Лекарственная форма левокарримицина, способ его получения и использования

Лекарственная форма левокарримицина, способ его получения и использования

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Техническая область

Изобретение относится к нерасфасованной лекарственной форме Карримицина (Carrimycin) и его лекарственным препаратам, конкретно говоря, относится к макролидным антибиотикам в генной инженерии, а именно лекарственные средства левовращающего Карримицина (Carrimycin), их способу приготовления и их употреблению в приготовлении лечебных и профилактических средств против инфекционных заболеваний.

Техническая среда

Карримицин (Carrimycin) - дериват спирамицина нового поколения, разработанный с помощью генной инженерии, носил первоначальное название «Biotechspiramycin», также биотехмицин (Biotechmycin) [Номер патента: ZL97104440.6]. Согласно «Принципу выбора названий лекарственных препаратов Китая» в результате технической проверки и изучения Государственной фармакопейной комиссией Китая было принято решение переименовать Biotechspiramycin в Карримицин (Carrimycin), название на английском языке «Carrimycin».

Карримицин (Carrimycin) является продуктом сбраживания в генной инженерии, с точки зрения химической структуры его основным составом является 4′′-изовалерил-спирамицин, включающий 4′′-изовалерил-спирамицины I, II, III, кроме этого, Карримицин (Carrimycin) содержит и примерно 6 видов спирамицинов с ацилированной 4-оксигруппой, поэтому он носит общее химическое название 4′′-ацилированный спирамицин».

Химическая структура основного состава Карримицин (Carrimycin) показана на (I):

В том числе:

R

R'

Изовалерил-спирамицин I	H	COCH2CH(CH3)2
Изовалерил-спирамицин II	COCH3	COCH2CH(CH3)2
Изовалерил-спирамицин III	COCH2CH3	COCH2CH(CH3)2

Карримицин (Carrimycin) представляет собой шестнадцатичленные макролидные антибиотики, механизм действия заключается в сочетании с тельцем Паладе бактерий для ингибирования синтеза белков.

Результаты теста in vitro показали, что Карримицин (Carrimycin) хорошо воздействует на грамм-положительные бактерии, особенно некоторые лекарственно-устойчивые микробы (к примеру, золотистый стафилококк, стойкий к β-лактаму, золотистый стафилококк, стойкий к эритромицину и т.д.), не имеет заметной перекрестной устойчивости к подобным лекарственным средствам. Тем временем, обладает хорошей антибактериальной активностью в отношении микоплазмы и хламидии, части грамм-отрицательных бактерий, обладает благоприятной антибактериальной активностью и проницаемостью тканей в отношении токсоплазм, легионеллы, а также потенциальной иммунологической регуляцией. Антибактериальная активность внутри организма превосходит активность вне организма (ZL200310122420.9). Клинические исследования показали, что прием таблеток Карримицин (Carrimycin) в течение 5-7 дней по 0,2 мг - 0,4 мг в день, дает положительные эффекты в лечении острого бактериального фарингита и острого гнойного тонзиллита, вызванного streptococcus pyogenes; бактериального хронического синусита и острого бронхита, вызванного сенситивными бактериями; не сильной пневмонии, вызванной пневмококком, гемофильной палочкой и микоплазмой пневмония; негонококкового уретрита, вызванного микоплазмой, хламидией; инфекции кожи и мягких тканей, периодонтита, тимпанита и других инфекционных болезней, вызванных сенситивными бактериями. Общий коэффициент полезного действия составляет 92,68%, Карримицин (Carrimycin) безопасен и эффективен.

Результаты фармакокинетических исследований показали, что в Карримицине (Carrimycin) самыми активными составами являются изовалерил-спирамицины I, II, III. После поступления в организм Карримицин (Carrimycin) быстро метаболирует с образованием спирамицина, расчет суммы AUC_0-t материнских средств изовалерил-спирамицинов I, II, III и активных метаболитов - спирамицинов I, II, III показал, что при пероральном применении абсолютная биодоступность составляет в среднем 91,6%. По источникам, абсолютная биодоступность спирамицина при пероральном применении для человека составляет в пределах 30-40% (Frydman AM et al JAntimicrob Chemother. 1988, 22 (suppl B): 93-103). Чем доказано, что структура изовалерил-спирамицина в значительной степени улучшила биологическую доступность активного вещества - спирамицина. Разовый прием Карримицина (Carrimycin) медленно дает эффект, Т_1/2β в пределах 23-27 ч.

В результате исследования эффективных составов Карримицина (Carrimycin) было обнаружено, что в молекулярной структуре самого активного состава Карримицина (Carrimycin) - изовалерил-спирамицина I, II, III существует несколько хиральных атомов углеводорода. Хиральность (Chirality) - основное свойство трехмерных предметов, является одним из основных свойств природы. В качестве важной основы жизненной деятельности, почти все биологические макромолекулы, как протеин, полисахарид, нуклеиновая кислота, ферменты и т.д., хиральные, и эти макромолекулы, как правило, исполняют важную физиологическую функцию внутри тела. Под хиральными лекарствами (chiral drug) понимаются пары оптических антиподов, являющихся зеркальными отражениями друг друга и полученных после ввода хирального центра в молекулярную структуру лекарства.

Эти оптические антиподы обладают принципиально аналогичными физико-химическими свойствами, отличаются только оптической активностью, откуда и выделились R (правовращающие) или S (левовращающие), рацемические.

За последние 20 лет углубленные изучения в фармации доказали различную стереоспецифичность (stereoselectivity) антиподов лекарственных веществ, они имеют различный аффинитет с рецепторами, в результате чего сильно отличаются фармакологические свойства.

Антиподы хиральных лекарств, имеющие повышенную активность, называют оптимальными антиподами (Eutomer); а антиподы, имеющие низкую активность или не имеющие активности, называют неактивными антиподами (Distomer).

В большинстве случаев, неактивные антиподы не дают эффективности, но они еще частично нейтрализуют эффективность оптимальных антиподов, иногда даже вызывают серьезные токсичные и побочные реакции, что доказало сложность в разнице эф4)ективности лекарственных средств и значительное отличие терапевтического индекса антипода одного антипода от его рацемата, как всем известно, что терапевтическая эффективность синтомицина DL-(+-) составляет только половину хлорамфеникола D(-); а активность L -изомера пропранолола (propranolol) в 100 раз больше чем D-изомер; (-) метадон представляет собой сильное болеутоляющее средство, а (+) не действующее.

Сильно отличается и токсичность, например, оба антипода талидомида (thalidomide) обладают аналогичным успокаивающим действием в отношении мышей, но только S(-) изомер и его метаболит обладают зародышевой токсичностью и тератогенезом; кетамин -широкораспространенные наркотические и болеутоляющие средства, но они дают галлюцинацию и другие побочные действия. Изучения показали, что S(+) дает эффект в 3-4 раза больше R(-), а токсичные и побочные действия явно связаны с последним.

Значительное различие в терапевтической эффективности хиральных лекарств стимулировало развитию работ по разработке, разделению и анализу хиральных лекарств.

Применение техники «Хиральность» позволило удалять из лекарственных средств антиподы, не дающие эффекта или имеющие токсичные и побочные действия, производить чистые хиральные лекарственные вещества, имеющие структуру с одним направлением, что позволило повышать чистоту состава препарата, быстро проявлять терапевтическую эффективность и сокращать курс лечения.

В связи с этим, разработка хиральных лекарств стала одним из новых направлений в разработке новых лекарственных средств мира. Правительства и крупные фармацевтические фирмы разных стран начали вносить большие средства в разработку хиральных лекарственных препаратов, хирального сырья и хиральных интермедиатов, чтобы завоевать фармацевтический рынок мира хиральных лекарственных веществ.

Более того, с непрерывным улучшением хиральной технологии и быстрым распространением жидкостной хроматографии была продвинута работа по разделению, анализу и определению антиподов хиральных лекарств. Хиральные моноэнантиомерные средства получили широкое применение.

В отношении вопроса, обладает ли Карримицин (Carrimycin) оптической активностью, изобретателями был проведен ряд исследований, им было приятно обнаружить, что путем регулирования и оптимизирования условий культивирования и сбраживания получали Карримицин (Carrimycin), который обладает оптической активностью и лучшей противоинфекционной активностью. Ввиду этого, изобретение относится к левовращающему Карримицину (Carrimycin), способу его приготовления, а также его употреблению в приготовлении лечебных и профилактических средств против инфекционных заболеваний.

Общее описание изобретения

Первый объект изобретения относится к левовращающему Карримицину (Carrimycin), который имеет оптическую активность и также отличную противоинфекционную активность.

Второй объект изобретения относится к лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin), содержащей левовращающий Карримицин (Carrimycin) с оптической активностью и фармацевтически приемлемые носители.

Третьим объектом изобретения является способ приготовления левовращающего Карримицина (Carrimycin), отличающийся упрощенной технологией производства, удобством контролировать критерий качества. Приготовленный левовращающий Карримицин (Carrimycin) обладает отличной эффективностью, оптической активностью, а также отличной противоинфекционной активностью.

Четвертым объектом изобретения является употребление указанного левовращающего Карримицина (Carrimycin) и лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin) в приготовлении лечебных и/или профилактических средств против инфекционных заболеваний, левовращающий Карримицин (Carrimycin) и его лекарственные комбинации высокоэффективны в отношении бактерий, хламидии и микоплазмы, могут использоваться для лечения инфекционных заболеваний.

Для осуществления первого объекта изобретения приняли следующие технические решения:

Левовращающий Карримицин (Carrimycin), отличающийся тем, что он является смесью изовалерил-спирамицинов III, II и I, содержит определенное количество изобутилил-спирамицинов III, II, бутирилспирамицинов III, II, пропионил-спирамицинов III, II и ацетилспирамицинов III, II, в т.ч. содержание изовалерил-спирамицина III не ниже 30% (масс.), общее содержание изовалерил-спирамицинов III, II, I не ниже 60% (масс.), содержание ацилированного спирамицина 80-98% (масс.), предпочтительно 85-98% (масс.), более предпочтительно 90-98% (масс.), еще более предпочтительно 95-98% (масс.); удельная постоянная вращения левовращающего Карримицина (Carrimycin) в хлороформном растворе составляет [α]_D-52°~ -57° при 25°С и 0,02 г/мл, предпочтительно -54°~ -56°, более предпочтительно -55°.

Изобретатели проводили многочисленные исследования о Карримицине (Carrimycin), регулировали и оптимизировали условия культивирования и сбраживания, особенно регулировали уровень pH в процессе сбраживания с помощью средства для регулирования уровня pH, чтобы зависимость уровня pH от времени в процессе сбраживания показывала три непрерывных этапа, и каждый из этапов удовлетворял определенному уравнению, таким образом, получали левовращающий Карримицин (Carrimycin) с оптической активностью. Это может объясняться либо изменением содержания составов с оптической активностью в таких условиях культивирования и сбраживания, либо изменением оптической конфигурации в таких условиях культивирования и сбраживания.

Метод определения удельной постоянной вращения левовращающего Карримицина (Carrimycin): точно взвешивают левовращающий Карримицин (Carrimycin), полученный по настоящему изобретению, добавляют трихлорметан, растворяют и разбавляют до концентрации 20 мг / 1 мл, определяют постоянную вращения калиброванным поляриметром с разрешением до 0,0001° с помощью D-линии спектра натрия (589,3 нм), длина 1 дм, температура 25°С.

Точка плавления левовращающего Карримицина (Carrimycin) изобретения составляет: 112-122°C, предпочтительно 114-120°С, более предпочтительно 116-118°С.

Метод определения: взвешивают сухой указанный препарат в умеренном количестве, кладут в капилляр для определения точки плавления, повторяют определение три раза и принимают среднюю величину.

Карримицин (Carrimycin) изобретения имеет оптическую активность, согласно современной мармакологии в связи с различной стереоспецифичностью антипода лекарственных веществ, они имеют различный аффинитет с рецепторами, в результате чего сильно отличаются фармакологические свойства. Внутренняя и наружная эффективность препарата доказала, что левовращающий Карримицин (Carrimycin) изобретения обладает благоприятным антиинфекционным эффектом и сильной фармакологической активностью. Таким образом, предоставляли новые лекарственные средства для лечения инфекционных заболеваний и закладывали основу для разработки хиральных лекарственных препаратов Карримицин (Carrimycin).

Результаты тестов in vivo и in vitro доказали, что левовращающий Карримицин (Carrimycin) изобретения обладает высокой чувствительностью и низкой лекарственной устойчивостью, эффективен к золотистому Стафилококку, стойкому к лекарствам, кроме этого, он обладает неоценимой ценностью в отношении инфекций, вызванных в результате злоупотребления антибиотиков. Например, инфекции, вызванные Золотистым Стафилококком (MRSA), стойким к метицилину; инфекции, вызванные кишечной палочкой, продуцирующей β-лактамазы расширенного спектра действия (ESBL); инфекционные болезни, вызванные клостридиями диффициле (C-diff), все эти инфекции были вызваны в результате злоупотребления антибиотиков. Такая проблема может быть контролирована с выходом в свет левовращающего Карримицина (Carrimycin).

Указанный в изобретении левовращающий Карримицин (Carrimycin) также содержит спирамицин III и другие составы, в т.ч. содержание спирамицина III не более 1,0%, суммарное содержание других составов 2,0-19% (масс.), предпочтительно 2,0-14,0% (масс.), более предпочтительно 2,0-9,0% (масс.), еще более предпочтительно 2,0-4,0% (масс.).

Указанные в изобретении другие составы содержат не менее 3 улучшенных гомолога спирамицина.

Левовращающий Карримицин (Carrimycin) изобретения является смесью с изовалерил-спирамицинами III, II и I в качестве основных составов, указанный изовалерил-спирамицин III является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина III, или указанный изовалерил-спирамицин II является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина II, или указанный изовалерил-спирамицин I является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина I.

Когда изовалерил-спирамицин III является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина III, порошковая рентгеновская дифракция кристалла, измеренная Cu-Kα-лучами, показывает характеристический пик при 2θ, равном 8,0°, 10,0°, 11,2°, 11,7°, 16,4°, 19,1°, 19,6°, 20,0°, 21,4°, 22,9°, 23,6° и 29,4°;

Когда изовалерил-спирамицин II является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина II, порошковая рентгеновская дифракция кристалла, измеренная Cu-Kα-лучами, показывает характеристический пик при 2θ, равном, 10,0°, 11,6°, 16,4°, 17,3°, 19,1°, 21,2°, 22,1°, 22,7°, 26,4°, 26,9°, 27,5° и 31,5°;

Когда изовалерил-спирамицин I является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина I, порошковая рентгеновская дифракция кристалла, измеренная Cu-Kα-лучами, показывает характеристический пик при 2θ, равном, 7,6°, 8,0°, 10,0°, 11,4°, 16,4°, 17,0°, 17,5°, 17,9°, 19,5°, 22,7°, 23,7° и 24,4°.

В результате последующих исследований изобретатели обнаружили, что после очистки и выделения полученного левовращающего Карримицина (Carrimycin) получали однокомпонентный изовалерил-спирамицин I, П, или III, далее путем перекристаллизации одного из компонентов получали кристаллы изовалерил-спирамицина I, II, III, потом перемешивали с левовращающим Карримицином (Carrimycin), таким образом, получали левовращающий Карримицин (Carrimycin), изовалерил-спирамицин III, II, или I которого является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина III, II, или I. Тест in vivo показал, что левовращающий Карримицин (Carrimycin), изовалерил-спирамицин III, II, или I которого является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина III. II, или I, обладает лучшей эффективностью, чем простой левовращающий Карримицин (Carrimycin).

Для осуществления второго объекта изобретения приняли следующие технические решения:

Лекарственная комбинация левовращающего Карримицина (Carrimycin), в т.ч. указанная лекарственная комбинация левовращающего Карримицина (Carrimycin) содержит вышеуказанные левовращающий Карримицин (Carrimycin) и фармацевтически приемлемые носители.

В лекарственной комбинации, указанной в изобретении, содержание левовращающего Карримицина (Carrimycin) является безопасным и терапевтически эффективным количеством левовращающего Карримицина (Carrimycin), предпочтительное содержание левовращающего Карримицина (Carrimycin) в лекарственной комбинации составляет 10-90% (масс.) более предпочтительно 25-75% (масс.), еще более предпочтительно 40-60% (масс.)

Под термином «безопасное и терапевтически эффективное количество», указанным в изобретении, понимается доза лекарственного средства, соединения, комбинации, продукта или препарата, достаточная для облегчения, реверсирования или лечения заболеваний человека или других млекопитающих, при этом применение таких средств или препаратов не оказывает серьезного повреждающего действия на ткани млекопитающих.

Под термином «фармацевтически приемлемый носитель», указанным в изобретении, понимается обычный носитель лекарственного препарата в области фармацевтики, например разбавитель, воспринимающее средство, как вода; заполняющее вещество, как крахмал, сахароза; связитель, как производные фибрина, соль альгиновой кислоты, желатина и поливиниловый пирролидон; смачиватель как глицерин; дезинтегрирующее средство, как агар, углекислый кальций и натрия гидрокарбонат; активатор поглощения как четвертичные аммониевые соединения; поверхностно-активный агент как цетиловый спирт; адсорбционный носитель, как каолин и бентонит; мягчительное средство как тальковый порошок, стеариновый кальций и магний, полиэтиленгликоль и т.д.. Кроме этого, можно добавлять в комбинацию другие вспомогательные материалы как ароматизирующее вещество, сахаристое вещество и другие.

Для комбинации изобретения можно выбирать безопасное и терапевтически эффективное количество любых из разбавителя, дезинтегранта, мягчительного средства, наполнителя, заполняющего вещества, связителя, смачивателя, активатора поглощения, поверхностно-активного агента, воспринимающего средства или безопасное и терапевтически эффективное количество любого обычного фармацевтического носителя данной области.

Указанная в изобретении лекарственная комбинация левовращающего Карримицина (Carrimycin) приготовлена в формах, подходящих для фармацевтической цели, и может быть жидкими, твердыми, полутвердыми или газообразными препаратами, указанный жидкий препарат выбирают среди раствора для инъекции, трансфузионной среды, раствора, микстуры, сахарного сиропа, настойки, золи, ароматизированной воды, глицеринового раствора, коллоидального раствора, слизи, взвеси или эмульсии; указанный твердый препарат выбирают среди порошка для инъекций, лиофилизированного порошка, таблеток, желатиновых капсул, порошка, пилюль или пленок; указанный полутвердый препарат выбирают среди мази, пластыри, свечи; суппозитория, экстракта, желатин ирующего вещества; указанный газообразный препарат выбирают среди аэрозоли или распыляемого раствора.

В лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin), доза применения левовращающего Карримицина (Carrimycin) составляет 10-1500 мг на единичную форму, предпочтительно 100-1000 мг, более предпочтительно 200-500 мг.

Для осуществления третьего объекта изобретения приняли следующие технические решения:

Способ приготовления левовращающего Карримицина (Carrimycin), включает культивирование, сбраживание и экстрагирование, в т.ч. указанное культивирование и сбраживание включают: культивирование клонированного штамма WSJ-195 бактерий, продуцирующих спирамицин, с содержанием гена 4”-изовалерил-трансферазы, на наклонной питательной среде, потом засев и культивирование на питательной среде семени, далее засев на питательную ферментационную среду, контролирование процесса сбраживания с помощью средства для регулирования уровня pH, сбраживание при уровне pH 6,0-9,0, предпочтительно 6,0-8,0, более предпочтительно 6,0-7,5, при этом зависимость уровня pH от времени показывает три непрерывных этапа, первый этап удовлетворял уравнению y₁=k₁x₁+6,0, где 0,0227≤k₁≤1364, 0<x₁≤22; второй этап удовлетворял уравнению y₂=k₂x₂+b₂, где -0,0735≤k₂<0, 6,5<b₂≤10,62, 22≤x₂≤56, третий этап удовлетворял уравнению y₃=k₃x₃+b₃, где 0<k₃≤0,0078, 6,06≤b₃<6,5, 56≤x₃≤120.

Регулировали и оптимизировали условия культивирования и сбраживания, особенно регулировали уровень pH в процессе сбраживания с помощью средства для регулирования уровня pH, чтобы зависимость уровня pH от времени в процессе сбраживания показывала три непрерывных этапа, каждый из этапов удовлетворял определенному уравнению, таким образом, получали левовращающий Карримицин (Carrimycin) с оптической активностью.

В изобретении решающим фактором является процесс сбраживания, во всем процессе следует время от времени определять уровень pH, который контролируют путем добавки средства для регулирования уровня pH, в т.ч. в качестве которого выбирают любой среди глюкозы, лимоннокислоты, соляной кислоты, уксусной кислоты, нашатырного спирта, каустической соды, гидроокиси калия, или их комбинацию, предпочтительна глюкоза, лимоннокислота, уксусная кислота, нашатырный спирт или их комбинация, более предпочтительна глюкоза, нашатырный спирт или их комбинация.

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. указанное экстрагирование включает: обработку сбраживаемой жидкости сернокислым алюминием для получения фильтрата, регулирование уровня pH фильтрата до 8,5-9,0, экстрагирование бутилацетатом, промывку бутилацетатного экстракта обессоленной водой и 1% NaH₂PO₄ соответственно, экстрагирование водой pH 2,0-2,5 для получения водофазного экстракта, регулирование уровня pH до 4,5-5,5, удаление остаточного бутилацетата возгонкой для получения водного экстракта, фильтрование, регулирование уровня pH фильтрата до 8,5-9,0, осаждение, орошение очищенной воды для получения влажного вещества, далее осушение для получения левовращающего Карримицина (Carrimycin).

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. указанная наклонная питательная среда содержит муку из бобового жмыха 2%, глюкозу 1%, крахмал 3%, CaCO₃ 0,5%, NaCl 0,4% и агар 2%.

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. указанная питательная среда семени содержит муку из бобового жмыха 1,5%, крахмал 3%, NaCl 0,4%, СаСО₃ 0,5%, пептон 0,3% и KH₂PO₄ 0,05%.

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. указанная питательная ферментационная среда содержит глюкозу 0,5%, крахмал 6,0%, сухие дрожжи 0,5%, рыбную муку 2,0%, NH₄NO₃0,6%, NaCl 1,0%, CaCO₃ 0,5%, KH₂PO₄ 0,05%, MgSO₄ 0,1%, бобовое масло 0,5% и противовспениватель 0,02%.

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. под упомянутым культивированием на наклонной питательной среде понимается культивирование в течение 8-15 сут. при 28-38°С.

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. под упомянутым культивированием на питательной среде семени понимается культивирование в течение 40-80 ч. при 25-30°С.

Упомянутый в изобретении способ приготовления, в т.ч. под упомянутым сбраживанием на питательной ферментационной среде понимается культивирование в течение 72-120 ч. при 26-30°С.

Когда левовращающий Карримицин (Carrimycin) содержит кристаллы изовалерил-спирамицина I, II или III, указанный способ приготовления также включает следующие шаги:

a) Выделение и очистка левовращающего Карримицина (Carrimycin) для получения левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III;

b) Перекристаллизация полученного левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III для получения кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III;

c) Удаление ацетонитрила вращающим испарением из левовращающего Карримицина (Carrimycin), полученного по п. a) после выделения и очистки от левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III, потом экстрагирование однократным этилацетатом, удаление из экстракта этилацетата вращающим испарением для получения пастообразных проб; переплавление полученных проб петролейньш эфиром, далее удаление петролейного эфира вращающим испарением для получения левовращающего Карримицина (Carrimycin);

d) Смешивание кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III, полученных по п. b), с левовращающим Карримицином (Carrimycin), полученным по п. c) для получения левовращающего Карримицина (Carrimycin), изовалерил-спирамицин I, II или III которого является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III.

Способ приготовления, согласно изобретению, в т.ч. указанные в п. a) выделение и очистка включают:

очистку левовращающего Карримицина (Carrimycin), полученного после предварительного выделения препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией, применяя хроматографическую колонну ODS, проведение градиентной элюции с помощью ацетонитрила и буферного раствора уксуснокислого амминия, ультрафиолетового контроля, регистрации ультрафиолетовой спектрограммы выделения, сбор целевого пика состава левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III:

Хроматографическая колонна: приготовление хроматографической колонны из ODS;

Подвижная фаза: ацетонитрил (А), 0,1 моль водный раствор уксуснокислого амминия (В);

Градиент: применяли линейный градиент 0-60 мин., А: 25% - 65%; 61-90 мин., А: 65%-90%;

Скорость потока: 260 мЛ/мин;

Объем вводимого образца: 10 мЛ;

Концентрация вводимого образца: 0,5 г/мЛ;

Контрольная длина волны: 231 нм;

Способ сбора: ультрафиолетовый пуск;

Собирают образцы левовращающего изовалерил-спирамицина I согласно времени выдержки левовращающего изовалерил-спирамицина I RT 44,759 мин; или собирают образцы левовращающего изовалерил-спирамицина II согласно времени выдержки левовращающего изовалерил-спирамицина II RT 43,34 мин; или собирают образцы левовращающего изовалерил-спирамицина III согласно времени выдержки левовращающего изовалерил-спирамицина III RT 48,009 мин. Далее удаляют ацетонитрил вращающим испарением, потом экстрагируют однократным этилацетатом, удаляют из экстракта этилацетат вращающим испарением для получения пастообразных проб; переплавливают полученные пробы петролейным эфиром, далее удаляют петролейный эфир вращающим испарением для получения белых порошковых частиц левовращающего изовалерил-спирамицина I, II или III.

Способ приготовления, согласно изобретению, в т.ч.

когда изовалерил-спирамицин I является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина I, данный кристалл получается по следующему методу перекристаллизации: сначала растворяют полученные белые порошковые частицы левовращающего изовалерил-спирамицина I в смешанном растворителе безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, потом наливают очищенную воду с одновременным перемешиванием, после налива очищенной воды температура снижается до 5°С - 15°С, при этом продолжают перемешивание до получения кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I. В примененном смешанном растворителе отношение объема этилацетата к объему абсолютного этилового спирта и к объему безводного ацетона составляет 1:0,1-10:0,5-1, предпочтительно 1:2-8:0,8-1.

В т.ч. первое предпочтительное техническое решение по перекристаллизации кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I заключается в том, что объем вводимой очищенной воды в 2-9 раз больше суммы объема этилацетата, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, предпочтительно 2,5-7,5 раза; скорость ввода очищенной воды 4-10 мл/мин, предпочтительно 6-8 мл/мин.

Второе предпочтительное техническое решение по перекристаллизации кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I заключается в том, что в примененной смеси растворителей отношение объема этилацетата к объему абсолютного этилового спирта и к объему безводного ацетона составляет 1: 0,1-10; 0,5-1, предпочтительно 1: 2-8: 0,8-1.

Третье предпочтительное техническое решение по перекристаллизации указанных кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I заключается в том, что скорость перемешивания вводимой очищенной воды 30-60 р/мин, предпочтительно 45-60 р/мин; после ввода очищенной воды скорость перемешивания 10-30 р/мин, предпочтительно 10-20 р/мин.

Четвертое предпочтительное техническое решение по перекристаллизации указанных кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина I заключается в том, что скорость охлаждения после ввода очищенной воды 1-3°C /ч, предпочтительно 1-1.5°C /ч.

когда изовалерил-спирамицин II является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина II, данный кристалл получается по следующему методу перекристаллизации: сначала растворяют полученные белые порошковые частицы левовращающего изовалерил-спирамицина II в смешанном растворителе безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, потом наливают очищенную воду с одновременным перемешиванием, после налива очищенной воды температура снижается до 5°С - 15°С, при этом продолжают перемешивание до получения кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина II. В примененном смешанном растворителе отношение объема этилацетата к объему абсолютного этилового спирта и к объему безводного ацетона составляет 1: 0,1-10: 0,5-1, предпочтительно 1: 2-8: 0,8-1;

В т.ч. первое предпочтительное техническое решение по перекристаллизации кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина II заключается в том, что объем вводимой очищенной воды в 2-9 раз больше суммы объема безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, предпочтительно 2,5-7,5 раза; скорость ввода очищенной воды 4-10 мл/мин, предпочтительно 6-8 мл/ мин.

Второе предпочтительное техническое решение по перекристаллизации кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина II заключается в том, что в примененной смеси растворителей отношение объема безводного метанола к объему безводного ацетона и к объему абсолютного этилового спирта составляет 1: 0,1-10: 0,5-1, предпочтительно 1: 2-8: 0,8-1.

Третье предпочтительное техническое решение по перекристаллизации указанных кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина II заключается в том, что скорость перемешивания вводимой очищенной воды 30-60 р/мин, предпочтительно 45-60 р/мин; после ввода очищенной воды скорость перемешивания 10-30 р/мин, предпочтительно 10-20 р/мин.

Четвертое предпочтительное техническое решение по перекристаллизации указанных кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина II заключается в том, что скорость охлаждения после ввода очищенной воды 1-3°С /ч, предпочтительно 1-1.5°С /ч.

Когда изовалерил-спирамицин III является кристаллом левовращающего изовалерил-спирамицина III, данный кристалл получается по следующему методу перекристаллизации: сначала растворяют полученные белые порошковые частицы левовращающего изовалерил-спирамицина III в смешанном растворителе безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, потом наливают очищенную воду с одновременным перемешиванием, после налива очищенной воды температура снижается до 5°С - 15°С, при этом продолжают перемешивание до получения кристалла левовращающего изовалерил-спирамицина III. В примененном смешанном растворителе отношение объема безводного метанола к объему абсолютного этилового спирта и к объему безводного ацетона составляет 1: 0,1-10: 0,5-1, предпочтительно 1: 2-8; 0,8-1.

В т.ч. первое предпочтительное техническое решение по перекристаллизации кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина III заключается в том, что объем вводимой очищенной воды в 2-9 раз больше суммы объема безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, предпочтительно 2,5-7,5 раза; скорость ввода очищенной воды 4-10 мл/мин, предпочтительно 6-8 мл/мин.

Второе предпочтительное техническое решение по перекристаллизации кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина III заключается в том, что в примененной смеси растворителей отношение объема безводного метанола к объему абсолютного этилового спирта и к объему безводного ацетона составляет 1: 0,1-10: 0,5-1, предпочтительно 1: 2-8: 0,8-1.

Третье предпочтительное техническое решение по перекристаллизации указанных кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина III заключается в том, что скорость перемешивания вводимой очищенной воды 30-60 р/мин, предпочтительно 45-60 р/мин; после ввода очищенной воды скорость перемешивания 10-30 р/мин, предпочтительно 10-20 р/мин.

Четвертое предпочтительное техническое решение по перекристаллизации указанных кристаллов левовращающего изовалерил-спирамицина III заключается в том, что скорость охлаждения после ввода очищенной воды 1-3°C /ч, предпочтительно 1-1,5°C /ч.

Изобретение также относится к употреблению левовращающего Карримицина (Carrimycin) или лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin) в приготовлении лечебных средств против инфекционных заболеваний.

Указанные в изобретении инфекционные заболевания вызваны заражением грамм-положительными бактериями, золотистым Стафилококком, пневмококком, микоплазмой пневмония, хламидией пневмониз, уреаплазмой уреалитикум, трахоматозными хламидиями, streptococcus pyogenes, микрококком катаральным, нейссерией гонорея, гемофильной палочкой, легионеллой или анаэробными бактериями.

Изобретение также относится к употреблению указанного левовращающего Карримицина (Carrimycin) или указанной лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin) в приготовлении антибактериальных средств, указанные бактерии:

пневмококк, стрептококк группы A, streptococcus pyogenes, энтерококк, золотистый стафилококк, эпидермальный стафилококк, микрококк катаральный, нейссерия гонорея, гемофильная палочка, колибацилла или кишечная палочка, энтеротоксигенные кишечные палочки, патогенная кишечная палочка, enteroinvasive escherichia coli, синегнойная палочка, клебсиелла пневмонии, протеус вульгарис, тифозная палочка, акинетобактерии, лимоннокислота, цитробактер, serratia marcescens, шигелла зонне, шигелла Флекснера, бацилла, tritirachium album; легионеллы. как легионеллезная пневмония, legionella gormanii, legionella bozemanii, legionella dumoifii, legionella jordanis, legionella micdadei; анаэробные бактерии, как бактероиды фрагилис, bacteroides thetaiotaomicron, бактероиды вульгатус, bacteroides distasonis, bacteroides ruminicola, prevotella asaccharolyticus, prevotella oralis, палочка Плаута, fusobacterium russii, бифидобактерии, лактобацилла, пептострептококки, пропионибактерии акне, клостридии перфрингенс, дрожжеподобный гриб.

Как правило, специалисты данной области понимают, что количество требуемого в лечении активного вещества зависит от многих факторов, включая характер болезни, возраст и состояние пациента, и в конце концов решение принимается ведущим врачом. При введении лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin) данного изобретения на единичную форму, доза применения указанного левовращающего Карримицина (Carrimycin) составляет 10-1500 мг на единичную форму, предпочтительно 100-1000 мг, более предпочтительно 200-500 мг. Тотальная доза в сутки разделяется на унифицированные дозы или фракционированные дозы. Тесты фармакодинамические in vivo и vitro доказали, что активное вещество левовращающего Карримицина (Carrimycin) или лекарственной комбинации левовращающего Карримицина (Carrimycin) обладает оптической активностью и также относительно хорошей антиинфекционной эффектностью, имеет не только антибактериальную активность в отношении грамм-положительных бактерий, особенно золотистого стафилококка, стойкого к эритромицину и β-лактаму, пневмококка, streptococcus pyogenes, но и в отношении нескольких отрицательных бактерий, как микрококка катарального, нейссерии гонорея, гемофильной палочки, части легионеллов и анаэробных бактерий, особенно заметную активность в отношении микоплазмы пневмония, хламидии пневмониз.

По сравнению с существующей технологией, изобретение имеет следующие пр