2588462 - Моноклональное антитело против интерлейкина-31

Моноклональное антитело против интерлейкина-31

Иллюстрации

Показать все

Изобретение относится к биотехнологии. Предложено выделенное антитело, которое специфически связывается по меньшей мере с одним из собачьего интерлейкина-31 (IL-31) или кошачьего IL-31. Такие антитела могут быть представлены в форме диагностических и/или ветеринарных композиций, полезных для лечения сопровождающегося зудом и/или аллергического состояния у собак или кошек. Изобретение расширяет арсенал средств лечения животных. 9 н. и 18 з.п. ф-лы, 23 ил., 5 табл., 12 пр.

Реферат

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к области рекомбинантных моноклональных антител и их применениям в клинических и научных методиках, в том числе диагностических методиках. Согласно настоящему изобретению также предложены выделенные антитела против IL-31 (интерлейкина-31) в форме ветеринарных композиций, полезных для лечения сопровождающегося зудом состояния или аллергического состояния у собак или кошек.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Атопический дерматит определен специальной комиссией Американской коллегии по ветеринарной дерматологии как "воспалительное и зудящее аллергическое кожное заболевание с генетической предрасположенностью с характерными клиническими признаками" (Olivry et al., Veterinary Immunology and Immunopathology, 2001, 81:143-146). Специальная комиссия также признала, что данное заболевание у представителей семейства псовых ассоциировано с аллерген-специфическим IgE (Olivry и др. 2001, выше; Marsella & Olivry, Clinics in Dermatology, 2003, 21:122-133). Сильный прурит наряду с вторичной алопецией и эритемой являются наиболее заметными и тревожащими симптомами для владельцев домашних животных.

Распространенность атопического дерматита точно не известна вследствие недостаточных и противоречивых эпидемиологических данных, но по оценкам составляет 10% от общей популяции представителей семейства псовых (Marsella & Olivry, 2003, выше; Scott et al., Canadian Veterinary Journal, 2002, 43:601-603; Hillier Veterinary Immunology and Immunopathology, 2001, 81:147-151). В целом, примерно 4,5 миллиона собак подвержены воздействию этого хронического и продолжающегося в течение всей жизни состояния. По всей видимости, уровень заболеваемости увеличивается. Полагали, что есть предрасположенность в отношении породы и пола, однако в зависимости от географического региона могут быть сильные различия (Hillier, 2001, выше; Picco et al., Vet. Dermatol., 2008, 19:150-155).

Возможные факторы, вовлеченные в аллергический дерматит, многочисленны и плохо изучены. Атонический дерматит могут инициировать присутствующие в пище компоненты (Picco, 2008, выше), а также аллергены из окружающей среды, такие как блохи, пылевые клещи, амброзия, растительные экстракты и т.д. Важную роль также играют генетические факторы. И хотя никаких подтверждений предрасположенности в отношении породы нет, полагают, что имеется некоторое влияние наследственности в повышении предрасположенности к атопическому дерматиту (Sousa & Marsella, Veterinary Immunology and Immunopathology, 2001, 81:153-157; Schwartzman et al., Clin. Exp. Immunol. 1971, 9:549-569).

Интерлейкин-31 (IL-31) представляет собой цитокин, клонирование которого было осуществлено в 2004 году. Он продуцируется главным образом активированными Т-хелперными (Th)2-клетками (Dillon et al., Nat. Immunol., 2004, 5:752-60), однако также продуцируется в тучных клетках и макрофагах. IL-31 связывается с корецептором, состоящим из рецептора А IL-31 (IL-31RA) и рецептора онкостатина М (OSMR) (Dillon и др., 2004, выше, и Bilsborough et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2006, 117(2):418-25). Активация рецептора вызывает фосфорилирование STAT (трансдуктор сигнала и активатора транскрипции) с участием рецептора(ов) JAK (янус-киназы). Экспрессия корецептора продемонстрирована в макрофагах, кератиноцитах и в дорсальных корешковых ганглиях. Не так давно обнаружено, что IL-31 вовлечен в дерматит, зудящие поражения кожи, аллергию и гиперчувствительность дыхательных путей. См. Фиг.1.

Стимуляция Т-клеток антителами против CD3 и против CD28 незамедлительно повышает экспрессию мРНК IL-31 (Dillon et al., 2004, выше). Посредством анализа с применением микрочипов показано, что IL-31 индуцирует некоторые гены хемотаксических агентов, таких как CXCL1 (СХС-хемокиновый лиганд 1), CCL17 (СС-хемокиновый лиганд 17) (тимусный регулируемый активацией хемокин (TARC)), CCL19 (макрофагальный воспалительный белок (MIP) 3β), CCL22 (моноцитарный хемокин (MDC)), CCL23 (MIP3) и CCL4 (MIPβ) (Dillon и др., 2004, выше).

Трансгенные мыши, которые сверхэкспрессируют IL-31, демонстрируют кожное воспаление, зуд, тяжелый дерматит и алопецию (Dillon и др., 2004, выше). Подкожная инъекция IL-31 мышам инициирует инфильтрацию под действием воспалительных клеток, нейтрофилов, эозинофилов, лимфоцитов и макрофагов и приводит к эпидермальному утолщению и акантозу кожи. У мышей NC/Nga с атопическим дерматитом (AD) вследствие естественных причин IL-31 сверхэкспрессируетя в местах поражения кожи, и его уровень коррелирует с пруритом (Takaoka et al., Eur. J. Pharmacol., 2005, 516, 180-181; Takaoka et al., Exp. Dermatol., 2006, 15, 161-167). Кроме того, на мышиных моделях показано, что IL-31 индуцирует быстронаступающий прурит (Raap et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2008, 122(2):421-3).

В других исследованиях показано, что IL-31 ассоциирован с индуцируемым атопическим дерматитом кожным воспалением и пруритом у людей. У пациентов-людей с AD в значительно большей степени наблюдается экспрессия мРНК IL-31 в местах поражения кожи, чем в непораженных участках кожи, а экспрессия в непораженных участках кожи превышает таковую в нормальной коже здоровых пациентов (Sonkoly et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2006, 117:411-7). В другом исследовании сообщалось, что CD45RO+ Т-клетки (клетки памяти), позитивные в отношении кожного лимфоцитарного антигена (CLA), экспрессируют мРНК и белок IL-31 в коже пациентов с AD (Bilsborough и др., 2006, выше). Также сообщалось, что сверхэкспрессия мРНК IL-31 в коже пациентов или аллергический контактный дерматит коррелируют с экспрессией мРНК IL-4 и IL-13, а не с экспрессией мРНК интерферона(IFN)-γ (Neis et al., J. Allergy Clin. Immunol., 2006, 118, 930-937). Помимо этого, показано, что уровни IL-31 в сыворотке крови пациентов-людей с хронической спонтанной крапивницей повышены и еще больше повышены у пациентов с AD (Raap et al., Exp. Dermatol., 2010, 19(5):464-6). Кроме того, у людей наблюдали корреляцию тяжести AD с уровнями IL-31 в сыворотке крови (Rapp и др., 2008, выше). Также показано, что секреция IL-31 усиливалась в тучных клетках после перекрестного связывания IgE и в ответ на стафилококковый суперантиген у индивидов с атопией. Помимо этого, показано, что IL-31 стимулирует продуцирование некоторых провоспалительных медиаторов, включая IL-6, IL-8, CXCL1, СС17 и многочисленные металлопротеиназы, в миофибробластах толстой кишки человека (Yagi et al., International Journal of Molecular Medicine, 2007, 19(6):941-946).

Считается, что гиперчувствительность I типа к аллергенам из окружающей среды представляет собой главный механизм AD у представителей семейства псовых, и уровни Th2-опосредованных цитокинов, таких как IL-4, в местах поражения кожи собак с AD повышены (Nuttall et al., Vet. Immunol. Immunopathol., 2002, 87, 379-384). Кроме того, инфильтрация под действием воспалительных клеток, лимфоцитов и нейтрофилов представляет собой важный механизм, лежащий в основе обострения кожных поражений; сверхэкспрессия генов хемотаксических агентов, таких как CCL17/TARC, CCR4 и CCL28/ассоциированный со слизистой оболочкой эпителиальный хемокин (МЕС), вносит вклад в обострение поражений кожи у собак с AD (см. Maeda et al., Vet. Immunol. Immunopathol., 2005, 103, 83-92; Maeda et al., Vet. Immunol. Immunopathol., 2002b, 90, 145-154; и Maeda et al., J. Vet. Med. Sci., 2008, 70, 51-55).

Последние данные указывают на то, что IL-31 может быть вовлечен в стимуляцию аллергического воспаления и ответную реакцию эпителия дыхательных путей, характерную для аллергической астмы (Chattopadhyay et al., J. Biol. Chem., 2007, 282: 3014-26; и Wai et al., Immunology, 2007, 122, 532-541).

Эти наблюдения подтверждают гипотезу о том, что IL-31 играет существенную роль как в сопровождающихся зудом, так и в аллергических состояниях. Было бы желательно иметь терапевтическое антитело против IL-31, полезное для лечения сопровождающегося зудом состояния и/или аллергического состояния у собак или кошек.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном из воплощений согласно настоящему изобретению предложено выделенное антитело, которое специфически связывается по меньшей мере с одним из собачьего IL-31 или кошачьего IL-31. В некоторых воплощениях антитело представляет собой моноклональное антитело. В одном из воплощений моноклональное антитело является химерным. В другом воплощении антитело является канинизированным или фелинизированным.

В некоторых воплощениях антитело снижает, ингибирует или нейтрализует активность IL-31 у собаки или кошки. В предпочтительных воплощениях антитело ослабляет, подавляет или нейтрализует сопровождающееся зудом состояние или аллергическое состояние. Сопровождающиеся зудом состояния включают, например, атопический дерматит, экзему, псориаз, склеродермию и прурит. Аллергические состояния включают, например, аллергический дерматит, летнюю экзему, крапивницу, запал, воспалительное заболевание дыхательных путей, рецидивирующую обструкцию дыхательных путей, гиперреактивность дыхательных путей, хроническую обструктивную болезнь легких и воспалительные процессы, возникающие в результате аутоиммунной реакции, такие как синдром раздраженного кишечника (IBS). В одном из воплощений согласно настоящему изобретению предложено выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие по меньшей мере одно из следующего:

определяющую комплементарность область (CDR) 1 вариабельного домена тяжелой (V_H) цепи, имеющую аминокислотную последовательность YYDIN (SEQ ID NO:1; 11E12-VH-CDR1), SYDMS (SEQ ID NO:2; 19D07-VH-CDR1) или NYGMS (SEQ ID NO:3; 34D03-VH-CDR1);

CDR2 вариабельного домена тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность WIFPGDGGTKYNETFKG (SEQ ID NO:4; 11E12-VH-CDR2), TITSGGGYTYSADSVKG (SEQ ID NO:5; 19D07-VH-CDR2) или TISYGGSYTYYPDNIKG (SEQ ID NO:6; 34D03-VH-CDR2);

CDR3 вариабельного домена тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность ARGGTSVIRDAMDY (SEQ ID NO:7; 11E12-VH-CDR3), ARQNWWGLAY (SEQ ID NO:8; 19D07-VH-CDR3) или VRGYGYDTMDY (SEQ ID NO:9; 34D03-VH-CDR3); и

их вариант, имеющий одну или более чем одну консервативную аминокислотную замену по меньшей мере в одной из CDR1, CDR2 или CDR3.

В другом воплощении согласно изобретению предложено выделенное антитело или его антигенсвязывающий участок, содержащие по меньшей мере одно из следующей группы:

вариабельный домен легкой (V_L) цепи, содержащий определяющую комплементарность область (CDR) 1, имеющую аминокислотную последовательность RASESVDNYGISFMH (SEQ ID NO:10; 11E12-VL-CDR1), KSSQSLLNSGNQKNYLA (SEQ ID NO:11; 19D07-VL-CDR1) или KASQSVSFAGTGLMH (SEQ ID NO:12; 34D03-VL-CDR1);

CDR2 вариабельного домена легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность RASNLES (SEQ ID NO:13; 11E12-VL-CDR2), GASTRES (SEQ ID NO:14; 19D07-VL-CDR2) или RASNLEA (SEQ ID NO:15; 34D03-VL-CDR2);

CDR3 вариабельного домена легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность QQSNKDPLT (SEQ ID NO:16; 11E12-VL-CDR3), QNDYSYPYT (SEQ ID NO:17;19D07-VL-CDR3) или QQSREYPWT (SEQ ID NO:18; 34D03-VL-CDR3); и

В других воплощениях антитело, имеющее по меньшей мере одну из CDR вариабельного домена легкой цепи, описанных выше, может дополнительно содержать по меньшей мере одну из следующих CDR вариабельного домена тяжелой цепи:

определяющую комплементарность область (CDR) 1 вариабельного домена тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность YYDIN (SEQ ID NO:1; 11E12-VH-CDR1), SYDMS (SEQ ID NO:2; 19D07-VH-CDR1) или NYGMS (SEQ ID NO:3; 34D03-VH-CDR1);

В некоторых воплощениях антитело может содержать по меньшей мере одно из следующего:

а) вариабельный домен легкой цепи, содержащий

б) вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий

в) их варианты, имеющие одну или более чем одну консервативную аминокислотную замену.

В одном из воплощений согласно настоящему изобретению предложено моноклональное антитело, которое специфически связывается с областью примерно между аминокислотными остатками 95 и 125 аминокислотной последовательности собачьего IL-31 SEQ ID NO:32 или с соответствующей областью кошачьего IL-31. В некоторых воплощениях антитело специфически связывается с областью примерно между аминокислотными остатками 102 и 122 аминокислотной последовательности собачьего IL-31 (SEQ ID NO:32) или с соответствующей областью кошачьего IL-31.

Согласно настоящему изобретению также предложена ветеринарная композиция, содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного антитела, описанного выше.

В других воплощениях согласно изобретению предложена клетка-хозяин, которая продуцирует антитело, описанное выше.

В других воплощениях согласно изобретению предложена выделенная нуклеиновая кислота, содержащая последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одно из следующего:

В других воплощениях выделенная нуклеиновая кислота, описанная выше, может дополнительно содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую по меньшей мере одно из следующего:

CDR3 вариабельного домена легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность QQSNKDPLT (SEQ ID NO:16; 11E12-VL-CDR3), QNDYSYPYT (SEQ ID NO:17; 19D07-VL-CDR3) или QQSREYPWT (SEQ ID NO:18; 34D03-VL-CDR3); и

Согласно настоящему изобретению также предложен вектор, содержащий по меньшей мере одну из нуклеиновых кислот, описанных выше.

В других воплощениях согласно настоящему изобретению предложен способ продуцирования антитела, включающий культивирование клетки-хозяина, описанной выше, в условиях, которые приводят к продуцированию антитела, и выделение антитела из клетки-хозяина или культуральной среды клетки-хозяина.

Также предложен способ лечения состояния или расстройства, выбранного из сопровождающегося зудом состояния или аллергического состояния, включающий введение терапевтически эффективного количества антитела, описанного выше. В некоторых воплощениях сопровождающееся зудом состояние выбрано из атопического дерматита, экземы, псориаза, склеродермии и прурита. В других воплощениях подвергаемое лечению аллергическое состояние выбрано из аллергического дерматита, летней экземы, крапивницы, запала, воспалительного заболевания дыхательных путей, рецидивирующей обструкции дыхательных путей, гиперреактивности дыхательных путей, хронической обструктивной болезни легких и воспалительных процессов, возникающих в результате аутоиммунной реакции, таких как синдром раздраженного кишечника (IBS).

Кроме того, предложен способ ингибирования активности IL-31 у собаки или кошки, включающий введение антитела, описанного выше.

Также предложен способ обнаружения или количественного определения IL-31 в образце, включающий инкубирование клинического или биологического образца, содержащего IL-31, в присутствии антитела, описанного выше, и обнаружение антитела, которое связано с IL-31 в образце. В одном из воплощений антитело является меченым с возможностью обнаружения. В другом воплощении антитело является немеченым и используется в комбинации с вторичным антителом, которое является меченым.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг.1 представляет собой схематическое изображение IL-31-пути.

Фиг.2 представляет собой схематическое изображение общей структуры молекулы иммуноглобулина G (IgG) мыши с выделенным антигенсвязывающим сайтом.

Фиг.3 представляет собой схематическое изображение общей структуры химерного мышиного:собачьего IgG.

Фиг.4 представляет собой иллюстрацию, на которой показано видообразование или "канинизации" мышиного IgG; мышиные CDR прививают на каркасы собачьего Ig, идентифицированные из баз данных для последовательностей.

Фиг.5 представляет собой иллюстрацию "гетерохимерного" моноклонального антитела с химерной легкой цепью в паре с полностью канинизированной тяжелой цепью.

На Фиг.6 показаны ELISA-титры для IL-31-иммунизированных мышей (CF-1 MU №1-4) относительно мышей до иммунизации и мышей в качестве положительного контроля.

Фиг.7 представляет собой иллюстрацию вариабельных доменов цепей антитела, на которой показаны праймеры к константным областям и вырожденные праймеры в направлении вариабельных областей Ig мыши.

Фиг.8 представляет собой график эффективности химерного 11Е12 в пилотном плацебо-контролируемом исследовании с п/к (подкожным) введением разовой дозы (76А60).

На Фиг.9 представлена таблица, показывающая индивидуальные оценки тяжести зуда в баллах у собак, зарегистрированных в исследовании 76А60.

На Фиг.10 представлены вестерн-блоты, демонстрирующие связывание химерных (блот №1), канинизированных (блот №2) и гетерохимерных (блоты №3 и 4) вариантов 11Е12 с собачьим IL-31. Гетерохимера на блоте №3 имеет канинизированную легкую цепь в паре с химерной тяжелой цепью. Гетерохимера на блоте №4 имеет химерную легкую цепь в паре с канинизированной тяжелой цепью. Каждый нитроцеллюлозный блот содержит: левая дорожка - предварительно окрашенные белковые стандарты (Seeblue plus 2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA), и правая дорожка - 800 нг собачьего IL-31.

На Фиг.11 приведено схематическое представление результата замены в каркасе легкой цепи канинизированного 11Е12.

На Фиг.12 представлены вестерн-блоты, демонстрирующие связывание канинизированных вариантов 11Е12, содержащих одиночные обратные мутации в остатках каркаса 2 легкой цепи Ig мыши. Каждый нитроцеллюлозный блот содержит: левая дорожка - предварительно окрашенные белковые стандарты (Seeblue plus 2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA), и правая дорожка - 800 нг собачьего IL-31.

На Фиг.13 представлены вестерн-блоты с использованием полноразмерных и укороченных белков собачьего IL-31. Индивидуальные нитроцеллюлозные блоты зондировали, используя антитела А) против His, В) 34D03 и С) 11Е12. Линии 1-9 блотов соответствуют следующему: дорожка 1 - предварительно окрашенные белковые стандарты (Seeblue plus 2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA); дорожка 2 - полноразмерный собачий IL-31; дорожка 3 - структура, укороченная по N-концу, -20N; дорожка 4 - структура, укороченная по N-концу, -40N; дорожка 5 - структура, укороченная по N-концу, -60N; дорожка 6 - структура, укороченная по С-концу -20С; дорожка 7 - структура, укороченная по С-концу -40С; дорожка 8 - структура, укороченная по С-концу -60С; и дорожка 9 - бета-галактозидаза (lacZ). Примечание: для полноразмерного IL-31 и белков с укорочениями по С-концу (-20С, -40С и -60С) не обнаружено никакой детектируемой экспрессии в этих условиях.

На Фиг.14 представлены вестерн-блоты для укороченных белков собачьего IL-31. Индивидуальные нитроцеллюлозные блоты зондировали, используя антитела А) против His, В) 11Е12 и С) 34D03. Линии 1-5 блотов соответствуют следующему: дорожка 1 - предварительно окрашенные белковые стандарты (Seeblue plus 2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA); дорожка 2 - укороченные по С-концу конструкции, соответствующие положениям 20-122; дорожка 3 - укороченные по С-концу конструкции, соответствующие положениям 20-100; дорожка 4 - укороченные по С-концу конструкции, соответствующие положениям 20-80; и дорожка 5 - бета-галактозидаза (lacZ).

Фиг.15 представляет собой часть вестерн-блотов для лизатов штаммов Е. coli, экспрессирующих собачий IL-31 с заменой на аланин для каждого положения аминокислот (76-122). Индивидуальные нитроцеллюлозные блоты зондировали антителами против His, 11E12 и 34D03, как показано на этой Фиг.

Фиг.16 представляет собой часть вестерн-блотов для лизатов с двойными и тройными мутациями в собачьем IL-31. Белковый лизат -20N использовали в качестве положительного контроля.

Фиг.17 представляет собой график, показывающий оценки тяжести зуда в баллах у собак, которым вводили подкожно канинизированное антитело 34D03 (1,0 мг/кг). Тяжесть зуда в баллах оценивали в каждый день исследования перед (исходный ответ) и после (ответ за период 2 ч) введения собачьего IL-31 (1,5 мкг/кг).

Фиг.18 представляет собой картину электрофореза в полиакриламидном 4-12%-ном геле в бис-Трис-буфере в присутствии додецилсульфата натрия (4-12% Bis-Tris SDS PAGE) для очищенных собачьих и кошачьих белков IL-31. На панели А показано окрашивание белков с использованием кумасси, анализ которых проводили в восстанавливающих условиях. На панели В показано окрашивание белков с использованием кумасси, анализ которых проводили в невосстанавливающих условиях. Панели С и D представляют собой вестерн-блоты гелей, идентичных А и В, соответственно, зондированных антителом против His. Дорожка 1 - собачий IL-31; дорожка 2 - кошачий IL-31; дорожка 3 - предварительно окрашенные белковые стандарты (Seeblue plus 2, Invitrogen Corp., Carlsbad, CA); дорожка 4 - собачий IL-31; и дорожка 5 - кошачий IL-31.

Фиг.19 представляет собой график pSTAT-передачи сигнала в собачьих моноцитах DH-82, которая индуцируется собачьим и кошачьим IL-31, продуцированным в Е. coli. Собачий IL-31 (СНО) представляет собой референсный белок, использованный для всех предыдущих анализов на основе клеток, модели прурита у собак и в качестве иммуногена для первоначальной идентификации антител.

На Фиг.20 представлено выравнивание, демонстрирующее консервативность последовательностей среди кошачьих и собачьих IL-31 в области этого белка, вовлеченной в связывание антител 11Е12 и 34D03 (помечено знаком плюс).

На Фиг.21 представлены вестерн-блоты с использованием белков IL-31. Индивидуальные нитроцеллюлозные блоты зондировали антителами А) против His, В) 11Е12 и С) 34D03. Примечание: собачий IL-31 (СНО) не содержит метки 6-His.

Фиг.22 представляет собой график, показывающий ингибирование pSTAT-передачи сигнала, индуцированной собачьим IL-31, в собачьих моноцитах DH82 со сравнением фелинизированного и канинизированного антитела 34D03.

Фиг.23 представляет собой вестерн-блот кошачьего и собачьего IL-31 в восстанавливающих условиях, зондированный фелинизированным антителом 34D03.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO:1 представляет собой CDR1 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 11E12-VH-CDR1;

SEQ ID NO:2 представляет собой CDR1 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 19D07-VH-CDR1;

SEQ ID NO:3 представляет собой CDR1 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 34D03-VH-CDR1;

SEQ ID NO:4 представляет собой CDR2 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 11E12-VH-CDR2;

SEQ ID NO:5 представляет собой CDR2 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 19D07-VH-CDR2;

SEQ ID NO:6 представляет собой CDR2 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 34D03-VH-CDR2;

SEQ ID NO:7 представляет собой CDR3 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 11E12-VH-CDR3;

SEQ ID NO:8 представляет собой CDR3 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 19D07-VH-CDR3;

SEQ ID NO:9 представляет собой CDR3 вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенную в данном описании как 34D03-VH-CDR3;

SEQ ID NO:10 представляет собой CDR1 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 11E12-VL-CDR1;

SEQ ID NO:11 представляет собой CDR1 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 19D07-VL-CDR1;

SEQ ID NO:12 представляет собой CDR1 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 34D03-VL-CDR1;

SEQ ID NO:13 представляет собой CDR2 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 11E12-VL-CDR2;

SEQ ID NO:14 представляет собой CDR2 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 19D07-VL-CDR2;

SEQ ID NO:15 представляет собой CDR2 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 34D03-VL-CDR2;

SEQ ID NO:16 представляет собой CDR2 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 11E12-VL-CDR3;

SEQ ID NO:17 представляет собой CDR3 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 19D07-VL-CDR3;

SEQ ID NO:18 представляет собой CDR3 вариабельного домена легкой цепи, обозначенную в данном описании как 34D03-VL-CDR3;

SEQ ID NO:19 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как MU-11E12-VL;

SEQ ID NO:20 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VL-cUn-FW2;

SEQ ID NO:21 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VL-cUn-13;

SEQ ID NO:22 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как MU-19D07-VL;

SEQ ID NO:23 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-19D07-VL-998-1;

SEQ ID NO:24 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как MU-34D03-VL;

SEQ ID NO:25 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-34D03-VL-998-1;

SEQ ID NO:26 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как MU-11E12-VH;

SEQ ID NO:27 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VH-415-1;

SEQ ID NO:28 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как MU-19D07-VH;

SEQ ID NO:29 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-19D07-VH-400-1;

SEQ ID NO:30 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как MU-34D03-VH;

SEQ ID NO:31 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-34D03-VH-568-1;

SEQ ID NO:32 представляет собой аминокислотную последовательность, соответствующую № доступа в GenBank C7GOW1, и соответствует полноразмерному белку IL-31 собаки;

SEQ ID NO:33 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую № доступа в GenBank C7G0W1, и соответствует нуклеотидной последовательности, кодирующей полноразмерный белок IL-31 собаки;

SEQ ID NO:34 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как MU-11E12-VL;

SEQ ID NO:35 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как MU-11E12-VH;

SEQ ID NO:36 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как MU-19D07-VL;

SEQ ID NO:37 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как MU-19D07-VH;

SEQ ID NO:38 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как MU-34D03-VL;

SEQ ID NO:39 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как MU-34D03-VH;

SEQ ID NO:40 представляет собой аминокислотную последовательность для константной области тяжелой цепи собачьего Ig, обозначенной в данном описании как НС-64 (№ доступа в GenBank AF354264);

SEQ ID NO:41 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область тяжелой цепи собачьего Ig, обозначенной в данном описании как НС-64 (№ доступа в GenBank AF354264);

SEQ ID NO:42 представляет собой аминокислотную последовательность для константной области тяжелой цепи собачьего Ig, обозначенной в данном описании как НС-65 (№ доступа в GenBank AF354265);

SEQ ID NO:43 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область тяжелой цепи собачьего Ig, обозначенную в данном описании как НС-65 (№ доступа в GenBank AF354265);

SEQ ID NO:44 представляет собой аминокислотную последовательность для константной области легкой цепи собачьего Ig, обозначенной в данном описании как каппа (№ доступа в GenBank ХР_532962);

SEQ ID NO:45 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область легкой цепи собачьего Ig, обозначенную как каппа (№ доступа в GenBank ХР_532962);

SEQ ID NO:46 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-19D07-VL-998-1;

SEQ ID NO:47 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-19D07-VH-998-1;

SEQ ID NO:48 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-34D03-VL-998-1;

SEQ ID NO:49 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-34D03-VH-568-1;

SEQ ID NO:50 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VL-cUn-FW2;

SEQ ID NO:51 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VH-415-1;

SEQ ID NO:52 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VL-cUn-13;

SEQ ID NO:53 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12_VL_cUn_1;

SEQ ID NO:54 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как CAN-11E12-VL-cUn-1;

SEQ ID NO:55 соответствует аминокислотной последовательности полноразмерной конструкции собачьего IL-31, использованной в данном описании для экспрессии в E. coli;

SEQ ID NO:56 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую полноразмерной конструкции собачьего IL-31, использованной в данном описании для экспрессии в E. coli;

SEQ ID NO:57 представляет собой аминокислотную последовательность конструкции -20N собачьего IL-31 для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:58 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую конструкции -20N собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:59 представляет собой аминокислотную последовательность конструкции -40N собачьего IL-31 для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:60 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую конструкции -40N собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:61 представляет собой аминокислотную последовательность конструкции -60N собачьего IL-31 для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:62 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую конструкции -60N собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:63 представляет собой аминокислотную последовательность конструкции 20-122 собачьего IL-31 для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:64 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую конструкции 20-122 собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:65 представляет собой аминокислотную последовательность конструкции 20-100 собачьего IL-31 для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:66 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую конструкции 20-100 собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:67 представляет собой аминокислотную последовательность конструкции 20-80 собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:68 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую конструкции 20-80 собачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:69 представляет собой нуклеотидную последовательность, соответствующую полноразмерной конструкции кошачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:70 представляет собой аминокислотную последовательность, соответствующую полноразмерной конструкции кошачьего IL-31, для экспрессии в Е. coli;

SEQ ID NO:71 представляет собой последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как FEL-34D03-VL-021-1;

SEQ ID NO:72 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена легкой цепи, обозначенного в данном описании как FEL-34D03-VL-021-1;

SEQ ID NO:73 представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как FEL-34D03-VH-035-1;

SEQ ID NO:74 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, обозначенного в данном описании как FEL-34D03-VH-035-1;

SEQ ID NO:75 представляет собой аминокислотную последовательность для константной области тяжелой цепи кошачьего Ig, обозначенной в данном описании как НС-А кошек (№ доступа в GenBank AB016710.1);

SEQ ID NO:76 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область тяжелой цепи кошачьего Ig, обозначенную в данном описании как НС-А кошек (№ доступа в GenBank AB016710.1);

SEQ ID NO:77 представляет собой аминокислотную последовательность для константной области легкой цепи кошачьего Ig, обозначенной в данном описании как LC-каппа кошек (№ доступа в GenBank AF198257.1);

SEQ ID NO:78 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую константную область легкой цепи кошачьего Ig, обозначенную в данном описании как LC-каппа кошек (№ доступа в GenBank AF198257.1).

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Перед подробным описанием настоящего изобретения будут определены некоторые термины, используемые в контексте настоящего изобретения. В дополнение к этим терминам в данном описании определены и другие термины, если это необходимо. Если в данном описании явным образом не указано иное, то принятые в данной области техники термины, которые использованы в этом описании, будут иметь свои признанные в данной области значения.

Как использовано в описании и формуле изобретения, формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если контекст ясно не предусматривает иное. Например, ссылка на "антитело" включает множество таких антител.

Подразумевается, что использованный в данном описании термин "содержащий" означает, что композиции и способы включают перечисленные элементы, но не исключая другие элементы.

Эпитоп, как использовано в данном описании, относится к антигенной детерминанте, распознаваемой CDR антитела. Другими словами, эпитоп относится к тому участку любой молекулы, который способно распознавать и с которым может связываться антитело. Если не указано иное, термин "эпитоп", использованный в данном описании, относится к области IL-31, с которой анти-IL-31 агент вступает в реакцию.

"Антиген" представляет собой молекулу или участок молекулы, с которыми может связываться антитело, которые помимо этого способно распознавать и с которыми может связываться антитело (соответствующая область связывания антитела может быть названа паратопом). В общем случае, эпитопы состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, например боковых цепей аминокислот или Сахаров, и имеют определенные пространственные структурные характеристики, а также определенные характеристики в отношении заряда.

Термин "специфически", применительно к связыванию с антителом, относится к высокоавидному и/или высокоаффинному связыванию антитела с конкретным антигеном, т.е. полипептидом или эпитопом. Во многих воплощениях конкретным антигеном является антиген (или фрагмент либо субфракция антигена), используемый для иммунизации животного-хозяина, из которого были выделены антитело-продуцирующие клетки. Специфическое связывание антитела с антигеном является более сильным, ч

Моноклональное антитело против интерлейкина-31

Патент 2588462