Производное замещенного циннамамида, способ его получения и применения

Производное замещенного циннамамида, способ его получения и применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к областям как органической химии, так и фармацевтики, в частности, к соединению общей формулы (I), фармацевтически приемлемым солям присоединения кислоты соединения общей формулы (I), способу их получения, фармацевтической композиции, содержащей их, и применению соединения общей формулы (I) для лечения и/или предупреждения психических болезней депрессивного типа.

ПРЕДПОСЫЛКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Депрессия, как полагают, представляет собой аффективное расстройство, симптом психической болезни, который главным образом характеризуется депрессивным состоянием. Клинически это выражается сериями симптомов, в том числе депрессивным состоянием, брадифренией, немногословностью, сниженной активностью и потерей интереса к работе и т. д. Как сообщает ВОЗ, депрессия стала четвертым по распространенности заболеванием во всем мире. К 2020 году она, вероятно, станет вторым по распространенности заболеванием, сразу после заболеваний сердечно-сосудистой системы. Сейчас в Китае насчитывается около 26 миллионов пациентов с депрессией, только 10% из которых при этом имеют возможность получить нормальное медикаментозное лечение. Таким образом антидепрессивные лекарственные средства, безусловно, будут иметь огромный потенциальный рынок.

Как предполагалось многочисленными исследованиями, изменение моноаминергических нейромедиаторов нервных центров, допамина и холинэргика, изменчивость их соответствующей рецепторной функции и нейроэндокринной дисфункции, вероятно, играют важную роль в возникновении и развитии депрессии. На данный момент принцип лечения депрессии должен быть направлен на регулирование содержания моноаминов-нейромедиаторов в гипоталамусе, их рецепторных функций и восстановление нормальной нейроэндокринной функции.

В настоящее время медикаментозное лечение все еще представляет собой основной способ лечения депрессии. То, что патогенез депрессии является сложным, связанным со многими факторами, например, социальной психологией, наследственностью, биохимическими изменениями человеческого тела и нейроэндокринологией, подтверждается литературными источниками. Антидепрессивное лекарственное средство может иметь разнообразные виды мишеней, например, рецепторы, концентрацию моноаминов-нейромедиаторов и цитокин. Различные антидепрессивные лекарственные средства воздействуют через различные мишени. Первое поколение антидепрессивных лекарственных средств относится к ингибиторам моноаминоксидазы. Тем не менее, их селективность и необратимый ингибирующий эффект на фермент приводят к токсическому повреждению печени, что имеет определенные токсические и побочные эффекты; поэтому их постепенно заменяют на трициклические антидепрессивные лекарственные препараты. Такие широкоприменяемые медикаменты включают доксепин, амитриптилин и кломипрамин и т.д. Несмотря на то что они оказывают лучший терапевтический эффект на эндогенную депрессию, в частности, обладают более чем 80% эффективностью при эмоциональной депрессии, потере интереса и пессимизме, считают, что эти лекарственные средства обладают более высокой кардиотоксичностью и большим количеством побочных реакций. Избирательный ингибитор обратного захвата 5-HT (SSRI) появился в конце 1980-х, как вид нового антидепрессивного лекарственного средства. Их до сих пор применяют в Европе и США в качестве общепринятого антидепрессивного лекарственного средства первой линии, потому что оно сохраняет классический эффект антидепрессанта и значительно снижает побочные реакции, вызванные другими рецепторами. Такие широкоприменяемые медикаменты включают флуоксетин, пароксетин, сертралин, циталопрам и флувоксамин и т.д. Они всасываются через желудок и кишечный тракт и метаболизируются в организме, таким образом вызывают желудочно-кишечную дисфункцию, а некоторые из них вызывают также половую дисфункцию. Помимо этого, клинические исследования показали, что для таких синтезированных лекарственных средств, которые были предназначены для нацеливания на отдельную мишень, было тяжело достичь удовлетворительного эффекта. До сих пор не было разработано идеального антидепрессивного лекарственного средства, обладающего лучшей эффективностью и меньшими токсическими и побочными эффектами.

Заявка на патент Китая (заявка № 201010169679.9) раскрывает соединение N-изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамида, который представлял собой алкалоид, выделенный из Piper laetispicum C. DC, растения семейства Piperaceae. Его структура приведена ниже. Как было показано в экспериментах на животных, соединение N-изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамида обладает значительным антидепрессивным эффектом.

N-изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамид.

В настоящее время существует ограниченный ресурс растения Piper laetispicum C. DC, с низким содержанием в нем соединения N-изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамида. Экстракция и выделение этого соединения только из растения плохо удовлетворяет требованиям фундаментального исследования и клинического исследования. Таким образом, настоящее изобретение сфокусировано на способе химического синтеза N-изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамида и его производных с тем, чтобы получать молекулы лекарственного средства с более высокой антидепрессивной активностью.

В настоящем изобретении были синтезированы N-изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-1) и его производные, и вещества, обладающие антидепрессивными активностями, были подвергнуты скринингу с помощью разнообразных типов мышиных моделей депрессии. Впоследствии были обнаружены серии молекул лекарственного средства, которые обладают значительными антидепрессивными эффектами.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Целью настоящего изобретения является предоставление соединения общей формулы (I) и его фармацевтически приемлемых солей присоединения кислоты,

(I),

где

R₁ представляет собой H, OH, F, Cl, Br, I, OCH₃, OCF₃, OCHF_2, OCH₂F, CF₃, CHF₂, CH₂F, CH₃, CH₃CH₂, CF₃CH₂, CN, NO₂, NH₂ или COOR₃; где указанный R₃ представляет собой H, C₁~гидрокарбил с неразветвленной цепью, C₃~C₁₀ гидрокарбил с разветвленной цепью, C₃~C₁₀циклический гидрокарбил или C₆~C₁₀ароматический гидрокарбил;

n равняется 0, 1, 2 или 3, и элементарное звено содержит по меньшей мере одну одинарную или двойную углерод-углеродную связь;

X представляет собой =O, =S, H, SH или SR₃;

Y представляет собой N или NR₃, O или S, где указанный R₃ представляет собой H, C₁~C₁₀ гидрокарбил с неразветвленной цепью; C₃~C₁₀ гидрокарбил с разветвленной цепью; C₃~C₁₀циклический гидрокарбил или C₆~C₁₀ароматический гидрокарбил;

R₂ представляет собой H, C₁~C₁₀ гидрокарбил с неразветвленной цепью, C₃~C₁₀ гидрокарбил с разветвленной цепью, C₃~C₁₀циклический гидрокарбил, C₆~C₁₀ароматический гидрокарбил, C₁~C₁₀-гидроксиалкил или группу производных N-замещенного пиперазина; или R₂ представляет собой группу, которая образует тетрагидропирролильную, пиперидильную или гексаметилениминовую группу с соседним Y.

Предпочтительно R₁ представляет собой -CF₃;

n равняется 0, 1, 2 или 3, и элементарное звено содержит по меньшей мере одну одинарную или двойную углерод-углеродную связь;

X представляет собой =O;

Y представляет собой N или NH;

R₂ представляет собой H, C₁~C₁₀ гидрокарбил с неразветвленной цепью, C₃~C₁₀ гидрокарбил с разветвленной цепью, C₃~C₁₀циклический гидрокарбил, C₆~C₁₀ароматический гидрокарбил, C₁~C₁₀-гидроксиалкил или группу производных N-замещенного пиперазина; или R₂ представляет собой группу, которая образует тетрагидропирролильную, пиперидильную или гексаметилениминовую группу с соседним Y.

Другое предпочтительное производное замещенного циннамамида представлено структурой следующей общей формулы (II).

(II),

где

R₁ представляет собой H, OH, F, Cl, Br, I, OCH₃, OCF₃, OCHF_2, OCH₂F, CF₃, CHF₂, CH₂F, CH₃, CH₃CH₂, CF₃CH₂, CN, NO₂, NH₂ или COOR₃; где указанный R₃ представляет собой C₁~C₁₀ гидрокарбил с неразветвленной цепью, C₃~C₁₀ гидрокарбил с разветвленной цепью, C₃~C₁₀циклический гидрокарбил или C₆~C₁₀ароматический гидрокарбил;

R₂ представляет собой H, C₁~C₁₀ гидрокарбил с неразветвленной цепью, C₃~C₁₀ гидрокарбил с разветвленной цепью, C₃~C₁₀циклический гидрокарбил, C₆~C₁₀ароматический гидрокарбил, C₁~C₁₀-гидроксиалкил или группу производных N-замещенного пиперазина.

Наиболее предпочтительно, структура настоящего соединения и его фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты представлены в виде следующих соединений.

N-Изобутил-5'-метокси-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-1)

N-Изобутил-5'-нитро-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-2)

N-Изобутил-5'-йод-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-3)

N-Изобутил-5'-хлор-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-4)

N-Изобутил-5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-5)

N-Изобутил-5-(5'-метокси-3',4'-метилендиоксифенил)-пентадиенамид (I-6)

N-Изобутил-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-7)

N,N-Диметил-5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-8)

N,N-Диэтил-5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксициннамамид (I-9)

1-(5'-Трифторметил-3',4'-метилендиоксициннамил)-пиперидин (I-10)

N-Изобутил-3-(5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксифенил)-пропионамид (I-11)

N-Изобутил-5-трифторметил-3,4-метилендиоксибензамид (I-12)

1-(5-Трифторметил-3,4-метилендиоксибензоил)-пиперидин (I-13)

В соответствии с настоящим изобретением указанные фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты настоящего соединения получают путем осуществления реакции со следующими кислотами: серной кислотой, соляной кислотой, бромистоводородной кислотой, фосфорной кислотой, винной кислотой, фумаровой кислотой, малеиновой кислотой, лимонной кислотой, уксусной кислотой, муравьиной кислотой, метансульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой, щавелевой кислотой или янтарной кислотой; предпочтительно, указанные фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты настоящего соединения представляют собой хлористоводородные соли.

В другом аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ получения соединений общей формулы (I).

Предпочтительно соединение общей формулы (I) представляет собой производное замещенного N-изобутилциннамамида. Соединение общей формулы (I) получают следующими путями синтеза.

Производное замещенной коричной кислоты получают с помощью реакции Виттига или реакции Виттига-Хорнера между производным замещенного пипероналя и этоксиформилметилентрифенилфосфином или триэтилфосфоноацетатом.

Далее полученное производное замещенной коричной кислоты ацилируют с получением его ацилированного производного (в том числе ацилгалогенида, азида, ангидрида, активного сложного эфира), а затем осуществляют реакцию ацилированного производного с органическим амином с получением амидного производного. Альтернативно, производное замещенной коричной кислоты реагирует с органическим амином и конденсирующим средством (HATU, HBTU, EDCI, DCC и т.д.) с получением амидного производного.

В соответствии с настоящим изобретением, наиболее удобным способом синтеза является получение амидного соединения с помощью реакции амидирования кислоты, соответствующей конечному продукту.

Предпочтительную структуру производного 5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксициннамамида получают с помощью следующих путей синтеза.

Используют 5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксикоричную кислоту в качестве исходного материала для получения ее ацилированного производного (в том числе ацилгалогенида, азида, ангидрида, активного сложного эфира), а затем осуществляют реакцию ацилированного производного с органическим амином с получением амидного производного. Альтернативно осуществляют реакцию 5'-трифторметил-3',4'-метилендиоксикоричной кислоты с органическим амином и конденсирующим средством (HATU, HBTU, EDCI, DCC и т.д.) с получением амидного производного;

.

Предпочтительно, ацилгалогенид используют для прямого ацилирования.

В соответствии с настоящим изобретением указанные фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты по настоящему соединению получают с помощью обычной реакции кислотно-основной нейтрализации. Например, соответствующие соли присоединения кислоты по настоящему изобретению получают путем осуществления реакции настоящего соединения со следующими кислотами: серной кислотой, соляной кислотой, бромистоводородной кислотой, фосфорной кислотой, винной кислотой, фумаровой кислотой, малеиновой кислотой, лимонной кислотой, уксусной кислотой, муравьиной кислотой, метансульфоновой кислотой, п-толуолсульфоновой кислотой, щавелевой кислотой или янтарной кислотой, предпочтительно указанные фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты по настоящему соединению представляют собой хлористоводородные соли.

В другом аспекте настоящего изобретения обеспечивают фармацевтические композиции, содержащие указанное соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты.

В соответствии с настоящим изобретением фармацевтические композиции могут быть получены в виде любых лекарственных форм. Лекарственные формы включают таблетки, например, таблетки в сахарной оболочке, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, таблетки с энтеросолюбильным покрытием или таблетки с пролонгированным действием; капсулы, например, твердые капсулы, мягкие капсулы или капсулы с пролонгированным действием; пероральные растворы; защечные таблетки; гранулы; гранулы, которые принимают после растворения в кипятке; пилюли; порошкообразные лекарственные формы; пасты, например, мази, пластыри; пеллеты; суспензии; порошки; водные растворы, например, инъекции; суппозитории; крема; спреи; капли и пластыри небольшого размера.

В соответствии с настоящим изобретением, соединение можно предпочтительно получать в составе стандартной лекарственной формы.

В соответствии с настоящим изобретением композиция содержит 0,1~1000 мг указанного соединения в качестве действующего ингредиента на стандартную лекарственную форму, и остатком является фармацевтически приемлемое(ые) вспомогательное(ые) вещество(а). Указанное(ые) фармацевтически приемлемое(ые) вспомогательное(ые) вещество(а) составляет(ют) 0,01~99,99 вес. % от общего веса состава.

В соответствии с настоящим изобретением, медицинское применение и дозировку указанной композиции определяют на основании состояний пациентов, например, 1~3 раза в день и 1~10 таблеток за один прием.

В соответствии с настоящим изобретением указанная композиция может быть получена в виде перорально вводимой лекарственной формы или инъекции.

Композиция, где указанную перорально вводимую лекарственную форму выбирают из одного из следующего: капсулы, таблетки, капельные пилюли, гранулы, концентрированные пилюли и пероральные растворы.

Композиция, где указанные инъекции выбирают из одного из следующего: инъекционные растворы, лиофилизированные порошки для инъекций и водные инъекции.

В соответствии с настоящим изобретением указанная перорально вводимая лекарственная форма настоящей фармацевтической композиции как правило содержит обычное вспомогательное(ые) вещество(а), например, связующие средства, объемообразующие средства, разбавители, средства для таблетирования, смазывающие вещества, распадающиеся вещества, окрашивающие вещества, вкусовые вещества, увлажняющие средства, и, при необходимости, на таблетки можно нанести покрытие.

Подходящие объемообразующие средства включают целлюлозу, маннит, лактозу и другие аналогичные объемообразующие средства. Подходящие распадающиеся вещества включают крахмал, поливинилпирролидон (PVP) и производные крахмала (предпочтительно натрия крахмалгликолят). Подходящие смазывающие вещества включают, например, стеарат магния. Подходящие увлажняющие средства включают додецилсульфат натрия.

Обычно, твердые препараты для перорального введения могут быть получены обычными способами, такими как перемешивание, заполнение и таблетирование и т.д. Постоянное перемешивание обеспечивает равномерное распределение действующего вещества в композициях, которые имеют большое количество объемообразующего средства.

В соответствии с настоящим изобретением пероральные жидкие препараты могут быть, например, водорастворимыми или жирорастворимыми суспензиями, растворами, эмульсиями, сиропами или настойками, или высушенными продуктами, которые перед применением могут быть ресуспендированы водой или другими подходящими носителями. Жидкие препараты могут содержать обычные добавки, например суспендирующие средства, например сорбит, сироп, метилцеллюлозу, желатин, гидроксиэтилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу, гель стеарата алюминия или гидрогенизированный пищевой жир; эмульгирующие средства, например, лецитин, сорбитан моноолеат или гуммиарабик; неводные носители, которыми могут быть пищевое масло, например, миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, сложные эфиры глицерина, пропиленгликоль или этанол; и консерванты, например метилпарабен, нипазол или сорбиновая кислота. И, при необходимости, могут быть включены традиционные отдушки или окрашивающие вещества.

Также как и в случае инъекций, полученная жидкая стандартная лекарственная форма содержит активный(е) компонент(ы) по настоящему изобретению и стерильный(е) носитель(и). В соответствии с типом носителя(ей) и концентрацией активного(ых) компонента(ов), указанный активный(е) компонент(ы) может(могут) быть растворен(ы) или суспендирован(ы). Как правило, растворы получают с помощью растворения активного(ых) компонента(ов) в носителях, стерилизации с помощью фильтрования, наполнения подходящего флакона или ампулы и запаивания. В носители также могут добавлять некоторые фармацевтически приемлемые наполнители, например, анестезирующие средства местного действия, консерванты и буферные вещества. Для того чтобы улучшить стабильность, композицию по настоящему изобретению после того, как наполнили флакон, можно заморозить, а затем обработать в вакууме для удаления воды.

В соответствии с настоящим изобретением указанную фармацевтическую композицию получают в составе, в который необязательно могут быть добавлены фармацевтически приемлемые носители. Указанные носители выбирают из сахарного спирта, например, маннита, сорбита, ксилита; аминокислот, например, цистеина-гидрохлорида, метионина, глицина; двунатриевого EDTA, кальциево-нитриевой соли EDTA; неорганических солей, например, карбонатов, фосфатов одновалентных щелочных металлов или их водных растворов, хлорида натрия, хлорида калия, пиросульфита натрия, бисульфита натрия, тиосульфата натрия, карбоната кальция, бикарбоната кальция; стеаратов, например, стеарата кальция, стеарата магния; неорганических кислот, например, соляной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты; органических кислот, например, уксусной кислоты, витамина C; солей органических кислот, например, ацетатов, лактата натрия; олигосахаридов, полисахаридов, целлюлоз и их производных, например, мальтозы, глюкозы, фруктозы, декстрана, сахарозы, лактозы, циклодекстрина (такого как β-циклодекстрин), крахмала; меркаптоуксусной кислоты; кремнеорганических производных; альгината; желатина; PVP, глицерина; Tween-80; агара; поверхностно-активных веществ; полиэтиленгликоля; фосфолипидных материалов; каолина; тальковой пудры и т.д.

В соответствии с настоящим изобретением указанную фармацевтическую композицию можно применять в комбинации с другими антидепрессивными лекарственными препаратами. Другими словами, за исключением соединения по настоящему изобретению, есть один или несколько видов антидепрессивных лекарственных средств, которые применяют клинически для профилактики и лечения психических болезней, например, нефазодон, сульпирид, алпразолам, сереназ, буспирон, тандоспирон, метилфенидат, флуоксетин, пароксетин, сертралин, циталопрам, лексапро, флувоксамин, ребоксетин, венлафаксин, флюанксол, мелитрацен и невростан и т.д.

В соответствии с настоящим изобретением, как показано в экспериментах на животных, замещенный циннамамид и его производные могут значительно сокращать длительность неподвижности в тесте принудительного плавания и в тесте подвешивания мышей за хвост, которые представляют собой две модели депрессии на животных при приобретенном поведенческом отчаянии. Они оказывают антагонистический эффект на активность резерпина в расходовании моноамина. Таким образом, замещенный циннамамид и его производные могут быть применены в качестве лекарственного средства для лечения и профилактики психических болезней депрессивного типа.

В другом аспекте настоящего изобретения обеспечивают применение соединения общей формулы (I) в получении медикамента для предупреждения и лечения психических болезней депрессивного типа.

В соответствии с настоящим изобретением, благоприятные эффекты соединения и композиции для предупреждения и лечения психических болезней подтверждают посредством следующих экспериментальных данных.

Тест 1 Модель депрессии “приобретенное отчаяние” в тесте подвешивания мышей за хвост

1 Материал

1.1 Реагенты

Соединения I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8, I-9, I-10, I-11, I-12 и I-13 синтезировали в соответствии со способом по настоящему изобретению, с чистотой более 95%. Их добавляли в 2% водный раствор Tween-80 с получением раствора, содержащего перед применением 1 мг/мл соединения лекарственного средства.

Гидрохлорид флуоксетина был изготовлен Patheon Inc. (Франция) и отдельно упакован Eli Lilly (Сучжоу) Pharmaceutical Inc. со спецификацией 20 мг/таблетка и серийным номером 81958. Перед экспериментом его растворяли в 2% водном растворе Tween-80 с получением раствора, содержащего 1 мг/мл соединения лекарственного средства.

1.2 Животные

Мышей C57BL/6 приобретали у Beijing Vital River Experimental Animal Co. Ltd. Номер сертификации животных SCXK (Beijing) 2006-0009.

1.3 Оборудование

Многофункциональное регистрирующее автономную деятельность у мышей устройство YLS-1A было предоставлено Shandong Institute of Medical Instruments.

2. Способ

240 самцов мышей C57BL/6 с весом 18~22 г в возрасте 6~8 недель кормили для адаптации в течение 2~3 дня.

Эксперимент 1

110 мышей выбирали случайным образом для определения величины их автономной деятельности. Мышей помещали в многофункциональное регистрирующее автономную деятельность у мышей устройство YLS-1A, а после 1 мин адаптации подсчитывали величину деятельности мышей в период времени с конца 1^ой мин до 4^ой мин. Отбирали 96 мышей с величиной автономной деятельности от 70 до 140, случайным образом разделяли на 8 групп и внутрижелудочно вводили соединения лекарственного средства в дозе, приведенной в таблице 1, один раз в день последовательно в течение 7 дней. Контрольной группе растворителя вводили 2% водный раствор Tween-80 в таком же объеме. Всех мышей помещали в регистрирующее автономную деятельность устройство спустя 30 мин после введения на 6^ой день. После 1 мин адаптации величину деятельности мышей подсчитывали за период времени с конца 1^ой мин до 4^ой мин.

Спустя 30 мин после введения на 7^ой день мышей фиксировали на опоре с помощью прорезиненной ткани на расстоянии 1 см от конца хвоста мыши, подвешивая мышей вниз головой. Голова мыши находилась на высоте около 30 см над столом, и ее поле зрения закрывали от соседней мыши с помощью пластинки. Как правило, мышь пыталась бороться в надежде преодолеть ненормальное положение тела. Тем не менее, после некоторого периода времени мыши эпизодически показывали неподвижность, отображающую безысходность. Для каждой мыши определяли суммарную длительность неподвижности в пределах 6 мин, которую рассматривали как “время отчаяния”. Причем под неподвижностью понимали то, что конечности мыши не двигаются, за исключением дыхания.

Эксперимент 2

130 мышей выбирали случайным образом для определения величины их автономной деятельность. Способ был аналогичен таковому из эксперимента 1. Отбирали 108 мышей с величиной автономной деятельности от 70 до 140, случайным образом разделяли на 9 групп и внутрижелудочно вводили соединения лекарственного средства в дозе, приведенной в таблице 2, один раз в день последовательно в течение 7 дней. Контрольной группе растворителя вводили 2% водный раствор Tween-80 в таком же объеме. Спустя 30 мин после введения на 6^ой день определяли величину автономной деятельности каждой мыши. Спустя 30 мин после введения на 7^ой день, определяли длительность неподвижности в тесте подвешивания за хвост. Способ был аналогичен таковому из эксперимента 1.

Статистические данные

Использовали аналитическое программное обеспечение SPSS10.0 и результаты анализировали с помощью способа однофакторного дисперсионного анализа для того, чтобы сравнить межгрупповую значимость.

3. Результаты

Эксперимент 1 использовали для оценки эффекта соединений I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6 на величину автономной деятельности и время неподвижности мыши в тесте подвешивания за хвост. Как показано в таблице 1, при сравнении с контрольной группой растворителя, одна неделя внутрижелудочного введения флуоксетина гидрохлорида в дозе 10 мг/кг не влияет на автономную деятельность мыши и может значительно уменьшать длительность неподвижности в тесте подвешивания за хвост (p<0,01). Внутрижелудочное введение соединения I-4 или I-5 в дозе 10 мг/кг может также существенно уменьшать длительность неподвижности мышей в тесте подвешивания за хвост (p<0,05, p<0,01), но не влияет на автономную деятельность мышей. В случае других обработанных групп, длительность неподвижности мыши в тесте подвешивания за хвост была снижена до различных степеней, но не имела статистической разницы. По сравнению с I-1, I-4 или I-5 оказывает лучший эффект на продолжительность борьбы мышей в тесте подвешивания за хвост (p<0,05).

Таблица 1. Эффекты различных соединений на величину автономной деятельности и длительность неподвижности мышей в тесте подвешивания за хвост

Группы	Дозировки	Количество мышей	Величина автономной деятельности (длительность)	Длительность неподвижности в тесте подвешивания за хвост (с)
Контроль-растворитель	--	12	107,75±8,38	193,11±41,69
Флуоксетина гидрохлорид	10 мг/кг	12	121,75±24,14	131,14±28,76**∆
I-1	10 мг/кг	12	113,92±14,24	180,10±18,26
I-2	10 мг/кг	12	102,00±26,24	169,69±38,10
I-3	10 мг/кг	12	94,42±23,97	173,14±32,39
I-4	10 мг/кг	12	94,75±28,53	155,29±31,81*∆
I-5	10 мг/кг	12	94,75±23,98	147,54±35,72** ∆
I-6	10 мг/кг	12	98,83±17,56	164,82±23,04

Примечание: при сравнении с контрольной группой растворителя, ^*p<0,05, ^**p<0,01; при сравнении с I-1, ^∆ p<0,05.

Эксперимент 2 использовали для оценки эффекта соединений I-5, I-8, I-9, I-10, I-11, I-12 и I-13 на величину автономной деятельности мышей и длительность неподвижности в тесте подвешивания за хвост. Как показано в таблице 2, при сравнении с контрольной группой растворителя, одна неделя внутрижелудочного введения I-5, I-9, I-10, I-11, I-12, I-13 в дозе 10 мг/кг может значительно уменьшить длительность неподвижности мыши в тесте подвешивания за хвост (p<0,01), но не влияет на автономную деятельность мышей. Было проиллюстрировано, что данные соединения имеют определенную антидепрессивную активность без возбуждения центральной нервной системы.

Таблица 2. Эффект различных соединений на величину автономной деятельности и длительность неподвижности мыши в тесте подвешивания за хвост

Группы	Дозировки	Количество мышей	Величина автономной деятельности (длительность)	Длительность неподвижности в тесте подвешивания за хвост (с)
Контроль-растворитель	--	12	94,50±19,55	204,05±33,86
Флуоксетина гидрохлорид	10 мг/кг	12	102,00±14,91	123,58±30,44**
I-5	10 мг/кг	12	99,40±19,67	117,34±32,78**
I-8	10 мг/кг	12	84,00±21,81	194,39±39,14
I-9	10 мг/кг	12	83,60±22,68	139,70±48,62**
I-10	10 мг/кг	12	95,30±15,06	121,91±22,75**
I-11	10 мг/кг	12	86,60±23,08	145,32±33,78**
I-12	10 мг/кг	12	93,20±19,54	136,44±53,28**
I-13	10 мг/кг	12	87,40±22,39	122,76±39,34**

Примечание: при сравнении с контрольной группой растворителя, ^**p<0,01.

Тест 2 Тест антиблефароптоза, вызванного резерпином, на модели депрессии

1 Материал

1.1 Реагенты

Соединения I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8, I-9, I-10, I-11, I-12 и I-13 синтезировали в соответствии со способом настоящего изобретения (чистота>95%). 2% водный раствор Tween-80 добавляли для получения раствора, содержащего 1 мг/мл соединения лекарственного средства.

Флуоксетина гидрохлорид был изготовлен Patheon Inc. (Франция) и отдельно упакован Eli Lilly (Сучжоу) Pharmaceutical Inc. со спецификацией 20 мг/таблетка и номером партии 81958. Перед экспериментом его растворяли в 2% водном растворе Tween-80 для получения раствора, содержащего 1 мг/мл соединения лекарственного средства.

Инъекцию резерпина приобретали у Shanghai Fudan Fuhua Pharmaceutical Co., Ltd. со спецификацией 1 мг/мл и серийным номером x070302.

1.2 Животные

Мышей C57BL/6 приобретали у Beijing Vital River Experimental Animal Co. Ltd. Номер сертификации животных SCXK (Beijing) 2006-0009.

1.3 Оборудование

Многофункциональное регистрирующее автономную деятельность у мышей устройство YLS-1A было предоставлено Shandong Institute of Medical Instruments.

2. Способ

240 самцов мышей C57BL/6 с весом 18~22 г в возрасте 6~8 недель кормили для адаптации в течение 2~3 дней.

Эксперимент 1

120 самцов мышей C57BL/6 выбирали случайным образом для определения величины их автономной деятельности. Мышей помещали в многофункциональное регистрирующее автономную деятельность у мышей устройство YLS-1A и после 1 мин адаптации подсчитывали величину деятельности мышей за период времени с конца 1^ой мин до 4^ой мин. Отбирали 96 мышей с величиной автономной деятельности от 70 до 140, случайным образом разделяли на 8 групп и внутрижелудочно вводили им соединения лекарственного средства в дозе, приведенной в таблице 3, один раз в день последовательно в течение 7 дней. Контрольной группе растворителя вводили 2% водный раствор Tween-80 в таком же объеме. За исключением нормальной контрольной группы, спустя 30 мин после последнего введения, каждой группе внутрибрюшинно инъецировали резерпин в дозе 4 мг/кг. После этого наблюдали за проявлением акинезии, блефароптоза и наблюдали за внешней температурой тела.

I Акинезия: спустя один час после внутрибрюшинной инъекции резерпина мышей помещали в центр круга диаметром 7,5 см для наблюдения в течение 15 с, чтобы рассчитать соотношение “выхода из круга”.

II Блефароптоз: спустя один час после внутрибрюшинной инъекции резерпина наблюдали смыкание глаз мышей и оценивали с помощью следующих нормативов: веки открыты, 0; веки закрыты на 1/4, 1; веки закрыты на 2/4, 2; веки закрыты на 3/4, 3; веки закрыты полностью, 4.

III Температура поверхности тела: через два часа после внутрибрюшинной инъекции резерпина измеряли внешнюю температуру живота мышей.

Эксперимент 2

120 мышей C57BL/6 выбирали случайным образом для определения величины их автономной деятельности. Способ был аналогичен таковому из эксперимента 1. Отбирали 100 мышей с величиной автономной деятельности от 70 до 140, случайным образом разделяли на 10 групп и внутрижелудочно вводили соединения лекарственного средства в дозе, приведенной в таблице 4, один раз в день последовательно в течение 7 дней. Мышам в нормальной группе и контрольной группе растворителя вводили 2% водный раствор Tween-80 в таком же объеме. Исключая нормальную контрольную группу, спустя 30 мин после последнего введения каждой группе внутрибрюшинно инъецировали резерпин в дозе 4 мг/кг. После этого наблюдали за проявлением акинезии, блефароптоза и наблюдали за внешней температурой тела. Способ наблюдения был аналогичен таковому из эксперимента 1.

Статистические данные

Использовали аналитическое программное обеспечение SPSS10.0 и анализировали результаты с помощью способа однофакторного дисперсионного анализа для того, чтобы сравнить межгрупповую значимость.

3 Результаты

Полное исчезновение резерпина, как полагают, представляет собой везикулярный ингибитор обратного захвата, который производит медиаторы вне везикулы, и кроме того приводит к легкой деградации медиаторов под действием моноаминоксидазы. Таким образом, NE, E, DA, 5-HT и им подобные истощаются, что приводит к физиологическим или поведенческим изменениям, следовательно, наблюдают симптомы депрессии.

Как показано в эксперименте 1, после введения резерпина наблюдали акинезию, блефароптоз и пониженную внешнюю температуру тела. При сравнении с контрольной группой растворителя лекарственное средство положительного контроля, флуоксетина гидрохлорид (10 мг/кг), может заметно улучшить соотношение “выхода из круга”, и заметно повысить внешнюю температуру тела у мышей, и значительно снизить степень смыкания глаз у мышей (p<0,01). При сравнении с контрольной группой растворителя значительно снижается блефароптоз, значительно улучшается соотношение “выхода из круга” и значительно повышается внешняя температура тела (p<0,05, p<0,01) в группах I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6. По сравнению с I-1, степень смыкания глаз у мышей в группах I-3, I-4, I-5 была снижена (p<0,01); соотношение “выхода из круга” в группах I-2, I-3, I-4, I-5, I-6 заметно улучшалось (p<0,05). Соединения I-4 и I-5 оказывают лучший эффект на снижение акинезии, блефароптоза и повышение внешней температуры тела.

Таблица 3. Эффект каждого соединения на смыкание глаз и акинезию, вызванную резерпином (±SD)

Группы	Дозировка	Количество мышей	Степень смыкания глаз	Изменение температуры поверхности тела (ΔT°С)	Соотношение “выхода из круга”
Контроль-растворитель	--	12	3,50±0,52	3,51±0,37	0%
Флуоксетина гидрохлорид	10 мг/кг	12	1,42±1,38**∆	1,89±0,21*	58%∆
I-1	10 мг/кг	12	2,67±0,89*	2,05±0,24*	17%
I-2	10 мг/кг	12	1,67±1,30**	1,60±0,18*	83%∆
I-3	10 мг/кг	12	1,00±1,13**∆∆	1,72±0,26*	92%∆
I-4	10 мг/кг	12	0,17±0,39**∆∆	1,51±0,31*	100%∆
I-5	10 мг/кг	12	0,42±0,79**∆∆	1,32±0,16*	92%∆
I-6	10 мг/кг	12	2,08±1,68*	1,84±0,22*	67%∆