Способ прогнозирования течения рассеянного склероза

Способ прогнозирования течения рассеянного склероза

Реферат

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для прогнозирования средней скорости прогрессирования (ССП) рассеянного склероза (PC).

Известен способ прогнозирования течения PC, заключающийся в том, что определяют личностную тревожность по шкале тревожности Спилбергера-Ханина, при показателе личностной тревожности более 46 баллов прогнозируют злокачественное течение PC.

Однако данный способ учитывает только уровень психоневрологических изменений, не принимая во внимание изменения других неврологических функций, поэтому является субъективным. Так, тест Спилбергера-Ханина оценивает уровень личностной тревожности на момент осмотра и на результат могут повлиять объективные внешние причины.

Прототипом изобретения является методика, в которой прогноз течения заболевания базируется на исследовании крови (патент RU №2272292, МПК G01N 33/53). В соответствии с данной методикой определяют содержание в крови HLA - DR⁺ лимфоцитов и иммуноглобулина M (IgM), вычисляют индекс миграции лейкоцитов (ИМЛ) и при нахождении этих показателей после лечения в диапазоне физиологической нормы прогнозируют ремитирующее течение PC, а при отсутствии динамики содержания HLA - DR⁺ лимфоцитов, понижении ИМЛ и повышенном уровне IgM прогнозируют непрерывно-рецидивирующее течение PC.

Недостатком данного способа является отсутствие возможности прогнозирования скорости прогрессирования заболевания, что особенно важно для определения соответствующей стратегии лечения.

Предпосылкой изобретения являются имеющиеся в литературе научные данные о том, что не только предрасположенность к PC, но и особенности его течения определяются полиморфизмом генов [Полиморфизм генов HLA DR2 и генов цитокинов IL-1β, IL-1Ra и их влияние на возникновение и течение рассеянного склероза / А.В. Субботин [и др.] // Медицина в Кузбассе. - 2004. - №2. - С. 18-24].

Результатом изобретения является разработка клинико-генетического способа прогнозирования течения PC, позволяющего выделить группу риска повышенной ССП заболевания.

Указанный результат достигается в способе прогнозирования течения PC путем исследования крови, согласно заявленному изобретению из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК, далее методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллели G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и/или аллели C полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную ССП, а при обнаружении аллели A полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и/или аллели G полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют низкую ССП заболевания.

Лейкоцитарную взвесь выделяют с помощью буфера, лизирующего эритроциты.

ДНК выделяют из лейкоцитарной взвеси методом фенол-хлороформной экстракции.

Сущность изобретения иллюстрируется таблицей 1, в которой представлены результаты статистических исследований ССП у больных PC, соотнесенные с наличием полиморфных вариантов генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40).

ССП ретроспективно определяется как отношение балла по шкале EDSS (расширенная шкала нетрудоспособности) к длительности заболевания в годах. Низкой считается ССП≤0,25 баллов в год, умеренной 0,25<ССП≤0,75, высокой - ССП>0,75. Так как в результате проведенного исследования было установлено, что с умеренной и высокой ССП были ассоциированы одинаковые аллели, эти 2 группы были объединены в одну - повышенной ССП.

Была обследована группа пациентов (265 человек), которые в течение 5-7 лет наблюдаются по поводу PC. Из них у 182 пациентов наблюдается низкая средняя скорость прогрессирования заболевания (ССП≤0,25), а у 54 пациентов - повышенная (ССП≥0,25). Всем пациентам был выполнен молекулярно-генетический анализ изучаемых полиморфных локусов.

Установлено, что наследование аллели С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) и/или аллели G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) связано с повышенной ССП. Наследование аллели A полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и/или аллели G полиморфного локуса rs6074022 (CD40) связано с низкой ССП.

Полученные результаты стали основанием для рекомендации определения полиморфных вариантов этих генов для прогнозирования течения PC.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами:

Пример 1. Больная А.

У пациентки произвели забор крови из вены, выделяли лейкоцитарную взвесь с помощью буфера, лизирующего эритроциты. Затем из лейкоцитарной взвеси выделяли ДНК методом фенол-хлороформной экстракции, далее методом ПЦР в режиме реального времени определяли наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных локусах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40). Выявлена аллель C полиморфного локуса гена rs6074022 (CD40) и аллель G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα). На основании этого был сделан прогноз повышенной ССП. Спустя 3 года в процессе наблюдения определена ССП=1,75 (повышенная), что подтверждает правильность прогноза, полученного с использованием клинико-генетического способа прогнозирования.

Пример 2. Больная Б.

У пациентки произвели забор крови из вены, выделяли лейкоцитарную взвесь с помощью буфера, лизирующего эритроциты. Затем из лейкоцитарной взвеси выделяли ДНК методом фенол-хлороформной экстракции, далее методом ПЦР в режиме реального времени определяли наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных локусах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40). Выявлена аллель G полиморфного локуса гена rs6074022 (CD40) и аллель А полиморфного локуса rs1800629 (TNFα). На основании этого был сделан прогноз низкой ССП заболевания. Спустя 3 года после прогнозирования, была определена ССП=0,25 (низкая), что подтверждает правильность прогноза, полученного с использованием заявленного клинико-генетического способа прогнозирования.

Предлагаемая методика является объективной, так как генетические показатели являются статичными, и результат не зависит от влияния внешних факторов.

Разработанный клинико-генетический способ прогнозирования течения PC, позволяет выделить группу риска повышенной ССП и выработать соответствующую стратегию лечения.

1. Способ прогнозирования течения рассеянного склероза (PC) путем исследования крови, отличающийся тем, что из крови, взятой из вены, выделяют лейкоцитарную взвесь, затем из лейкоцитарной взвеси выделяют ДНК и методом ПЦР в режиме реального времени определяют наличие или отсутствие патологических аллелей в полиморфных вариантах генов rs1800629 (TNFα) и rs6074022 (CD40), причем при выявлении аллеля G полиморфного локуса rs1800629 (TNFα) и аллеля С полиморфного локуса rs6074022 (CD40) прогнозируют повышенную среднюю скорость прогрессирования рассеянного склероза.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лейкоцитарную взвесь выделяют с помощью буфера, лизирующего эритроциты.

3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что ДНК выделяют из лейкоцитарной взвеси методом фенол-хлороформной экстракции.