Биомаркерный анализ для детектирования или измерения ингибирования активности tor-киназы

Биомаркерный анализ для детектирования или измерения ингибирования активности tor-киназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Данная заявка испрашивает приоритет предварительной заявки США № 61/369455, поданной 30 июля 2010 года, полное содержание которой включено в данный документ по ссылке.

1. ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

В данном документе предоставлены способы детектирования и/или измерения ингибирования активности TOR-киназы у пациентов и связанные с ними применения.

2. УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Связь между анормальным фосфорилированием белков и причинами или следствиями болезней известна более 20 лет. Соответственно, протеинкиназы стали очень важной группой мишеней для лекарств. См. Cohen, Nature Reviews Drug Discovery, 1:309-315 (2002). Различные ингибиторы протеинкиназ использовались в клинике для лечения разнообразных заболеваний, таких как рак и хронические воспалительные заболевания, включая диабет и инсульт. См. Cohen, Eur. J. Biochem., 268:5001-5010 (2001), Proteinkinase Inhibitors for the Treatment of Disease: The Promise and the Problems, Handbook of Experimental Pharmacology, Springer Berlin Heidelberg, 167 (2005).

Протеинкиназы представляют собой большое и разнообразное семейство ферментов, которые катализируют фосфорилирование белков и играют критически важную роль в клеточной сигнализации. Протеинкиназы могут вызывать позитивные или негативные регуляторные эффекты, в зависимости от белков, которые являются их мишенями. Протеинкиназы вовлечены в специфические сигнальные пути, которые регулируют клеточные функции, такие как метаболизм, прохождение клеточного цикла, адгезия клеток, сосудистая функция, апоптоз и ангиогенез, но не ограничиваясь ими. Нарушения клеточной сигнализации связаны со многими заболеваниями, наиболее характерные из которых включают в себя рак и диабет. Регуляция передачи сигнала цитокинами и связь сигнальных молекул с протоонкогенами и генами-супрессорами опухолевого роста хорошо документирована. Сходным образом была показана связь между диабетом и связанными с ним состояниями, и нарушениями уровня протеинкиназы. См. например, Sridhar et al. Pharmaceutical Research, 17(11): 1345-1353 (2000). Вирусные инфекции и относящиеся к ним состояния также связаны с регуляцией протеинкиназы. Park et al. Cell 101 (7): 777-787 (2000).

Протеинкиназы могут быть разделены на большие группы на основе той аминокислоты (аминокислот), которые являются их мишенями (серин/треонин, тирозин, лизин и гистидин). Например, тирозинкиназы включают в себя рецепторные тирозинкиназы (RTK), такие как факторы роста, и нерецепторные тирозинкиназы, такие как семейство src-киназ. Существуют также протеинкиназы двойной специфичности, для которых мишенями являются и тирозин, и серин/треонин, такие как циклин-зависимые киназы (CDK) и митоген-активируемые протеинкиназы (MAPK).

Поскольку протеинкиназы регулируют почти все клеточные процессы, включая в себя метаболизм, клеточную пролиферацию, клеточную дифференцировку и выживание клетки, они являются привлекательными мишенями для терапевтического вмешательства при различных болезненных состояниях. Например, контроль клеточного цикла и ангиогенез, в которых протеинкиназы играют центральную роль, являются клеточными процессами, связанными с многочисленными болезненными состояниями, такими как рак, воспалительные заболевания, патологический ангиогенез и заболевания, связанные с ним, атеросклероз, дегенерация желтого пятна, диабет, ожирение и боли, но не ограничиваясь ими.

Протеинкиназы стали привлекательными мишенями при лечении раковых заболеваний. Fabbro et al.. Pharmacology & Therapeutics 93:79-98 (2002). Было сделано предположение, что вовлечение протеинкиназ в развитие злокачественного роста у человека может происходить путем: (1) перестроек генома (например, BCR-ABL при хроническом миелобластном лейкозе), (2) мутаций, ведущих к постоянной активности киназ, таких как при остром миелобластном лейкозе и желудочно-кишечных опухолях, (3) нарушения регуляции активности киназы вследствие активации онкогенов или утраты функции супрессии опухолей, такие как при раковых заболеваниях с участием онкогенного RAS, (4) нарушения регуляции активности киназы вследствие оверэкспрессии, как в случае EGFR и (5) эктопической экспрессии факторов роста, которая может вносить вклад в развитие и поддержание неопластического фенотипа. Fabbro et al., Pharmacology & Therapeutics 93:79-98(2002).

Демонстрация сложности сигнальных путей протеинкиназы и сложность взаимосвязей и взаимодействий между ними и между различными протеинкиназами и киназными путями указала на важность развития фармацевтических агентов, способных действовать как модуляторы, регуляторы или ингибиторы протеинкиназы, которые имеют полезную активность на многочисленные киназы или многочисленные киназные пути. Соответственно, остается потребность в новых модуляторах киназы.

Белок, именующийся mTOR (мишень рапамицина у млекопитающих), который также называется FRAP, RAFTI или RAPT1), представляет собой Ser/Thr-протеинкиназу из 2549 аминокислот, которая, как было показано, является одним из наиболее важных белков пути mTOR/PI3K/Akt, который регулирует клеточный рост и пролиферацию. Georgakis and Younes Expert Rev. Anticancer Ther. 6(1): 131-140 (2006). mTOR существует в двух комплексах: mTORC1 и mTORC2. Тогда как mTORC1 чувствителен к аналогам рапамицина (таким как темсиролимус или эверолимус), mTORC2, в целом, нечувствителен к рапамицину. Стоит отметить, что рапамицин не является ингибитором TOR-киназы. Несколько ингибиторов mTOR были оценены в клинических испытаниях по лечению рака или находятся в стадии оценки. Темсиролимус был утвержден для применения при карциноме клеток почки в 2007 г., а эверолимус был утвержден в 2009 г. для пациентов с карциномой клеток почек, которые улучшались при действии ингибиторов рецепторов факторов роста. Кроме того, сиролимус был утвержден в 1999 г. для профилактики отторжения почечных трансплантатов. Интересный, но не ограничивающийся им, клинический успех этих ингибиторных соединений mTORCl показывает пригодность ингибиторов mTOR для лечения рака и отторжения трансплантатов, и увеличивает потенциал соединений с ингибиторной активностью в отношении и mTORC1, и mTORC2.

Вследствие потенциальной применимости ингибиторов активности TOR-киназы, существует потребность в способах детектирования и/или измерения ингибирования активности TOR-киназы in vivo.

Цитирование или идентификация какого-либо источника в Разделе 2 данной заявки не должно рассматриваться как утверждение, что источник представляет собой предшествующий уровень техники по отношению к данной заявке.

3. СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном документе представлены способы детектирования или измерения ингибирования активности TOR-киназы у пациентов, включающие измерение количества фосфорилированного 4EBP1 (также обозначаемый в данном документе как p4EBP1) в биологическом образце от упомянутого пациента, например, образце периферической крови до и после введения ингибитора TOR-киназы упомянутому пациенту. В одном из вариантов осуществления количество p4EBP1 измеряли с помощью проточной цитометрии. Предполагается, что способы, представленные в данном документе, пригодны для контроля ингибирования TOR-киназы у пациента.

Также в данном документе представлены способы определения зависимости «доза-эффект» при введении ингибитора TOR-киназы пациенту, при которых упомянутому пациенту вводят варьирующие дозы упомянутого ингибитора TOR-киназы и величина ингибирования активности TOR-киназы у упомянутого пациента, возникающая от каждой дозы упомянутого ингибитора TOR-киназы, определялась с использованием способа, представленного в данном документе.

Также в данном документе представлены способы определения того, чувствителен ли пациент к ингибитору TOR-киназы, включающие введение упомянутому пациенту упомянутого ингибитора TOR-киназы и определение того, ингибируется или нет активность TOR-киназы у упомянутого пациента, с помощью способа, представленного в данном документе.

Также в данном документе представлены способы определения эффективного количества ингибитора TOR-киназы для лечения или контроля заболевания у пациента, включающие введение упомянутому пациенту варьирующих доз упомянутого ингибитора TOR-киназы и определение у упомянутого пациента уровня ингибирования активности TOR-киназы, возникающего при действии каждой из доз упомянутого ингибитора TOR-киназы с помощью способа, представленного в данном документе.

Также в данном документе представлены способы лечения или контроля заболевания, связанного с TOR-киназой у пациента, страдающего заболеванием, связанным с TOR-киназой, включающие введение упомянутому пациенту эффективного количества ингибитора TOR-киназы, где эффективное количества упомянутого ингибитора TOR определяется с помощью способа, представленного в данном документе.

В определенных вариантах осуществления способы, представленные в данном документе, реализуются путем контакта биологического образца от пациента с ингибитором TOR-киназы ex vivo.

Также в данном документе представлены наборы, содержащие один или более контейнеров, заполненные реагентами для детектирования p4EBP1 с помощью проточной цитометрии, и инструкции для детектирования p4EBP1 с помощью проточной цитометрии.

Данные варианты осуществления могут быть поняты более полно по ссылке на детальное описание и примеры, которые направлены на представление неограничивающих вариантов осуществления.

4. КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг.1. Представляет гистограммы, показывающие клеточные популяции необработанных клеток (затененные [кривые]), клеток, обработанных ДМСО (пунктирная линия), клеток, обработанных специфическим блокирующим пептидом (сплошная линия), и клеток, обработанных соединением 1 (точечная линия). (A) представляет клетки PC3, обработанные 10 мкМ соединения 1. (B) Представляет гистограммы, представляющие моноциты CD91+ из цельной крови нормальных здоровых добровольцев, обработанные ex vivo 30 мкМ соединения 1. (C) Представляет гистограммы, представляющие моноциты CD91+ из цельной крови пациентов, страдающих раком легких, обработанные ex vivo 30 мкМ соединения 1.

Фиг.2. Иллюстрирует воспроизводимость теста p4EBP1 в зависимости от вариаций p4EBP1 в моноцитах день за днем от тех же здоровых доноров (кровь забирали от 3 здоровых доноров в течение 3 последовательных дней). (A) Иллюстрирует среднюю интенсивность флуоресценции для всех 3 доноров в различные дни. (B) Иллюстрирует ингибирование соединением 1. (C) Представляет иллюстративную гистограмму, представляющую клеточные популяции необработанных клеток (затененная), клеток, обработанных ДМСО (пунктирная линия), клеток, обработанных специфическим блокирующим пептидом (сплошная линия) и клеток, обработанных соединением 1 (точечная линия).

Фиг.3. Иллюстрирует стабильность сигнала p4EBP1 в зафиксированных замороженных клетках. Все образцы цельной крови были обработаны ДМСО или соединением 1 при 37°C в течение 2 часов, а PBMC были зафиксированы и заморожены без стабилизирующего буфера. (A) Представляет гистограммы моноцитов CD91+ из свежеприготовленной цельной крови. (B) Представляет столбчатую диаграмму, иллюстрирующую стабильность сигнала p4EBP1 в популяции моноцитов CD91+ из замороженных клеток в течение периода в 1 месяц. (C) Представляет таблицу, суммирующую жизнеспособность и среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) обработанных клеток.

Фиг.4. (A) Иллюстрирует обработку ex vivo цельной крови от здоровых доноров соединением 1 в течение 2 часов при комнатной температуре. Образцы обрабатывали в триплетах. Обработка 5 мкМ и 0,5 мкМ соединения 1 показала существенное ингибирование (p<0,005). (B) Иллюстрирует обработку ex vivo цельной крови от здоровых доноров соединением 1 в указанных концентрациях в триплетах в течение 2 часов при комнатной температуре. Образцы обрабатывались в триплетах. Обработка соединением 1 показала существенное ингибирование (p<0,005) при 5 мкМ и 0,5 мкМ.

Фиг.5. Иллюстрирует, что p4EBP1 заингибирована в периферической крови пациентов. Каждая линия представляет пациента.

Фиг.6. Иллюстрирует, что p4EBP1 заингибирована в периферической крови пациентов. Каждая линия представляет пациента.

5. ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

5.1 ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Термин «лечение», так как он использован в данном документе, обозначает частичное или полное облегчение симптомов, связанных с нарушением или заболеванием, или замедление, или прекращение дальнейшего развития или обострения таких симптомов.

Термин «эффективное количество» в связи с ингибитором TOR-киназы обозначает количество, способное частично или полностью облегчить симптомы, связанные с нарушением или заболеванием, или замедлить, или остановить дальнейшее развитие или обострение таких симптомов. Эффективное количество ингибитора TOR-киназы, например, в фармацевтических композициях, может находиться на уровне, который вызывает желаемый эффект; например, около 0,005 мг/кг веса тела пациента до около 100 мг/кг веса тела пациента в разовой дозе и для перорального и для парентерального введения. Как будет ясно для специалистов в данной области техники, следует ожидать, что эффективное количество ингибитора TOR-киназы, описанного в данном документе, может варьировать в зависимости от тяжести излечиваемых показаний.

Термины «пациент» и «объект», так как они использованы в данном документе, включают в себя животное, включая таких животных как корова, обезьяна, лошадь, овца, свинья, цыпленок, индюк, перепел, кошка, собака, мышь, крыса, кролик или морская свинка, в одном из вариантов осуществления млекопитающее, в другом варианте осуществления - человек, но не ограничиваясь ими. В одном из вариантов осуществления «пациент» или «объект» представляют собой человека, страдающего заболеванием, представленным в данном документе, таким как заболевания, связанные с TOR-киназой.

Термин «биологический образец», так как он используется в данном документе, включает в себя образцы крови и образцы ткани, такие как образцы опухолей. В одном варианте осуществления биологический образец представляет собой образец периферической крови. В другом варианте осуществления биологический образец представляет собой плазму. В другом варианте осуществления биологический образец представляет собой плазму, богатую тромбоцитами.

Термин «ингибитор TOR-киназы», так как он использован в данном документе, означает соединение (например, малую молекулу) или биологическое соединение (например, белок), способные ингибировать активность TOR-киназы (т.е. in vitro или in vivo). В одном варианте осуществления ингибитор TOR-киназы представляет собой соединение, описанное в WO 2008/023161 (см., например, страницу 5, строка 5 до страницы 11, строка 15), WO 2009/007751 (см., например, страницу 9, строка 8 до страницы 26, строка 8), WO 2009/007749 (см., например, страницу 9, строка 21 до страницы 29, строка 23), WO 2009/007750 (см., например, страницу 9, строка 21 до страницы 32, строка 22), WO 2009/007748 (см., например, страницу 9, строка 6 до страницы 42, строка 28), WO 2008/032028 (см., например, страницу 11, строка 13 до страницы 21, строка 13), WO 2008/032086 (см., например, страницу 10, строка 21 до страницы 15, строка 22), WO 2008/032072 (см., например, страницу 11, строка 11 до страницы 16, строка 13), WO 2008/032033 (см., например, страницу 11, строка 3 до страницы 16, строка 5), WO 2008/032089 (см., например, страницу 11, строка 11 до страницы 16, строка 13), WO 2008/032060 (см., например, страницу 11, строка 3 до страницы 16, строка 6), WO 2008/032091 (см., например, страницу 11, строка 11 до страницы 16, строка 13), WO 2008/032036 (см., например, страницу 11, строка 13 до страницы 21, строка 13), WO 2008/032077 (см., например, страницу 10, строка 21 до страницы 15, строка 22), WO 2008/032064 (см., например, страницу 11, строка 3 до страницы 16, строка 5), WO 2008/032027 (см., например, страницу 10, строка 21 до страницы 15, строка 22), WO 2007/135398 (см., например, страницу 11, строка 28 до страницы 16. строка 6), WO 2007/129052 (см., например, страницу 10, строка 8 до страницы 13, строка 5), WO 2007/129044 (см., например, страницу 10, строка 22 до страницы 13, строка 20), WO 2007/080382 (см., например, страницу 9, строка 20 до страницы 32, строка 32), WO 2007/066102 (см., например, страницу 9, строка 22 до страницы 14, строка 17), WO 2007/066099 (см., например, страницу 9, строка 22 до страницы 14, строка 14). WO 2007/066103 (см., например, страницу 9, строка 22 до страницы 14, строка 16), WO 2007/060404 (см., например, страницу 5, строка 4 до страницы 7, строка 25), WO 2006/090169 (см., например, страницу 4, строки 1 - 25), WO 2006/090167 (см., например, страницу 3, строка 33 до страницы 6, строка 23), WO 2008/115974 (см., например, страницу 4, абзац [0012] до страницы 127, абзац [0257]), WO 2009/052145 (см., например, страницу 5, абзац [0015] до страницы 81, абзац [0082]), WO 2010/006072 (см., например, страницу 28, строка 1 до страницы 34, строка 1), WO 2007/044698 (см., например, страницу 3, абзац [0010] до конца страницы 7), WO 2007/044813 (см., например, страницу 3, абзац [0010] до середины страницы 7), WO 2007/044729 (см., например, страницу 3, абзац [0010] до конца страницы 10), WO 2007/129161 (см., например, страницу 2, строка 10 до страницы 9, строка 19), WO 2006/046031 (см., например, страницу 2, строка 15 до страницы 4, строка 12), WO 2003/072557 (см., например, страницу 1, строка 4 до страницы 2, строка 27), WO 2004/048365 (см., например, страницу 1, строка 4 до страницы 4, строка 17), WO 2004/078754 (см., например, страницу 1, строка 4 до страницы 2, строка 21), WO 2004/096797 (см., например, страницу 1, строка 4 до страницы 2, строка 34). WO 2005/021519 (см., например, страницу 1, строка 4 до страницы 4, строка 17) или US 2007/112005 (см., например, страницу 2, абзац [0012] до страницы 22, абзац [0065]), каждая из которых включена в данный документ по ссылке во всей их полноте. Ингибиторы TOR-киназы могут быть получены с помощью стандартной хорошо известной синтетической методологии, см. например, March, J. Advanced Organic Chemistry; Reactions Mechanisms, and Structure, 4th ed., 1992. Исходные материалы, пригодные для изготовления соединений формулы (III), и промежуточные вещества коммерчески доступны или могут быть изготовлены из коммерчески доступных материалов с помощью известных синтетических способов и реагентов. Конкретные способы изготовления ингибиторов TOR-киназы описаны в заявке США № 11/975652, поданной 18 октября 2007 года, заявке США № 11/975657, поданной 18 октября 2007 года и заявке США № 12/605791, поданной 26 октября 2009 года, каждая из которых включена в данный документ по ссылке во всей их полноте. В специфическом варианте осуществления ингибиторы TOR-киназы не включают в себя рапамицин или аналоги рапамицина (рапалоги).

5.2 СПОСОБЫ ПРИМЕНЕНИЯ

Не будучи ограниченными теорией, полагали, что, поскольку 4EBP1 (4E-связывающий белок 1, также обозначаемый в данном документе как «p4EBP1») является непосредственным субстратом TOR-киназы (т.е. TOR-киназа катализирует фосфорилирование 4EBP1 в p4EBP1), ингибирование активности TOR-киназы in vivo может быть измерено путем определения уровня p4EBP1 у пациента (например, уровня в биологическом образце от пациента) перед и после лечения ингибитором TOR-киназы.

Соответственно, в данном документе предоставлены способы детектирования или измерения ингибирования активности TOR-киназы у пациента, включающие измерение количества p4EBP1 в биологическом образце от упомянутого пациента перед и после введения ингибитора TOR-киназы. В одном из вариантов осуществления количество p4EBP1 измеряли с помощью проточной цитометрии.

В одном из вариантов осуществления количество p4EBP1 измеряли в цельной крови пациента. В еще одном варианте осуществления количество p4EBP1 измеряли в одноядерных клетках периферической крови (PBMC) пациента. В еще одном варианте осуществления количество p4EBP1 измеряли в образце ткани пациента. В еще одном варианте осуществления измеряли количество p4EBP1 в образце опухоли пациента.

Также в данном документе представлены способы определения зависимости доза-ответ при введении ингибитора TOR-киназы пациенту, в которых упомянутому пациенту вводили варьирующие дозы упомянутого ингибитора TOR-киназы, а уровень ингибирования активности TOR-киназы у упомянутого пациента, возникающий от каждой дозы упомянутого ингибитора TOR-киназы, определяли с помощью способа, представленного в данном документе.

Также в данном документе представлены способы определения того, чувствителен ли пациент к ингибитору TOR-киназы, включающие введение упомянутому пациенту упомянутого ингибитора TOR-киназы и определение заингибирована или нет активность TOR-киназы у упомянутого пациента с помощью способа, представленного в данном документе.

Также в данном документе представлены способы определения эффективного количества ингибитора TOR-киназы для лечения или контроля заболевания у пациента, включающие введение упомянутому пациенту варьирующих доз упомянутого ингибитора TOR-киназы и определение уровня ингибирования активности TOR-киназы у упомянутого пациента, являющегося результатом каждой дозы упомянутого ингибитора TOR-киназы с помощью способа, представленного в данном документе.

Также в данном документе представлены способы лечения или контроля заболевания, связанного с TOR-киназой, у пациентов, страдающих заболеванием, связанным с TOR, включающие введение упомянутому пациенту эффективного количества ингибитора TOR-киназы, где эффективное количество упомянутого ингибитора TOR определяется с помощью способа, представленного в данном документе.

В определенных вариантах осуществления способы, представленные в данном документе, выполняются путем контакта биологического образца от пациента с ингибитором TOR-киназы ex vivo. Например, вместо введения ингибитора TOR-киназы пациенту, способы, представленные в данном документе, могут содержать измерение количества p4EBP1 в биологическом образце от пациента, и контакт упомянутого биологического образца с ингибитором TOR-киназы ex vivo, после чего следует измерение количества p4EBP1 в упомянутом биологическом образце после упомянутого контакта. Соответственно, в данном документе представлены способы детектирования или измерения ингибирования активности TOR-киназы в биологическом образце от пациента, включающие измерение количества p4EBP1 в упомянутом биологическом образце перед и после контакта упомянутого биологического образца с ингибитором TOR-киназы ex vivo. В одном из вариантов осуществления количество p4EBP1 измеряют с помощью проточной цитометрии.

В определенных вариантах осуществления значение IC₅₀ около 250 мкМ или менее, около 100 мкМ или менее, около 10 мкМ или менее, около 1 мкМ или менее или около 0,10 мкМ или менее показывает, что ингибитор TOR-киназы является эффективным в лечении заболевания, связанного с активностью TOR-киназы, таких как заболевания, представленные в данном документе.

Также в данном документе представлены наборы, содержащие один или более контейнеров, заполненных реагентами для детектирования p4EBP1 с помощью проточной цитометрии и инструкции для детектирования p4EBP1 с помощью проточной цитометрии. В одном из вариантов осуществления набор содержит один или более контейнеров, заполненных антителами к p4EBP1. В определенных вариантах осуществления антитела к p4EBP1 представляют собой мышиные антитела к p4EBP1 Alexa Fluor 647 или антитела к p4EBP1, конъюгированные с Alexa Fluor 488. В определенных вариантах осуществления наборы, представленные в данном документе, также содержат один или более ингибиторов TOR-киназы, таких как представленные в данном документе, включенные по ссылке в данный документ, или те, которые известны в данной области техники.

В одном из вариантов осуществления пациент страдает солидной раковой опухолью. В еще одном варианте осуществления пациент страдает раком крови. В специфическом варианте осуществления рак крови представляет собой лейкоз, такой как хронический лейкоз, острый лейкоз, эритролейкоз, лимфоцитарный лейкоз, миелолейкоз или миелогенный лейкоз. В еще одном варианте осуществления пациент страдает раком крови, иным, чем лимфобластный лейкоз (например, острый T-клеточный лимфобластный лейкоз).

5.3 ИЛЛЮСТРАТИВНЫЕ ИНГИБИТОРЫ TOR-КИНАЗЫ

Иллюстративные ингибиторы TOR-киназы включают в себя соединения, имеющие нижеследующую формулу (I), но не ограничиваются ими:

и их фармацевтически приемлемые соли, клатраты, сольваты, стереоизомеры, таутомеры и пролекарства, где:

R¹ представляет собой замещенный или незамещенный C_1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклил или замещенный или незамещенный гетероциклилалкил;

R² представляет собой H, замещенный или незамещенный C_1-8алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклил, замещенный или незамещенный гетероциклилалкил, замещенный или незамещенный аралкил или замещенный или незамещенный циклоалкилалкил; и

R³ и R⁴ представляют собой независимо друг от друга H, замещенный или незамещенный C_1-8алкил, замещенный или незамещенный арил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклил, замещенный или незамещенный гетероциклилалкил, замещенный или незамещенный аралкил, замещенный или незамещенный циклоалкилалкил, или R³ и R⁴, вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют замещенный или незамещенный циклоалкил или замещенный или незамещенный гетероциклил;

или R² и один из R³ и R⁴, вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют замещенный или незамещенный гетероциклил.

В определенных вариантах осуществления ингибитор TOR-киназы не представляет собой соединение, описанное ниже, а именно:

6-(4-гидроксифенил)-4-(3-метоксибензил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенил)-3-(циклогексилметил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

или

(R)-6-(4-(1H-1,2,4-триазол-5-ил)фенил)-3-(циклогексилметил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он.

В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) R¹ представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил. В одном из вариантов осуществления R¹ представляет собой фенил, пиридил, пиримидил, бензимидазолил, индолил, индазолил, 1H-пирроло[2,3-b]пиридил, 1H-имидазо[4,5-b]пиридил, 1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-онил, 3H-имидазо[4,5-b]пиридил или пиразолил, каждый из которых может быть замещенным. В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой фенил, замещенный одним или более заместителями, независимо выбранным и из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C_1-8алкила (например, метила), замещенного или незамещенного гетероциклила (например, замещенного или незамещенного триазолила или пиразолила), галогена (например, фтора), аминокарбонила, циано, гидроксиалкила (например, гидроксипропила) и гидрокси. В других вариантах осуществления R¹ представляет собой пиридил, замещенный одним или более заместителями, выбранными независимо из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C_1-8алкила, замещенного или незамещенного гетероциклила (например, замещенного или незамещенного триазолила), галогена, аминокарбонила, циано, гидроксиалкила, -OR и -NR₂, где каждый из R представляет собой независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил. В других еще вариантах осуществления R¹ представляет собой 1H-пирроло[2,3-b]пиридил или бензимидазолил, каждый из которых необязательно замещен одним или более заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C_1-8алкила и -NR₂, где каждый из R представляет собой независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил.

В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) R¹ представляет собой

где R представляет собой в каждом случае независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил (например, метил); R' представляет собой в каждом случае независимо замещенный или незамещенный C_1-4алкил, галоген (например, фтор), циано, -OR или -NR₂; m составляет 0-3; а n составляет 0-3. Специалистам в данной области техники понятно, что какие-либо заместители R' могут быть присоединены к какому-либо подходящему атому какого-либо из колец в системе сочлененных циклов. Также специалистам в данной области техники следует понимать, что соединительная связь R¹ (обозначенная пересекающей волнистой линией) может быть присоединена к какому-либо из колец системы сочлененных циклов.

В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) R¹ представляет собой

где R представляет собой в каждом случае независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил; R' представляет собой в каждом случае независимо замещенный или незамещенный C_1-4алкил, галоген, циано, -OR или -NR₂; m составляет 0-3; и n составляет 0-3.

В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) R² представляет собой H, замещенный или незамещенный C_1-8алкил, замещенный или незамещенный циклоалкил, замещенный или незамещенный гетероциклил, замещенный или незамещенный C_1-4алкилгетероциклил, замещенный или незамещенный C_1-4алкиларил или замещенный или незамещенный C_1-4алкилциклоалкил. Например, R² представляет собой H, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, циклопентил, циклогексил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, (C_1-4алкил)фенил, (C_1-4алкил)циклопропил, (C_1-4алкил)циклобутил, (C_1-4алкил)циклопентил, (C_1-4алкил)циклогексил, (C_1-4алкил)пирролидил, (C_1-4алкил)пиперидил, (C_1-4алкил)пиперазинил, (C_1-4алкил)морфолинил, (C_1-4алкил)тетрагидрофуранил или (C_1-4алкил)тетрагидропиранил, каждый из которых необязательно может быть замещенным.

В других вариантах осуществления R² представляет собой H, C_1-4алкил, (C_1-4алкил)(OR),

где R представляет собой в каждом случае независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил (например, метил); R' представляет собой в каждом случае независимо H, -OR, циано или замещенный или незамещенный C_1-4алкил (например, метил); и p составляет 0-3.

В некоторых таких вариантах осуществления R² представляет собой H, C_1-4алкил, (C_1-4алкил)(OR),

где R представляет собой в каждом случае независимо H или замещенный или незамещенный C_1-2алкил; R' представляет собой в каждом случае независимо H, -OR, циано или замещенный или незамещенный C_1-2алкил; и p составляет 0-1.

В некоторых других вариантах осуществления соединений формулы (I) R² и один из R³ и R⁴ вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют замещенный или незамещенный гетероциклил. Например, в некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой

где R представляет собой в каждом случае независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил; R" представляет собой H, OR или замещенный или незамещенный C_1-4алкил; а R¹ такой, как определено в данном документе.

В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) R³ и R⁴ оба представляют собой H. В других вариантах один из R³ и R⁴ представляет собой H, а другой отличается от H. Кроме того, в других вариантах один из R³ и R⁴ представляет собой C_1-4алкил (например, метил), а другой представляет собой H. Кроме того, в других вариантах и R³, и R⁴ представляют собой C_1-4алкил (например, метил).

В некоторых вариантах осуществления, описанных выше, R¹ представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный гетероарил. Например, R¹ представляет собой фенил, пиридил, пиримидил, бензимидазолил, индолил, индазолил, 1H-пирроло[2,3-b]пиридил, 1H-имидазо[4,5-b]пиридил, 1H-имидазо[4,5-b]пиридин-2(3H)-онил, 3H-имидазо[4,5-b]пиридил или пиразолил, каждый из которых необязательно является замещенным. В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой фенил, замещенный одним или более заместителями, выбранными независимо из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C_1-8алкила, замещенного или незамещенного гетероциклила, галогена, аминокарбонила, циано, гидроксиалкила и гидрокси. В других вариантах R¹ представляет собой пиридил, замещенный одним или более заместителями, выбранными независимо из группы, состоящей из циано, замещенного или незамещенного C_1-8алкила, замещенного или незамещенного гетероциклила, гидроксиалкила, галогена, аминокарбонила, -OR и -NR₂, где каждый из R представляет собой независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил. В других вариантах R представляет собой 1H-пирроло[2,3-b]пиридил или бензимидазолил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными независимо из группы, состоящей из замещенного или незамещенного C_1-8алкила и -NR₂, где R представляет собой независимо H или замещенный или незамещенный C_1-4алкил.

В определенных вариантах осуществления соединения формулы (I) имеют группу R¹, описанную в данном документе, и группу R², описанную в данном документе.

В некоторых вариантах осуществления соединений формулы (I) соединение представляет собой

6-(1Н-пирроло[2,3-b]пиридин-3-ил)-4-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(4-метил-6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-((тетрагидро-2H-пиран-4-ил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-((транс-4-метоксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-((цис-4-метоксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-((транс-4-метоксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-((транс-4-гидроксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-((цис-4-метоксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-((транс-4-гидроксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-(цис-4-гидроксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-((цис-4-гидроксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(транс-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-(транс-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-(транс-4-гидроксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-((цис-4-гидроксициклогексил)метил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-(цис-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-(2-метоксиэтил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-изопропил-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(цис-4-гидроксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(цис-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(2-метоксиэтил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-4-этил-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(транс-4-гидроксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-изопропил-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

4-этил-6-(5-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(3-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(3-фтор-2-метил-4-(1Н-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(цис-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(3-фтор-2-метил-4-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)фенил)-4-(транс-4-метоксициклогексил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

4-(2-метоксиэтил)-6-(4-метил-6-(1H-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-3-ил)-3,4-дигидропиразино[2,3-b]пиразин-2(1H)-он;

6-(3-(1Н-1,2,4-триазол-5-ил)фенил)-4-(2-(тетрагидро-2H-пиран-4-ил)этил)-3,4-дигидропиразино[2,3