Антитело против липоарабиноманнана и иммунологический анализ инфекции, вызываемой кислотоустойчивыми бактериями, с использованием антитела

Антитело против липоарабиноманнана и иммунологический анализ инфекции, вызываемой кислотоустойчивыми бактериями, с использованием антитела

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к моноклональному антителу, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном кислотоустойчивых бацилл, таких как бацилла туберкулеза, и, конкретно, к одноцепочечному антителу (scFv) и его мультивалентному антителу.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу обнаружения кислотоустойчивых бацилл с использованием антител, конкретно, к способу диагностирования туберкулеза или способу диагностики туберкулеза; и реагенту для обнаружения кислотоустойчивой бациллы (например, реагенту для обнаружения туберкулеза), и набору для обнаружения кислотоустойчивой бациллы (например, набору для диагностики туберкулеза), которые предназначены для использования в вышеуказанном способе.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способу определения лечебного эффекта в отношении туберкулеза противотуберкулезного лекарственного средства с использованием антитела; и набору для определения лечебного эффекта в отношении туберкулеза противотуберкулезного лекарственного средства, которые предназначены для использования в вышеуказанном способе.

Уровень техники

Туберкулез представляет собой инфекционное заболевание, которое досаждает людям в течение нескольких тысяч лет, и по оценкам, ¼ взрослого населения Европы в девятнадцатом веке умерло от туберкулеза. Благодаря улучшению жизненного уровня и открытию антибиотиков в двадцатом веке, туберкулез был практически искоренен в промышленных странах в 1950-е годы. Однако туберкулез все еще свирепствует как периодически повторяющееся заболевание. В настоящее время оценивают, что одна треть населения мира инфицирована туберкулезной бациллой (скрытая форма туберкулеза). Утверждают, что общее количество пациентов с впервые выявленным туберкулезом в мире составляет 9,4 миллиона, и оценивают, что 2 миллиона пациентов среди них умирают от него. В настоящее время, приблизительно 95% пациентов с активной формой туберкулеза живут в развивающихся странах, и 99% людей, которые умирают от туберкулеза, сконцентрированы в развивающихся странах.

В 1990-х годах, мировое сообщество осознало снова, что число случаев заболевания туберкулезом все еще продолжает возрастать, таким образом, туберкулез становится самым серьезным инфекционным заболеванием, становящимся центральной проблемой в развивающихся странах, требующей принятия полномасштабных мер. Мероприятия против туберкулеза проводятся в условиях глобального сотрудничества, такого как развертывание Непосредственно Наблюдаемого Лечения, с Сокращенным Курсом (DOTS), в наибольшей степени под эгидой Всемирной Организацией Здравоохранения (ВОЗ), основание “Партнерства для Прекращения Туберкулеза” для принятия мер при сотрудничестве стран, которых эта проблема непосредственно касается, стран, предоставляющих помощь, и организация помощи, и основание “Фонда Борьбы со СПИД, Туберкулезом и Малярией” как системы для предоставления финансовой поддержки. Многие из существующих технологий, которые применяют в качестве контрмер против туберкулеза, обычно применялись в течение нескольких десятков лет, без каких-либо улучшений. Следовательно, существует острая потребность в разработке новых технологий, которые являются эффективными в развивающихся странах.

При диагностики туберкулеза, наиболее важно обнаружить инфекцию туберкулезной бациллы на ранней стадии, чтобы начать терапию. В частности, поскольку пациенты, которые находятся в состоянии выделения бактерий, имеют крайне высокий риск распространения инфекции на окружающих людей, необходимо лечить этих пациентов в изолированном окружении, без какого-либо контакта с окружающими людьми. В качестве теста для этого существует “Бактериологический анализ туберкулеза” и тест на мазок мокроты, описанный в нем, применяют наиболее часто.

Тест мазка мокроты представляет собой метод для непосредственного наблюдения и обследования образца мазка мокроты под микроскопом (прямая микроскопия образца мазка мокроты), и был установлен Робертом Кохом более столетия назад. Микобактерий идентифицируют в клиническом тестируемом образце посредством окрашивания патогена туберкулеза. Метод диагностики туберкулеза, применяемый в настоящее время, был установлен посредством практического использования технологии, применяемой Кохом. Тест на туберкулезную бациллу в мазке является стандартным методом для диагностики туберкулеза в развивающихся странах, и его также применяют в качестве референтного при оценке эффективности осуществления нового метода тестирования.

Метод генной амплификации был установлен в качестве метода, который имеет более высокую чувствительность, чем тест мазка мокроты. Метод генной амплификации представляет собой метод для увеличения специфичного фрагмента ДНК по типу цепной реакции с использованием ДНК-полимеразы. Принцип этого метода состоит в амплификации ДНК, которая предназначена для тестирования, с использованием ДНК, подлежащей амплификации, одной пары ДНК-праймеров, которые являются комплементарными последовательностям по обоим концам ДНК, и термостойкой ДНК-полимеразы, и осуществлении повторяющихся температурных изменений. Несмотря на то что метод генной амплификации является удовлетворительным с позиций чувствительности, трудно применять данный метод в развивающихся странах вследствие пригодности к эксплуатации, оборудования и затрат.

В качестве последней глобальной тенденции, вследствие распространения туберкулеза, резистентного к множеству лекарственных средств, интерес направлен в сторону необходимости теста культуры и теста с амплификацией нуклеиновой кислоты. Однако, среди разнообразных бактериологических методов диагностики, которые существуют, тест мазка мокроты (прямой микроскопии мокроты) все еще считают центральным ядром стратегий контрмер против туберкулеза. Особенно в бедных ресурсами развивающихся странах, в которых распространяется туберкулез, тест мазка мокроты является не только эффективным диагностическим методом, но также играет важную роль в качестве средства для определения терапевтического эффекта.

Как описано выше, несмотря на то что тест мазка мокроты является ядром базовой стратегии борьбы с туберкулезом, количество работников, которые проводят бактериологическое исследование, во многих развивающихся странах является абсолютно недостаточным, и считают, что профессиональные качества таких работников являются проблематичными. Поскольку эффективность этого теста зависит от квалификации лаборантов, ежедневное обучение и контроль качества являются существенными, а они являются причинами для чрезмерного увеличения общих затрат. В дополнение, развивающиеся страны имеют много проблем с социальной инфраструктурой, решение которых требуется для улучшения лабораторного окружения, инструментов тестирования, технологий тестирования и т.п. Эти факторы становятся запутанными сложным образом, и в результате, неблагоприятно влияют на качество теста в немалой степени.

Кроме того, поскольку тест мазка мокроты является тестом для обнаружения и идентификации кислотоустойчивых бацилл, но не методом обнаружения туберкулезных бацилл, с помощью этого теста невозможно идентифицировать туберкулезные бациллы.

Что касается терапии туберкулеза в развитых странах, то терапию с использованием химического средства инициируют после идентификации туберкулезной бациллы; в то время как программу DOTS, осуществляемую в развивающихся странах, терапию с использованием химического средства, начинают, когда кислотоустойчивую бациллу обнаруживают в тесте мазка мокроты без идентификации туберкулезной бациллы. В настоящем описании, несмотря на то, химические средства, используемые для инфекции туберкулезных бацилл и инфекции нетуберкулезных туберкулезных кислотоустойчивых бацилл, являются различными, терапию проводят для нетуберкулезных кислотоустойчивых бацилл, в основном, применяя химическое средство для туберкулезной бациллы, поскольку лекарственное средство с высоким терапевтическим эффектом для нетуберкулезных кислотоустойчивых бацилл не было разработано. Следовательно, пациент должен нести риск побочных эффектов от химического средства. Представительные примеры рисков, на которые было обращено внимание, включают серьезные побочные эффекты, такие как снижение функции печени и потеря зрения, и распространение резистентных к лекарственному средству нетуберкулезных кислотоустойчивых бацилл.

Как описано выше, несмотря на существование нескольких проблем в известной до настоящего времени диагностике туберкулеза и его терапии, метод тестирования мазка мокроты, разработанный Кохом в 1882 г., все еще применяется сейчас для диагностики туберкулеза без каких-либо крупных улучшений. С целью решения проблем в развивающихся странах и вновь появляющихся странах, касающихся социальной инфраструктуры, необходимой для лабораторного окружения, инструментов для тестирования, технологий тестирования и т.д.; возможными являются две меры, т.е. “установление высокочувствительного и низкозатратного метода тестирования, который позволяет проводить высокопроизводительную обработку образцов, собранных в ограниченных местах, укомплектованных энергоснабжением и оборудованием” или “установление Пункта оказания помощи при тестировании (РОСТ), который является высокочувствительным, быстрым, простым и низкозатратным и, который осуществляет работу без использования инструментария, который требует энергоснабжения”.

Системы энергоснабжения и оборудование в развивающихся странах и вновь возникающих странах, также размещаются, если они находятся в очень ограниченной области. Дополнительно, центры тестирования, которые осуществляют относительно прогрессивные тесты, уже существуют в такой области, и некоторые здоровые пациенты могут использовать эти службы. Посредством использования таких центров тестирования, проблемы, такие как лабораторное оборудование, инструменты для тестирования, технологии тестирования и человеческие ресурсы, могут быть решены. В таком случае, необходимо транспортировать пациента или образец мокроты из места медицинского обследования в центр тестирования. Существуют несколько основных ограничений при транспортировке образцов мокроты, используемых для теста с амплификацией нуклеиновой кислоты или теста с культурой. Чтобы предотвратить загрязнение и рост нежелательных микробов, образцы должны быть немедленно помещены в холодильник после сбора мокроты, подлежащей транспортировке. Кроме того, поскольку для теста с культурой важно содержать бактерии в состоянии способности к росту, больше мер предосторожности требуется при сравнении с генетическим тестированием. Дополнительно, так как оба теста не могут осуществляться, когда с образцом проводят операцию по стерилизации, такую как тепловая обработка, образцы должны транспортироваться в строго контролируемом состоянии. Поскольку система, с помощью которой можно манипулировать такими ограничениями, включенная в транспорт образца, не установлена в развивающихся странах и вновь возникающих странах, важно установить аналитический тест, способный к обнаружению даже в образцах, прошедших операцию по стерилизации, применяемую к ним.

При реализации РОСТ важно обеспечить анализ в условиях клиники в течение короткого периода времени без использования специального оборудования и инструментов. Технология, применяемая наиболее часто для РОСТ, представляет собой иммунохроматографический тест (ИХТ). В целом, считается, что ИХТ уступает методам иммунологического анализа, таким как ELISA, по чувствительности. Следовательно, если проблемы должны решаться с использованием РОСТ, будет важным установить аналитическую систему, способную к обнаружению с высокой чувствительностью. Кроме того, в случае с РОСТ, поскольку работникам трудно предпринять меры по предотвращению инфекции посредством использования безопасных кабинетов и т.п., применяемых в центрах тестирования, существенной является стерилизационная обработка для снижения риска инфекции от образца.

Следовательно, является необходимым установить аналитический тест, способный к обнаружению с высокой чувствительностью в стерилизованных образцах для “установления высокочувствительного и низкозатратного метода тестирования, который обеспечивает высокопроизводительную обработку образцов, собранных в ограниченных местах, укомплектованных энергоснабжением и оборудованием” и “установление Пункта оказания помощи при тестировании (РОСТ), который является высокочувствительным, быстрым, простым и низкозатратным и, который осуществляет работу без использования инструмента, который требует энергоснабжения”. Чтобы это сделать, важным является выбор целевого антигена. В качестве антигенов, специфичных для туберкулезных бацилл, сообщают о белковых антигенах, таких как Ag85. Однако, поскольку белковые антигены являются быстроразрушаемыми и усваиваемыми in vivo, с ними едва ли может быть получена тонкая чувствительность.

Основные антигены у кислотоустойчивых бацилл включают гликолипиды, которые являются основными составными частями клеточных мембран и клеточных стенок. Гликолипидные антигены считаются одним из типов перспективных целевых антигенов, поскольку они являются высокоустойчивыми in vivo. Среди них, ЛАМ составляет 15% от компонентов бактериальной клетки, и представляет собой антиген, который привлекает внимание также с позиций его количества. Существует несколько сообщений о создании PoAb и MoAb с целью обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в живых образцах (см. Непатентные литературные источники 1-4 (НПЛ 1-4)). В двух из этих сообщений, применяют ELISA для обнаружения липоарабиноманнана (далее в настоящем описании, также именуемого “ЛАМ”) в мокроте или моче. Однако, основные структуры ЛАМов у кислотоустойчивых бацилл являются почти одинаковыми, за исключением небольшого различия, наблюдаемого в структуре маннозной верхушки. В частности, у Mycobacterium avium, которая является бактерией, вызывающей инфекции кислотоустойчивыми бациллами наиболее часто, находясь на втором месте после туберкулезной бациллы, структура маннозной верхушки является почти такой же, как и у туберкулезной бациллы (см. непатентная литература 5 (НПЛ 5)). Следовательно, существует потребность в моноклональном антителе, способном специфически обнаруживать ЛАМ туберкулезной бациллы среди кислотоустойчивых бацилл.

Список цитируемых источников

Непатентная литература

NPL 1: Aharona Glatman-Freedman et al., “Monoclonal antibodies to surface antigens of Mycobacterium tuberculosis and their use in a modified Enzyme-Linked Immunosorbent Spot Assay for detection of Mycobacteria,” Journal of Clinical Microbiology, Nov. 1996, pp. 2795-2802.

NPL 2: Lenka M. Pereira Arias-Bouda et al., “Development of antigen detection assay for diagnosis of tuberculosis using sputum samples,” Journal of Clinical Microbiology, June 2000, pp. 2278-2283.

NPL 3: Beston Hamasur et al., “Rapid diagnosis of tuberculosis by detection of acid-fast bacillary lipoarabinomannan in urine,” Journal of Microbiological Methods, 45, 2001, pp. 41-52.

NPL 4: C. Boehme et al., “Detection of acid-fast bacillary lipoarabinomannan with an antigen-capture ELISA in unprocessed urine of Tanzanian patients with suspected tuberculosis”, Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene, 99, 2005, pp. 893-900.

NPL 5: Lipoarabinomannans: from structure to biosynthesis. Jérôme Nigou, Martine Gilleron, Germain Puzo, Biochimie 85 (2003) 153-166.

NPL 6: Winter et al., Annu. Rev. Immunol., 12:433, 1994.

NPL 7: K. Zuberbühler, Protein Engineering, Design & Selection, 22, 169 (2009).

Сущность изобретения

Техническая проблема

Целью настоящего изобретения является получение моноклонального антитела, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном (далее в настоящем описании иногда называемым “ЛАМ”) кислотоустойчивых бацилл, таких как бацилла туберкулеза, и, конкретно, одноцепочечное антитело (scFv) и его мультивалентное антитело.

Еще одной целью настоящего изобретения является способ обнаружения кислотоустойчивых бацилл с использованием антитела или способ диагностики туберкулеза, реагент для обнаружения кислотоустойчивой бациллы (например, реагент для диагностики туберкулеза) и набор для обнаружения кислотоустойчивой бациллы (например, набор для диагностики туберкулеза) с использованием способа.

Дополнительной целью настоящего изобретения является способ определения лечебного эффекта в отношении туберкулеза противотуберкулезного лекарственного средства с использованием антител; и набор для определения лечебного эффекта в отношении туберкулеза противотуберкулезного лекарственного средства, которые предназначены для использования в вышеуказанном способе.

Решение проблемы

Посредством разработки метода получения или селекции подходящих иммунного животного, иммуногена и MoAb, авторы настоящего изобретения успешно разработали антитело и способ анализа, который может различать ЛАМ кислотоустойчивых бацилл от ЛАМ других бактерий или мембранных антигенов, структурно сходных с ним и специфически обнаруживать ЛАМ кислотоустойчивых бацилл с высокой чувствительностью, которая сравнима с чувствительностью методов обнаружения с амплификацией генов. Дополнительно, авторы настоящего изобретения успешно разработали антитело, которое может различать ЛАМ туберкулезных бацилл и ЛАМ кислотоустойчивых нетуберкулезных бацилл, и специфически обнаруживать ЛАМ туберкулезных бацилл.

Таким образом, настоящее изобретение включает следующие варианты осуществления.

(I) Моноклональное антитело (I-1), которое специфически связывается с липоарабиноманнаном (ЛАМ) кислотоустойчивых бацилл.

(I-1) Моноклональное антитело, которое является способным к связыванию с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, антитело, приведенное в любом из (А)-(С) ниже:

(А) моноклональное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соединенные через линкер, вариабельную область тяжелой цепи, содержащую тяжелые цепи CDR1-CDR3, показанные в (а)-(с) ниже, и легкие цепи, содержащие CDR1-CDR3, показанные в (d)-(f) ниже:

(а) тяжелая цепь CDR1, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:1,

(b) тяжелая цепь CDR2, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:2,

(c) тяжелая цепь CDR3, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:3,

(d) легкая цепь CDR1, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:4,

(e) легкая цепь CDR2, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:5, и

(f) легкая цепь CDR3, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:6,

(B) моноклональное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соединенные через линкер, вариабельную область тяжелой цепи, содержащую тяжелые цепи CDR1-CDR3, показанные в (g)-(i) ниже, и легкие цепи, содержащие CDR1-CDR3, показанные в (j)-(l) ниже:

(g) тяжелая цепь CDR1, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:31,

(h) тяжелая цепь CDR2, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:32,

(i) тяжелая цепь CDR3, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:33,

(j) легкая цепь CDR1, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:34,

(k) легкая цепь CDR2, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:35 и

(l) легкая цепь CDR3, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:36 и

(C) моноклональное антитело, содержащее вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи, соединенные через линкер, вариабельную область тяжелой цепи, содержащую тяжелые цепи CDR1-CDR3, показанные в (m)-(o) ниже, и легкие цепи, содержащие CDR1-CDR3, показанные в (p)-(r) ниже:

(m) тяжелая цепь CDR1, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:47,

(n) тяжелая цепь CDR2, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:48,

(o) тяжелая цепь CDR3, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:49,

(p) легкая цепь CDR1, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:50,

(q) легкая цепь CDR2, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:51 и

(r) легкая цепь CDR3, состоящая из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:52.

(I-2) Моноклональное антитело в соответствии с (I-1), где вариабельная область тяжелой цепи моноклонального антитела из (А) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:7.

(I-3) Моноклональное антитело в соответствии с (I-1) или (I-2), где вариабельная область тяжелой цепи моноклонального антитела из (А) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:8.

(I-4) Моноклональное антитело в соответствии с любым из от (I-1) до (I-3), где линкер моноклонального антитела из (А) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11.

(I-5) Моноклональное антитело в соответствии с любым из от (I-1) до (I-4), где моноклональное антитело из (А) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:12.

(I-6) Моноклональное антитело в соответствии с любым из от (I-1) до (I-5), где моноклональное антитело из (А) способно к специфическому связыванию с ЛАМ туберкулезной бациллы, предпочтительно, туберкулезной бациллы человека (M. tuberculosis).

(I-7) Моноклональное антитело в соответствии с (I-1), где вариабельная область тяжелой цепи моноклонального антитела из (В) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:37.

(I-8) Моноклональное антитело в соответствии с (I-1) или (I-7), где вариабельная область легкой цепи моноклонального антитела из (В) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:38.

(I-9) Моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1), (I-7) и (I-8), где линкер моноклонального антитела из (В) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:40.

(I-10) Моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1) и (I-7)-(I-9), где моноклональное антитело из (В) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:39.

(I-11) Моноклональное антитело в соответствии с (I-1), где вариабельная область тяжелой цепи моноклонального антитела из (С) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:53.

(I-12) Моноклональное антитело в соответствии с (I-1) или (I-11), где вариабельная область легкой цепи моноклонального антитела из (С) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:54.

(I-13) Моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1), (I-11) и (I-12), где линкер моноклонального антитела из (С) имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:11.

(I-14) Моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1) и (I-11)-(I-13), где моноклональное антитело из (С) состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:30.

(I-15) Моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1) и (I-7)-(I-14), где моноклональное антитело из (В) или (С) способно специфически связываться с нетуберкулезной кислотоустойчивой бациллой.

(I-16) Моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1)-(I-15), где моноклональное антитело из любого из (А)-(С) является моновалентным или бивалентным антителом.

(II) Способ иммунизации животного, не являющегося человеком, для продуцирования моноклонального антитела, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном (ЛАМ) кислотоустойчивых бацилл, и способ получения моноклонального антитела.

(II-1) Способ иммунизации животного, не являющегося человеком, для продуцирования моноклонального антитела, которое специфически связывается с липоарабиноманнаном (ЛАМ) кислотоустойчивых бацилл, способ, включающий введение БЦЖ в качестве иммуногена животному, не являющемуся человеком, чтобы индуцировать гуморальный иммунный ответ на БЦЖ.

(II-2) Способ в соответствии с (II-1), где животное, не являющееся человеком, представляет собой кролика или цыпленка.

(II-3) Способ в соответствии с (II-1) или (II-2), где кислотоустойчивая бацилла представляет собой туберкулезную бациллу, предпочтительно, туберкулезную бациллу человека (M. tuberculosis).

(II-4) Способ получения моноклонального антитела, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, способ, включающий стадии:

введения БЦЖ в качестве иммуногена животному, не являющемуся человеком, чтобы индуцировать гуморальный иммунный ответ на БЦЖ и продуцировать антитело, которое связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл; и

сбор клеток, которые продуцируют антитело из животного, не являющегося человеком.

(II-5) Способ получения моноклонального антитела, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, способ, включающий стадии:

введения BCG в качестве иммуногена животному, не являющемуся человеком, чтобы индуцировать гуморальный иммунный ответ на БЦЖ;

получения мРНК, кодирующей антитело, которое связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл из животного, не являющегося человеком;

получения кДНК с использованием мРНК в качестве матрицы; и

сбора моноклональных антител, которые специфически связываются с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл посредством метода фагового дисплея с использованием кДНК.

(II-6) Способ в соответствии с (II-4) или (II-5), где животное, не являющееся человеком, представляет собой кролика или цыпленка.

(II-7) Способ в соответствии с любым из (II-4)-(II-6), где кислотоустойчивая бацилла представляет собой туберкулезную бациллу, предпочтительно, туберкулезную бациллу человека (M. tuberculosis).

(II-8) Способ в соответствии с любым из (II-4)-(II-7), где моноклональное антитело, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, представляет собой моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1)-(I-12).

(II-9) Способ в соответствии с любым из (II-4)-(II-8), где моноклональное антитело, которое специфически связывается с ЛАМ туберкулезной бациллы, предпочтительно, туберкулезной бациллы человека (M. tuberculosis), представляет собой моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

(II-10) Способ получения моноклонального антитела, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, способ, включающий стадии:

введения комплекса ЛАМ и моноклонального антитела из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) в качестве иммуногена животному, не являющемуся человеком, для индуцирования гуморального иммунного ответа на комплекс; и получения антитела, которое связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл; и

сбора клеток, которые продуцируют антитело, из животного, не являющегося человеком.

(II-11) Способ получения моноклонального антитела, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, способ, включающий стадии:

введения комплекса ЛАМ и моноклонального антитела из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) в качестве иммуногена животному, не являющемуся человеком, для индуцирования гуморального иммунного ответа на комплекс;

получения мРНК, кодирующей антитело, которое связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, из животного, не являющегося человеком;

получения кДНК с использованием мРНК в качестве матрицы; и

сбора моноклонального антитела, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, посредством метода фагового дисплея с использованием кДНК.

(II-12) Способ в соответствии с (II-10) или (II-11), где моноклональное антитело, которое специфически связывается с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, представляет собой моноклональное антитело из (В) в соответствии с любым из (I-1) и (I-7)-(I-12).

(III) Способ обнаружения кислотоустойчивых бацилл, предпочтительно, туберкулезной бациллы.

(III-1) Способ обнаружения кислотоустойчивой бациллы, предпочтительно, туберкулезной бациллы, способ, включающий стадии:

(1) приведения моноклонального антитела в соответствии с любым из (I-1)-(I-16) в контакт с биологическим образцом индивида; и

(2) проведения анализа на кислотоустойчивую бациллу, предпочтительно, туберкулезную бациллу, которая существует в образце, с использованием, в качестве показателя, реакции связывания между моноклональным антителом и ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, предпочтительно, ЛАМ туберкулезной бациллы.

(III-2) Способ в соответствии с (III-1), где в способе обнаружения туберкулезной бациллы используют моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

Среди приведенных выше способов обнаружения, способ обнаружения туберкулезной бациллы может быть перефразирован как способ диагностики туберкулеза у пациентов (способ диагностики туберкулеза).

(IV) Реагент для диагностики туберкулеза и набор для диагностики туберкулеза.

(IV-1) Реагент для диагностики туберкулеза, содержащий моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

(IV-2) Набор для диагностики туберкулеза, содержащий моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) в качестве реагента для обнаружения туберкулеза.

(V) Способ измерения содержания липоарабиноманнана кислотоустойчивых бацилл (ЛАМ).

(V-1) Способ измерения содержания ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в тестируемом образце, включающий стадии:

(1) приведения моноклонального антитела в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) в контакт с тестируемым образцом, который может содержать кислотоустойчивую бациллу; и

(2) проведения анализа на ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в тестируемом образце с использованием реакции связывания между моноклональным антителом и ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в качестве показателя.

(V-2) Способ в соответствии с (V-1), который представляет собой способ качественной оценки ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, включающий обнаружение ЛАМ кислотоустойчивых бацилл как на стадии (2), или представляет собой способ количественной оценки ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, включающий количественное определение ЛАМ кислотоустойчивых бацилл как на стадии (2).

(V-3) Способ в соответствии с (V-1) или (V-2), где кислотоустойчивая бацилла представляет собой туберкулезную бациллу, предпочтительно, туберкулезную бациллу человека (M. tuberculosis).

(V-4) Способ в соответствии с (V-3), где моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

(VI) Реагент для обнаружения липоарабиноманнана (ЛАМ) кислотоустойчивых бацилл или набор для его обнаружения.

(VI-1) Реагент для обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, содержащий моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1)-(I-16).

(VI-2) Реагент для обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, содержащий моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

(VI-3) Реагент в соответствии с (VI-2), где кислотоустойчивая бацилла представляет собой туберкулезную бациллу, предпочтительно, туберкулезную бациллу человека (M. tuberculosis).

(VI-4) Набор для обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл, содержащий моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1)-(I-16) в качестве реагента для обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл.

(VI-5) Набор для обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в соответствии с (VI-4), где моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

(VI-6) Набор для обнаружения ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в соответствии с (VI-5), где кислотоустойчивая бацилла представляет собой туберкулезную бациллу, предпочтительно, туберкулезную бациллу человека (M. tuberculosis).

(VII) Анализ с использованием стерилизованного образца

(VII-1) Способ определения присутствия или отсутствия инфекции кислотоустойчивыми бациллами в тестируемом образце, включающий стадии:

(1) стерилизации тестируемого образца кипячением, предпочтительно, автоклавированием;

(2) приведения моноклонального антитела в соответствии с любым из (I-1)-(I-16), предпочтительно, моноклонального антитела из (А) или (В) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) или (I-7)-(I-10), в контакт со стерилизованным образцом; и

(3) проведения анализа на ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в тестируемом образце с использованием реакции связывания между моноклональным антителом и ЛАМ кислотоустойчивых бацилл в качестве показателя; и

(4) определения того, что тестируемый образец инфицирован кислотоустойчивой бациллой, когда ЛАМ кислотоустойчивых бацилл обнаруживается в тестируемом образце.

(VII-2) Способ в соответствии с (VII-1), где моноклональное антитело представляет собой моноклональное антитело из (А) или (В) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) или (I-7)-(I-10), и кислотоустойчивая бацилла представляет собой туберкулезную бациллу.

(VIII) Способ определения лечебного эффекта противотуберкулезного лекарственного средства в отношении туберкулеза.

(VIII-1) Способ определения лечебного эффекта противотуберкулезного лекарственного средства в отношении туберкулеза, включающий стадии:

(1) приведения моноклонального антитела из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) в контакт с обоими тестируемыми образцами до и после введения противотуберкулезного лекарственного средства;

(2) проведения анализа ЛАМ туберкулезной бациллы в тестируемых образцах до и после введения противотуберкулезного лекарственного средства с использованием реакции связывания между моноклональным антителом и ЛАМ туберкулезной бациллы в качестве показателя; и

(3) определения того, что противотуберкулезное лекарственное средство имеет лечебный эффект в отношении туберкулеза, когда ЛАМ туберкулезной бациллы обнаруживается в тестируемом образце перед введением противотуберкулезного лекарственного средства и, когда ЛАМ туберкулезной бациллы не обнаруживается в тестируемом образце после введения противотуберкулезного лекарственного средства.

(VIII-2) Способ определения лечебного эффекта противотуберкулезного лекарственного средства в отношении туберкулеза, включающий стадии:

(1) приведения моноклонального антитела из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6) в контакт с обоими тестируемыми образцами до и после введения противотуберкулезного лекарственного средства;

(2) количественного определения ЛАМ туберкулезной бациллы в тестируемых образцах до и после введения противотуберкулезного лекарственного средства с использованием реакции связывания между моноклональным антителом и ЛАМ туберкулезной бациллы в качестве показателя; и

(3) сравнения количества ЛАМ туберкулезной бациллы в тестируемом образце после введения противотуберкулезного лекарственного средства (измерение после введения) с количеством ЛАМ туберкулезной бациллы в тестируемом образце перед введением противотуберкулезного лекарственного средства (измерение перед введением); и определения того, что противотуберкулезное лекарственное средство имеет лечебный эффект в отношении туберкулеза, когда результат измерения после введения ниже результата измерения перед введением, и определения того, что противотуберкулезное лекарственное средство не имеет лечебного эффекта в отношении туберкулеза, когда результат измерения после введения не ниже результата измерения перед введением.

(IX) Набор для определения лечебного эффекта противотуберкулезного лекарственного средства в отношении туберкулеза.

(IX) Набор для определения лечебного эффекта противотуберкулезного лекарственного средства в отношении туберкулеза, содержащий моноклональное антитело из (А) в соответствии с любым из (I-1)-(I-6).

(X) Устройство для обнаружения кислотоустойчивых бацилл (туберкулезной бациллы).

(Х-1) Устройство для обнаружения кислотоустойчивых бацилл, предпочтительно, туберкулезной бациллы, содержащее поглощающий раствор фрагмент, образованный из материала, способного к переносу тестируемого образца посредством капиллярного действия, поглощающий раствор фрагмент, содержащий:

(1) часть для сбора образца для поглощения и сбора тестируемого образца;

(2) часть с мечеными антителами, являющуюся подложкой для меченого моноклонального антитела в соответствии с любым из (I-1)-(I-16), которое специфически реагирует с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл;

(3) часть для определения, включающая часть отображения результата тестирования,

(а) на которой иммобилизовано немеченое моноклональное антитело в соответствии с любым из (I-1)-(I-16), которое специфически реагирует с ЛАМ кислотоустойчивых бацилл; и

(4) часть для поглощения раствора для поглощения остающегося раствора тестируемого образца, которая прошла через часть для сбора образца, часть с мечеными антителами и часть для определения.

(Х-2) Устройство для обнаружения кислотоустойчивых бацилл, предпочтительно, туберкулезной бациллы в соответствии с (Х-1), где часть для определения (3) дополнительно содержит часть для контроля отображения (b), на которой иммобилизовано немеченое антитело, которое реагирует с меченым моноклональным антителом в соответствии с любым из (I-1)-(I-16), причем часть для контроля отображения расположена отдельно от части отображ