Лекарственное средство, предупреждающее предрак и рак простаты, фармацевтическая композиция, активный ингредиент фармацевтической композиции и способ химиопрофилактики рака простаты

Лекарственное средство, предупреждающее предрак и рак простаты, фармацевтическая композиция, активный ингредиент фармацевтической композиции и способ химиопрофилактики рака простаты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области медицины, именно, к онкоурологии и может быть использовано для предупреждения предрака и рака простаты у мужчин с помощью лекарственных препаратов, полученных из растительного сырья.

Рак предстательной железы (РПЖ) в мире занимает 2-е место среди онкологических заболеваний у мужчин [Parkin D.M., Bray F., Ferlay J., Pisani P. Global cancer statistics, 2002// CA Cancer J.Clin. - 2005. - Vol.55. - P.74-108]. В целом, на протяжении всей жизни каждому шестому мужчине будет поставлен диагноз РПЖ, а около 3% мужчин имеют шанс умереть от РПЖ [Имянитов Е.Н. Эпидемиология и биология рака простаты// Практическая онкология. - 2008. - Т.9, №2. - С.57-64]. Предшественником инвазивного РПЖ является предраковая патология - простатическая интраэпителиальная неоплазия (ПИН), которая характеризуется дисплазией и гиперплазией эпителиальных клеток, выстилающих ацинусы и протоки простаты [Epstein J.I. Precursor lesions to prostatic adenocarcinoma // Virchows Arch. - 2009. - Vol.454. - P.1-16].

На сегодняшний день в онкологии сложилась ситуация, при которой очаги предрака и рака простаты могут быть выявлены у большого числа практически здоровых мужчин. Особенность РПЖ, в отличие от большинства других опухолей, заключается в длительном латентном (индолентном) течении заболевания. Число мужчин, имеющих РПЖ, значительно превышает число диагностированных случаев. По данным аутопсии мужчин, умерших от разных причин, в возрасте 50 лет раковые клетки в ткани простаты обнаруживают в 15-30% случаев, в возрасте 60 лет - в 30-40% случаев, в возрасте 80 лет - в 60-75% случаев [Болезни предстательной железы/ Под ред. Ю.Г.Аляева. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 240 с., Воробьев А.В., Крживицкий П.И. Перспективы профилактики, диагностика и стадирование рака предстательной железы // Практическая онкология. - 2008. - Т.9, №2. - С.71-82]. Частота обнаружения ПИН, по данным аутопсии или биопсий простаты, также является очень высокой у здоровых мужчин и возрастает с увеличением возраста [Epstein J.I. Precursor lesions to prostatic adenocarcinoma // Virchows Arch. - 2009. - Vol.454. - P.1-16]. Теоретически все мужчины, имеющие очаги ПИН и микроочаги РПЖ, в итоге могут заболеть агрессивным раком простаты. В связи с высокой распространенностью ПИН и индолентного РПЖ в популяции здоровых мужчин, а также с учетом наблюдаемого во многих странах мира быстрых темпов роста заболеваемости и смертности от РПЖ [Parkin D.M., Bray F., Ferlay J., Pisani P. Global cancer statistics, 2002 // CA Cancer J.Clin. - 2005. - Vol.55. - P.74-108], проблема профилактики рака простаты является особенно актуальной.

Уровень сегодняшних знаний о канцерогенезе простаты, позволяет утверждать, что химиопрофилактика РПЖ показана большой части популяции мужчин, и начинать химиопрофилактику следует с возраста примерно 40 лет, проводя ее в течение длительного времени.

Профилактика рака с помощью длительного применения лекарственных средств определяется как химиопрофилактика, а лекарственные препараты, предупреждающие возникновение и развитие злокачественных опухолей, определяются как химиопрофилактические или снижающие риск заболевания [Meyskens F.L., Curt G.A., Brenner D.E. et al. Regulatory approval of cancer risk-reducing (chemopreventive) drugs: moving what we have learned into the clinic// Cancer Prev. Res. (Phila). - 2011. - Vol.4. -P.311-323]. Химиопрофилактика РПЖ - перспективное направление предупреждения такой злокачественной опухоли, так как индолентные формы РПЖ могут долго сдерживаться химиопрофилактикой и не переходить в агрессивный рак. Именно химиопрофилактика РПЖ должна стать основным методом борьбы с данным заболеванием, мишенями для которой являются предрак, доброкачественная гиперплазия предстательной железы, хроническое воспаление, а также возраст. Химиопрофилактика РПЖ может быть: а) первичной (у практически здоровых мужчин с определенного возраста и у пациентов с фоновой патологией простаты); б) вторичной (у пациентов с предраковыми изменениями).

Химиопрофилактическое (онкопрофилактическое) и противоопухолевое действие - это разные виды фармакологической активности. Одно и то же вещество может обладать и онкопрофилактическим и противоопухолевым действием, как разными видами фармакологической активности. Но в ряде случаев вещество может обладать разнонаправленными действиями в отношении предупреждения развития (химиопрофилактика) и торможения роста (противоопухолевое действие) злокачественных опухолей. Например, классические противоопухолевые цитостатические лекарственные препараты оказывают противоопухолевое действие, но не предупреждают, а, наоборот, вызывают новые злокачественные опухоли, что является их побочным эффектом.

Известно несколько растительных средств, которые в доклинических исследованиях предупреждали развитие РПЖ. На трансгенных и комбинированных моделях (инициация канцерогеном и промоция тестостероном) канцерогенез простаты предупреждали изофлавоны сои - генистеин, смесь изофлавонов; катехины чая -эпигаллокатехин-3-галлат, смесь катехинов; полифенольные соединения и экстракты, их содержащие - ресвератрол, экстракт полифенолов какао, экстракт семян винограда; экстракты растений Pygeum africanum, Roystonea regia, Serenoa repens и Scutellaria barbata [Беспалов В.Г., Муразов Я.Г., Панченко А.В. Химиопрофилактика рака предстательной железы // Медлайн экспресс. - 2011. - №1. - С.57-64].

Вышеназванные растительные средства имеют ряд существенных недостатков, из-за которых они не доведены до клинической практики. Растительные экстракты очень трудно стандартизовать и создать на их основе лекарственную форму с воспроизводимыми эффектами. В экспериментах все вышеназванные растительные средства проявляли способность тормозить или только ПИН, или только РПЖ, но не влияли одновременно на все этапы канцерогенеза простаты от ПИН до инвазивного и метастатического РПЖ [Беспалов В.Г., Муразов Я.Г., Панченко А.В. Химиопрофилактика рака предстательной железы // Медлайн экспресс. - 2011. - №1. - С.57-64].

В настоящее время в клинической практике для химиопрофилактики РПЖ применяют только синтетические лекарственные препараты.

Наиболее известно применение для химиопрофилактики РПЖ лекарственных препаратов "Финастерид" и "Дутастерид", которые являются ингибиторами 5-α-редуктазы 1-го или 2-го типа. В рандомизированном исследовании под названием "РСРТ" у 18882 мужчин возрастом 55 лет и старше финастерид, снижал риск развития РПЖ на 24,8% по сравнению с плацебо [Thompson I.M., Klein E.A., Lippman S.M. et al. Prevention of prostate cancer with finasteride: US/European perspective // Eur Urol. - 2003. - Vol.44. - P.650-655]. Известно, что финастерид, принимаемый для химиопрофилактики рака РПЖ в течение 4 и более лет, снижает риск его развития на 26% [Wilt T.J., MacDonald R., Hagerty K. et al. Five-alpha-reductase inhibitors for prostate cancer prevention// Cochrane Database Syst. Rev. - 2008 Apr 16; (2): CD007091]. В экспериментах финастерид снижал частоту аденокарцином простаты у трансгенных крыс SV-40 Tag [Cho Y.M., Takahashi S., Asamoto M. et al. Suppressive effects of antiandrogens, fmasteride and flutamide on development of prostatic lesions in a transgenic rat model // Prostate Cancer Prostatic Dis. - 2007. - Vol.10. - P.378-383], а также у крыс Вистар, подвергнутых воздействию метилнитрозомочевины и тестостерона [Esmat A.Y., Refaie F.M., Shaheen M.H., Said M.M. Chemoprevention of prostate carcinogenesis by DFMO and/or finasteride treatment in male Wistar rats // Tumori. - 2002. - Vol.88. - P.513-521]. Известно, что препарат "Дутастерид", принимаемый в качестве химиопрофилактического средства по 0,5 мг ежедневно в течение 4 лет, достоверно снижал риск развития РПЖ на 22,8% [Andriole G.L., Bostwick D.G., Brawley O.W. et al. Effect of dutasteride on the risk of prostate cancer // N.Engl. J.Med. - 2010. - Vol.362. - P.1192-1202].

Однако ингибиторы 5-α-редуктазы (финастерид, дутастерид) обладают рядом значимых побочных эффектов, прежде всего, нарушение сексуальной функции: эректильная дисфункция, снижение либидо, уменьшение объема эякулята, гинекомастия. Наиболее частые побочные эффекты при приеме финастерида - снижение либидо (6%), импотенция (8%), уменьшение объема эякулята (4%), нагрубание и увеличение молочных желез (1%) [Болезни предстательной железы/ Под ред. Ю.Г.Аляева. - M.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 240 с.]. Данные побочные эффекты ставят под вопрос возможность применения ингибиторов 5-α-редуктазы у практически здоровых мужчин для химиопрофилактики РПЖ, тогда как финастерид снижает риск РПЖ именно у здоровых мужчин с уровнем простат-специфического антигена (ПСА) в крови <4 нг/мл. Мета-анализ 9 рандомизированных клинических испытаний финастерида показал, что финастерид не снижает риск РПЖ у мужчин с уровнем ПСА в крови >4 нг/мл; при приеме финастерида чаще наблюдались сексуальные и гормональные нарушения, чем при приеме плацебо; в исследовании "РСРТ" при приеме финастерида, по сравнению с плацебо, у большего числа мужчин диагностирован РПЖ с высоким индексом Глисона (7-10 или 8-10) [Wilt T.J., MacDonald R., Hagerty K. et al. Five-alpha-reductase inhibitors for prostate cancer prevention // Cochrane Database Syst. Rev. - 2008 Apr 16; (2): CD007091].

Применение ингибиторов 5-а-редуктазы для химиопрофилактики РПЖ может привести к поздней диагностике РПЖ, когда у пациента уже будет диагностирован РПЖ с высоким значением индекса Глисона [Walsh P.C. Chemoprevention of prostate cancer // NEJM. - 2010. - Vol.362. - P.1237-1238].

Кроме ингибиторов 5-α-редуктазы, известны синтетические средства, которые в доклинических исследованиях на трансгенных и комбинированных моделях (инициация канцерогеном и промоция тестостероном) тормозили канцерогенез простаты. К ним относятся, в первую очередь, гормональные препараты - антиандрогены (доксазозин, тамсулозин, флутамид), аналоги релизинг-гормонов (лейропрорелин), эстрогены и антиэстрогены (2-метоксиэстрадиол, эстрадиол, тамоксифен, торемифен), стероидные гормоны (дегидроэпиандростерон, флуастерон), ингибитор гистон-деацетилазы. Канцерогенез простаты также тормозили антипролиферативные препараты (α-дифторметилорнитин), нестероидные противовоспалительные средства (сулиндак, целекоксиб, флурбипрофен), ретиноиды (фенретинид, 9-цис-ретиноевая кислота), витамины и антиоксиданты, такие как витамин D, каротиноид ликопин, сернистые соединения, выделенные из чеснока (диаллил трисульфид, диаллил дисульфид, сульфорафан), ингибитор протеаз Bowman-Birk из сои, инозитол гексафосфат, полиненасыщенные жирные кислоты омега-3 типа [Беспалов В.Г., Муразов Я.Г., Панченко А.В. Химиопрофилактика рака предстательной железы // Медлайн экспресс. - 2011. - №1. - С.57-64].

Однако большинство данных синтетических средств имеют серьезные побочные и токсические эффекты; в экспериментах они проявляли способность тормозить или только ПИН, или только РПЖ, но не влияли одновременно на все этапы канцерогенеза простаты от ПИН до инвазивного и метастатического РПЖ [Беспалов В.Г., Муразов Я.Г., Панченко А.В. Химиопрофилактика рака предстательной железы // Медлайн экспресс. - 2011. - №1. - С.57-64].

Наиболее близким аналогом к изобретению является селен, который способен тормозить канцерогенез простаты, легко стандартизуется как отдельное химическое соединение, не обладает гормональным действием и не нарушает баланс андрогенов в мужском организме, может применяться длительное время, не имеет существенных токсических и побочных эффектов при приеме в профилактических дозах.

Известно применение селена для химиопрофилактики РПЖ. В рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании "NPC" у 974 мужчин со средним возрастом около 60 лет селен (в виде селенометионина дрожжей), принимаемый по 200 мкг в день в течение 4,5 лет, статистически достоверно снижал частоту РПЖ по сравнению с плацебо на 63% [Clark L.C., Dalkin В., Krongrad A. et al. Decreased incidence of prostate cancer with selenium supplementation: results of a double-blind cancer prevention trial// Br.J.Urol. - 1998. - Vol.81. - P.730-734]. Мета-анализ 16 эпидемиологических исследований показал, что повышенное потребление селена с пищей снижает относительный риск РПЖ до 0,74 [Etminan M., FitzGerald J.M., Gleave M., Chambers К. Intake of selenium in the prevention of prostate cancer: a systematic review and meta-analysis // Cancer Causes Control. - 2005. - Vol.16. - P.1125-1131]. Мета-анализ 20 эпидемиологических исследований показал, что высокий уровень селена в сыворотке и плазме крови и ногтях снижает риск РПЖ [Brinkman M., Reulen R.C., Kellen E. et al. Are men with low selenium levels at increased risk of prostate cancer? // Eur. J.Cancer. - 2006. - Vol.42. - P.2463-2471]. В эксперименте метилселениновая кислота и метилселеноцистеин снижали частоту аденокарцином простаты и увеличивали выживаемость трансгенных мышей TRAMP [Wang L., Bonorden M.J., Li G.X. et al. Methyl-selenium compounds inhibit prostate carcinogenesis in the transgenic adenocarcinoma of mouse prostate model with survival benefit // Cancer Prev. Res. (Phila Pa). - 2009. - Vol.2. - P.484-495].

Главным недостатком селена является отсутствие стабильного химиопрофилактического действия в отношении РПЖ. В рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании "SELECT" L-селенометионин, принимаемый по 200 мкг/день в течение 5,46 лет, не предупреждал возникновение РПЖ у мужчин [Lippman S.M, Klein E.A., Goodman P.J. et al. Effect of selenium and vitamin E on risk of prostate cancer and other cancers: the Selenium and Vitamin E Cancer Prevention Trial (SELECT) // JAMA. - 2009. - Vol.301. - P.39-51]. В некоторых эпидемиологических и доклинических работах у селена также не подтверждалась способность предупреждать РПЖ. В проспективном исследовании "VITAL" у 35242 мужчин длительный прием селена в виде диетической добавки не снижал общий риск РПЖ [Peters U., Littman A.J., Kristal A.R. et al. Vitamin E and selenium supplementation and risk of prostate cancer in the Vitamins and lifestyle (VITAL) study cohort//Cancer Causes Control. 2008. - Vol.19. - P.75-87]. В проспективном исследовании по методу случай-контроль у 1059 здоровых мужчин по сравнению с 959 больными РПЖ уровень селена в плазме крови не влиял на риск РПЖ [Alien N.E., Appleby P.N., Roddam A.W. et al. Plasma selenium concentration and prostate cancer risk: results from the European Prospective Investigation into Cancer and Nutrition (EPIC) // Am. J.Clin. Nutr. - 2008. - Vol.88. - P.1567-1575]. В других исследованиях ни селенометионин, ни селенизированные дрожжи не влияли достоверно на частоту РПЖ, вызываемого комбинированной схемой с помощью последовательного введения ципротерона ацетата, тестостерона пропионата и МНМ с последующей хронической андрогенной стимуляцией путем подкожных имплантаций гранул с тестостероном у крыс-самцов Wistar-Unilever [McCormick D.L., Rao K.V., Johnson W.D. et al. Null activity of selenium and vitamin E as cancer chemopreventive agents in the rat prostate // Cancer Prev. Res. (Phila). - 2010. - Vol.3. - P.381-392].

Одним из главных объяснений противоречий в химиопрофилактическом действии на РПЖ селена является разность антиканцерогенных эффектов микронутриентов, назначаемых при их дефиците или адекватном потреблении. Витамины, минералы и другие микронутриенты проявляют антиканцерогенную активность преимущественно на фоне их хронического дефицита в пище. Дополнительный длительный прием витаминов, минералов и других микронутриентов при их адекватном потреблении с пищей вызывает хроническую передозировку, что приводит к исчезновению положительных эффектов, а в ряде случаев может быть и вредным [Huang H.Y., Caballero В., Chang S. et al. The efficacy and safety of multivitamin and mineral supplement use to prevent cancer and chronic disease in adults: a systematic review for a National Institutes of Health state-of-the-science conference // Ann. Intern. Med. - 2006. - Vol.145. - P.372-385].

Кроме того соединения селена имеют и другие недостатки: неспособность тормозить все стадии канцерогенеза простаты; наличие на рынке различных соединений селена в форме пищевых веществ и диетических добавок, а не лекарственных препаратов. У многих соединений селена, особенно его неорганических форм, низкая терапевтическая широта, легко превысить профилактическую или терапевтическую дозу, что дает ряд серьезных токсических и побочных эффектов [Jung H.J., Seo Y.R. Current issues of selenium in cancer chemoprevention // Biofactors. - 2010. - Vol.36. - P.153-158].

Вышеприведенные аргументы говорят о том, что в настоящее время возможности применения известных средств для химиопрофилактики РПЖ не столь эффективны, и актуальность поиска новых более эффективных и при этом более безопасных средств для химиопрофилактики РПЖ является очень высокой.

Задачей изобретения является создание нового лекарственного средства, обладающего химиопрофилактическим действием на всех стадиях канцерогенеза вплоть до развития инвазивного и метастатического РПЖ, лишенного вышеперечисленных недостатков ближайшего аналога и не имеющего побочных и токсических эффектов, ограничивающих возможности его клинического применения.

Технический результат изобретения состоит в создании эффективного торможения всех стадий канцерогенеза простаты - от ПИН и микроочаговых карцином до инвазивного и метастатического РПЖ при использовании нового химиопрофилактического лекарственного средства.

Задача, поставленная перед изобретением, решена созданием и использованием для химиопрофилактики рака простаты нового лекарственного средства на основе смеси природных олигомеров изопренола.

Исследования, проведенные авторами, показали, что смесь полипренолов формулы (1), называемая Ропрен,

где n=8-20,

может предупреждать и тормозить предрак и рак простаты на всех стадиях канцерогенеза от появления очагов ПИН и перерождения данных предраковых очагов в рак до предупреждения возникновения микроочагового, инвазивного и метастатического РПЖ.

Соединение формулы (1) используется в качестве фармацевтической субстанции при производстве лекарственного средства (препарата) Ропрен, в виде капель, который по составу представляет собой концентрат полипренолов (с суммой полипренолов 95%). Известный лекарственный препарат Ропрен, который относится к группе полипренолов, зарегистрирован в качестве гепатопротектора растительного происхождения (ЛСР-001521/07 от 12.07.2007 г) и получен из хвои сосны и ели по способу (RU 2238291). Состав: ропрен (с содержанием суммы полипренолов 95%) - 25 г, масло подсолнечное рафинированное дезодорируемое - до 100 г. Описание: прозрачная маслянистая жидкость от желтого до желтовато-оранжевого цвета. Фармакологическая группа: гепатопротекторное средство растительного происхождения. Код АТХ: А05ВА. Фармакологические свойства: оказывает гепатопротекторное, гиполиподемическое действие. Нормализует процессы окислительного фосфорилирования на уровне клеточного метаболизма. Способствует восстановлению мембран гепатоцитов путем конкурентного ингибирования перекисных процессов. В печени метаболизируется в долихол, участвующий в гликозилировании мембранных белков и образовании гликопротеинов. Нормализует детоксикационную функцию печени. Показания к применению: жировая дистрофия печени различной этиологии, гепатит, цирроз печени (в комплексном лечении), токсические поражения печени (алкогольные, наркотические, лекарственные). Полипренольный препарат "Ропрен" - безопасный, у него не выявлено каких-либо токсических и побочных эффектов. Известно его антиатерогенное, гиполипидемическое и антиоксидантное действие. [Султанов B.C., Лаптева Е.Н., Рощин В.И. и др. Клиническое исследование гепатопротектора "Ропрен" при заболеваниях гепатобилиарной системы// Гастроэнтерол. Санкт-Петербурга. - 2010. - №4. - С.7-11; Soultanov V.S., Agishev V.G., Monakhova I.A. et al. Ropren® improves liver and pancreatic function in patients with chronic alcoholism// Там же. - С.12-17; Голованова Е.В., Винницкая Е.В., Шапошникова Н.А. и др. Эффективность нового растительного гепатопротектора ропрен в терапии больных с неалкогольным стеатогепатитом // Эксперт и клин. гастроэнтерол. - 2010. - №7. - С.97-102].

Известно, что использование препарата ропрен стимулирует репаративно-регенерационные процессы в печени (RU 2252026 "Средство для стимуляции процессов естественной регенерации", 29.10.2003, а также известно его применение при лечении алкоголизма как средства для лечения зависимости от этилового спирта и/или от наркотиков RU 2327448, 23.05.2007, как средства лечения больных с дементным синдромом RU 2327480, 23.05.2007.

Авторами впервые выявлена способность предупреждать возникновение очагов предрака простаты (ПИН), предупреждать возникновение микроочагов рака простаты и возникновение агрессивного (инвазивного и метастатического) РПЖ смесью полипренолов общей формулы (1), называемой Ропрен:

где n=8-20,

Это природная смесь олигомеров (изопренолов) ведет себя как одно вещество, но может быть разделена на обращенно-фазных сорбентах на индивидуальные изопренологи.

Авторы изобретения предложили использовать полипренолы формулы (1)

где n=8-20,

в качестве активного ингредиента для производства лекарственного средства для химиопрофилактики предрака и рака предстательной железы.

Кроме того, предложена фармацевтическая композиция для химиопрофилактики предрака и рака предстательной железы, которая включает эффективное количество полипренолов формулы (1)

где n=8-20,

и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, включая носители, и/или растворители, добавки и/или лубриканты. Фармацевтическая композиция может быть выполнена в форме раствора, суспензии, геля, таблетки, капсулы, свечи для ректального введения, в липосомальной форме. Фармацевтическая композиция представляет собой масляный раствор для наружного и/или внутреннего использования, геля, или свечей для ректального введения при этом содержание в ней указанных полипренолов составляет от 0,01 до 10,0 масс.%.

Кроме того, предложен способ химиопрофилактики рака предстательной железы, который включает прием лекарственного средства, предупреждающего предрак простаты (простатическую интраэпителиальную неоплазию) и рак простаты и отличается тем, что при химиопрофилактике пациентов с факторами риска рака простаты, фоновой патологией простаты, предраковыми изменениями предстательной железы, индолентным микроочаговьм раком простаты, в качестве вышеупомянутого лекарственного средства используют полипренолы формулы (1), которые могут быть в виде самостоятельного лекарственного средства и/или в виде фармацевтической композиции, дополнительно включающей вспомогательные ингредиенты, при этом суточная доза упомянутого средства составляет от 1 мг до 10000 мг, а его прием осуществляют один или два или три раза в сутки в течение установленного курса, который составляет не менее 3 месяцев и до 5 лет с перерывом на 1-2 месяца.

Предлагаемые изобретения поясняются рисунками 1-12.

Рисунок 1. Дорсолатеральная простата у крысы самца №1, подвергнутого воздействию андрокура, МНМ и омнадрена и получавшего Ропрен, × 150. Гистологическая картина дорсолатеральной простаты имеет нормальный вид. Полное предупреждение ПИН в результате применения Ропрена.

Рисунок 2. Вентральная простата у крысы самца №1, подвергнутого воздействию андрокура, МНМ и омнадрена и получавшего Ропрен, × 150. Гистологическая картина вентральной простаты имеет нормальный вид. Полное предупреждение ПИН в результате применения Ропрена.

Рисунок 3. Передняя простата у крысы самца X» 1, подвергнутого воздействию андрокура, МНМ и омнадрена и получавшего Ропрен, × 150. Гистологическая картина передней простаты имеет нормальный вид. Полное предупреждение ПИН в результате применения Ропрена.

Рисунок 4. Крибриформная и микрососочковая НИН дорсолатеральной простаты у крысы самца №2, подвергнутого воздействию андрокура, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 150. Без применения Ропрена в дорсолатеральной простате развились множественные очаги ПИН тяжелой степени.

Рисунок 5. Пучкообразная и плоская ПИН вентральной простаты у крысы самца №2, подвергнутого воздействию андрокура, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 150. Без применения Ропрена в вентральной простате развились множественные очаги ПИН тяжелой и легкой степени.

Рисунок 6. Пучкообразная и микрососочковая ПИН передней простаты у крысы самца №2, подвергнутого воздействию андрокура, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 300. Без применения Ропрена в передней простате развились множественные очаги ПИН тяжелой степени.

Рисунок 7. Предстательная железа крысы самца №5, подвергнутого воздействию кастрации, МНМ и омнадрена и получавшего Ропрен. Макроскопический вид. 1 - дорсолатеральный отдел простаты, макроскопическая картина нормальная; 2 - вентральные доли простаты, макроскопическая картина нормальная; 3 - семенные пузырьки с передними долями простаты, макроскопическая картина нормальная. Белой стрелкой обозначена простатическая часть уретры. Полное предупреждение РПЖ в результате применения Ропрена.

Рисунок 8. Макроскопический вид на вскрытии крысы самца №6, подвергнутого воздействию кастрации, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен. Обширное опухолевое поражение всех отделов простаты, переполненный мочой с кровью мочевой пузырь, асцит, множественные метастазы висцеральной брюшины, сальника, брыжейки кишечника. Без применения Ропрена развился РПЖ с множественными метастазами.

Рисунок 9. Гистологическая картина дорсолатеральной простаты у крысы самца №6, подвергнутого воздействию кастрации, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 150. Без применения Ропрена развилась адено карцинома с высоким индексом Глисона.

Рисунок 10. Гистологическая картина вентральной простаты у крысы самца №6, подвергнутого воздействию кастрации, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 300. Без применения Ропрена развилась аденокарцинома с высоким индексом Глисона.

Рисунок 11. Гистологическая картина передней простаты у крысы самца №6, подвергнутого воздействию кастрации, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 150. Без применения Ропрена развилась аденокарцинома с высоким индексом Глисона.

Рисунок 12. Метастаз аденокарциномы простаты в брыжейку кишечника у самца крысы №6, подвергнутого воздействию кастрации, МНМ и омнадрена и не получавшего Ропрен, × 150. Без применения Ропрена развились множественные метастазы аденокарциномы простаты с высоким индексом Глисона, в том числе в брыжейку кишечника.

Исследования проведены на базе ФГБУ НИИ онкологии им. Н.Н.Петрова Минздравсоцразвития России. Эксперименты проведены на крысах-самцах Вистар разводки питомника лабораторных животных "Рапполово" РАМН. Эксперименты проведены на 2-х моделях предрака и рака простаты: с помощью фармакологической и хирургической кастрации животных с введением канцерогена, препаратов тестостерона в промотирующей дозе. На 1-й модели канцерогенеза простаты у крыс развивалась преимущественно ПИН в различных долях простаты и в относительно небольшом числе случаев - микроочаговый РПЖ. При моделировании канцерогенеза простаты на 2-ой модели канцерогенез простаты был более далеко зашедший: у крыс развивались преимущественно аденокарциномы в различных долях простаты, в том числе метастатический РПЖ, а также - ПИН в различных долях простаты. Наблюдение за животными было на протяжении 62 недель или 55 недель. В качестве профилактического средства использовали препарат Ропрен, представляющий из себя прозрачную маслянистую жидкость оранжевого цвета, специфического запаха, содержащий сумму полипренолов не менее 95%. Препарат Ропрен (производства ОАО Фармацевтическая фабрика Санкт-Петербурга) вводили перорально в дозе 12,5 мг/кг массы тела. В качестве препарата сравнения использовали известный препарат селенит натрия (Sigma-Aldrich, Co, США, Германия), который вводили перорально в дозе 4 мг/л питьевой воды. Ропрен и селен вводили в фазы промоции и прогрессии канцерогенеза простаты.

В экспериментах использованы также следующие материалы и реактивы для моделирования канцерогенеза: ципротерона ацетат (Андрокур® Депо, "Schering AG", Германия); пролонгированный препарат тестостерона (омнадрен 250, "Jelfa", Польша); N-метил-N-нитрозомочевина (МНМ) (Sigma-Aldrich, Со, США, Германия

По окончании экспериментов, а также у забитых в терминальном состоянии и павших до этого животных, проводилась полная аутопсия с забором простаты. Гистологичесакий анализ предстательных желез проводили стандартными методами. Окраску проводили гематоксилином-К (Карацци) (БиоВитрум, Россия) и водно-спиртовым раствором эозина (БиоВитрум, Россия). Предстательные железы всех крыс разделялись на 3 отдела и 5 долей: на дорсолатеральный отдел, вентральный отдел (две вентральные доли), передний отдел (две передние доли). Все отделы простаты у всех крыс, независимо от наличия или отсутствия при макроскопическом исследовании опухолевых изменений, подвергались серийным срезам с шагом микротома 500 мкм. Морфологическое исследование препаратов осуществлялось при помощи световой микроскопии (см. Приложение). Результаты экспериментов подвергались статистической обработке на персональном компьютере с помощью программ EXCEL, STATISTICA и MSTAT. В таблицах с результатами экспериментов показатели вариационного ряда представлены в виде М±m, где М - средняя арифметическая, a m- ошибка средней арифметической, которые рассчитывали по общепринятьм формулам. Для статистического анализа результатов использовались тест χ², точный метод Фишера, критерий t (Стьюдента).

Ниже приведены примеры использования препарата Ропрен и селенита натрия для предупреждения предрака и рака простаты

Пример 1. Предупреждение предрака простаты (ПИН) препаратом Ропрен.

У 44 крыс-самцов индуцировали ПИН по следующей схеме: введение ежедневно внутрибрюшинно андрокура в дозе 50 мг/кг массы тела в течение 21 дня; через день после последней инъекции андрокура введение однократно омнадрена в дозе 833 мг/кг массы тела; через 3 дня после инъекции омнадрена введение однократно внутривенно МНМ в дозе 50 мг/кг массы тела, растворенную в стерильном физиологическом растворе в концентрации 10 мг/мл; через 7 дней после инъекции МНМ введение омнадрена внутрибрюшинно в дозе 16,7 мг/кг массы тела в течение 60 дней с промежутками между введениями 3 дня, всего 15 инъекций. Через 7 дней после инъекции МНМ проведена рандомизация животных и начато введение смеси полипренолов формулы (1) - Ропрена. Были сформированы 2 экспериментальные группы: 1-я группа "Контроль", 20 крысам 5 дней в неделю через 2 дня перерыва вводили внутрижелудочным зондом носитель (рафинированное подсолнечное масло) по 0,5 мл на крысу; 2-я группа "Ропрен", 24 крысам 5 дней в неделю через 2 дня перерыва вводили внутрижелудочным зондом смесь полипренолов формулы (1) - Ропрен в дозе 12,5 мг/кг массы тела, растворенную в 0,5 мл рафинированного подсолнечного масла. Введение масла в 1-й группе и Ропрена во 2-й группе продолжали до 62 недель от момента первого введения андрокура, после чего эксперимент завершали и оставшихся в живых животных забивали. Результаты эксперимента представлены в таблице 1.

Таблица 1
Влияние смеси полипренолов формулы (1) - Ропрена на частоту и множественность ПИН у крыс, подвергнутых воздействию андрокура, МНМ и омнадрена
Показатель	Группа	Эффект Ропрена
1 Контроль n=20	2 Ропрен n=24
Количество крыс с ПИН всего: абс.(%)	15 (75,0%)	10(41,7%)*	Достоверно снижает общую частоту ПИН в 1,8 раза (на 33,3%)
Срок выявления первой ПИН	134-й день	266-й день	Тормозит развитие ПИН в 2 раза
Количество отделов простаты с образовавшейся ПИН	36	22
Среднее число отделов простаты с ПИН на крысу из группы	1,80±0,29	0,92±0,24*	Достоверно уменьшает общую множественность ПИН в 2,0 раза
Количество крыс с ПИН в 2 или 3 отделах простаты: абс.(%)	12 (60,0%)	9 (37,5%)	Недостоверно снижает частоту ПИН, выявленной более чем в 1-м отделе простаты, в 1,6 раза
Количество крыс с ПИН в дорсолатеральном отделе простаты: абс.(%)	13 (65,0%)	10 (41,7%)	Недостоверно снижает частоту ПИН дорсолатерального отдела простаты в 1,6 раза
Количество крыс с ПИН в вентральном отделе простаты: абс.(%)	12 (60,0%)	7 (29,2%)*	Достоверно снижает частоту ПИН вентрального отдела простаты в 2,1 раза
Количество крыс с ПИН в	11 (55,0%)	5 (20,8%)*	Достоверно снижает
переднем отделе простаты: абс.(%)			частоту ПИН переднего отдела простаты в 2,6 раза
* Разница с контрольной группой статистически достоверна, р<0,05.

Ропрен эффективно предупреждал развитие ПИН у крыс. Если в контрольной группе первый диагноз ПИН был поставлен у крысы, погибшей на 134-й день эксперимента, то в группе с воздействием Ропрена - на 266-й день. При использовании препарата Ропрен ПИН развилась только в 41,7% случаях, а в контрольной группе ПИН развилась у 75% крыс, т.е. процент торможения под действием полипренолов формулы (1) составил 33,3%. По сравнению с контрольной группой, Ропрен уменьшал как общую частоту и множественность ПИН, так и отдельно частоту ПИН в дорсолатеральном, вентральном и переднем отделах простаты в 1,6-2,6 раза, большинство эффектов были статистически достоверными (табл.2). У крыс из группы с воздействием Ропрена, которым поставили диагноз ПИН, по сравнению с крысами из контрольной группы поражение ткани простаты ПИН было менее обширным, реже встречались участки микрососочковой и крибриформной ПИН.

В контрольной группе ПИН развилась у 75% крыс, в большинстве случаев у крыс с диагнозом ПИН наблюдали распространенные структурные изменения ткани отделов простаты, скопления ацинусов с ПИН в очаги, чаще всего - множественные, в нескольких отделах простаты. Наиболее часто ПИН обнаруживали в дорсолатеральном отделе простаты, но лишь ненамного реже - в вентральном и переднем отделах (табл.2). Как правило, при выявлении распространенной ПИН у крыс в отделах простаты была одновременно ПИН тяжелой степени и ПИН легкой степени. Наиболее часто ПИН была представлена пучкообразной формой, реже - микрососочковой и крибриформной формами. При выявлении единичных очагов ПИН была обычно плоской и пучкообразной. При обширном поражении ткани простаты ПИН наблюдали все ее формы: плоскую, пучкообразную, а также далеко зашедшие (менее дифференцированные) формы ПИН - микрососочковую и крибриформную.

Пример 2. Полное предупреждение предрака простаты (ПИН) препаратом Ропрен. У 2 крыс-самцов индуцировали ПИН по схеме, изложенной в примере 1. Через 7 дней после инъекции МНМ крысе №1 начали введение внутрижелудочным зондом смеси полипренолов - Ропрена, который давали 5 дней в неделю через 2 дня перерыва в дозе 12,5 мг/кг массы тела, растворенных в 0,5 мл рафинированного подсолнечного масла, в течение 57,5 недель; крысе №2 (контрольной) начали введение внутрижелудочным зондом носителя (рафинированное подсолнечное масло) по 0,5 мл в день, который давали 5 дней в неделю через 2 дня перерыва в течение 57,5 недель. Крыс забивали через 62 недели от момента первого введения андрокура, предстательные железы извлекали, подвергали стандартной гистологической обработке, делали серийные срезы всех отделов простаты и выявляли наличие ПИН при световой микроскопии.

У самца крысы №1, получавшей Ропрен, при анализе серийных срезов всех отделов простаты ни в одном срезе ткани простаты ПИН не обнаружена: дорсолатеральная, вентральная и передняя доля простаты выглядели так же, как у нормальных интактных крыс.

У самца крысы №2 (контрольной) выявлена ПИН тяжелой и легкой степени во всех отделах простаты: дорсолатеральном (преимущественно крибриформная и микрососочковая формы), вентральном (преимущественно пучкообразная и плоская формы) и переднем (преимущественно пучкообразная и микрососочковая формы). Ацинусы с ПИН скапливались во множественные очаги. Диагностированы все формы ПИН: плоская, пучкообразная, микрососочковая и крибриформная.

Следовательно, Ропрен полностью предупреждал развитие ПИН у самца крысы №1. Самцы крыс №1 и №2 подвергались одинаковым воздействиям андрокура, МНМ и омнадрена, которые у самца №2, не получавшего лечебно-профилактических средств, привели к развитию множественных очагов ПИН тяжелой и легкой степени во всех трех отделах простаты, в том числе далеко зашедших форм ПИН - микрососочковой и крибриформной. У самца крысы №1 Ропрен полностью предупреждал эффекты андрокура, МНМ и омнадрена, ПИН ни в одном отделе простаты не развилась.

Пример 3. Предупреждение предрака простаты (ПИН) препаратом Ропрен в сравнении с селеном.

У 92 крыс-самцов индуцировали ПИН по следующей схеме: хирургическая кастрация, через 21 день после кастрации введение однократно омнадрена в дозе 833 мг/кг массы тела; через 3 дня после инъекции омнадрена введение однократно внутривенно МНМ в дозе 50 мг/кг массы тела, растворенную в стерильном физиологическом растворе в концентрации 10 мг/мл; через 7 дней после инъекции МНМ введение омнадрена внутрибрюшинно в дозе 16,7 мг/кг массы тела в течение 60 дней с промежутками между введениями 3 дня, всего 15 инъекций; после этого введение омнадрена внутрибрюшинно в дозе 16,7 мг/кг массы тела, 1 раз в неделю до конца эксперимента.

Через 7 дней после инъекции МНМ проведена рандомизация животных и начато введение смеси полипренолов формулы (1) - Ропрена. Были сформированы 3 экспериментальные группы: 1-я группа "Контроль", 34 крысам 5 дней в неделю через 2 дня перерыва вводили внутрижелудочным зондом носитель (рафинированное подсолнечное масло) по 0,5 мл на крысу; 2-я группа "Ропрен", 29 крыса