекарственных средств, обычно через один-два года становится резистентным. Например, паллиативное антиандрогенное лечение может вызвать ремиссию у 80% пациентов, но через 15-20 месяцев клетки опухоли становятся гормон-нечувствительными, и развивается андроген-независимый рак предстательной железы. В этом случае существует слишком мало способов лечения, например, эффективность химиотерапии ограничена (см. выше). В связи с этим, гормональную терапию обычно применяют, если рак распространяется за пределы предстательной железы. Ее также назначают некоторым мужчинам, прошедшим курс лучевой терапии или после хирургического вмешательства с целью исключить рецидив рака.

В связи с этим, существует острая необходимость в альтернативных способах лечения пациентов с обычным, а также рецидивирующим раком предстательной железы или прогрессирующим раком предстательной железы. В качестве одного подхода описанные выше стандартные способы лечения рака предстательной железы, локализованного в одном органе, включая радикальную простатэктомию или лучевую терапию, такую как внешнее излучение и близкофокусная лучевая терапия, в некоторых случаях включают также неоадъювантно- или адъювантно-гормональную терапию (см., например, Totterman T.H., Loskog А. и др., «The immunotherapy of prostate and bladder cancer», BJU Int., 96 (5), c.728-735 (2005)). Хотя указанные способы лечения являются относительно эффективными в течение короткого периода времени, у значительной части пациентов (30-40%) с исходно локализованным заболеванием в итоге наблюдается рецидив. В случае метастазирующего рака предстательной железы основным лечением является подавление андрогенов. Хотя указанное лечение обычно обеспечивает клеточную редукцию и временное ослабление заболевания, прогрессирование гормонорезистентного заболевания обычно происходит в течение 14-20 месяцев. В данной области химиотерапии проведено множество клинических испытаний лечения прогрессирующего андроген-независимого рака предстательной железы. Только недавно в ходе двух испытаний было установлено, что химиотерапия в минимальной степени продлевает жизнь пациентов с гормонорезистентным заболеванием.

В основном, описанные выше стандартные методы лечения, такие как упомянутая выше хирургия, лучевая терапия, гормональная терапия, периодически проводимая химиотерапия, протонная терапия и т.п., при использовании в отдельности, по-видимому, не пригодны для эффективного лечения рака предстательной железы (РПЖ). В связи с этим, усовершенствованный способ лечения может включать указанные способы лечения или другие способы лечения, которые могут повысить эффективность указанных стандартных методик. Таким образом, в данном контексте предполагается использовать приобретенный иммунитет в ходе основного лечения или поддерживающего лечения рака предстательной железы (РПЖ).

Как известно в данной области, иммунная система играет важную роль в лечении и профилактике многочисленных заболеваний. В настоящем уровне техники известны различные механизмы защиты организма млекопитающих за счет идентификации и уничтожения, например, опухолевых клеток. Согласно настоящему изобретению указанные опухолевые клетки необходимо детектировать и отличать от нормальных (здоровых) клеток и тканей организма.

Иммунная система позвоночных, таких как человек, включает множество типов белков, клеток, органов и тканей, которые взаимодействуют в чрезвычайно сложной динамической системе. В качестве части указанного комплексного иммунного ответа система позвоночных со временем приспосабливается более эффективно распознавать конкретные патогены или опухолевые клетки. В процессе адаптации формируется иммунологическая память и обеспечивается даже более эффективная защита в ходе следующих столкновений. Указанный адаптационный или приобретенный иммунитет создает основу для разработки стратегии вакцинации.

Приобретенный иммунитет является антиген-специфическим, т.е. специфически распознает «собственные» или «чужие» антигены в ходе процесса, называемого презентацией антигена. Антигенная специфичность обеспечивает выработку ответных реакций, которые предназначены для идентификации специфических патогенов или инфицированных патогенами клеток, или опухолевых клеток. Способность усиливать указанные специфические ответные реакции поддерживается в организме так называемыми «клетками памяти». При повторном инфицировании организма патогеном указанные специфические клетки памяти используются для быстрого уничтожения патогена. В связи с этим, приобретенный иммунитет обеспечивает более сильный иммунный ответ, а также иммунологическую память, в которой каждый патоген или опухолевая клетка «запоминается» по одному или более характерных антигенов.

Главные компоненты приобретенного иммунитета у позвоночных предпочтительно включают на клеточном уровне лимфоциты, а на молекулярном уровне - антитела. Лимфоциты в качестве клеточных компонентов приобретенного иммунитета включают В-клетки и Т-клетки, которые образуются из кроветворных стволовых клеток костного мозга. В-клетки принимают участие в гуморальном ответе, в то время как Т-клетки вовлечены в опосредованный клетками иммунный ответ. В-клетки и Т-клетки включают рецепторные молекулы, которые распознают специфические мишени. Т-клетки распознают «чужую» мишень, такую как патогенная структура-мишень, только после процессинга и презентации антигенов (например, небольших фрагментов патогена) в комбинации с «собственным» рецептором, называемым молекулой главного комплекса гистосовместимости (ГКГ). И наоборот, антиген-специфический рецептор В-клеток представляет собой молекулу антитела на поверхности В-клеток и распознает патогены как таковые, когда антитела на поверхности В-клеток связываются со специфическим чужеродным антигеном. Указанный комплекс антиген/антитело поглощается В-клеткой и подвергается протеолизу (процессингу), при этом образуются пептиды. Затем В-клетка презентирует указанные антигенные пептиды на поверхности молекулы ГКГ класса II. Указанная комбинация ГКГ и антигена притягивает соответствующую Т-клетку-хелпер, которая высвобождает лимфокины и активирует В-клетку. Затем активированная В-клетка начинает делиться, ее потомок секретирует миллионы копий антитела, которое распознает указанный антиген. Указанные антитела циркулируют в плазме крови и лимфе, связываются с патогенами или опухолевыми клетками, экспрессирующими антиген, и маркируют их для деструкции при активации комплемента или для поглощения и деструкции фагоцитами. Цитотоксические Т-клетки (CD8⁺) в качестве клеточного компонента приобретенного иммунитета также индуцируют ответ цитотоксических Т-лимфоцитов (ЦТЛ). Цитотоксические Т-клетки (CD8⁺) распознают пептиды из эндогенных патогенов и собственные антигены, связанные с молекулами ГКГ типа I. CD8⁺ Т-клетки выполняют киллерную функцию за счет высвобождения цитотоксических белков в клетку.

Таким образом, механизмы иммунной системы могут формировать мишени для эффективного лечения различных заболеваний. Соответствующие способы обычно основаны на введении адъювантов для индуцирования врожденного иммунитета или на введении антигенов или иммуногенов для индуцирования приобретенного иммунного ответа. Поскольку антигенами обычно являются специфические компоненты патогенов (например, поверхностные белки) или их фрагменты, можно также вводить пациенту нуклеиновые кислоты с последующей экспрессией требуемых полипептидов, белков или антигенов.

Например, результаты клинических испытаний вакцинации, основанной на известных антигенах, связанных с предстательной железой, проведенных группой Noguchi и др. в 2003 г. и 2004 г. (см., например, статьи Noguchi M., Itoh K. и др., «Phase I trial of patient-oriented vaccination in HLA-A2-positive patients with metastatic hormone-refractory prostate cancer», Cancer Sci., 95 (1), cc.77-84 (2004) и Noguchi M., Kobayashi K. и др., «Induction of cellular and humoral immune responses to tumor cells and peptides in HLA-A24 positive hormone-refractory prostate cancer patients by peptide vaccination». Prostate, 57 (1), cc.80-92 (2003)), которые проводили в две фазы I с использованием мультипептидной вакцины с участием пациентов с метастазирующим гормонорезистентным раком предстательной железы, показали, что в ходе лечения наблюдается как повышенный клеточный, так и гуморальный иммунный ответ на выбранные мишени. Вакцинация безопасна, характеризуется достаточно высокой переносимостью и отсутствием значительного токсического действия. Однако при этом наблюдается также стабилизация или снижение концентраций простат-специфического антигена (ПСА) и только у одного пациента наблюдалось исчезновение метастаз в костной ткани. Главное ограничение указанного подхода, которое вызывает проблемы при его применении в клинике, заключается в необходимости получения предварительной информации о гаплотипе антиген-лейкоцитов человека (АЛЧ), а также об экспрессии пептидов опухолевыми клетками предстательной железы.

В некоторых других недавно разработанных подходах используют вакцинацию на основе клеток, например, для вакцинации используют различные антигены или используют дендритные клетки, нагруженные различными антигенами или их фрагментами. Например, описаны клинические испытания вакцинации пациентов с диагнозом рака предстательной железы аутологическими дендритными клетками, нагруженными импульсным рекомбинантным ПСА человека (см., например, Barrou В., Benoit G. и др., «Vaccination of prostatectomized prostate cancer patients in biochemical relapse, with autologous dendritic cells pulsed with recombinant human PSA», Cancer Immunol. Immunother., 53 (5), cc.453-460 (2004)). При вакцинации пациентов с диагнозом прогрессирующего рака предстательной железы дендритными клетками, нагруженными пептидами АСКП и ПСА, у 5-10 пациентов вырабатывается иммунный ответ по крайней мере на один антиген (см., например, Thomas-Kaskel А.K., Zeiser R. и др., «Vaccination of advanced prostate cancer patients with PSCA and PSA peptide-loaded dendritic cells induces DTH responses that correlate with superior overall survival». Int. J. Cancer, 119(10), c.2428-2434 (2006)).

Другим примером является вакцинация пациентов с диагнозом рака предстательной железы, проведенная группой Murphy и др. (1996), в соответствующей клинической фазе I с использованием двух эпитопов ПСМА HLA-A*0201S по сравнению с вакцинацией пептидом в отдельности или с использованием импульсных ДК. Результаты свидетельствуют о том, что в случае вакцинации импульсными ДК ответ наблюдается у большинства пациентов. В результате указанных испытаний было установлено, что вакцинация ДК, нагруженными пептидами или белками, вызывает по крайней мере частично, детектируемый иммунный ответ, а также временное снижение или стабилизацию АСКП (см., например, Murphy G., Tjoa В. и др., «Phase I clinical trial: T-cell therapy for prostate cancer using autologous dendritic cells pulsed with HLA-A0201-specific peptides from prostate-specific membrane antigen», Prostate, 29 (6), cc.371-380 (1996)).

Вакцинацию пациентов с диагнозом рака предстательной железы можно также проводить с использованием комбинаций пептидов, которыми нагружают дендритные клетки, например, с использованием дендритных клеток, нагруженных смесью пептидов (см., например, Fuessel S., Meye А. и др., «Vaccination of hormone-refractory prostate cancer patients with peptide cocktail-loaded dendritic cells: results of a phase I clinical trial». Prostate, 66 (8), cc.811-821 (2006)). Смесь включает пептиды ПСА, ПСМА, сурвивина, простеина и Trp-p8 (транзиторный рецепторный потенциал р8). Клинические испытания проводили также с использованием основанной на дендритных клетках мультиэпитопной иммунотерапии гормонорезистентной карциномы предстательной железы (см., например, Waeckerle-Men Y., Uetz-von Allmen E. и др., «Dendritic cell-based multi-epitope immunotherapy of hormone-refractory prostate carcinoma». Cancer Immunol. Immunother., 55 (12), cc.1524-1533 (2006)), а также проводили испытания вакцинации против гормонорезистентной карциномы предстательной железы пептидами АСКП, простатической кислой фосфатазой (ПКФ), ПСМА и ПСА.

Хотя вакцинация антигенными белками или пептидами, например, которыми нагружены дендритные клетки, является стандартным способом индуцирования иммунного ответа, для включения требуемой генетической информации в клетку в основе иммунизации или вакцинация можно также использовать нуклеиновые кислоты. В основном, для введения нуклеиновых кислот разработаны различные способы, такие как кальций-фосфатная трансфекция, полипреновая трансфекция, слияние протопластов, электропорация, микроинъекция и липофекция, причем было установлено, что пригодным способом, прежде всего, является липофекция.

В качестве одного примера можно привести способ лечения рака предстательной железы при вакцинации, основанной на трансфекции дендритных клеток общей РНК, полученной из аутологической опухоли (см., например, Heiser A., Coleman D. и др., «Autologous dendritic cells transfected with prostate-specific antigen RNA stimulate CTL responses against metastatic prostate tumors», J. Clin. Invest., 109 (3), cc.409-417 (2002)). Преимущество указанной стратегии заключается в использовании в качестве мишени многочисленных специфических опухоль-ассоциированных антигенов (ОАА) АЛЧ класса I и класса II у пациентов без проведения предварительного типирования АЛЧ. Кроме того, в качестве мишеней в данной стратегии можно использовать даже стромальные антигены, так как мРНК получают из хирургических образцов, а не из опухолевых клеточных линий. Например, группой Heiser и др. разработана методика иммунотерапии на основе ДК, которые трансфектируют мРНК, кодирующей ПСА. Вакцинация характеризуется достаточно высокой переносимостью и индуцирует повышенный Т-клеточный ответ на ПСА. Однако указанные вакцины на основе ДК против рака предстательной железы, по-видимому, генерируют значительный Т-клеточный ответ, который может сопровождаться клинической ответной реакцией, хотя частота регистрации таких симптомов все еще остается неудовлетворительной.

В стратегии вакцинации для включения требуемой генетической информации в клетку в качестве нуклеиновой кислоты можно также использовать ДНК. В конкретном примере в качестве носителя ДНК используют вирусную ДНК. Благодаря своим инфекционным свойствам, указанные вирусы характеризуются чрезвычайно высокой скоростью трансфекции. Используемые вирусы обычно генетически модифицируют таким образом, чтобы в трансфектированной клетке не образовались функциональные инфекционные частицы. Например, клинические испытания в фазе I проводили с использованием рекомбинантного вируса коровьей оспы, экспрессирующего ПСА. Авторами было установлено, что наблюдается Т-клеточный иммунный ответ на ПСА, а также стабилизация сывороточного ПСА у выбранных пациентов (см., например, Eder J.P., Kantoff P.W. и др., «A phase I trial of a recombinant vaccinia virus expressing prostate-specific antigen in advanced prostate cancer», Clin. Cancer Res., 6 (5), cc.1632-1638 (2000)). Воспалительная ответная реакция, индуцируемая высоко иммуногенными пептидами рекомбинантного вируса, может усиливать иммуногенность чужеродного белка, но было установлено, что иммунная система снижает репликацию рекомбинантного вируса и таким образом ограничивает эффективность применения в клинике. Хотя в ходе нескольких испытаний установлена иммуногенность рекомбинантных вакцин и доказана ответная реакция опухоли, указанные результаты тем не менее нуждаются в подтверждении.

Согласно другому подходу вакцинацию пациентов с диагнозом гормонорезистентного рака предстательной железы проводят плазмидными ДНК, экспрессирующими ПСА (см., например, статью Pavlenko M., Roos A.K. и др., «A phase I trial of DNA vaccination with a plasmid expressing prostate-specific antigen in patients with hormone-refractory prostate cancer», Br. J. Cancer, 91 (4), cc.688-694 (2004)). Было также установлено, что терапевтическая и профилактическая вакцинация плазмидой или вирусоподобным репликоном, кодирующим шестой трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы (ШТЭАП), увеличивает продолжительность жизни мышей с привитыми опухолями (см., например, Garcia-Hernandez Mde L., Gray А. и др., «In vivo effects of vaccination with six-transmembrane epithelial antigen of the prostate: a candidate antigen for treating prostate cancer». Cancer Res., 67 (3), cc.1344-1351 (2007)). Недавно было установлено, что ШТЭАП является белком-индикатором прогрессирующего рака предстательной железы человека и характеризуется значительной сверхэкспрессией при раке предстательной железы человека. Его функция в настоящее время еще не определена.

Хотя ДНК используют в качестве носителя генетической информации, тем не менее, нельзя исключить риск неконтролируемой репродукции введенного гена или вирусных генов, например, за счет возможной рекомбинации. В связи с этим, существует также риск, связанный с включением ДНК в интактный ген генома клетки-хозяина, например, рекомбинацией, при этом возможна мутация указанного гена, который в связи с этим полностью или частично инактивируется или содержит искаженную информацию. Другими словами, синтез генного продукта, который жизненно необходим клетке, полностью подавляется, или, в другом варианте, экспрессируется модифицированный генный продукт или генный продукт с неправильной информацией. Особый риск возникает, если ДНК внедряют в ген, который принимает участие в регуляции роста клеток. В этом случае клетка-хозяин дегенерирует, что приводит к развитию рака или образованию опухоли. Кроме того, если ДНК вводят в клетку с целью ее экспрессии, необходимо, чтобы соответствующий носитель ДНК содержал сильный промотер, такой как вирусный промотер ЦМВ. Интеграция указанных промотеров в геном обрабатываемой клетки приводит к нежелательным изменениям регуляции генной экспрессии в клетке. Другой риск использования ДНК в качестве агента для индуцирования иммунного ответа (например, в качестве вакцины) заключается в индуцировании патогенных антител против ДНК у пациента, которому введена чужеродная ДНК, что может вызвать иммунный ответ (возможно летальный).

Подводя итог, результаты описанных выше подходов, несомненно, свидетельствуют о достижении определенного прогресса в лечении рака предстательной железы (РПЖ), тем не менее при данном высоком уровне смертности, существует острая необходимость в других, альтернативных или усовершенствованных способах лечения.

В связи с этим, в настоящее время существует возможность и необходимость создания эффективной системы, которую можно использовать, чтобы обеспечить эффективную стимуляцию иммунной системы для лечения рака предстательной железы (РПЖ) и при этом исключить проблемы неконтролируемой репродукции введенного гена, вызванной ДНК в составе композиций.

В связи с этим, в объекте настоящего изобретения предлагается композиция, которая а) обеспечивает лечение РПЖ за счет стимуляции иммунной системы, в то время как б) исключаются упомянутые выше недостатки.

Объектом настоящего изобретения является, прежде всего, активная (иммуностимулирующая) композиция, включающая по крайней мере одну РНК, кодирующую по крайней мере два, три или даже четыре (предпочтительно различных) антигена, выбранных из группы, включающей следующие антигены:

- простат-специфический антиген ((ПСА), калликреин-3 (КЛК3)),

- простат-специфический мембранный антиген (ПСМА),

- антиген стволовых клеток предстательной железы (АСКП),

- шестой трансмембранный эпителиальный антиген предстательной железы (ШТЭАП).

Неожиданно было установлено, что специфическая комбинация по крайней мере двух антигенов, антигенных белков или антигенных пептидов из упомянутой выше группы, предпочтительно двух, трех или четырех указанных антигенов, антигенных белков или антигенных пептидов, в составе активной (иммуностимулирующей) композиции по настоящему изобретению, эффективно стимулирует (приобретенный) иммунитет, что позволяет лечить РПЖ, предпочтительно неоадъювантно- и/или гормонорезистентный рак предстательной железы, а также родственные заболевания или нарушения. В данном контексте термины антигены, антигенные белки или антигенные пептиды являются синонимами. В контексте настоящего изобретения активная (иммуностимулирующая) композиция по настоящему изобретению, кроме того, включает композицию, которая индуцирует иммунный ответ, предпочтительно приобретенный иммунный ответ, как определено выше, за счет действия одного компонента(ов), который содержится в активной (иммуностимулирующей) композиции или кодируется компонентами активной (иммуностимулирующей) композиции, предпочтительно по крайней мере одной РНК, предпочтительно мРНК, кодирующей по крайней мере два (предпочтительно различных) антигена.

Было установлено, что антигены, такие как ПСА, ПСМА и АСКП, сверхэкспрессируются опухолевыми клетками предстательной железы по сравнению с нормальными аналогами. В связи с этим, указанные антигены представляют собой возможные мишени для иммунотерапии (см., например, статью Marrari A., Iero M. и др., «Vaccination therapy in prostate cancer». Cancer Immunol. Immunother., 56 (4), cc.429-445 (2007)).

По крайней мере, одна РНК в составе активной (иммуностимулирующей) композиции кодирует ПСА. В контексте настоящего изобретения термин «ПСА» обозначает «простат-специфический антиген», известный в литературе также как калликреин-3 (КЛК3). ПСА является белком с молекулярной массой 33 кДа и представляет собой калликреин-подобную регулируемую андрогенами сериновую протеазу, которая продуцируется исключительно эпителиальными клетками ткани предстательной железы всех типов, доброкачественными и злокачественными. Прежде всего, ПСА экспрессируется на высоком уровне нормальными эпителиальными клетками предстательной железы и представляет собой один из наиболее характерных опухоль-ассоциированных антигенов рака предстательной железы. На физиологическом уровне ПСА присутствует в семенной жидкости при высокой концентрации и расщепляет высокомолекулярный белок, ответственный за коагуляцию семенной жидкости, с образованием более мелких полипептидов. Указанное действие приводит к разжижению коагулята. ПСА присутствует также в сыворотке и его можно определять методом моноклонального иммунорадиометрического анализа или поликлонального радиоиммуноанализа. В настоящее время ПСА является наиболее широко распространенным опухолевым маркером, используемым для анализа, диагностики и мониторинга рака предстательной железы. Прежде всего, для определения ПСА в сыворотке широкое клиническое применение находят некоторые типы иммуноанализа. Недавно разработан анализ цепной реакции полимеризации с использованием обратной транскриптазы (ОТ-ПЦР) для определения мРНК ПСА в сыворотке. Однако ПСА нельзя использовать в качестве специфического маркера заболевания, так как повышенные концентрации ПСА регистрируются у значительного процента пациентов с диагнозом гиперплазии предстательной железы (ГПЖ) и простатита (25-86%) (Gao и др.. Prostate, 31, cc.264-281 (1997)), а также при других доброкачественных нарушениях и у некоторых здоровых мужчин, что является фактором, который значительно ограничивает диагностическую специфичность указанного маркера. В контексте настоящего изобретения предпочтительная последовательность по крайней мере одной РНК, предпочтительно мРНК, кодирующей ПСА, при использовании в составе активной (иммуностимулирующей) композиции по настоящему изобретению содержит или включает последовательность, депонированную с кодом NM_001648, более предпочтительно, содержит или включает последовательность, представленную на фиг.1 (SEQ ID NO: 1), и наиболее предпочтительно по крайней мере одна РНК, кодирующая ПСА, содержит или включает кодирующую последовательность, представленную на фиг.2 или на фиг.3 (SEQ ID NO: 2 или 3). Согласно другому предпочтительному варианту по крайней мере одна РНК в составе активной (иммуностимулирующей) композиции в альтернативном или в дополнительном варианте кодирует антигенную последовательность ПСА, выбранную из фрагмента, варианта или эпитопа последовательности ПСА, депонированной с кодом NM_001648, или представленной на фиг.1, фиг.2 или фиг.3 (SEQ ID NO: 1, 2 или 3).

По крайней мере, одна РНК в составе активной (иммуностимулирующей) композиции кодирует ПСМА. В контексте настоящего изобретения термин «ПСМА» обозначает простат-специфический мембранный антиген или так называемую фолатгидролазу 1 (ФОЛГ-1) или «ПСМ». ПСМА представляет собой трансмембранный гликопротеин типа II с молекулярной массой 100 кДа, при этом экспрессия ПСМА в значительной степени ограничена тканями предстательной железы, но регистрируемые концентрации мРНК ПСМА наблюдаются в головном мозге, слюнной железе, тонкой кишке, а также в почечно-клеточной карциноме (Israeli и др., Cancer Res., 53, cc.227-230 (1993)). ПСМА на высоком уровне экспрессируется в большинстве случаев первичного и метастазирующего рака предстательной железы, но также экспрессируется в большинстве нормальных внутриэпителиальных неопластических образований (Gao и др. (1997), см. выше). Прежде всего, ПСМА на высоком уровне экспрессируется в опухолевых клетках предстательной железы и в не относящейся к предстательной железе сосудистой системе солидных опухолей, а также представляет собой мишень для визуализации рака и противораковых терапевтических агентов. ПСМА выполняет функцию глутаматкарбоксипептидазы (GCPII) при действии на низкомолекулярные субстраты, включая фолат, противораковое лекарственное средство метотрексат, а также на нейропептид N-ацетил-L-аспартил-L-глутамат. Было установлено, что при раке предстательной железы экспрессия ПСМА коррелирует с прогрессированием заболевания, при этом наиболее высокие уровни экспрессии наблюдаются при гормонорезистентном и метастазирующем заболевании. В клетках ПСМА находится в цитоплазме и/или мембранах. ПСМА считается биомаркером рака предстательной железы (РПЖ) и в настоящее время его интенсивно исследуют для применения в качестве мишени для визуализации и лечения. В контексте настоящего изобретения предпочтительная последовательность по крайней мере одной РНК, предпочтительно мРНК, кодирующей ПСМА, при использовании в составе активной (иммуностимулирующей) композиции по настоящему изобретению содержит или включает последовательность, депонированную с кодом NM_004476, более предпочтительно, содержит или включает последовательность, представленную на фиг.4 (SEQ ID NO: 4), и наиболее предпочтительно по крайней мере одна РНК, кодирующая ПСМА, содержит или включает кодирующую последовательность, представленную на фиг.5 или фиг.6 (SEQ ID NO: 5 или 6). Согласно другому предпочтительному варианту по крайней мере одна РНК в составе активной (иммуностимулирующей) композиции в альтернативном или в дополнительном варианте кодирует антигенную последовательность ПСМА, выбранную из фрагмента, варианта или эпитопа последовательности ПСМА, депонированной с кодом NM_004476, или представленной на фиг.5 или фиг.6 (SEQ ID NO: 5 или 6).

По крайней мере, одна РНК в составе активной (иммуностимулирующей) композиции кодирует АСКП. В контексте настоящего изобретения «АСКП» обозначает «антиген стволовых клеток предстательной железы». АСКП сверхэкспрессируется на всех стадиях развития рака предстательной железы, включая низкодифференцированную внутриэпителиальную неоплазию предстательной железы (PIN), андроген-зависимые и андроген-независимые опухоли предстательной железы. Ген АСКП характеризуется 30% гомологией по сравнению с антигеном-2 стволовых клеток, членом семейства Thy-I/Ly-6 антигенов, присоединенных к клеточной поверхности через гликозилфосфатидилинозит (ГФИ), и кодирует белок, содержащий 123 аминокислотных остатка, N-концевую сигнальную последовательность, C-концевую последовательность, связанную с ГФИ, а также многочисленные участки N-гликозилирования. Экспрессия мРНК АСКП в значительной степени активируется с повышением активности в андроген-зависимом и андроген-независимом ксенотрансплантатах рака предстательной железы. При проведении анализа мРНК in situ установлено, что экспрес